3 2 1
常见风湿病实验检查风湿病病因学检查,
RA HLA-DRB10405
0409风险高达 58.2%.
SLE HLA-DQB1(nRNP),
DQa(SSA/SSB),
DQW6(Sm)
DQB1(TCR).
AS HLA-B27.
3 2 2
BS HLA-B51.
PM\DM HLA-B8,DR3,DR1,HLA-DRB1,ancestral
haplotype祖单倍体 8.1。 TNF-?-308A
SSC HLA-DR1,DR5,DRQI； P1A2/FN等位 基因与肺纤维化,Scl-70的阳性呈正相关。
SS HLA-DR3,DRBI0602,03（与肾小管酸中毒及 SSB密切相关,DQAI0504,DQBI0202。
RF HLA-DR4.
OA HLA-A1,B8.
3 2 3
HLA研究进展
HLA抗原基因的多态性，决定了其所表达的 HLA抗原分子的多态性,也决定了 HLA系统免疫应答的多样性与复杂性。近年来 HLA 基因分型迅猛发展，使得 HLA 基因分型更加准确，
简便和实用。 HLA 基因分型目前大致分为：
限制性片段长度多态性方法 PCR- RFLP
(restriction fragment length
polymophism)。 PCR- SSOP 是以核酸杂交为基础的分型技术。 PCR扩增特定的基因片段，
与 (sequence specific oligonucleotide
probes)序列特异性寡核苷酸探针杂交，进行分析鉴定。
基因芯片或微阵列技术 (gene chip or
DNA microarray)：
3 2 4
该技术其原理类似于反向斑点杂交。它是指大规模集成电路控制的机器人在尼龙膜或硅片等固相支持物的表面有规律地合成代表不同基因的寡核苷酸探针，或液相合成探针后，通过点样仪点样于固相支持物的表面。这些探针与放射性标记物或荧光素标记的样品的 DNA或
cDNA互补核酸序列相结合，通过放射自显影或荧光检测，对杂交结果进行计算机软件处理分析，获得杂交信号的强度及分布模式图，反映样品中基因表达的情况。
PCR-SSCP(single-strand
conformation polymorphism)可检测 DNA
片段中不同位置的点突变，而不必象 PCR-
RFLP 那样，必须选择合适的限制酶，使其识别的位点正好位于等位基因的特异性核苷酸序列处。
3 2 5
PCR- SSP(SEQUENCE SPECIFIC
PRIMES)是近年唯一针对急诊和尸体器官移植而设计的。其原理是通过序列特异性引物 SSP,
特异的扩增目的 DNA 片段，再通过凝胶电泳等手段，判断被扩增序列的存在。
作为第 3代遗传标记 SNP单核苷酸多态位点
(single nucleotide polymorphism)。已有 MHC-SNP分型试剂盒面市。
分子的超型及抗原结合肽超基序的发现，表明可从功能上对类分子进行分类使得该技术更为合理，简明和实用，对于疾病相关性的研究和异体移植有重大意义。
3 2 6
AS的相关遗传因素
1,HLA是一必需的致病基因，但其遗传风险为
16~50%。其亚型有 23个之多，从
B2701~2723。与 AS相关的是
2705﹑ 2704﹑ 2701等等。
2,CYP2D6﹑ LMP7和 TNF308等 TNF-?的等位基因； bosak报道 HLA-2﹑ Bw4﹑ Cw1/2﹑ DR1
基因频率均高于健康人群。这提示 HLA-
A﹑ B﹑ C﹑ DR和 DQ区域有与 AS发病的易感基因存在； HLA-B60增加了 AS依赖 HLA-B27发病的易感性。
3 2 7
链球菌感染的检测
1 咽拭子培养
20~25%
SZ(链球菌酶 )检
2ASO>500
50%
3DNA酶 -B>210 85%
4ASK(抗链球菌激酶 )>8
5AH(抗透明质酸酶 )>128
6ANDS(抗核苷酸 )<275
抗 EBV抗体 RA
PHS-2(福氏志贺菌 ) Reiter's
肺炎克雷伯菌 AS
沙门菌,螺杆菌 ReA
3 2 8
炎性实验室指标主要针对疾病活动性
ESR:
CRP:2周内 >80%,大于 4周
<25%
OTHER:1.白细胞及中性粒细胞,2.糖蛋白及粘蛋白等,
3 2 9
CRP
IL-1
IL-6
TNFa
TG
PF4白细胞粘着游走
CRP
凝血纤溶系统亢进
ICAM-1
VCAM-1
E-SELECTIN
血小板凝集亢进血小板释放反应感染外伤免疫异常恶性增生物
3 2 10
CRP与炎症
CRP是重要的炎性因子,其致炎作用包括,激活补体、刺激细胞因子分泌、上调内皮细胞黏附分子表达、抑制一氧化氮合成、增加纤溶酶原激活物抑制剂 -1的水平与活性、增强巨噬细胞对低密度脂蛋白的摄取及单核细胞化学趋化性、上调血管紧张素 Ⅱ -1型受体的表达等,
CRP与肥胖关系密切,而且脂肪细胞也可分泌 CRP.
CRP水平随年龄的增高而升高,女性较高,吸烟、
感染和某些药物可使其增高 ;而饮酒和某些药物可使其降低,
3 2 11
生化检查
1.Ca,P,Fe等电解质,
2.UA,磷酸钙双水化合物 CPP等,
3.肝,肾,血常规等功能检查,
4.CPK,LDH同功酶，肌球蛋白，肌凝蛋白重链，
肌钙蛋白 I（ TnI），等肌酶谱检查,
5.蛋白及蛋白电泳检查,
6.雌激素,泌乳素等激素检查,
7.维生素,骨钙素,TRAP,Pyd,Dpyd等,
3 2 12
雌激素和催乳素 PRL
大家都知道神经 -内分泌 -免疫调节网络功能失调，会影响的发生和发展。
PRL（ prolatin）已被证明具有免疫调节作用，对细胞和体液免疫都有促进作用，而且免疫细胞也能产生 PRL样物质，发挥自分泌和旁分泌作用。大量研究表明在 SLE中 PRL与可的松 CS比值增高反与病情进展相关。男性患者 PRL水平升高而雄激素功能低下，认为 PRL
可抑制睾酮的生成，在病因中起作用。但也有人认为不是通过其抑制雄激素而起作用。另外用 bromocriptine BRC溴隐停使 PRL降低可使 SLE病情改善。在 RA已证明 PRL是 AA
（ adjuvant arthritis）形成的必要条件。国外报道在 RA中 PRL水平上升发生率为 10.8%。
3 2 13
SS,PA,Reiter等风湿病都有 PRL水平升高。
目前认为 1.可能与可诱导核细胞产生 IgM，
IgA,IgG,ds-DNA和 ANA及 IgM类 RF，
ANA滴度增加并且 PRL水平与 ANA相平行。
IgG类 ds-DNA与抗甲状腺微粒体抗体 TMA合成增加，同时伴 ESR增快，淋巴细胞减少。
2.PRL基因在第 6号染色体短臂上，与 HLA基因复合体非常近。生殖危险因子与 RA病因相互作用可能是其原因。 SLE女性患者 HLA-
DRB10301和 PRL基因之间的连锁不平衡也是原因之一。 3.降低甾类物产生的允许作用。
PRL水平升高在甾类激素分泌减少的情况下起重要作用。一方面糖皮质激素能拮抗 PRL的刺激作用，而性激素对免疫的调节作用随性别而异。另一方面 PRL可影响甾类激素的产生，也可拮抗糖皮质激素的抑制作用。
3 2 14
4.PRL与细胞因子 PRL和 IL-2在免疫方面起协同作用，从而促进 AID的发生。同时
PRL也可促进滑膜纤维母细胞的增殖，并促进 IL-6,IL-8的生成。
而雌激素和雌激素受体在免疫调节和对许多风湿病发病机制，自身抗体的产生，及对其病理进程的影响巨大。早已为众人所熟悉。
3 2 15
滑液正常值
PH 7.3-7.43 7.38
WBC(/L) (13~180) 63
N 0-15 7
L 0-78 24
单核细胞 0-71 48
滑膜细胞 0-12 4
蛋白质 (g/L) 12-30 18
P(%) 56-63 60
A(%) 37-44 40
透明质酸盐 (g/L) 3
3 2 16
滑液分析
外观 WBC PC 粘蛋白 滑液与血清 微生物
试验 Glu差异 (ml/ml) 晶体等
正常 清晰，灰黄 0~200 <10% 良好 无差异 _
I类
(非炎性积液 )清晰，稍浊 50~4000 <30% 良好 无差异 _
II类 (非感染 偶有 LE细胞
轻度炎性 ) 清晰，稍浊 0~9000 <20% 良好 无差异 补体减少
III类 (非感染
重度炎性 ) 混浊 100~160,000 70% 不 良 10 ~30 补体减少晶体等
IV类 (感染 炎性 )
感染 高度混浊 150~250,000 90% 不 良 90 细菌培养阳性
结核 混浊 2500~100,000 60% 不良 70 结核培养阳性
3 2 17
滑液表现
I II III IV
OA RA 细菌性 创伤
肢端肥大症 AS 结核性 骨折
骨坏死 PA 淋球菌 血友病
Paget病 SS 神经病性患节炎
SLE PM/DM
NPA BD
SSC WG
Wilson RF
淀粉样变 REA
结节性红斑 IBD
软骨病 白血病
激素治疗 一部分细菌性
3 2 18
分子生物技术
1.目的 DNA的来源
从组织或细胞中提取,
通过载体获得 DNA片段,
以为 mRNA模板利用逆转录酶合成互补
DNA(cDNA).
DNA合成,通过 ligation,PCR,probe来完成,
2.重组 DNA技术,分子构建,细胞转移,宿主细胞鉴定,
3.核酸测定和应用
DNA/RNA印迹,PCR,原位 /斑点杂交,
DNA序列测定,
3 2 19
ANAs
ANA是指抗细胞内 DNA,RNA,AHA,no-
AHA,phospholipid…… 蛋白质分子及其复合物成分的抗体,Miescher于 1957年发现。
1957年 Ceppelini发现
DNA,ssDNA,dsDNA.
AHA:H1,H2A,H2B,H3,H4.
ENA:Sm,Nrnp,rRNP,SSA/SSB,ScL-
70,Jo-1,PM-
1,PCNA,RA33,centromere…,.
3 2 20
DNA研究
DNA大分子可以存在于循环中或黏附于多种器官的微血管结构，这些循环或器官原位抗原型 DNA均可以与循环抗 dsDNA自体抗体发生反应，形成抗原抗体免疫复合物，激活炎症系统，如补体途径。在器官引起 免疫复合物介导的疾病，引起关节炎，血管炎，肾炎等临床表现。 dsDNA抗体水平于疾病活动性，特别与
LN有密切关系。也可作为临床复发的指标。
SLE中的抗 DNA抗体是异基因的。血清的抗体和单克隆抗 DNA抗体可识别不同分子的核酸表位，如磷脂，蛋白，多糖和细胞结构。这说明 DNA本身不可能做为免疫原来诱导 DNA
抗体产生。同时这种抗体的多反应性可能与个体 Ig的不同区域的多结合位点或不同抗原的相同表位有关。
3 2 21
抗 DNA抗体的产生与 NO有关，活性氧可在细胞分裂中期导致淋巴细胞染色体损害和断裂，使淋巴细胞功能失常或凋亡，释放大量核抗原产生自身抗体。 NO在 SLE中参与产生自身抗体,NO抑制粒细胞活性，诱导其凋亡，抑制吞噬细胞释放促炎介质，抑制 T细胞增殖和 IL-2释放，阻止 T辅助细胞分化 Th1细胞，导致细胞免疫功能低下，
大量自身抗体产生。在凋亡期间完整的核抗原的大量释放可以提供细胞外足够的核抗原来促进免疫反应，诱导抗体的产生。
3 2 22
DNA免疫
哺乳动物具有免疫学特性温和，结构简单的特点，单纯的 DNA分子不能有效诱导免疫反应，
抗哺乳动物的 DNA抗体产生与抗原的交叉反应或多克隆 B细胞的活化有关。而细菌 DNA由于免疫原性强，结构复杂，能有效地诱导机体对宿主自体细胞以外的 DNA序列区域直接产生免疫应答。 SLE病人抗 DNA抗体主要是 Ig1和
Ig3而且需要 T细胞参与，且与所有 DNA的保守序列结合。这与健康人的抗 DNA抗体（ Ig2）
不同,
通过基因重组技术，将编码有特定蛋白抗原的裸露的质粒 DNA注入体内，表达出抗原蛋白，
诱导其抗体的表达及 T细胞依赖的细胞裂解等一系列特异性免疫应答。 DNA免疫不仅可以诱导体液免疫还可诱生特异性的以 CTL为代表的细胞免疫应答。
3 2 23
OTHER ANTIBODY
RA,
Sa99%,AKA（抗角质蛋白抗体） 95%-100%,APF（抗核周因子） 40%-50%,AFA（抗聚角蛋白微丝蛋白抗体）为的共同抗原决定族。
RF(IgG,IgM,IgA)80%,RA3389.8%,CCP（抗环瓜氨酸肽抗体） 46.6%（ 96.6%），其中 IgG型为 53%,IgM型为 58%。 A-
p68A（为糖蛋白成分 GRP，也称免疫球蛋白结合蛋白 Bip binding
protein；实际上是一种内质网分子伴侣。） 67.8%;91.3。常见于 RF
阴性患者并出现于 RA早期。
SLE:
ds-DNA40-90%,AHA3080%,Sm35%,Nrnp20-35%,
SSA25-40%,
SSB10-15%,hsp40-50%,APL20-50%.anti-neuronal
antibodies,anti-N（
血清中 62.0%。脑脊液中 47.4%）
3 2 24
抗细胞膜 DNA自身抗体（ autoantibidies to
membrane associated DNA，抗 mDNA。）
90.0%（ 98.8%）； AuA（以 Ds-DNA和 AHA
为靶抗原）；抗端粒抗体（抗原为真核细胞末端
DNA中高度重复的 TTAGGG/CCCTAA序列）
60%（ 91%）。 C1qAb（ 42,86%；有肾损害为 8 8,33%）。 CRPAb与 SLE的 SLEDAI﹑ 总
IgG/dsDNA滴度呈正相关 。
PM/DM,Jo-1 18-20%,pl-7<3,SRP4%,
Mi-28%,
56000 85-90%.
3 2 25
SSc:
Scl-70 5707%,ACA19.4%.,抗
RNA聚合酶 RNAPs I II III,AECA
（抗内皮细胞抗体） IgG型为 40%，抗原纤维抗体是重症的一个指标，抗丙酮酸脱氢酶的 Ela亚单位的抗体是发生胆汁性肝硬化的血清指标。 PM-Scl。
SS:
SSA45-68%,SSB20-33.6%,
抗甲状腺细胞抗体 50%,抗唾腺管细胞抗体 10-70%,抗胰管细胞抗体 6-
33%,抗胃黏膜细胞抗体 5-15%,抗线粒体抗体 20%.
3 2 26
MCTD:
ANA100%,nRNP100%.
RF:
PCA87%,IgM/IgG抗多糖抗体
87%.
ANCA
ANCA(anti neutrophil cytoplasmic
antibodies) 是 1982年由 Davies等人发现的。是针对中性粒细胞主要颗粒成分及单核细胞溶酶体的其主要抗原成分有蛋白酶 3（ PR3），髓过氧化物酶
（ MPO）组蛋白酶 (CG)，乳铁蛋白 (LF)，
杀菌 /通透性增加蛋白 (BIP)，人白细胞弹力蛋白酶 (HLE)，溶酶体膜糖蛋白等。
3 2 27
其检查方法用间接免疫荧光 (IIF)和抗原特异性酶联免疫吸附 (ELISA)。
分为 C-ANC（ Atypical）即弥漫的胞浆荧光无中心小叶间增强现象，
C-ANCA典型的颗粒状胞浆荧光伴中心小叶间增强现象,P-ANCA核周荧光伴和不伴核延伸，包括粒细胞特异性抗核抗体 (GSANA)；
AtypicalANCA其他形式的免疫荧光模式。
ANA,ACA等抗体常常产生 P-
ANCA样的免疫荧光模式。
3 2 28
ANCA的致病机制：
1.直接激活中性粒细胞
2.激活单核细胞
3.直接损伤内皮细胞
4.激活 T淋巴细胞
5.a-AT（ a-胰蛋白酶）是 PR3蛋白酶的抑制剂，
AT基因在小血管炎中成多态性。
Vasculitides,ANCA
Churg-Strauss 64-75%
Microscopic polyangiitis 75%
WG 90-97%
GCA (APL) >30%
Takayasu artertis (抗主动脉抗体 )>1:32
BD APL ANCA+
3 2 29
血管炎的抗体
1 ANCA：
2 AECA（ anti-endothelial cell
antibodies,AECA）,
BD 40%;
TA37%;MPA36%;PA44%;C-
S33%;GCA50%;OTHER62%.
3 anti-PR3(蛋白酶 3,)
anti-MPO(髓过氧化物酶）
3 2 30
其他：内皮素 ET-1，致炎因子 IL-
1?/β/TNF等；趋化 因子 MIP- 1?,MCP-
1,RANTES等。新喋呤。 sTNF-55，软骨低聚质蛋白（ COMP）。黏附分子等等。
常见风湿病实验检查风湿病病因学检查,
RA HLA-DRB10405
0409风险高达 58.2%.
SLE HLA-DQB1(nRNP),
DQa(SSA/SSB),
DQW6(Sm)
DQB1(TCR).
AS HLA-B27.
3 2 2
BS HLA-B51.
PM\DM HLA-B8,DR3,DR1,HLA-DRB1,ancestral
haplotype祖单倍体 8.1。 TNF-?-308A
SSC HLA-DR1,DR5,DRQI； P1A2/FN等位 基因与肺纤维化,Scl-70的阳性呈正相关。
SS HLA-DR3,DRBI0602,03（与肾小管酸中毒及 SSB密切相关,DQAI0504,DQBI0202。
RF HLA-DR4.
OA HLA-A1,B8.
3 2 3
HLA研究进展
HLA抗原基因的多态性，决定了其所表达的 HLA抗原分子的多态性,也决定了 HLA系统免疫应答的多样性与复杂性。近年来 HLA 基因分型迅猛发展，使得 HLA 基因分型更加准确，
简便和实用。 HLA 基因分型目前大致分为：
限制性片段长度多态性方法 PCR- RFLP
(restriction fragment length
polymophism)。 PCR- SSOP 是以核酸杂交为基础的分型技术。 PCR扩增特定的基因片段，
与 (sequence specific oligonucleotide
probes)序列特异性寡核苷酸探针杂交，进行分析鉴定。
基因芯片或微阵列技术 (gene chip or
DNA microarray)：
3 2 4
该技术其原理类似于反向斑点杂交。它是指大规模集成电路控制的机器人在尼龙膜或硅片等固相支持物的表面有规律地合成代表不同基因的寡核苷酸探针，或液相合成探针后，通过点样仪点样于固相支持物的表面。这些探针与放射性标记物或荧光素标记的样品的 DNA或
cDNA互补核酸序列相结合，通过放射自显影或荧光检测，对杂交结果进行计算机软件处理分析，获得杂交信号的强度及分布模式图，反映样品中基因表达的情况。
PCR-SSCP(single-strand
conformation polymorphism)可检测 DNA
片段中不同位置的点突变，而不必象 PCR-
RFLP 那样，必须选择合适的限制酶，使其识别的位点正好位于等位基因的特异性核苷酸序列处。
3 2 5
PCR- SSP(SEQUENCE SPECIFIC
PRIMES)是近年唯一针对急诊和尸体器官移植而设计的。其原理是通过序列特异性引物 SSP,
特异的扩增目的 DNA 片段，再通过凝胶电泳等手段，判断被扩增序列的存在。
作为第 3代遗传标记 SNP单核苷酸多态位点
(single nucleotide polymorphism)。已有 MHC-SNP分型试剂盒面市。
分子的超型及抗原结合肽超基序的发现，表明可从功能上对类分子进行分类使得该技术更为合理，简明和实用，对于疾病相关性的研究和异体移植有重大意义。
3 2 6
AS的相关遗传因素
1,HLA是一必需的致病基因，但其遗传风险为
16~50%。其亚型有 23个之多，从
B2701~2723。与 AS相关的是
2705﹑ 2704﹑ 2701等等。
2,CYP2D6﹑ LMP7和 TNF308等 TNF-?的等位基因； bosak报道 HLA-2﹑ Bw4﹑ Cw1/2﹑ DR1
基因频率均高于健康人群。这提示 HLA-
A﹑ B﹑ C﹑ DR和 DQ区域有与 AS发病的易感基因存在； HLA-B60增加了 AS依赖 HLA-B27发病的易感性。
3 2 7
链球菌感染的检测
1 咽拭子培养
20~25%
SZ(链球菌酶 )检
2ASO>500
50%
3DNA酶 -B>210 85%
4ASK(抗链球菌激酶 )>8
5AH(抗透明质酸酶 )>128
6ANDS(抗核苷酸 )<275
抗 EBV抗体 RA
PHS-2(福氏志贺菌 ) Reiter's
肺炎克雷伯菌 AS
沙门菌,螺杆菌 ReA
3 2 8
炎性实验室指标主要针对疾病活动性
ESR:
CRP:2周内 >80%,大于 4周
<25%
OTHER:1.白细胞及中性粒细胞,2.糖蛋白及粘蛋白等,
3 2 9
CRP
IL-1
IL-6
TNFa
TG
PF4白细胞粘着游走
CRP
凝血纤溶系统亢进
ICAM-1
VCAM-1
E-SELECTIN
血小板凝集亢进血小板释放反应感染外伤免疫异常恶性增生物
3 2 10
CRP与炎症
CRP是重要的炎性因子,其致炎作用包括,激活补体、刺激细胞因子分泌、上调内皮细胞黏附分子表达、抑制一氧化氮合成、增加纤溶酶原激活物抑制剂 -1的水平与活性、增强巨噬细胞对低密度脂蛋白的摄取及单核细胞化学趋化性、上调血管紧张素 Ⅱ -1型受体的表达等,
CRP与肥胖关系密切,而且脂肪细胞也可分泌 CRP.
CRP水平随年龄的增高而升高,女性较高,吸烟、
感染和某些药物可使其增高 ;而饮酒和某些药物可使其降低,
3 2 11
生化检查
1.Ca,P,Fe等电解质,
2.UA,磷酸钙双水化合物 CPP等,
3.肝,肾,血常规等功能检查,
4.CPK,LDH同功酶，肌球蛋白，肌凝蛋白重链，
肌钙蛋白 I（ TnI），等肌酶谱检查,
5.蛋白及蛋白电泳检查,
6.雌激素,泌乳素等激素检查,
7.维生素,骨钙素,TRAP,Pyd,Dpyd等,
3 2 12
雌激素和催乳素 PRL
大家都知道神经 -内分泌 -免疫调节网络功能失调，会影响的发生和发展。
PRL（ prolatin）已被证明具有免疫调节作用，对细胞和体液免疫都有促进作用，而且免疫细胞也能产生 PRL样物质，发挥自分泌和旁分泌作用。大量研究表明在 SLE中 PRL与可的松 CS比值增高反与病情进展相关。男性患者 PRL水平升高而雄激素功能低下，认为 PRL
可抑制睾酮的生成，在病因中起作用。但也有人认为不是通过其抑制雄激素而起作用。另外用 bromocriptine BRC溴隐停使 PRL降低可使 SLE病情改善。在 RA已证明 PRL是 AA
（ adjuvant arthritis）形成的必要条件。国外报道在 RA中 PRL水平上升发生率为 10.8%。
3 2 13
SS,PA,Reiter等风湿病都有 PRL水平升高。
目前认为 1.可能与可诱导核细胞产生 IgM，
IgA,IgG,ds-DNA和 ANA及 IgM类 RF，
ANA滴度增加并且 PRL水平与 ANA相平行。
IgG类 ds-DNA与抗甲状腺微粒体抗体 TMA合成增加，同时伴 ESR增快，淋巴细胞减少。
2.PRL基因在第 6号染色体短臂上，与 HLA基因复合体非常近。生殖危险因子与 RA病因相互作用可能是其原因。 SLE女性患者 HLA-
DRB10301和 PRL基因之间的连锁不平衡也是原因之一。 3.降低甾类物产生的允许作用。
PRL水平升高在甾类激素分泌减少的情况下起重要作用。一方面糖皮质激素能拮抗 PRL的刺激作用，而性激素对免疫的调节作用随性别而异。另一方面 PRL可影响甾类激素的产生，也可拮抗糖皮质激素的抑制作用。
3 2 14
4.PRL与细胞因子 PRL和 IL-2在免疫方面起协同作用，从而促进 AID的发生。同时
PRL也可促进滑膜纤维母细胞的增殖，并促进 IL-6,IL-8的生成。
而雌激素和雌激素受体在免疫调节和对许多风湿病发病机制，自身抗体的产生，及对其病理进程的影响巨大。早已为众人所熟悉。
3 2 15
滑液正常值
PH 7.3-7.43 7.38
WBC(/L) (13~180) 63
N 0-15 7
L 0-78 24
单核细胞 0-71 48
滑膜细胞 0-12 4
蛋白质 (g/L) 12-30 18
P(%) 56-63 60
A(%) 37-44 40
透明质酸盐 (g/L) 3
3 2 16
滑液分析
外观 WBC PC 粘蛋白 滑液与血清 微生物
试验 Glu差异 (ml/ml) 晶体等
正常 清晰，灰黄 0~200 <10% 良好 无差异 _
I类
(非炎性积液 )清晰，稍浊 50~4000 <30% 良好 无差异 _
II类 (非感染 偶有 LE细胞
轻度炎性 ) 清晰，稍浊 0~9000 <20% 良好 无差异 补体减少
III类 (非感染
重度炎性 ) 混浊 100~160,000 70% 不 良 10 ~30 补体减少晶体等
IV类 (感染 炎性 )
感染 高度混浊 150~250,000 90% 不 良 90 细菌培养阳性
结核 混浊 2500~100,000 60% 不良 70 结核培养阳性
3 2 17
滑液表现
I II III IV
OA RA 细菌性 创伤
肢端肥大症 AS 结核性 骨折
骨坏死 PA 淋球菌 血友病
Paget病 SS 神经病性患节炎
SLE PM/DM
NPA BD
SSC WG
Wilson RF
淀粉样变 REA
结节性红斑 IBD
软骨病 白血病
激素治疗 一部分细菌性
3 2 18
分子生物技术
1.目的 DNA的来源
从组织或细胞中提取,
通过载体获得 DNA片段,
以为 mRNA模板利用逆转录酶合成互补
DNA(cDNA).
DNA合成,通过 ligation,PCR,probe来完成,
2.重组 DNA技术,分子构建,细胞转移,宿主细胞鉴定,
3.核酸测定和应用
DNA/RNA印迹,PCR,原位 /斑点杂交,
DNA序列测定,
3 2 19
ANAs
ANA是指抗细胞内 DNA,RNA,AHA,no-
AHA,phospholipid…… 蛋白质分子及其复合物成分的抗体,Miescher于 1957年发现。
1957年 Ceppelini发现
DNA,ssDNA,dsDNA.
AHA:H1,H2A,H2B,H3,H4.
ENA:Sm,Nrnp,rRNP,SSA/SSB,ScL-
70,Jo-1,PM-
1,PCNA,RA33,centromere…,.
3 2 20
DNA研究
DNA大分子可以存在于循环中或黏附于多种器官的微血管结构，这些循环或器官原位抗原型 DNA均可以与循环抗 dsDNA自体抗体发生反应，形成抗原抗体免疫复合物，激活炎症系统，如补体途径。在器官引起 免疫复合物介导的疾病，引起关节炎，血管炎，肾炎等临床表现。 dsDNA抗体水平于疾病活动性，特别与
LN有密切关系。也可作为临床复发的指标。
SLE中的抗 DNA抗体是异基因的。血清的抗体和单克隆抗 DNA抗体可识别不同分子的核酸表位，如磷脂，蛋白，多糖和细胞结构。这说明 DNA本身不可能做为免疫原来诱导 DNA
抗体产生。同时这种抗体的多反应性可能与个体 Ig的不同区域的多结合位点或不同抗原的相同表位有关。
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抗 DNA抗体的产生与 NO有关，活性氧可在细胞分裂中期导致淋巴细胞染色体损害和断裂，使淋巴细胞功能失常或凋亡，释放大量核抗原产生自身抗体。 NO在 SLE中参与产生自身抗体,NO抑制粒细胞活性，诱导其凋亡，抑制吞噬细胞释放促炎介质，抑制 T细胞增殖和 IL-2释放，阻止 T辅助细胞分化 Th1细胞，导致细胞免疫功能低下，
大量自身抗体产生。在凋亡期间完整的核抗原的大量释放可以提供细胞外足够的核抗原来促进免疫反应，诱导抗体的产生。
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DNA免疫
哺乳动物具有免疫学特性温和，结构简单的特点，单纯的 DNA分子不能有效诱导免疫反应，
抗哺乳动物的 DNA抗体产生与抗原的交叉反应或多克隆 B细胞的活化有关。而细菌 DNA由于免疫原性强，结构复杂，能有效地诱导机体对宿主自体细胞以外的 DNA序列区域直接产生免疫应答。 SLE病人抗 DNA抗体主要是 Ig1和
Ig3而且需要 T细胞参与，且与所有 DNA的保守序列结合。这与健康人的抗 DNA抗体（ Ig2）
不同,
通过基因重组技术，将编码有特定蛋白抗原的裸露的质粒 DNA注入体内，表达出抗原蛋白，
诱导其抗体的表达及 T细胞依赖的细胞裂解等一系列特异性免疫应答。 DNA免疫不仅可以诱导体液免疫还可诱生特异性的以 CTL为代表的细胞免疫应答。
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OTHER ANTIBODY
RA,
Sa99%,AKA（抗角质蛋白抗体） 95%-100%,APF（抗核周因子） 40%-50%,AFA（抗聚角蛋白微丝蛋白抗体）为的共同抗原决定族。
RF(IgG,IgM,IgA)80%,RA3389.8%,CCP（抗环瓜氨酸肽抗体） 46.6%（ 96.6%），其中 IgG型为 53%,IgM型为 58%。 A-
p68A（为糖蛋白成分 GRP，也称免疫球蛋白结合蛋白 Bip binding
protein；实际上是一种内质网分子伴侣。） 67.8%;91.3。常见于 RF
阴性患者并出现于 RA早期。
SLE:
ds-DNA40-90%,AHA3080%,Sm35%,Nrnp20-35%,
SSA25-40%,
SSB10-15%,hsp40-50%,APL20-50%.anti-neuronal
antibodies,anti-N（
血清中 62.0%。脑脊液中 47.4%）
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抗细胞膜 DNA自身抗体（ autoantibidies to
membrane associated DNA，抗 mDNA。）
90.0%（ 98.8%）； AuA（以 Ds-DNA和 AHA
为靶抗原）；抗端粒抗体（抗原为真核细胞末端
DNA中高度重复的 TTAGGG/CCCTAA序列）
60%（ 91%）。 C1qAb（ 42,86%；有肾损害为 8 8,33%）。 CRPAb与 SLE的 SLEDAI﹑ 总
IgG/dsDNA滴度呈正相关 。
PM/DM,Jo-1 18-20%,pl-7<3,SRP4%,
Mi-28%,
56000 85-90%.
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SSc:
Scl-70 5707%,ACA19.4%.,抗
RNA聚合酶 RNAPs I II III,AECA
（抗内皮细胞抗体） IgG型为 40%，抗原纤维抗体是重症的一个指标，抗丙酮酸脱氢酶的 Ela亚单位的抗体是发生胆汁性肝硬化的血清指标。 PM-Scl。
SS:
SSA45-68%,SSB20-33.6%,
抗甲状腺细胞抗体 50%,抗唾腺管细胞抗体 10-70%,抗胰管细胞抗体 6-
33%,抗胃黏膜细胞抗体 5-15%,抗线粒体抗体 20%.
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MCTD:
ANA100%,nRNP100%.
RF:
PCA87%,IgM/IgG抗多糖抗体
87%.
ANCA
ANCA(anti neutrophil cytoplasmic
antibodies) 是 1982年由 Davies等人发现的。是针对中性粒细胞主要颗粒成分及单核细胞溶酶体的其主要抗原成分有蛋白酶 3（ PR3），髓过氧化物酶
（ MPO）组蛋白酶 (CG)，乳铁蛋白 (LF)，
杀菌 /通透性增加蛋白 (BIP)，人白细胞弹力蛋白酶 (HLE)，溶酶体膜糖蛋白等。
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其检查方法用间接免疫荧光 (IIF)和抗原特异性酶联免疫吸附 (ELISA)。
分为 C-ANC（ Atypical）即弥漫的胞浆荧光无中心小叶间增强现象，
C-ANCA典型的颗粒状胞浆荧光伴中心小叶间增强现象,P-ANCA核周荧光伴和不伴核延伸，包括粒细胞特异性抗核抗体 (GSANA)；
AtypicalANCA其他形式的免疫荧光模式。
ANA,ACA等抗体常常产生 P-
ANCA样的免疫荧光模式。
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ANCA的致病机制：
1.直接激活中性粒细胞
2.激活单核细胞
3.直接损伤内皮细胞
4.激活 T淋巴细胞
5.a-AT（ a-胰蛋白酶）是 PR3蛋白酶的抑制剂，
AT基因在小血管炎中成多态性。
Vasculitides,ANCA
Churg-Strauss 64-75%
Microscopic polyangiitis 75%
WG 90-97%
GCA (APL) >30%
Takayasu artertis (抗主动脉抗体 )>1:32
BD APL ANCA+
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血管炎的抗体
1 ANCA：
2 AECA（ anti-endothelial cell
antibodies,AECA）,
BD 40%;
TA37%;MPA36%;PA44%;C-
S33%;GCA50%;OTHER62%.
3 anti-PR3(蛋白酶 3,)
anti-MPO(髓过氧化物酶）
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其他：内皮素 ET-1，致炎因子 IL-
1?/β/TNF等；趋化 因子 MIP- 1?,MCP-
1,RANTES等。新喋呤。 sTNF-55，软骨低聚质蛋白（ COMP）。黏附分子等等。
