EphA2在大肠腺癌中的表达
陈壬寅 李珊珊
郑州大学第一附属医院病理科
郑州大学基础医学院病理学教研室
河南省肿瘤病理重点实验室
第一部分
大肠腺癌中 EphA2表达及其与
临床病理学因素,DNA倍体、
细胞周期关系的研究
EphA2基因的介绍
? EphA2是 Lindberg于 1990年用简并引物从人角化细胞
cDNA文库中筛选得到的一个 Eph（ Erythropoitin-
produceing hepato-cellular,Eph) 亚家族成员 。
? 人 EphA2基因定位于 1p36.1,有 17个外显子。
? Eph受体家族是 已知 最大的 酪氨酸蛋白激酶受体
(receptor tyrosine kinase,RTK)家族最大的家 庭。
? Eph家族受体激酶和他们 EFN配体 介导的细胞信号传
导 参与神经系统的基本发生过程,神经系统的信号传
递，在细胞的分化、发育、增殖，组织和器官的形成
、血管生成、细胞与细胞之间的粘附及 肿瘤的发生
和肿瘤的新生血管的形成 等过程中发挥重要的和必
不可少的作用。
EphA2与肿瘤的关系
? EphA2广泛高表达于 不同的肿瘤组织和细胞系, 如
,乳腺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌和食管癌，肾
细胞癌等，目前认为 EphA2参与肿瘤的发生和发展
，是功能强大的癌基因。
? EphA2的高表达能诱导非转化乳腺和前列腺上皮细
胞在体内、外的恶性转化，并促进其侵袭转移 。
? 应用 EphA2蛋白的抗体靶向抑制试验，下调 EphA2
蛋白表达的同时，也抑制了肿瘤细胞的生长，进而
降低肿瘤的恶性程度 。
154例大肠腺癌组织和相应正常大肠粘膜组织均来自郑州大学第一、二附属医院和河
南省肿瘤医院 2001年 1月 ~2004年 12月 手术切除标本的存档蜡块 (其中 66例为手术切
除新鲜标本和蜡块和 88例存档蜡块 )
1份置 4%多聚甲醛中固定存放 另 2份置 -82℃ 中存放
石蜡包
埋、切
片、
HE
染色
石蜡包埋、
切片，进
行免疫组
化
提取总
mRNA、
进行
RT-
PCR
实 验 标 本
FCM检
侧 DNA
倍体、细
胞周期
细胞增
殖率
临床病理资料
154例（ 88例存档石蜡包埋标本和 66例
手术切除新鲜大肠腺癌标本）大肠腺癌
患者，术前均未接受化疗、放疗及其他
治疗。其中男性 78例，女性 76例，年龄
在 23-85岁之间，平均年龄为 49.7岁。
66例新鲜手术切除标本均为大肠腺癌：
分化程度,高分化腺癌 30例，中分化腺癌 23
例，低分化腺癌 13例。
浸润深度,粘膜层 10例，粘膜下层 0例，肌
层 14例，浆膜层 37例，外周组织 5例。
转移：有淋巴结转移者 16例，无淋巴结转
移者 50例；有血道转移者 1例，无血道转
移者 65例；无种植性转移。
88例存档蜡块全部为腺癌,
分化程度：高分化腺癌 21例，中分化腺癌 18例，
低分化 29例和未分化 20例；
浸润深度：粘膜层 62例，粘膜下层 1例，肌层 17
例、浆膜层 5例，外周组织 3例；
转移：有淋巴结转移者 14例，无淋巴结转移者 74
例；有血道转移者 11例，无血道转移者 77例；
有种植性转移者 10例，无种植性转移者 78例 。
技 术 路 线
免疫组化（ SP法 ) FCM RT-PCR技术
检测 154例大肠腺癌组织
和相应正常食管组织中
EphA2蛋白表达
检测 66例大肠腺癌手术切
除新 鲜 组织和相应正常大
肠粘膜手术切除新 鲜 组织
中 DNA倍体、细胞周期、
细胞增殖率
探讨 EphA2表达与大肠腺癌病理临床因素,DNA倍体、细胞周期的关系
检测 66例大肠腺癌手术切
除新 鲜 组织和相应正常大肠
粘膜手术切除新 鲜 组织中
EphA2mRNA表达
一, 免疫组化
?步骤 （略）
?对照组设计,以已知 EphA2阳性食管鳞癌和正常食管
粘膜腺体组织切片作为阳性对照, 用正常兔 IgG代替一抗
作为阴性对照,用 PBS代替一抗作为空白对照 。
?免疫组化结果判定及定量分析,EPhA2免疫组化阳性
表达位于细胞胞浆，呈棕黄色。定量分析采用高清晰图
像处理系统，随机取 10个高倍视野进行图像分析，对免
疫组化切片检测 EphA2阳性细胞数，依据阳性细胞所占肿
瘤细胞面积的百分比和染色强度判断结果。
实 验 方 法
二,组织中总 RNA的提取及 RT-PCR
?步骤 （略）
?RNA浓度的测定 （略）
?对照设置,（ 1）阴性对照：以去离子水代替提取
的总 RNA，结果阴性。
?（ 2）内参对照：用 β-actin作为内参引物，与
EphA2和 KAI1引物分别同管扩增，结果在紫外灯下
出现一条 330bp的荧光带
?结果判定
?阳性判断标准为：目的 EphA2基因 RT-PCR产物凝
胶电泳后在紫外灯下分别出现一条 586bp的荧光带
。
实 验 方 法
取大肠腺癌和正常大肠粘膜组织 0.5g
剪碎 100,300目尼龙网上搓
收集细胞液,800prm/min离心 2min
70%乙醇 (4℃ )中固定 1h LPR染液,避光冷藏 (4℃ )5min
Stain 1ml避光 30min.
上机检测
FCM实验步骤：
FCM对照组设计和诊断标准：
? 设正常对照组：用正常人外周血淋巴细胞，即二倍体细胞作为 DNA含量
? 和肿瘤细胞 DNA倍体、细胞周期的参考标准
? DNA倍体分析,用 Partec流式细胞仪,计数 10000个细胞,具有相同 DNA含
? 量的细胞群表现为直方图中独立的峰,即每个峰表示一定 DNA含量或倍体
? 的细胞亚群。在正常对照组中,第 1个峰代表单倍体 (2C)细胞亚群,在实验
? 组中，第 1个峰代表双倍体 (G0/G1,2C)细胞亚群,第 3个峰则代表四倍体
? (G2/M,4C)细胞亚群，两峰之间代表 S期细胞亚群。计算机系统算出每
? 个峰下的面积所表示的该倍体的细胞占全部细胞的百分比。
? 诊断标准,根据左连富的标准,DNA倍体单倍体细胞百分数与正常对照组
? 单倍体细胞平均百分数相比较,在其两个标准差之内为正常,否则为异常。
FCM计算标准：
? DNA指数 (DI)计算公式,DI=样品细胞 G1峰道数均值 ÷ 正常
组织细胞 G1峰道数均值。
? DNA含量分析,以 DNA指数 (DI)表示细胞 DNA相对含量，根
据 DI值判断 DNA倍体。 0.9≤DI ≤1,1 为 DNA二倍体 ;DI < 0,9
或 > 1,1 为异倍体。
? 细胞周期分布的计算：运用 DNA细胞分析软件，计算出各时
相的分布百分比，以 S期细胞比率 (SPF)和增殖指数（ PI）表
示细胞的增殖活性。
? SPF( %) = [ S ÷ ( G0/ G1 + S + G2M) ] × 100 %
? PI=[(S+G2)÷ （ G1+S+G2） ]× 100%
统计学处理
所有数据均经 SPSS 12.0软件进行统计分析。计数资
料计算阳性率，计量资料用采用 X± S表示；阳性率
之间的比较采用 χ2检验（ chi-square）及 Fisher确定概
率计算法；两组均数的比较用 t检验 (t-test)；两组以
上均数的比较用方差分析（ ANVOA）和 Spearman
等级相关分析； 两变量之间的关系分析采用相关分
析；多变量之间的关系分析采用 秩和 Chi-sguare 检
验；行程列表 Chi-sguare检验 。显著性水准 α=0.05。
EphA2mRNA及蛋白表达与大肠腺癌
的关系：免疫组化结果
? 免疫组化检测结果：
– EphA2蛋白定位于癌细胞、
粘膜上皮细胞及癌组织血管
内皮胞浆内,呈棕黄色。
– 阴性对照均无阳性显示。
大肠腺 癌组织 及正常粘膜组织中
EphA2蛋白的表达
正常粘膜 116(75.3) 6(3.9) 26（ 16.9） 6（ 3.9） 1.369± 0.663
腺 癌 12（ 7.8） 32（ 20.8） 48（ 22.7） 62（ 40.3） 4.789± 0.542
组别 EphA2蛋白表达（例数 %） a 阳性细胞面积（ X± S)b
0级 I级 II级 III级
一, 大肠腺癌组织和正常粘膜组
织中 EphA2蛋白表达
注,a:χ2=70.5706,P<0.0001;b:χ2=90.523,P<0.0001
正常粘膜组织中 EphA2蛋白表达 SP
法 × 200
大肠腺癌组织中
EphA2蛋白表达 SP法 × 200
二,EphA2蛋白表达在大肠腺癌癌细胞与癌
组织中血管内皮细胞的比较
EphA2蛋白表达例数 (%)
组别 0级 I级 II级 III级
肿瘤细胞 200(11.2) 930(45.6) 700（ 35.0） 170（ 8.2）
血管内皮细胞 170（ 8.3） 940（ 46.1） 690（ 34.5） 200（ 11.2）
注,χ2=1562.1481,χ2 =90.272,P<0.000
大肠腺癌组织中癌细胞和血管内皮细胞
EphA2蛋白的表达 SP法 × 400
三,EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病
理学因素的关系 （ A)
临床病理 EphA2蛋白表达例数 (%)
学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P
年龄 a
≤30 7 0 (00.0) 2 (1.30) 2 (1.30) 3 (1.95)
51～ 70 79 4 (5.1) 16 (20.3) 26 (32.9) 33(41.8)
>70 30 5 (16.7) 8 (26.8) 9(30.0) 8(26.8) 0.577
性别 b
男 78 7(9.0) 21 (26.8) 26(33.3) 2 4(30.9)
女 76 5 (6.6) 11(14.5) 22 (28.9) 38 (50.0) 0.074
a,χ2=7.580; b:χ2=6.928
临床病理 EphA2蛋白表达例数 (%)
学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P
肿 瘤部 位 c
升结肠 14 0 (0.0) 1 (7.1) 2 (14.3) 11 (78.6)
横结肠 6 1（ 16.7） 1(16.7) 3(50.0) 1（ 16.7）
降结肠 4 0(0.0) 1(25.0) 2(50.0) 1(25.0)
乙状结肠 23 3(13.0) 3(13.0) 8(34.8) 9(39.1)
直 肠 86 4(4.7) 24(28.0) 28(32.6) 29(33.7)
结肠＃ 24 4(16.7) 2(8.3) 5(20.8) 11(45.2) 0.0798
大体类型 d
隆突型 108 6（ 5.55） 25（ 23.14） 31（ 28.7） 46（ 42.59）
溃疡型 6 0 （ 0.00） 3（ 50.0） 3（ 50.0） 0（ 0.00）
浸润型 27 3（ 11.11） 3（ 11.11） 12（ 44.44） 9（ 33.33）
管周型 13 3（ 23.08） 1（ 7.70） 5（ 38.46） 7（ 53.85） 0.0228
c:χ2=9.8600; d,χ2=7.5625
三,EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系 （ B)
＃详细部位不清
EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因
素的关系 (C)
临床病理 EphA2蛋白表达例数 (%)
学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P
肿瘤体积
(直径 cm)
<3 6 1(16.7) 1(16.7) 3(50.0) 1(16.0)
3-5 98 7(7.1) 14(14.3) 25(25.5) 42(42.9)
5.1-7 40 2(5.0) 4(10.0) 17(42.5) 17(42.5)
7.1-9 3 0(0.0) 1(33.3) 1(33.3) 1(33.3)
>9.1 7 2(28.6) 2(28.6) 2(28.6) 1(14.2) 0.533
χ2=10.723
EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系 (D)
临床病理 EphA2蛋白表达例数 (%)
学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P
分化程度 a
高分化 51 3(5.0) 7(13.7) 18(35.3) 23(45.1)
中分化 41 1(2.4) 9 (22.0) 18(43.9) 13(2.4)
低分化 42 7 (16.7) 13(31.0) 10(23.8) 12(28.6)
未分化 20 1(5.0) 3（ 15.0） 2(10.0) 14(70.0) 0.007a
浸润深度 b
粘膜层（ T0） 72 6(8.3) 21(29.2) 24(33.3) 21(29.1)
粘膜下层 (T1) 1 0(0.0) 1(100) 0(0.0) 0(0.0)
肌层 (T2) 31 2(6.5) 6 (19.4) 13(41.7) 10(32.3)
浆膜层 (T3) 42 4(9.5) 2(4.8) 7 (16.7) 29(69.0)
外周组织 (T4) 8 0(0.0) 2(25.0) 4(50.0) 2(25.0) 0.004b
A:χ2=22.730 ； b:χ2=29.225
EphA2蛋白表达与大肠腺癌的关系 (E)
淋巴道转移 c
有 30 4 (13.3) 7(23.3) 12(40.0) 7(23.3)
无 124 8(6.5) 25(20.2) 36(29.0) 55(44.3) 0.1207c
血道转移 d
有 12 0 (0.0) 1(8.3) 7(58.3) 4(33.3)
无 142 12(8.5) 31(21.8) 41(28.9) 58(40.8) 0.1348d
种植性转移 e
有 0 0 (0.0) 0(0.0) 7(70.0) 3(30.0)
无 144 12(8.3) 32(22.2) 41(28.5) 59(41.0) 0.0783e
临床病理 EphA2蛋白表达例数 (%)
学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P
c:χ2=5.8205; d,χ2=5.565； e:χ2=6.8070
EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法 × 200
EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆,
强度 I级
EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法 × 200
EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆,
强度 II级
EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法 × 200
EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细
胞的胞浆,强度 III级
EphA2在大肠腺癌组织中的表达
SP法 × 200
EphA2蛋白阳性染色定位在肿瘤区
域和血管内皮细胞
EphA2基因 RT-PCR结果
?EphA2基因 RT-PCR结果：
- 经 RT-PCR扩增，目的条
带为 586bp。与 EphA2引
物同管扩增的 β -actin
内参引物为 330bp的荧
光条带。以去离子水代
替提取的总 RNA的阴性
对照无任何荧光条带显
示。
大肠腺癌 癌组织和 正常粘膜中
EphA2mRNA表达
1 2 3 4 5 6 M
A Epha2 → →600bp
B β-actin→
→200bp
一,EphA2mRNA表达与大肠腺癌
临床病理学因素的关系
临床病理 Eph2mRNA EphA2/β-actin
学因素 例数 + － P (X± S) P
正常组织 66 21 45 0.7075± 0.3576
癌组织 66 22 44 0.26a 0.8501± 0.4610 0.54k
性别
男 33 13 20 0.3621± 0.2314
女 33 9 24 0.296b 0.2028± 0.2996 0.888l
年龄
＜ 30 1 0 1 0.3540± 0.446
30-60 40 19 21 0.7921± 0.2364
＞ 60 25 3 22 0.006c 0.3691± 0.4328 0.001m
EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理
学因素的关系 (A)
A,χ2=0.161; b,χ2=1.091; c,χ2=10.322
k,F=6.277;l,F=0.20 ; m,F=11.405
EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学
因素的关系 (B)
临床病理 Eph2mRNA EphA2/β-actin
学因素 例数 + － P (X± S) P
分化程度
高分化 30 6 24 0.5162± 0.6321
中分化 23 11 12 0.7421± 0.3261
低分化 13 5 8 0.089d 0.5026± 0.6741 0.499n
浸润深度
粘膜层 5 2 3 0.5026± 0.6459
粘膜下层 5 2 3 0.3654± 0.6598
肌层 14 4 10 0.8621± 0.3654
浆膜层 38 11 27 0.3011± 0.3224
外周组织 5 2 3 0.038e 0.7149± 0.1190 0.000o
d,χ2=4.837; e,χ2=10.120; n:F=0.474; o,F=48465;
EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学
因素的关系 (C)
临床病理 Eph2mRNA EphA2/β-actin
学因素 例数 + － P (X± S) P
转移
淋巴道转移
有 16 6 10 0.3462± 0.1791
无 50 16 34 0.685f 0.3896± 0.1779 0.161p
血道转移
有 1 1 0 0.2496± 0.7961
无 65 21 44 0.154g 0.2417± 0.8192 0.953q
f,χ2=0.165; g,χ2=2.031; p,F=2.119; q,F=0.004;
EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系 (D)
临床病理 Eph2mRNA EphA2/β-actin
学因素 例数 + － P (X± S) P
部位
升结肠 9 4 5 0.1985± 0.751
横结肠 2 1 1 0.2417± 0.8192
降结肠 0 0 0 0.0000± 0.0000
乙状结肠 16 6 10 0.2413± 0.7231
直 肠 39 11 28 0.720h 0.1951± 0.7950 0.795r
肿瘤大体类型
隆起型 38 17 21 0.2413± 0.7231
溃疡型 22 4 18 0.2496± 0.7211
浸润型 3 0 3 0.2315± 0.2339
管周型 3 1 2 0.112i 0.2351± 0.2996 0.366s
肿瘤体积 (直径 cm)
＜ 5 32 14 18 0.4362± 0.665
≥5 34 8 26 0.082j 0.4461± 0.674 0.060t
h,χ2=1.337; i,χ2=7.081; j,χ2=3.033; r,F=0.342; s,F=1.076 t:F=9.286
1 2 3 4 5 6 M
A Epha2 → →700bp
B β-actin→ 300bp
M,标准分子量 (100bp DNA ladder);
A,EphA2 cDNA，片段大小 586bp;
B,内参照 β-actin,片段大小 330bp;
1,阳性对照,2：, 癌浸润浆膜层 ;3,癌浸润肌层 ;
4,癌浸润粘膜下层 ;5,对应的正常粘膜 6,阴性对照
EphA2在大肠腺癌组织中的 RT-PCR结果
二,大肠腺癌中 EphA2蛋白表达与
EphA2 mRNA表达的关系
大肠腺癌中 EphA2蛋白表达与 EphA2 mRNA
表达的关系
EphA2 mRNA
EphA2 protein － + 合计
+ 17 23 40
－ 5 21 26
合计 22 44 66
χ2=0.25, P=0.6171
不同级别 EphA2蛋白表达的大肠腺
癌中的 EphA2 mRNA表达
EphA2蛋白表达分级 例数 EphA2/β-actin (X± S)
0 5 0.31± 0.22
I 3 1.12± 0.30
II 5 1.60± 0.25
III 9 1.39± 0.31
注, 0:I:II:III F=17.811 P<0.01； 0:I t=0.601 P<0.05；
0:II t=0.601 P<0.05； 0:III t=0.95 P<0.05；
I:II:III rs=0.5620 P>0.05
EphA2与 DNA倍体、细胞周期和
细胞增殖率关系
FCM检测结果
一,大肠腺癌和正常组织中 DNA含
量和 DNA倍体
一,大肠腺癌和正常组织中 DNA含
量和 DNA倍体的比较
病理临床因素 例数 DI (X± S) DNA倍体
P 二倍体 异倍体 P
正常 组织 66 1.0± 0.1 66 0
癌组织 66 1.67± 0.19 0.005 7 59 0.005
a, F=6.086;b,F=3.697;
二,大肠腺癌 DNA含量和 DNA倍体
与病理临床因素的关系
二,大肠腺癌 DNA含量和 DNA倍体与
病理临床因素的关系 (A)
病理临床因素 例数 DI (X± S) DNA倍体
P 二倍体 异倍体 P
年龄
＜ 30 1 1.10± 0.17 1 0
30-60 40 1.26± 0.21 5 35
＞ 60 25 1.11± 0.15 0.215c 1 24 0.086m
分化程度
高分化 30 1.16± 0.21 3 27
中分化 23 1.23± 0.16 2 21
低分化 13 1.32± 0.17 0.489d 2 11 0.455n
c,F=1.701;d,F=0.770; m:F=2.644;n,F=0.890
大肠腺癌 DNA含量和 DNA倍体与
病理临床因素的关系（ B)
病理临 例数 DI (X± S) DNA倍体
床因素 P 二倍体 异倍体 P
性别
男 33 1.32± 0.12 4 29
女 33 1.28± 0.11 0.056 3 30 0.056
F=6.277;F=3.697
大肠腺癌 DNA含量和 DNA倍体与
病理临床因素的关系 (C)
病理临床因素 例数 DI (X± S) DNA倍体
P 二倍体 异倍体 P
浸润深度
粘膜层 5 1.27± 0.23 1 4
粘膜下层 5 1.31± 0.21 0 5
肌层 14 1.30± 0.22 2 12
浆膜层 38 1.49± 0.29 2 36
外周组织 5 1.37± 0.15 0.11e 2 3 0.550o
淋巴道转移
有 16 1.31± 0.20 2 16
无 50 1.43± 0.16 0.224f 5 45 0.224p
血道转移
有 1 1.43± 0.33 0 1
无 65 1.39± 0.20 0.938g 7 58 0.967q
e,F=4.016; f,F=1.684; g,F=0.006; o,F=0.363;p,F=1.684;q,F=0.086
大肠腺癌 DNA含量和 DNA倍体与
病理临床因素的关系（ D)
病理临床因素 例数 DI (X± S) DNA倍体
P 二倍体 异倍体 P
部位
升结肠 9 1.48± 0.23 1 8
横结肠 2 1.39± 0.31 1 1
降结肠 0 1.10± 0.20 0 0
乙状结肠 16 1.46± 0.26 2 14
直 肠 39 1.43± 0.21 0.765h 3 36 0.909r
肿瘤大体类型
隆起型 38 1.43± 0.21 3 35
溃疡型 22 1.36± 0.20 2 20
浸润型 3 1.39± 0.31 1 2
管周型 3 1.66± 0.23 0.432i 1 2 0.371s
肿瘤体积 (直径 cm)
＜ 5 32 1.49± 0.31 4 28
≥5 34 1.66± 0.23 0.086 j 3 31 0.761t
h,F=0.274; i,F=0.913; j:F=2.644; r,F=0.097; s:F=0.816;t:F=0.094
正常大肠粘膜组织的细胞周期
分布 和 DNA倍体
大肠腺癌的细胞周期分布，
出现异倍体峰
三,大肠腺癌组织中 EphA2蛋白和
EphA2mRNA表达 与 DNA倍体和 DI的关系
大肠腺癌组织中 EphA2蛋白和 EphA2mRNA
表达 与 DNA倍体和 DI的关系
EphA2 例数 DI (X± S) DNA倍体
P 二倍体 异倍体 P
蛋白表达
阳性 40 1.76± 0.26 4 36
阴性 26 1.69± 0.32 0.903a 3 23 0.745c
mRNA表达
阳性 22 1.79± 0.31 4 18
阴性 44 1.87± 0.39 0.273b 3 41 0.518d
a,F=0.016;b,F=1.243;c,F=0.413;d,F=0.426
四,大肠腺癌 DNA倍体与 SPF,PI
的关系
大肠腺癌 DNA倍体与 SPF,PI的关系
DNA倍体 例数 SPF( X± S) P PI(X± S) P
二倍体 7 11.06± 2.52 20.73± 2.52
异倍体 59 13.14± 2.04 0.042a 23.3± 2.66 0.032b
注,a,χ2 =1.2; b,χ2 =1.1
EphA2蛋白的表达结果分析
一, EphA2在正常大肠粘膜上皮中的表
达结果分析
1.EphA2 在正常大肠粘膜上皮低表达，阳性率仅
为 24.67%（ 38/154），且阳性细胞 III级染色仅
占 3.9%，阳性细胞大部分定位于大肠粘膜隐窝
上皮基底部的胞浆,少量阳性细胞亦可见于表面
粘膜腺体，提示可能 EphA2作用于增殖期上皮
细胞，也可能参与细胞分化。
2.本研究发现的 EphA2在正常大肠粘膜上皮和血
管内皮细胞的 表达和分布模式提示,EphA2可
能 参与了正常大肠粘膜上皮的增殖过程。
二, EphA2在大肠腺 癌中 的表达结果分析
(1)
EphA2广泛高表达于许多人类肿瘤，无论
从肿瘤细胞还是肿瘤组织的检测都高表达，
包括：乳腺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌、
食管癌、肺癌和宫颈癌。本研究发现，相比
正常大肠粘膜上皮,EphA2在腺癌组织中高
表达，统计学分析差异有明显显著性
(P<0.001)，表明 EphA2高表达可能与大肠腺
粘膜上皮的癌变相关。
EphA2高表达 与大肠腺癌的生长方式、癌的
组织学分级、癌细胞浸润深度相关，表明
EphA2的高表达导致癌细胞恶性程度和侵袭性
增加，使其更易发生浸润。
EphA2高表达 与淋巴道转移、血道转移、种
植性转移无关，表明 EphA2的高表达与大肠腺
癌癌细胞的转移潜能无关。
二, EphA2在大肠腺 癌中 的表达结果分析
(2)
三, EphA2蛋白在大肠腺癌组织中血管
内皮细胞的阳性表达结果分析
本研究发现在 大肠腺 癌组织中, EphA2
阳性表达也见于 血管内皮细胞，通过 大肠
腺 癌细胞和血管内皮细胞 EphA2阳性表达
细胞计数对比，两者呈正相关，表明
EphA2参与肿瘤组织中的血管形成，从而
促进肿瘤的生长、发展。
EphA2mRNA 的结果分析
一,EphA2mRNA表达与大肠腺癌临
床病理学因素关系的结果分析
应用 RT-PCR技术，本研究发现在大肠腺癌组
织中,EphA2mRNA表达与大肠腺癌患者的发病
年龄相关，可能随着肿瘤患者年龄变化，与体细
胞存在基因突变的积累或基因修复系统功能低下
或 DNA甲基化相关。
EphA2mRNA表达与大肠腺癌的浸润深度相
关，表明,EphA2调节大肠腺癌细胞的迁移和黏
附能力，参与大肠腺癌的演进过程。
二,EphA2mRNA表达与其蛋白表达
的关系
EphA2蛋白 0级表达的 mRNA水平明显低于
蛋白表达 1～ 3级的 mRNA，但二者在蛋白表达
1～ 3级的样本中 mRNA水平并无差异，这与前
述的报道类似，提示在大肠腺癌中 EphA2蛋白
与其 mRNA表达水平不完全一致。这种结果的
确切机制还不是很清楚,EphA2mRNA的表达
水平高而蛋白水平低，提示二者 在 大肠腺癌中
并不完全在转录水平调节,某种转录后翻译水
平的调控机制可能存在。
FCM的结果分析
一、大肠腺癌组织中 DNA倍体、细胞周期、
癌细胞增殖率与临床病理因素的关系
(1)
大肠腺癌中异倍体细胞群占 83.39%，
明显高于正常大肠粘膜组织。表明大肠
腺癌有较高的恶性程度，但异倍体细胞
群增高与临床病理因素无关，可能是取
材标本组织成份为肿瘤细胞与间质正常
细胞混合群体，影响检测分析。
本实验结果表明癌组织中异倍体癌ＰＩ及
ＳＰＦ明显高于二倍体癌组织，而我们 66例大
肠腺癌标本中 89.39%出现异倍体癌，表明大肠
腺癌癌细胞增殖分裂能力异常强大，具有无限
分裂增殖的特性。
一、大肠腺癌组织中 DNA倍体、细胞周期、
癌细胞增殖率与临床病理因素的关系
(2)
二,EphA2表达与 DNA倍体、细胞增殖的关系
大肠腺癌组织中 DNA倍体,DI值、及细
胞殖率明显增高，表明癌细胞增值能力强，
具有无限分裂增殖的特性。但与 EphA2基因
的表达无关，提示 EphA2基因的表达与细胞
的增值速度无关。
1,EphA2蛋白的阳性表达在大肠腺癌组织中明显高于正常
大肠粘膜组织，且 EphA2蛋白的高表达与癌的 大体类型、
分化程度 及浸润深度相关，提示 EphA2的高表达可能与大
肠腺癌的癌变有关，并提示癌细胞具有更强的侵袭力。
2,EphA2蛋白也定位于 大肠腺癌的 血管内皮细胞，提示
EphA2基因表达参与了 大肠腺癌的微血管生成，有望成为
大肠腺癌基因治疗的新靶点。
4,EphA2表达与 KAI1的 表达无相关性，提示 在大肠
腺 癌中,EphA2和 KAI1可能通过不同的调节通路参与
大肠腺癌的发生及浸润转移。
5．大肠腺癌组织中 DNA异倍体,DI值及细胞增殖率
明显增高，表明癌细胞增殖能力强，但与 EphA2基
因的表达无关，提示 EphA2基因的表达与细胞的增殖
速度无关。
谢谢！
陈壬寅,chenrenyin@zzu.edu.cn
陈壬寅 李珊珊
郑州大学第一附属医院病理科
郑州大学基础医学院病理学教研室
河南省肿瘤病理重点实验室
第一部分
大肠腺癌中 EphA2表达及其与
临床病理学因素,DNA倍体、
细胞周期关系的研究
EphA2基因的介绍
? EphA2是 Lindberg于 1990年用简并引物从人角化细胞
cDNA文库中筛选得到的一个 Eph（ Erythropoitin-
produceing hepato-cellular,Eph) 亚家族成员 。
? 人 EphA2基因定位于 1p36.1,有 17个外显子。
? Eph受体家族是 已知 最大的 酪氨酸蛋白激酶受体
(receptor tyrosine kinase,RTK)家族最大的家 庭。
? Eph家族受体激酶和他们 EFN配体 介导的细胞信号传
导 参与神经系统的基本发生过程,神经系统的信号传
递，在细胞的分化、发育、增殖，组织和器官的形成
、血管生成、细胞与细胞之间的粘附及 肿瘤的发生
和肿瘤的新生血管的形成 等过程中发挥重要的和必
不可少的作用。
EphA2与肿瘤的关系
? EphA2广泛高表达于 不同的肿瘤组织和细胞系, 如
,乳腺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌和食管癌，肾
细胞癌等，目前认为 EphA2参与肿瘤的发生和发展
，是功能强大的癌基因。
? EphA2的高表达能诱导非转化乳腺和前列腺上皮细
胞在体内、外的恶性转化，并促进其侵袭转移 。
? 应用 EphA2蛋白的抗体靶向抑制试验，下调 EphA2
蛋白表达的同时，也抑制了肿瘤细胞的生长，进而
降低肿瘤的恶性程度 。
154例大肠腺癌组织和相应正常大肠粘膜组织均来自郑州大学第一、二附属医院和河
南省肿瘤医院 2001年 1月 ~2004年 12月 手术切除标本的存档蜡块 (其中 66例为手术切
除新鲜标本和蜡块和 88例存档蜡块 )
1份置 4%多聚甲醛中固定存放 另 2份置 -82℃ 中存放
石蜡包
埋、切
片、
HE
染色
石蜡包埋、
切片，进
行免疫组
化
提取总
mRNA、
进行
RT-
PCR
实 验 标 本
FCM检
侧 DNA
倍体、细
胞周期
细胞增
殖率
临床病理资料
154例（ 88例存档石蜡包埋标本和 66例
手术切除新鲜大肠腺癌标本）大肠腺癌
患者，术前均未接受化疗、放疗及其他
治疗。其中男性 78例，女性 76例，年龄
在 23-85岁之间，平均年龄为 49.7岁。
66例新鲜手术切除标本均为大肠腺癌：
分化程度,高分化腺癌 30例，中分化腺癌 23
例，低分化腺癌 13例。
浸润深度,粘膜层 10例，粘膜下层 0例，肌
层 14例，浆膜层 37例，外周组织 5例。
转移：有淋巴结转移者 16例，无淋巴结转
移者 50例；有血道转移者 1例，无血道转
移者 65例；无种植性转移。
88例存档蜡块全部为腺癌,
分化程度：高分化腺癌 21例，中分化腺癌 18例，
低分化 29例和未分化 20例；
浸润深度：粘膜层 62例，粘膜下层 1例，肌层 17
例、浆膜层 5例，外周组织 3例；
转移：有淋巴结转移者 14例，无淋巴结转移者 74
例；有血道转移者 11例，无血道转移者 77例；
有种植性转移者 10例，无种植性转移者 78例 。
技 术 路 线
免疫组化（ SP法 ) FCM RT-PCR技术
检测 154例大肠腺癌组织
和相应正常食管组织中
EphA2蛋白表达
检测 66例大肠腺癌手术切
除新 鲜 组织和相应正常大
肠粘膜手术切除新 鲜 组织
中 DNA倍体、细胞周期、
细胞增殖率
探讨 EphA2表达与大肠腺癌病理临床因素,DNA倍体、细胞周期的关系
检测 66例大肠腺癌手术切
除新 鲜 组织和相应正常大肠
粘膜手术切除新 鲜 组织中
EphA2mRNA表达
一, 免疫组化
?步骤 （略）
?对照组设计,以已知 EphA2阳性食管鳞癌和正常食管
粘膜腺体组织切片作为阳性对照, 用正常兔 IgG代替一抗
作为阴性对照,用 PBS代替一抗作为空白对照 。
?免疫组化结果判定及定量分析,EPhA2免疫组化阳性
表达位于细胞胞浆，呈棕黄色。定量分析采用高清晰图
像处理系统，随机取 10个高倍视野进行图像分析，对免
疫组化切片检测 EphA2阳性细胞数，依据阳性细胞所占肿
瘤细胞面积的百分比和染色强度判断结果。
实 验 方 法
二,组织中总 RNA的提取及 RT-PCR
?步骤 （略）
?RNA浓度的测定 （略）
?对照设置,（ 1）阴性对照：以去离子水代替提取
的总 RNA，结果阴性。
?（ 2）内参对照：用 β-actin作为内参引物，与
EphA2和 KAI1引物分别同管扩增，结果在紫外灯下
出现一条 330bp的荧光带
?结果判定
?阳性判断标准为：目的 EphA2基因 RT-PCR产物凝
胶电泳后在紫外灯下分别出现一条 586bp的荧光带
。
实 验 方 法
取大肠腺癌和正常大肠粘膜组织 0.5g
剪碎 100,300目尼龙网上搓
收集细胞液,800prm/min离心 2min
70%乙醇 (4℃ )中固定 1h LPR染液,避光冷藏 (4℃ )5min
Stain 1ml避光 30min.
上机检测
FCM实验步骤：
FCM对照组设计和诊断标准：
? 设正常对照组：用正常人外周血淋巴细胞，即二倍体细胞作为 DNA含量
? 和肿瘤细胞 DNA倍体、细胞周期的参考标准
? DNA倍体分析,用 Partec流式细胞仪,计数 10000个细胞,具有相同 DNA含
? 量的细胞群表现为直方图中独立的峰,即每个峰表示一定 DNA含量或倍体
? 的细胞亚群。在正常对照组中,第 1个峰代表单倍体 (2C)细胞亚群,在实验
? 组中，第 1个峰代表双倍体 (G0/G1,2C)细胞亚群,第 3个峰则代表四倍体
? (G2/M,4C)细胞亚群，两峰之间代表 S期细胞亚群。计算机系统算出每
? 个峰下的面积所表示的该倍体的细胞占全部细胞的百分比。
? 诊断标准,根据左连富的标准,DNA倍体单倍体细胞百分数与正常对照组
? 单倍体细胞平均百分数相比较,在其两个标准差之内为正常,否则为异常。
FCM计算标准：
? DNA指数 (DI)计算公式,DI=样品细胞 G1峰道数均值 ÷ 正常
组织细胞 G1峰道数均值。
? DNA含量分析,以 DNA指数 (DI)表示细胞 DNA相对含量，根
据 DI值判断 DNA倍体。 0.9≤DI ≤1,1 为 DNA二倍体 ;DI < 0,9
或 > 1,1 为异倍体。
? 细胞周期分布的计算：运用 DNA细胞分析软件，计算出各时
相的分布百分比，以 S期细胞比率 (SPF)和增殖指数（ PI）表
示细胞的增殖活性。
? SPF( %) = [ S ÷ ( G0/ G1 + S + G2M) ] × 100 %
? PI=[(S+G2)÷ （ G1+S+G2） ]× 100%
统计学处理
所有数据均经 SPSS 12.0软件进行统计分析。计数资
料计算阳性率，计量资料用采用 X± S表示；阳性率
之间的比较采用 χ2检验（ chi-square）及 Fisher确定概
率计算法；两组均数的比较用 t检验 (t-test)；两组以
上均数的比较用方差分析（ ANVOA）和 Spearman
等级相关分析； 两变量之间的关系分析采用相关分
析；多变量之间的关系分析采用 秩和 Chi-sguare 检
验；行程列表 Chi-sguare检验 。显著性水准 α=0.05。
EphA2mRNA及蛋白表达与大肠腺癌
的关系：免疫组化结果
? 免疫组化检测结果：
– EphA2蛋白定位于癌细胞、
粘膜上皮细胞及癌组织血管
内皮胞浆内,呈棕黄色。
– 阴性对照均无阳性显示。
大肠腺 癌组织 及正常粘膜组织中
EphA2蛋白的表达
正常粘膜 116(75.3) 6(3.9) 26（ 16.9） 6（ 3.9） 1.369± 0.663
腺 癌 12（ 7.8） 32（ 20.8） 48（ 22.7） 62（ 40.3） 4.789± 0.542
组别 EphA2蛋白表达（例数 %） a 阳性细胞面积（ X± S)b
0级 I级 II级 III级
一, 大肠腺癌组织和正常粘膜组
织中 EphA2蛋白表达
注,a:χ2=70.5706,P<0.0001;b:χ2=90.523,P<0.0001
正常粘膜组织中 EphA2蛋白表达 SP
法 × 200
大肠腺癌组织中
EphA2蛋白表达 SP法 × 200
二,EphA2蛋白表达在大肠腺癌癌细胞与癌
组织中血管内皮细胞的比较
EphA2蛋白表达例数 (%)
组别 0级 I级 II级 III级
肿瘤细胞 200(11.2) 930(45.6) 700（ 35.0） 170（ 8.2）
血管内皮细胞 170（ 8.3） 940（ 46.1） 690（ 34.5） 200（ 11.2）
注,χ2=1562.1481,χ2 =90.272,P<0.000
大肠腺癌组织中癌细胞和血管内皮细胞
EphA2蛋白的表达 SP法 × 400
三,EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病
理学因素的关系 （ A)
临床病理 EphA2蛋白表达例数 (%)
学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P
年龄 a
≤30 7 0 (00.0) 2 (1.30) 2 (1.30) 3 (1.95)
51～ 70 79 4 (5.1) 16 (20.3) 26 (32.9) 33(41.8)
>70 30 5 (16.7) 8 (26.8) 9(30.0) 8(26.8) 0.577
性别 b
男 78 7(9.0) 21 (26.8) 26(33.3) 2 4(30.9)
女 76 5 (6.6) 11(14.5) 22 (28.9) 38 (50.0) 0.074
a,χ2=7.580; b:χ2=6.928
临床病理 EphA2蛋白表达例数 (%)
学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P
肿 瘤部 位 c
升结肠 14 0 (0.0) 1 (7.1) 2 (14.3) 11 (78.6)
横结肠 6 1（ 16.7） 1(16.7) 3(50.0) 1（ 16.7）
降结肠 4 0(0.0) 1(25.0) 2(50.0) 1(25.0)
乙状结肠 23 3(13.0) 3(13.0) 8(34.8) 9(39.1)
直 肠 86 4(4.7) 24(28.0) 28(32.6) 29(33.7)
结肠＃ 24 4(16.7) 2(8.3) 5(20.8) 11(45.2) 0.0798
大体类型 d
隆突型 108 6（ 5.55） 25（ 23.14） 31（ 28.7） 46（ 42.59）
溃疡型 6 0 （ 0.00） 3（ 50.0） 3（ 50.0） 0（ 0.00）
浸润型 27 3（ 11.11） 3（ 11.11） 12（ 44.44） 9（ 33.33）
管周型 13 3（ 23.08） 1（ 7.70） 5（ 38.46） 7（ 53.85） 0.0228
c:χ2=9.8600; d,χ2=7.5625
三,EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系 （ B)
＃详细部位不清
EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因
素的关系 (C)
临床病理 EphA2蛋白表达例数 (%)
学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P
肿瘤体积
(直径 cm)
<3 6 1(16.7) 1(16.7) 3(50.0) 1(16.0)
3-5 98 7(7.1) 14(14.3) 25(25.5) 42(42.9)
5.1-7 40 2(5.0) 4(10.0) 17(42.5) 17(42.5)
7.1-9 3 0(0.0) 1(33.3) 1(33.3) 1(33.3)
>9.1 7 2(28.6) 2(28.6) 2(28.6) 1(14.2) 0.533
χ2=10.723
EphA2蛋白表达与大肠腺癌患者临床病理学因素的关系 (D)
临床病理 EphA2蛋白表达例数 (%)
学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P
分化程度 a
高分化 51 3(5.0) 7(13.7) 18(35.3) 23(45.1)
中分化 41 1(2.4) 9 (22.0) 18(43.9) 13(2.4)
低分化 42 7 (16.7) 13(31.0) 10(23.8) 12(28.6)
未分化 20 1(5.0) 3（ 15.0） 2(10.0) 14(70.0) 0.007a
浸润深度 b
粘膜层（ T0） 72 6(8.3) 21(29.2) 24(33.3) 21(29.1)
粘膜下层 (T1) 1 0(0.0) 1(100) 0(0.0) 0(0.0)
肌层 (T2) 31 2(6.5) 6 (19.4) 13(41.7) 10(32.3)
浆膜层 (T3) 42 4(9.5) 2(4.8) 7 (16.7) 29(69.0)
外周组织 (T4) 8 0(0.0) 2(25.0) 4(50.0) 2(25.0) 0.004b
A:χ2=22.730 ； b:χ2=29.225
EphA2蛋白表达与大肠腺癌的关系 (E)
淋巴道转移 c
有 30 4 (13.3) 7(23.3) 12(40.0) 7(23.3)
无 124 8(6.5) 25(20.2) 36(29.0) 55(44.3) 0.1207c
血道转移 d
有 12 0 (0.0) 1(8.3) 7(58.3) 4(33.3)
无 142 12(8.5) 31(21.8) 41(28.9) 58(40.8) 0.1348d
种植性转移 e
有 0 0 (0.0) 0(0.0) 7(70.0) 3(30.0)
无 144 12(8.3) 32(22.2) 41(28.5) 59(41.0) 0.0783e
临床病理 EphA2蛋白表达例数 (%)
学因素 例数 0级 I级 II级 III级 P
c:χ2=5.8205; d,χ2=5.565； e:χ2=6.8070
EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法 × 200
EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆,
强度 I级
EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法 × 200
EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞的胞浆,
强度 II级
EphA2在大肠腺癌中的表达 SP法 × 200
EphA2免疫染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细
胞的胞浆,强度 III级
EphA2在大肠腺癌组织中的表达
SP法 × 200
EphA2蛋白阳性染色定位在肿瘤区
域和血管内皮细胞
EphA2基因 RT-PCR结果
?EphA2基因 RT-PCR结果：
- 经 RT-PCR扩增，目的条
带为 586bp。与 EphA2引
物同管扩增的 β -actin
内参引物为 330bp的荧
光条带。以去离子水代
替提取的总 RNA的阴性
对照无任何荧光条带显
示。
大肠腺癌 癌组织和 正常粘膜中
EphA2mRNA表达
1 2 3 4 5 6 M
A Epha2 → →600bp
B β-actin→
→200bp
一,EphA2mRNA表达与大肠腺癌
临床病理学因素的关系
临床病理 Eph2mRNA EphA2/β-actin
学因素 例数 + － P (X± S) P
正常组织 66 21 45 0.7075± 0.3576
癌组织 66 22 44 0.26a 0.8501± 0.4610 0.54k
性别
男 33 13 20 0.3621± 0.2314
女 33 9 24 0.296b 0.2028± 0.2996 0.888l
年龄
＜ 30 1 0 1 0.3540± 0.446
30-60 40 19 21 0.7921± 0.2364
＞ 60 25 3 22 0.006c 0.3691± 0.4328 0.001m
EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理
学因素的关系 (A)
A,χ2=0.161; b,χ2=1.091; c,χ2=10.322
k,F=6.277;l,F=0.20 ; m,F=11.405
EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学
因素的关系 (B)
临床病理 Eph2mRNA EphA2/β-actin
学因素 例数 + － P (X± S) P
分化程度
高分化 30 6 24 0.5162± 0.6321
中分化 23 11 12 0.7421± 0.3261
低分化 13 5 8 0.089d 0.5026± 0.6741 0.499n
浸润深度
粘膜层 5 2 3 0.5026± 0.6459
粘膜下层 5 2 3 0.3654± 0.6598
肌层 14 4 10 0.8621± 0.3654
浆膜层 38 11 27 0.3011± 0.3224
外周组织 5 2 3 0.038e 0.7149± 0.1190 0.000o
d,χ2=4.837; e,χ2=10.120; n:F=0.474; o,F=48465;
EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学
因素的关系 (C)
临床病理 Eph2mRNA EphA2/β-actin
学因素 例数 + － P (X± S) P
转移
淋巴道转移
有 16 6 10 0.3462± 0.1791
无 50 16 34 0.685f 0.3896± 0.1779 0.161p
血道转移
有 1 1 0 0.2496± 0.7961
无 65 21 44 0.154g 0.2417± 0.8192 0.953q
f,χ2=0.165; g,χ2=2.031; p,F=2.119; q,F=0.004;
EphA2mRNA表达与大肠腺癌临床病理学因素的关系 (D)
临床病理 Eph2mRNA EphA2/β-actin
学因素 例数 + － P (X± S) P
部位
升结肠 9 4 5 0.1985± 0.751
横结肠 2 1 1 0.2417± 0.8192
降结肠 0 0 0 0.0000± 0.0000
乙状结肠 16 6 10 0.2413± 0.7231
直 肠 39 11 28 0.720h 0.1951± 0.7950 0.795r
肿瘤大体类型
隆起型 38 17 21 0.2413± 0.7231
溃疡型 22 4 18 0.2496± 0.7211
浸润型 3 0 3 0.2315± 0.2339
管周型 3 1 2 0.112i 0.2351± 0.2996 0.366s
肿瘤体积 (直径 cm)
＜ 5 32 14 18 0.4362± 0.665
≥5 34 8 26 0.082j 0.4461± 0.674 0.060t
h,χ2=1.337; i,χ2=7.081; j,χ2=3.033; r,F=0.342; s,F=1.076 t:F=9.286
1 2 3 4 5 6 M
A Epha2 → →700bp
B β-actin→ 300bp
M,标准分子量 (100bp DNA ladder);
A,EphA2 cDNA，片段大小 586bp;
B,内参照 β-actin,片段大小 330bp;
1,阳性对照,2：, 癌浸润浆膜层 ;3,癌浸润肌层 ;
4,癌浸润粘膜下层 ;5,对应的正常粘膜 6,阴性对照
EphA2在大肠腺癌组织中的 RT-PCR结果
二,大肠腺癌中 EphA2蛋白表达与
EphA2 mRNA表达的关系
大肠腺癌中 EphA2蛋白表达与 EphA2 mRNA
表达的关系
EphA2 mRNA
EphA2 protein － + 合计
+ 17 23 40
－ 5 21 26
合计 22 44 66
χ2=0.25, P=0.6171
不同级别 EphA2蛋白表达的大肠腺
癌中的 EphA2 mRNA表达
EphA2蛋白表达分级 例数 EphA2/β-actin (X± S)
0 5 0.31± 0.22
I 3 1.12± 0.30
II 5 1.60± 0.25
III 9 1.39± 0.31
注, 0:I:II:III F=17.811 P<0.01； 0:I t=0.601 P<0.05；
0:II t=0.601 P<0.05； 0:III t=0.95 P<0.05；
I:II:III rs=0.5620 P>0.05
EphA2与 DNA倍体、细胞周期和
细胞增殖率关系
FCM检测结果
一,大肠腺癌和正常组织中 DNA含
量和 DNA倍体
一,大肠腺癌和正常组织中 DNA含
量和 DNA倍体的比较
病理临床因素 例数 DI (X± S) DNA倍体
P 二倍体 异倍体 P
正常 组织 66 1.0± 0.1 66 0
癌组织 66 1.67± 0.19 0.005 7 59 0.005
a, F=6.086;b,F=3.697;
二,大肠腺癌 DNA含量和 DNA倍体
与病理临床因素的关系
二,大肠腺癌 DNA含量和 DNA倍体与
病理临床因素的关系 (A)
病理临床因素 例数 DI (X± S) DNA倍体
P 二倍体 异倍体 P
年龄
＜ 30 1 1.10± 0.17 1 0
30-60 40 1.26± 0.21 5 35
＞ 60 25 1.11± 0.15 0.215c 1 24 0.086m
分化程度
高分化 30 1.16± 0.21 3 27
中分化 23 1.23± 0.16 2 21
低分化 13 1.32± 0.17 0.489d 2 11 0.455n
c,F=1.701;d,F=0.770; m:F=2.644;n,F=0.890
大肠腺癌 DNA含量和 DNA倍体与
病理临床因素的关系（ B)
病理临 例数 DI (X± S) DNA倍体
床因素 P 二倍体 异倍体 P
性别
男 33 1.32± 0.12 4 29
女 33 1.28± 0.11 0.056 3 30 0.056
F=6.277;F=3.697
大肠腺癌 DNA含量和 DNA倍体与
病理临床因素的关系 (C)
病理临床因素 例数 DI (X± S) DNA倍体
P 二倍体 异倍体 P
浸润深度
粘膜层 5 1.27± 0.23 1 4
粘膜下层 5 1.31± 0.21 0 5
肌层 14 1.30± 0.22 2 12
浆膜层 38 1.49± 0.29 2 36
外周组织 5 1.37± 0.15 0.11e 2 3 0.550o
淋巴道转移
有 16 1.31± 0.20 2 16
无 50 1.43± 0.16 0.224f 5 45 0.224p
血道转移
有 1 1.43± 0.33 0 1
无 65 1.39± 0.20 0.938g 7 58 0.967q
e,F=4.016; f,F=1.684; g,F=0.006; o,F=0.363;p,F=1.684;q,F=0.086
大肠腺癌 DNA含量和 DNA倍体与
病理临床因素的关系（ D)
病理临床因素 例数 DI (X± S) DNA倍体
P 二倍体 异倍体 P
部位
升结肠 9 1.48± 0.23 1 8
横结肠 2 1.39± 0.31 1 1
降结肠 0 1.10± 0.20 0 0
乙状结肠 16 1.46± 0.26 2 14
直 肠 39 1.43± 0.21 0.765h 3 36 0.909r
肿瘤大体类型
隆起型 38 1.43± 0.21 3 35
溃疡型 22 1.36± 0.20 2 20
浸润型 3 1.39± 0.31 1 2
管周型 3 1.66± 0.23 0.432i 1 2 0.371s
肿瘤体积 (直径 cm)
＜ 5 32 1.49± 0.31 4 28
≥5 34 1.66± 0.23 0.086 j 3 31 0.761t
h,F=0.274; i,F=0.913; j:F=2.644; r,F=0.097; s:F=0.816;t:F=0.094
正常大肠粘膜组织的细胞周期
分布 和 DNA倍体
大肠腺癌的细胞周期分布，
出现异倍体峰
三,大肠腺癌组织中 EphA2蛋白和
EphA2mRNA表达 与 DNA倍体和 DI的关系
大肠腺癌组织中 EphA2蛋白和 EphA2mRNA
表达 与 DNA倍体和 DI的关系
EphA2 例数 DI (X± S) DNA倍体
P 二倍体 异倍体 P
蛋白表达
阳性 40 1.76± 0.26 4 36
阴性 26 1.69± 0.32 0.903a 3 23 0.745c
mRNA表达
阳性 22 1.79± 0.31 4 18
阴性 44 1.87± 0.39 0.273b 3 41 0.518d
a,F=0.016;b,F=1.243;c,F=0.413;d,F=0.426
四,大肠腺癌 DNA倍体与 SPF,PI
的关系
大肠腺癌 DNA倍体与 SPF,PI的关系
DNA倍体 例数 SPF( X± S) P PI(X± S) P
二倍体 7 11.06± 2.52 20.73± 2.52
异倍体 59 13.14± 2.04 0.042a 23.3± 2.66 0.032b
注,a,χ2 =1.2; b,χ2 =1.1
EphA2蛋白的表达结果分析
一, EphA2在正常大肠粘膜上皮中的表
达结果分析
1.EphA2 在正常大肠粘膜上皮低表达，阳性率仅
为 24.67%（ 38/154），且阳性细胞 III级染色仅
占 3.9%，阳性细胞大部分定位于大肠粘膜隐窝
上皮基底部的胞浆,少量阳性细胞亦可见于表面
粘膜腺体，提示可能 EphA2作用于增殖期上皮
细胞，也可能参与细胞分化。
2.本研究发现的 EphA2在正常大肠粘膜上皮和血
管内皮细胞的 表达和分布模式提示,EphA2可
能 参与了正常大肠粘膜上皮的增殖过程。
二, EphA2在大肠腺 癌中 的表达结果分析
(1)
EphA2广泛高表达于许多人类肿瘤，无论
从肿瘤细胞还是肿瘤组织的检测都高表达，
包括：乳腺癌、恶性黑色素瘤、前列腺癌、
食管癌、肺癌和宫颈癌。本研究发现，相比
正常大肠粘膜上皮,EphA2在腺癌组织中高
表达，统计学分析差异有明显显著性
(P<0.001)，表明 EphA2高表达可能与大肠腺
粘膜上皮的癌变相关。
EphA2高表达 与大肠腺癌的生长方式、癌的
组织学分级、癌细胞浸润深度相关，表明
EphA2的高表达导致癌细胞恶性程度和侵袭性
增加，使其更易发生浸润。
EphA2高表达 与淋巴道转移、血道转移、种
植性转移无关，表明 EphA2的高表达与大肠腺
癌癌细胞的转移潜能无关。
二, EphA2在大肠腺 癌中 的表达结果分析
(2)
三, EphA2蛋白在大肠腺癌组织中血管
内皮细胞的阳性表达结果分析
本研究发现在 大肠腺 癌组织中, EphA2
阳性表达也见于 血管内皮细胞，通过 大肠
腺 癌细胞和血管内皮细胞 EphA2阳性表达
细胞计数对比，两者呈正相关，表明
EphA2参与肿瘤组织中的血管形成，从而
促进肿瘤的生长、发展。
EphA2mRNA 的结果分析
一,EphA2mRNA表达与大肠腺癌临
床病理学因素关系的结果分析
应用 RT-PCR技术，本研究发现在大肠腺癌组
织中,EphA2mRNA表达与大肠腺癌患者的发病
年龄相关，可能随着肿瘤患者年龄变化，与体细
胞存在基因突变的积累或基因修复系统功能低下
或 DNA甲基化相关。
EphA2mRNA表达与大肠腺癌的浸润深度相
关，表明,EphA2调节大肠腺癌细胞的迁移和黏
附能力，参与大肠腺癌的演进过程。
二,EphA2mRNA表达与其蛋白表达
的关系
EphA2蛋白 0级表达的 mRNA水平明显低于
蛋白表达 1～ 3级的 mRNA，但二者在蛋白表达
1～ 3级的样本中 mRNA水平并无差异，这与前
述的报道类似，提示在大肠腺癌中 EphA2蛋白
与其 mRNA表达水平不完全一致。这种结果的
确切机制还不是很清楚,EphA2mRNA的表达
水平高而蛋白水平低，提示二者 在 大肠腺癌中
并不完全在转录水平调节,某种转录后翻译水
平的调控机制可能存在。
FCM的结果分析
一、大肠腺癌组织中 DNA倍体、细胞周期、
癌细胞增殖率与临床病理因素的关系
(1)
大肠腺癌中异倍体细胞群占 83.39%，
明显高于正常大肠粘膜组织。表明大肠
腺癌有较高的恶性程度，但异倍体细胞
群增高与临床病理因素无关，可能是取
材标本组织成份为肿瘤细胞与间质正常
细胞混合群体，影响检测分析。
本实验结果表明癌组织中异倍体癌ＰＩ及
ＳＰＦ明显高于二倍体癌组织，而我们 66例大
肠腺癌标本中 89.39%出现异倍体癌，表明大肠
腺癌癌细胞增殖分裂能力异常强大，具有无限
分裂增殖的特性。
一、大肠腺癌组织中 DNA倍体、细胞周期、
癌细胞增殖率与临床病理因素的关系
(2)
二,EphA2表达与 DNA倍体、细胞增殖的关系
大肠腺癌组织中 DNA倍体,DI值、及细
胞殖率明显增高，表明癌细胞增值能力强，
具有无限分裂增殖的特性。但与 EphA2基因
的表达无关，提示 EphA2基因的表达与细胞
的增值速度无关。
1,EphA2蛋白的阳性表达在大肠腺癌组织中明显高于正常
大肠粘膜组织，且 EphA2蛋白的高表达与癌的 大体类型、
分化程度 及浸润深度相关，提示 EphA2的高表达可能与大
肠腺癌的癌变有关，并提示癌细胞具有更强的侵袭力。
2,EphA2蛋白也定位于 大肠腺癌的 血管内皮细胞，提示
EphA2基因表达参与了 大肠腺癌的微血管生成，有望成为
大肠腺癌基因治疗的新靶点。
4,EphA2表达与 KAI1的 表达无相关性，提示 在大肠
腺 癌中,EphA2和 KAI1可能通过不同的调节通路参与
大肠腺癌的发生及浸润转移。
5．大肠腺癌组织中 DNA异倍体,DI值及细胞增殖率
明显增高，表明癌细胞增殖能力强，但与 EphA2基
因的表达无关，提示 EphA2基因的表达与细胞的增殖
速度无关。
谢谢！
陈壬寅,chenrenyin@zzu.edu.cn
