细菌的形态学检查
细菌形态学检查的意义
? 是细菌分类和鉴定所不可缺，并可为细菌进一
步鉴定提供依据
? 可以迅速了解临床标本中有无细菌及大致的数
量，并可根据其形态、结构和染色性大致决定
其种属，对临床及时选用抗生素有一定参考意
义
? 验证培养物是否纯种
? 有少数细菌可根据形态学的检查得出初步诊断
显微检查法
? 光学显微镜
? 暗视野显微镜
? 相差显微镜
? 荧光显微镜
? 电子显微镜
光学显微镜 light microscope
? 结构及原理
– 低倍镜、高倍镜、油浸镜
? 分辨率为光波波长的一半
– 可见光的波长 0.4~0.7μm平均 0.5 μm
油浸镜
? 原理
? 香柏油的折射率
（ n=1.52)与玻璃相
同
? 增加物镜的开口率
? 增加亮度
? 标记：× 100,白圈
暗视野显微镜
darkfiled microscope
? 结构及原
理
? 用途
– 未染色的
螺旋体的
形态和运
动观察
相差显微镜
phase contrast microscope
? 结构及原理
? 用途
– 用于观察细菌活
体的详细结构
荧光显微镜
fluorescence microscope
? 结构及原理
? 用途
电子显微镜
electron microscope
? 结构及原理
? 用途
电子波波长约为 0.005nm
能分辨 1nm的微粒
细菌的活体检查法
? 细菌的折光性不强,在普通的光学显微镜
下能看见,但不清楚
? 一般用于观察细菌的运动、形态和排列、
以及大致估计细菌的大小
? 方法：悬滴法、压滴法
细菌染色标本的检查法
? 对细菌进行固定后，进行适当染色，在
油镜下可清楚的观察
– 细菌的染色反应性
– 形态、排列
– 特殊结构
– 准确测量细菌的大小
细菌的染色法
? 染色的一般原理
– 物理学说
– 化学学说
– 其它学说
常用的染料
? 酸性染料 电离后带负电荷，一般情况下
细菌都带负电荷，故细菌不着色
– 伊红、刚果红等常用于细胞浆染色，细菌少
用
? 碱性染料 电离后带正电荷，一般情况下
细菌都带负电荷，故细菌着色。
– 结晶紫、美蓝和碱性复红 等常用于细菌染色
? 复合染料 姬姆萨染料
? 单纯染料
单染色法
? 美蓝染色法
? 复红染色法
? 结晶紫染色法
? 特点,细菌为统一的单一颜色,可以观察细
菌的大小、形态和排列
负染色法
? 用细菌不能结合的材料进行染色,如酸
性染料、墨汁
? 在黑背景下可看到透光的细菌,主要用
于真菌的检查
复合染色法
? 革兰染色法
? 抗酸染色法
? 特殊染色法 芽胞染色法、鞭毛染色
法、荚膜染色法、异染颗粒染色法
等等
革兰染色法
? 历史
– 丹麦细菌学家
– 革兰（ Hans Christian Gram)于 1884年创立
革兰染色法方法步骤
? 制作一张细菌涂片,干燥固定
? 加结晶紫染液覆盖涂片染色 1分钟,用小水流冲洗
? 加革兰碘液,染色 1分钟,用小水流冲洗
? 加 95%乙醇,轻轻摇动进行脱色,然后倾去 ;重复进
行,直到流下的乙醇为极淡的紫色或无色为止
– 此步骤需多次练习才能掌握
? 加稀释复红或沙黄,染色 1分钟,水洗
? 待干后,用显微镜油镜检查
革兰染色法结果观察
? 紫色 革兰阳性
? 红色 革兰阴性
革兰染色法的意义
? 将细菌分成二类
? 细菌的致病性不同
? 抗生素使用不同
革兰染色法的原理
? 目前尚未明了
? 三大学说
– 通透性学说
– 化学学说
– 等电点学说
通透性学说
? G+细菌细胞壁致密,脂类含量低,蛋白含量
高,遇乙醇变性,通透性不强,已进入细胞内
的结晶紫不能透出,保留了紫色
? G-细菌细胞壁较疏松,脂类含量高,蛋白含
量低,遇乙醇脂类溶解,通透性加强,已进入
细胞内的结晶紫容易透出,被复红复染成
红色
– 细胞壁缺失后 G+细菌变为 G-细菌
化学学说
? G+细菌含有大量核糖核酸镁盐,与结晶紫
及碘复合物形成大分子复合物,使结晶紫
不能逸出
? G-细菌含有少量核糖核酸镁盐,与结晶紫
及碘复合物形成大分子复合物少,使结晶
紫容易逸出
等电点学说
? G+细菌 pI低,为 2~3
? G-细菌 pI高,为 4~5
? 在同样的中性或中性偏碱条件下,G+细菌
所携带的负电荷比 G-细菌多,因而结合了
更多的碱性染料
细菌形态学检查的意义
? 是细菌分类和鉴定所不可缺，并可为细菌进一
步鉴定提供依据
? 可以迅速了解临床标本中有无细菌及大致的数
量，并可根据其形态、结构和染色性大致决定
其种属，对临床及时选用抗生素有一定参考意
义
? 验证培养物是否纯种
? 有少数细菌可根据形态学的检查得出初步诊断
显微检查法
? 光学显微镜
? 暗视野显微镜
? 相差显微镜
? 荧光显微镜
? 电子显微镜
光学显微镜 light microscope
? 结构及原理
– 低倍镜、高倍镜、油浸镜
? 分辨率为光波波长的一半
– 可见光的波长 0.4~0.7μm平均 0.5 μm
油浸镜
? 原理
? 香柏油的折射率
（ n=1.52)与玻璃相
同
? 增加物镜的开口率
? 增加亮度
? 标记：× 100,白圈
暗视野显微镜
darkfiled microscope
? 结构及原
理
? 用途
– 未染色的
螺旋体的
形态和运
动观察
相差显微镜
phase contrast microscope
? 结构及原理
? 用途
– 用于观察细菌活
体的详细结构
荧光显微镜
fluorescence microscope
? 结构及原理
? 用途
电子显微镜
electron microscope
? 结构及原理
? 用途
电子波波长约为 0.005nm
能分辨 1nm的微粒
细菌的活体检查法
? 细菌的折光性不强,在普通的光学显微镜
下能看见,但不清楚
? 一般用于观察细菌的运动、形态和排列、
以及大致估计细菌的大小
? 方法：悬滴法、压滴法
细菌染色标本的检查法
? 对细菌进行固定后，进行适当染色，在
油镜下可清楚的观察
– 细菌的染色反应性
– 形态、排列
– 特殊结构
– 准确测量细菌的大小
细菌的染色法
? 染色的一般原理
– 物理学说
– 化学学说
– 其它学说
常用的染料
? 酸性染料 电离后带负电荷，一般情况下
细菌都带负电荷，故细菌不着色
– 伊红、刚果红等常用于细胞浆染色，细菌少
用
? 碱性染料 电离后带正电荷，一般情况下
细菌都带负电荷，故细菌着色。
– 结晶紫、美蓝和碱性复红 等常用于细菌染色
? 复合染料 姬姆萨染料
? 单纯染料
单染色法
? 美蓝染色法
? 复红染色法
? 结晶紫染色法
? 特点,细菌为统一的单一颜色,可以观察细
菌的大小、形态和排列
负染色法
? 用细菌不能结合的材料进行染色,如酸
性染料、墨汁
? 在黑背景下可看到透光的细菌,主要用
于真菌的检查
复合染色法
? 革兰染色法
? 抗酸染色法
? 特殊染色法 芽胞染色法、鞭毛染色
法、荚膜染色法、异染颗粒染色法
等等
革兰染色法
? 历史
– 丹麦细菌学家
– 革兰（ Hans Christian Gram)于 1884年创立
革兰染色法方法步骤
? 制作一张细菌涂片,干燥固定
? 加结晶紫染液覆盖涂片染色 1分钟,用小水流冲洗
? 加革兰碘液,染色 1分钟,用小水流冲洗
? 加 95%乙醇,轻轻摇动进行脱色,然后倾去 ;重复进
行,直到流下的乙醇为极淡的紫色或无色为止
– 此步骤需多次练习才能掌握
? 加稀释复红或沙黄,染色 1分钟,水洗
? 待干后,用显微镜油镜检查
革兰染色法结果观察
? 紫色 革兰阳性
? 红色 革兰阴性
革兰染色法的意义
? 将细菌分成二类
? 细菌的致病性不同
? 抗生素使用不同
革兰染色法的原理
? 目前尚未明了
? 三大学说
– 通透性学说
– 化学学说
– 等电点学说
通透性学说
? G+细菌细胞壁致密,脂类含量低,蛋白含量
高,遇乙醇变性,通透性不强,已进入细胞内
的结晶紫不能透出,保留了紫色
? G-细菌细胞壁较疏松,脂类含量高,蛋白含
量低,遇乙醇脂类溶解,通透性加强,已进入
细胞内的结晶紫容易透出,被复红复染成
红色
– 细胞壁缺失后 G+细菌变为 G-细菌
化学学说
? G+细菌含有大量核糖核酸镁盐,与结晶紫
及碘复合物形成大分子复合物,使结晶紫
不能逸出
? G-细菌含有少量核糖核酸镁盐,与结晶紫
及碘复合物形成大分子复合物少,使结晶
紫容易逸出
等电点学说
? G+细菌 pI低,为 2~3
? G-细菌 pI高,为 4~5
? 在同样的中性或中性偏碱条件下,G+细菌
所携带的负电荷比 G-细菌多,因而结合了
更多的碱性染料
