第四章 食用菌菌种的生产
食用菌的栽培一般包含几个步骤：首先是制作菌种，
即通过孢子或菇体组织分离出菌丝体，并加以扩大繁
殖形成生产菌种；其次是将制好的菌种接于培养基质，
生产出食用菌子实体。
孢子
菇体组织
菌丝体 菌 种
培养基质
子实体
萌发
分离
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
食用菌菌种有特定的制作程序，只有掌握了制种
技术，才能生产出优良菌种，使食用菌栽培获得成功。
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型
使用目的的不同
保藏用菌种
实验用菌种
生产用菌种
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型
物理性状
固化菌种
固体菌种
液体菌种
外观形态
颗粒状菌种
片状菌种
砖状菌种
培养
容器 袋装菌种
瓶装菌种
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型
培养基的主料
粪草菌种
谷粒菌种
木块菌种
木屑菌种
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型
菌种按生产程序
一级种 (母种）
二级种 （原种）
三级种 (栽培种 ）
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型 ① 一级种
一级种又称母种、试管种。
将经孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物，移接到
试管斜面培养基上培养而得到的纯种。
采用分离法获得的母种数量有限，一般可将菌丝再次转
接到新的斜面培养基上进行转管繁殖，能得到更多的母种，
称为 再生母种,即可用于生产，也适用于纯种的保藏 。
一支长满菌丝体的试管母种可分移成 10多支新试
管。试管种若不马上使用，可臵于 4℃ 的冰箱中保存。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型 ② 二级种
二级种又称 原种,这是由母种转接到装有麦粒等
固体培养基质的专有菌种瓶中经过培养后形成。原种
可采用 750mL菌种瓶或 500mL罐头瓶作为培养容器。
一般一支母种可扩大繁殖 6-8瓶原种。
若原种直接用于生产，则成本太高，因此，原种
还必须进一步扩大繁殖成三级种，使菌种数量增多，
才能用于栽培。由于原种的培养基质接近栽培所用的
基质，因此原种也可用于小规模的栽培。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型 ③ 三级种
三级种又称栽培种，它是由二级种进一步扩大繁
殖而得。
栽培种的培养基质与二级种相似，更接近于栽
培基质。三级种数量多、成本低。
栽培种一般采用固体培养基，用聚乙烯塑料袋
或玻璃瓶作堵养容器。通 常一瓶原种可繁殖 30-50
袋栽培种。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序 （ 2）制种程序
菌种
生产是指
通过无菌
操作，大
量培养繁
殖菌种的
过程。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ l）配料设备
切片机
是将本材切
成规格木片
的专用机械，
是食用菌培
养基质粉碎
处理的预前
工序设备。
切 片 机
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ l）配料设备
粉碎机
是将木片,
秸秆等原料
粉碎成一定
粗细度碎屑
的专用机械 。
粉 碎 机
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ l）配料设备
搅拌机
是将培养料
通过搅拌使
其分布充分
均匀的专业
机械。其配
套动力为
3KW，每次
拌料量为
100KG湿重 。 搅 拌 机
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ l）配料设备
装袋机是将搅
拌混合均匀后的培
养料装入塑料薄膜
筒内的机械。
装 袋 机
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ l）配料设备
将培养料
装入料瓶的机
械。生产上采
用的均匀螺旋
挤入式装瓶机。
装 瓶 机
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 2）灭菌设备
高压灭菌锅是密闭耐压的金属灭菌容器。其工作
原理是在驱尽锅内空气的前提下，通过加热把密闭锅
内的水蒸气压力升高，从而使蒸汽温度相应提高到
100℃ 以上。压力在 98Pa时，蒸汽温度可达 121 ℃ 。常
见的高压灭菌锅有手提式、立式与卧式，也有自制的
高压灭菌锅。手提式主要用于一级种制作，立式和卧
式主要用于二级种、三级种和栽培瓶、袋的制作。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 2）灭菌设备
手提式高压灭
菌锅的容积小，适
用于试管培养基、
三角瓶或平皿、无
菌水、少量菌种瓶
及一些器皿的灭菌。
手提式高压灭菌锅
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 2）灭菌设备
立式高压灭
菌锅容量大，可
用于菌种瓶、罐
头瓶及塑料袋装
培养基的灭菌。
立式高压灭菌锅
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 2）灭菌设备
卧式高压灭
菌锅容量大、盛
物多，灭菌彻底，
效果好。
卧式高压灭菌锅
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 2）灭菌设备
常压灭菌灶是在
自然压力下产生
100℃ 蒸汽进行灭菌
的炉灶，如土蒸锅。
常压灶制作简单，造
价低，很受菇农欢迎。
常压灭菌灶
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 3）接种设备
无菌室是食用菌生产中无菌操作的环境。无菌室
要求严密、清洁。
无菌室一般有内外两间，外间较小，作为缓冲间。
缓冲间可放臵工作服、拖鞋、口罩、消毒用药品等。
无菌室门应采用推拉门，内外两间的门应呈对角线安
装，以提高隔离缓冲效果。必 要时可安装一个双层小
型玻璃推拉窗，以便于内外物品传递，减少进出无菌
室的次数。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 3）接种设备
为了在使用之后能排湿、通风，应在室内顶部
设臵小型排风扇，在室内的侧面底部设臵玻 璃纤维
过滤进气口。
无菌室 (包括缓冲间 )除照明用光源外，还应安
装紫外线杀菌灯，吊装在接种操作台的正上 方。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 3）接种设备
超净工作台 是一种
局部层流 (平行流 )装臵，
它能在局部造成高洁净
度的工作空间；使小房
间内的空气经预过滤器
和高效过滤器除尘、洁
净后，以垂直或水平层
流状态通过操作区，因
此，可使操作区保持既
无尘又无菌的环境。 超净工作台
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 3）接种设备
接种箱是用木材与
玻璃制成密闭箱 。 有单
人式或双人对接式 。 接
种箱前后斜面为玻璃窗,
便于操作时观察, 可开
启, 以便取放物品 。 玻
璃窗下的木板有一对椭
圆形开孔, 操作孔装有
白布袖套, 一端固定在
圆孔上, 另一端套口用
松紧带箍住操作者的手
腕 ·,以防杂菌进入 。 箱
内可安装 20W日光灯和
30W紫外线灯管 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 3）接种设备
A、接种针
B、接种钩
C、接种环
D、接种铲
E、接种锄
F、接种耙
G、接种刀
H、接种勺
I、接种镊
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 4）培养设备
在 制 作 一
级种和少量二级
种时, 可采用电
热恒温箱或隔水
式电热恒温箱,
目的是控制温度,
适温培养
恒 温 箱
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 4）培养设备
培养室是专门用于培养菌种的场所。各级菌种
在接种完毕之后，即移人培养室。冬季培养室应有专
用加温设备。无论采用何种方法加温，都要注意培养
室内空气的相对湿度，一般维持在 65％ — 70％，否则
菌瓶失水过多。菌种培养架可用木制，也可用钢材或
铝合金材料制成，宽度 1— 1.5m，有 4-6层，层间距
0.4- 1m,培养室内还需温、湿度计，用于培养室温度、
湿度的测量。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 5）菌种保藏设备
多数菌种要在低
温, 干燥, 隔绝空气
等环境中保藏 。 常用
的主要设备是电冰箱,
干燥器, 真空抽气机
等 。 高温型菌类的菌
种需继代保藏, 由于
要越过寒冷的冬季,
常用电热恒温箱,
电
冰
箱
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (1)药品
① 基物药品
制作母种时常
用的药品有
琼脂、葡萄糖、蔗糖、
磷酸二氢钾、硫酸镁、
蛋白胨、麦芽汁、酵
母膏和维生素 B1等。
原种和栽培种
常用药品有
石膏粉、碳酸钙、过
磷酸钙、蔗糖、红糖、
尿素、硫酸铵等。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (1)药品
② 消毒及杀菌药品
5％甲醛
5％石碳酸
0.l％高锰酸钾
75％酒精
2％～ 5％漂白粉
0.1％升汞
1％～ 2％煤酚皂溶液 (又称来苏尔 )
0.25％新洁而灭
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (2)配料用具
常见的配
料用具有
搅拌机
天平
杆秤
水泥地
水桶
铁铲、铝锅、
铁锅、搪瓷
杯、大烧杯、
筐、木箱、
塑料箱
脸盆
废油桶
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (3)分装及检测用具
分装
用具有
铁架台
漏斗
试管筐
菌种袋 (17cmX 33cm,14cmX 28cm等的聚乙烯或聚
丙烯插角、平底袋 )
试管 (18mmXl80mm,20mmX200mm)
量杯 (100,250,500mL)
菌种瓶 (750mL,500mL盐水瓶或罐头瓶 )
培养皿 (d＝ 9cm)
三角瓶 250mL
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (3)分装及检测用具
检测用
具有
生物显微镜
温度计
干湿球温度计
pH试纸
卡尺
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (4)分离及其用具
常用分
离用具
钟罩
棉花
纱布
记录本、标签纸、笔
尖头镊子
酒精灯
广口瓶
手术剪
95％酒精 其他用具及材料有：纱布、工作衣、托
鞋、口罩、无菌水、
颈圈、绳线、回形
针、钉书机等。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 1）培养基 (料 )的配制原则
①
选
择
适
宜
的
营
养
物
质
食用菌所需的营养物质，不外是碳源、氮源和矿质元素等，对
每一种营养物质的种类和数量要求又有所不同。
如培养 木耳、猴头 等木腐菌原种和栽培时，多采用木屑、棉籽
壳等为主要原料的培养基；而培养 双孢蘑菇、草菇 等草腐菌的原种
和栽培种时，要采用粪草为主要原料的培养基。
在整个菌种制备过程中，从母种，原种到栽培种各个阶段的
目的和要求不同，所选用的培养基营养成分也应有不同。
母种 的初生菌丝比较嫩弱，分解养分能力差，因此要求营养
丰富、完全，氮源和维生素的比例要高，需选用容易被菌丝吸收
利用的物质，如葡萄糖、蔗糖、马铃薯、玉米粉、麦芽汁、酵母
膏、蛋白胨、无机盐类和生长素等为原料。
原种、栽培种 所需培养基数量较多，而且菌丝分解物质能力
强，可利用大量农作物秸秆、粪草，锯木屑、棉籽壳、麸皮和米
糠等原料作为培养基。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 1）培养基 (料 )的配制原则
②
注
意
各
种
营
养
成
分
的
比
例
培养基 (料 )中各种营养物质的比例是影
响菌丝生长的重要因素。营养物质比例适当，
菌丝生长发育就好，否则就差。
应根据不同培养对象的需要，配以适当
比例。菌丝生长要求培养基 (料 )有一定的碳
氮比，一般碳氮比 (C,N)以 20:1为好。
如培养基 (料 )中碳源供应不足时，容易
引起菌丝的过早衰老和自溶，如氮源过多或
过少时，会引起菌丝的过于旺盛生长或生长
缓慢，对菌丝生长造成不良影响。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 1）培养基 (料 )的配制原则
③
调
节
适
宜
的
酸
碱
度
(pH)
培养基 (料 )需要保持菌丝生长发育所需
要的酸碱度，因此配制培养基 (料 )时，要用
氢氧化钠、石灰或过磷酸钙等调节 pH值。
各种食用菌所需要的 pH值不同，培养基
(料 )的酸碱度也应不同。
如猴头菌丝喜欢酸性环境，需调节 pH值
为 4— 5;又如草菇菌丝喜碱性环境，需将 pH
值调为 7,5～ 8。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 1）培养基 (料 )的配制原则
④
选
择
经
济
实
用
的
原
料
制做培养基 (料 )的原料, 有些价格比较贵, 成
本高, 可用一些价格低廉的代用原料理,
可用一些农副产品代替化学药品，常用的有马
铃薯、麦芽，玉米面、麦麸等。
在食用菌制种中，原种和栽培种因原料用量
较大，选择合适的代用原料，其经济意义就更大。
过去多用麦粒和玉米，现在可用锯木屑和棉
籽壳等来代替。但是选用代用料时，必须就地取
材，来源丰富、价格便宜的原则，而且原料没有
毒性。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型
培
养
基
的
类
型
① 营养来源
② 物理状态
③ 表面形式
④ 用途
天然培养基
合成培养基
半合成培养基 固体培养基
液体培养基
半固体培养基斜面培养基
平面培养基
高层培养基 母种培养基
原种培养基
栽培种培养基
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ① 营养来源
天然培养基
天然的有机物质
配制而成。如农副产
品麦麸，米糠，豆饼
及许多农作物秸秆等，
也有动植物浸出液，
如牛肉膏、麦芽汁、
豆芽汁及马铃薯汁等。
培养基的优点 是营养
丰富、经济方便，但它的
化学成分不能定量，每批
成分也不稳定，不宜用作
精确的实验。常用的天然
培养基有马铃薯培养基、
麦芽汁培养基等。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ① 营养来源
合成培养基
用已知成
分的化学药
品配制而成 。
培养基的优点 优
点是各种成分简单而
清楚，容易控制，适
于进行某些定性、定
量测定。
常用的合
成培养基有
高氏一号培
养基、察氏
培养基等 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ① 营养来源
半合成培养基
在天然培养基中适当添
加一些无机盐类，或者在
合成培养基中添加少数天
然有机物质配制而成。
培养基的优点 是
营养全面丰富、宜于
控制。常用的有综合
马铃薯培养基等。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ② 物理状态
液体培养基
培养基
呈液体状态。
它含有食用
菌菌丝生长
发育所需要
的各种营养
物质。
食用菌孢子或菌丝
在这种 培养基 中能够
更好地接触和吸收养料，
因而菌丝体生长迅速而
粗壮，同时这种液体菌
种便于接种工作的机械
化、自动化，有利于提
高生产效率。
缺点 是要发
酵设备，成本较
高，也较复杂。
液体培养基常用
来观察菌种的培
养特征以及检查
菌种的污染情况。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ② 物理状态
固体培养基
在液体
培养基中加
入凝固剂即
成为固体培
养基。常用
的凝固剂是
琼脂。
根据季节和用途的不
同，凝固剂的添加量一般
在 1,8％～ 2％ 之间。固
体培养基可制成试管斜面，
也可制成平皿平面（平
板），试管斜面用来培养
和保存菌种，平皿平面可
用来分离和纯化菌种。
除了加凝固剂
的固体培养基外，
天然的固体基质做
成的培养基也称固
体培养基。在菌种
制作中，用麦粒、
玉米粒、木屑、棉
籽壳、甘蔗渣等农
副产品制成的培养
基也属固体培养基。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ② 物理状态
半固体培养基
在 1000毫升液体培养基中，将加入的琼脂量减
少为 8～ 10克，即成为半固体培养基。它主要用来
培养一些特殊菌类。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ③ 培养基的表面形状
斜面培养基
将琼脂培
养基装入试管
灭菌后，乘热
放臵成斜面，
凝固后即成。
它用于菌种扩
大转管及菌种
的保藏。
平面培养基 高层培养基
将琼脂培养基
装入三角瓶中灭菌
后，冷至 50℃ 左右，
乘热倒入灭菌平
皿,(或不倒入平皿 )
凝固后即成。它用
于菌种分离和研究
菌类的某些特征。
将琼脂培养基装
入试管内灭菌后，不
摆成斜面，即成高层
培养基。接入高层培
养基的菌种，发育的
面积虽然小，但这种
培养基厚度大，营养
丰富，存放时间长，
也不易干燥开裂。常
用于保存菌种。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ④ 培养基的用途
母种培养基
也称一级培养
基。它是分离母
种或试管种扩大
繁殖用的培养基。
因母种培养基装
在试管内，并摆
成斜面，因此也
叫斜面培养基 。
原种培养基 栽培种培养基
也称二级培养
基．通常装在罐头
瓶或者 750毫升容积
的菌种瓶内，也可
装在 1000毫升客积
的白色聚丙烯塑料
瓶内 。
也称三级培养基，
它是供食用菌栽培用
的菌种培养基。通常
装在罐头瓶或 750毫
升容积的菌种瓶内，
也可装在 17X 33厘米
或 l7X28厘米大小的
聚丙烯塑料袋内。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
① 母种（一级种）培养基的配制
种菇或种木的
选择和处理
孢子、组织、
种木分离
马铃薯、琼脂、
葡萄糖等原料
装入试管
的培养基
排成斜面
的培养基
母 种
接种
配制 灭菌
培养
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(1)母种（一级种）培养基的配制
母种培养基种类很多，常用的有以下几种：
① 马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基 (PDA培养基 ) 马
铃薯 (去皮 )200克，葡萄糖 20克，琼脂 18— 20克，水
1000毫升。
② 马铃薯、蔗糖、琼脂培养基 (PSA培养基 ) 马
铃薯 (去皮 )200克，蔗糖 20克，琼脂 18~20克，水
1000毫升。
③ 蛋白胨、葡萄糖、琼脂培养基 蛋白胨 2克，葡萄糖 20
克，磷酸氢二钾 1克，，磷酸二氢钾 0,5克，维生素 B10,05
毫克，硫酸镁 0,5克，琼脂 18--20克，水 1000毫升。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
工艺流程
计算 配方
各物用量
按比例称
量各物质 配制 调 pH
分装试管塞棉塞灭菌及摆斜面无菌检查
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
工
艺
流
程
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
首先要选择合适的浸煮容器，一般选用铝锅、搪
瓷缸或玻璃烧杯等，而不能用铜，铁器皿，以免铜锈
或铁锈混进培养基中。
母种培养基的制作，按以下顺序操作
① 计算 先选好培养基配方，按照培养基需要的
数量计算各种成分的用量，然后称量。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
② 称量 用架盘天平称取培养基各种成分的用量，
对一些不易称量的成分，需采用特殊方式称量，如牛
肉膏比较粘稠，可先称好一根玻棒和烧杯，再用玻棒
取牛肉膏放在烧杯中一起称。微量元素与生长因子等，
需要量很少，难以称准，可先配成较浓的原液，再从
中取出需要的量。
③ 配制 为避免发生沉淀，加入的顺序一般是先
加缓冲化合物，溶解后加入主要元素，然后是微量元
素，再加入维生素等。最好是每种成分溶解后，再加
入第二种营养成分。若各种成分均不发生沉淀，也可
以一起加入。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
③ 配制
若用马铃薯、玉米粉、苹果、米粉、木屑等原料
时，应先制取这些原料的煮汁，然后再把煮汁与其它
成分混合．
以马铃薯葡糖琼脂培养基为例，说明其配制方法。
把选好的马铃薯洗净，去皮挖去芽眼，切成薄
片或 1厘米大小的方块，称取 200克放在容器中，加
水 1000毫升，加热煮沸 20～ 30分钟，至软而不烂的
程度，用四层纱布过滤；取其滤液。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
③ 配制
在滤液中加入琼脂，小火加热，用玻璃棒不断
搅拌，以防溢出或焦底，至琼脂全部溶化，再加入
葡萄糖和其它营养物质使其溶化，最后加水至 1000
毫升即成。
④ 调 pH 一般用 10％盐酸 (HCl)或 10％氢氧化
钠 (NaOH)调 pH，用 pH试纸进行测试。调时要小心，
要几滴几滴地加碱或加酸，调至所需要的 pH值。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑤ 分装 培养基配制好后，趁热倒人大的玻璃漏
斗中，打开弹簧夹，按需要分装于试管或三角瓶内。
装入试管的培养基量，以试管总长的 1/4～ 1/5为好
(装入的培养基切勿沾附管口壁 )。装入三角瓶培养
基量，一般不要超过瓶容量的 1／ 3．每装完一支试
管或一个三角瓶．随即关闭弹簧夹，并把试管放进
小铁丝筐内。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑥ 塞棉塞 培养基分装到试管或三角瓶后，管口
或瓶口要塞上棉塞。棉塞用普通棉花,不要用脱脂棉，
因脱脂棉易吸水变潮，导致杂菌生长。 棉塞的作用是
过滤空气，避免杂菌污染培养基。
棉塞的制作是取适量棉花作成均匀片状，将一边
向里折叠．再将对面的另一边向里折叠，然后从一毛
边开始将棉花卷紧。使之成为两边齐的一柱形，末端
的棉絮自然地平贴在棉柱上。棉塞长度一般为 4,5CM
左右；最后将棉塞塞入试管内，塞入管内长度约为棉
塞总长度的 2／ 3。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑥ 塞棉塞
棉
塞
制
作
过
程
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑥ 塞棉塞
棉塞塞入试管后要
紧贴管壁，不留缝隙，
大小、松紧均要合适，
既便于通气，又能防止
杂菌侵入。检查松紧的
方法是，将棉塞提起，
试管跟着被提起而不滑
下，表明棉塞不 松，
将棉塞拔出，可听到有
轻微的声音但不明显，
这表明棉塞不紧。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑥ 塞棉塞
棉塞塞好后，每 7～
1O支包扎成捆，并在试
管上部包上一层牛皮纸，
用线绳扎紧。包纸的作
用是避免灭菌时冷凝水
淋湿棉塞，并能防止接
种前培养基水分散失或
杂菌污染。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑦ 灭菌及摆斜面
将包扎好的试管竖直放人手
提高压灭菌锅内,1,05千
克／厘米 2灭菌 30分钟，冷
却到 70℃ 左右，从锅内取出，
趁热摆成斜面。一般斜面长
度达试管长度的 1/2为宜，
待冷却后即成斜面培养基。
灭菌的三角瓶中的培养基，
倒入无菌培养皿中 (每皿倒
入 15～ 20毫升 )，凝固后即
成平板培养基。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
灭菌后的培养基要进行无菌检查，取数支斜面培
养基放人 25℃ 左右的恒温箱中培养 2— 3天，若无杂菌
生长便可使用。若暂时用不完，用纸包好放人 4℃ 冰
箱保存。
⑧ 无菌检查
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
工艺流程
设计培养
基质配方
按比例称
量各物质
天然材料如棉
籽壳、木屑等
主料的预处理
混合
调节含水 量装瓶装袋灭菌冷却使用
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
① 常用培养料配方
阔叶树木屑 78％,木
屑
麸
皮
培
养
料
米糠或麸皮 20％,
石膏 1 ％,
糖 1％ 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
① 常用培养料配方
棉籽壳 68％,棉
籽
壳
木
屑
培
养
料
木屑 10％,
麸皮或米糠 20％,
碳酸钙 1,5％,
石灰 0.5％。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
① 常用培养料配方
玉米粒 90％,
玉
米
培
养
料
麦麸 5％,
玉米粉 2％,
葡萄糖 1 ％,
过磷酸钙 1％，
石膏 1％ 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
原种、栽培种培养基配制时应注意的问题
① 除针叶树松、杉、柏和具芳香、异味和有毒的樟、楠木
荷等树种外，一般阔叶树的木屑均可利用。木屑需晒干保存。
陈木屑比新鲜木屑好。松、杉木屑经陈放或加石灰堆制处理后
可与杂木屑搭配用，用量占总量的 1／ 3为宜。麻栎树等鞣酸高
的木屑对香菇生长有利，但对其他食用菌菌丝生长有一定的抑
制作用。使用时应加以选择。
② 麸皮、米糠要求新鲜，凡久存、变质、结块的麸糠，不
再采用；麸糠的用量一般不低于 15％，不高于 30％；天冷可多
些，天热宜少些；平菇、凤尾菇可少加些，金针菇应稍多些。
香菇培养基中加米糠更好，而木耳以麸皮为好。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
原种、栽培种培养基配制时应注意的问题
③ 碳酸钙应采用轻质碳酸钙，它与石膏可通用，熟石膏与
生石膏有效成分相同。
④ 白糖、饴糖、砂糖、甘薯糖等均可用，红糖更好。糖精
不是糖，不可代替。
⑤ 水应清洁无油污, 每天首次使用的自来水, 应先排放掉前
面含铁锈高的一段水, 而后再用于拌料 。
⑥ 配方中各种成分必须正确称取，不可随意增减。
⑦ 加水拌制，就意味着杂菌开始生长、繁殖。因此，拌 料、
分装至灭菌时间越短越好，特别是夏季，时间拖长，易引起培
养基酸败、变质。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
② 配制方法
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
以棉籽壳、木屑为主的干培养料，应将其加水 120％ -130
％，充分拌和：使其充分吸进水，使混合培养料含水量在 55％
-65％。其含水量可用手握法简单测定，抓一把培养料子手掌
心，用力握捏，手指缝间有水迹渗出，但不成滴。
以小麦、玉米；稻谷为主料的，则应先将主料加水浸泡
4--6h，然后加热煮沸 15— 20分钟，麦粒、玉米不能煮得过软，
以粒心尚有干白部分为度，然后捞出备用。对于辅料，则加
少量水溶解后，与培养料混合即成。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
③ 装瓶灭菌
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
为便于观察和接种,
原种容器一般采用透明
的专用菌种瓶；瓶口内
径为 32— 25MM,瓶径高
度为 40MM, 容 量 为
750ML。 也可采用 500ML
罐头瓶；但因其瓶径大,
易造成污染和干燥, 且
瓶颈过短, 棉塞塞不牢
固, 易脱落 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
③ 装瓶灭菌
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
栽培种容器采用瓶子外, 也可用聚丙烯塑料袋,
其规格长 15CM,宽 28CM,厚度 0.06CM,过薄易破裂,
感染杂菌 。 袋口套上塑料环, 其高为 2-3CM,直径 4CM、
采用塑料袋制种可节省掏瓶人工, 减少麻烦,
除谷粒 (玉米、麦粒等 )料直接装至瓶肩处外，木屑、粪
草等料都要松紧适度，过紧则接种后透气不良，菌丝生长缓慢；
过松则菌丝生长虽快，但稀疏无力。装料时要压实，装料量以
袋子的 2/3为宜，使上部留有一定空间，有利于菌丝生长。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
③ 装瓶灭菌
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
装好料后，在料面中央从表面用水棒往下打一
洞直至瓶 (袋 )底或接近瓶底。擦拭瓶 (袋 )，用棉塞
塞好，然后用防水纸或牛皮纸将瓶口棉花塞包好，
及时送入高压锅，在 147KPa压力下灭菌 1.5-2小时。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(1)消毒与灭菌的概念
物品上存在着的微生物，为培养出食用菌的纯菌体，必须
对食用菌栽培的各环节进行杀菌，这是生产中的一项基本技术。
消毒 具有杀死致病微生物的作用或方法，称为消毒。
就食用菌菌种生产而言，消毒是指用物理或化学方法杀灭或
消除对食用菌生长发育有害的微生物，通常只能消灭物体表
面或环境中的一部分微生物，有能达到消灭所有微生物。
灭菌 指彻底杀菌，用物理或化学等方法，杀死物体上的
一切微生物，以及它们的芽孢和孢子，使物体成为无菌状态。
防腐 指防止或抑制微生物的生长繁殖, 是一种抑菌作
用, 不能杀死微生物群体
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法
① 热力灭菌
干热灭菌 烘烤灭菌法
焚烧灭菌法
湿热灭菌
高压蒸汽灭菌法
常压蒸汽灭菌法
间歇灭菌法
煮沸消毒法
巴氏消毒法② 辐射灭菌
紫外线辐射
电离辐射
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法
① 热力灭菌
热力灭菌 是指利用高温杀死微生物
的方法。 高温可引起微生物蛋白质和核酸
不可逆变性，细胞原生质凝固，酶被破坏，
代谢停止，最后引起微生物细胞死亡，这
种灭菌方法简便易行、经济有效，是食用
菌生产中最普遍采用的消毒灭菌方法。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
采用灼烧或干热空气进行的灭菌, 称为干热灭菌 。
焚烧灭菌法
通过火焰高温进行的灭菌。适
用于耐热的接种工具如接种环、接
种针、接种铲、接种匙等，以及试
管口、玻璃瓶口的灭菌等，通过酒
精灯几次火焰灼烧，一切微生物和
芽孢可全部杀死。
干热灭菌
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
采用灼烧或干热空气进行的灭菌, 称为干热灭菌 。
焚烧灭菌法
干热灭菌
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
采用灼烧或干热空气进行的灭菌, 称为干热灭菌 。
干热灭菌
烘烤灭菌法
通过加热的高温空气进行灭菌的方法。
电热于燥箱是干热灭菌的常用仪器，它是
通过电热丝进行加温，既可灭菌，也可用
于器皿的烘干。适用于固体材料的灭菌如
培养皿、三角瓶、试管等，通常采用 160℃
灭菌 2h，待温度下降到 45℃ 以下，方可取
出灭菌物品，否则玻璃物品会固温度骤然
下降而破裂。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
通过蒸汽杀死微生物的方法, 称为 湿热灭菌 。
在同一温度下, 湿热 灭菌比干热灭菌效果好,
因为湿热灭菌的穿透力比干热灭菌大, 杀伤力
强 。 蛋白质, 原生质胶体在湿热条件下容易变
性凝固, 酶系统容易被破坏, 而且蒸汽进入细
胞内凝结成水, 放出潜在热量面提高了环境温
度, 使杀菌力增强 。
湿热灭菌
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
高压蒸汽
灭菌法
利用高温高压蒸汽锅进行灭菌的方法。
可以杀死一切微生物，包括细胞芽孢、真菌
休眠体或孢子等耐高温个体。
在密闭系统中，蒸汽压力增高，温度也
增高，从而提高了杀菌效力。它是一种有效
的使用普遍的灭菌方法。
一般母种培养基及液体培养基灭菌采用 103,4kPa的压力，
温度 121.2℃,灭菌时间 30分钟。如原种及栽培种等采用
15Qkpa的压力，温度为 128℃,灭菌时间为 1-2小时。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌高压蒸汽
灭菌法
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
高压蒸汽
灭菌法
在使用高压锅时，需注意要将锅内
的冷空气全部排尽。如果锅内留有冷空
气，当加热时，冷空气变热很快膨胀，
使压力上升，造成灭菌锅内压力与温度
不一致，产生假性蒸汽压，即假上磅现
象。锅内实际温度低于蒸汽压对应的相
应温度，致使灭菌不彻底而达不到灭菌
目的。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
高压蒸汽
灭菌法
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌高压蒸汽
灭菌法
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌高压蒸汽
灭菌法
当开始加热灭菌
时，先关闭排气阀，
当压力升到 5kPa左右
时，打开排气阀，集
中排出空气，让压力
降到零，然后关闭排
气阀进行升压灭菌。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
高压蒸汽
灭菌法
在高压灭菌过程中，其
压力、温度、时间对营养成
分有影响，可采用提高温度、
压力和缩短灭菌时间的办法
减少对营养成分的破坏。虽
然温度升高了，破坏增加，
但受热时间缩短，则总的破
坏量减少。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
常压蒸汽
灭菌法
采用自然压力的蒸汽进行灭
菌的方法。有蒸笼灭菌、流通蒸
汽灭菌灶等。常见的是用钢筋水
泥砌成大型的流通蒸汽灭菌灶，
一般流通蒸汽温度为 1OO℃,杀
菌时间为 6-8H。其灭菌容量大，
可充分杀死微生物，有的一次可
灭菌几千瓶菌种。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
常压蒸汽
灭菌法
灭菌灶结
构简单，成本
低廉，可自行
建造，使用普
遍，但是灭菌
时间长，储耗
大且常有灭菌
不彻底的现象。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
间歇灭
菌法
指间歇一定时间，连续消毒几次而
灭菌的方法，适合于不耐高温的培养基
的灭菌，此法是在常压下加热到 100℃,
保持 20-30分钟，以杀死其中的营养体细
胞，然后将培养基在常温下或保温箱中
(28— 37℃) 培养，使芽孢发芽长成营养
体，再用同法杀死新长成的营养体细胞，
如此反复三次，即可杀死培养基中的全
部芽孢和营养体，达到灭菌的目的。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
煮沸消
毒法
将物品放入水中煮沸一定时间
进行消毒的方法。可杀死微生物的
营养体，但对细菌的芽孢、真菌休
眠体效果差。若在水中加入 2％ — 5
％的石炭酸或 1％的碳酸氢钠，可
提高消毒效果。此法适于制种及栽
培过程中所需的一些物品、器具、
器材的消毒。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
巴氏消
毒法
将物品在 60-70度的温度下经一
定时间消毒，杀死有害微生物的方
法。适合于不耐高温的培养基以及
一些食品如牛奶、酒类、饮料的消
毒，既可杀死有害微生物，又不破
坏营养成分。如在蘑菇培养的发酵
期间，通常采用 60--62度的巴氏消
毒法，消毒 4— 7h，可杀死培养料中
的病虫杂菌。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ② 辐射灭菌
利用辐射所产生的能量进行杀菌
的方法，称为 辐射灭菌 。它可分为电
离辐射和非电离辐射。 a射线,b射线、
r射线,X射线等属电离辐射；紫外线
等为非电离辐射。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ② 辐射灭菌
紫外线辐射
在 200— 300nm范围内紫外
线的杀菌作用最好。紫外线的
杀菌作用是因为它可以被蛋白
质 (约 280nm)和核酸 (约 260nm)
吸收，造成变性失活,引起致死。
紫外线的另一杀菌机制是因辐
射空气产生臭氧，臭氧遇水又
化合成双氧水，这两种物质都
能杀菌。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ② 辐射灭菌
紫外线辐射
无菌室、接种箱、超净工作
台内安装的紫外线灯管，一般照
射 20-30min，可杀死空气中的微
生物。但紫外线穿透力很弱，一
层普通玻璃或水均能滤去大量的
紫外线，它也不能穿过衣物、纸
张等大多数物体。因此，紫外线
只适用于空气和物体表面的消毒。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ② 辐射灭菌
紫外线辐射
我国蘑菇生产中使用的覆土，在日
光下曝晒，就是利用日光及其中的紫外
线进行杀菌。但必须注意，经紫外线照
射致死或损伤的微生物，通过自然光照
又能复活，称为光复活作用。因此,经
紫外线杀菌后，不要立即开启日光灯。
如白天灭菌，无菌室、接种室需用黑窗
帘或黑布套遮光半小时，以防止光复活
作用，提高灭菌效果。紫外线对人体有
害，特别对眼睛有损伤，因此，不能在
开启的紫外灯下工作 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ② 辐射灭菌
将被照射物质的原子核周围的电子击出，使其
变为阳离子，击出的电子可附着在其它原子上，使
其变成阴离子，也可以再冲击其它原子，引起继发
电离。在液体中，射线使水电离成 H+和 OH一,可直
接作用于微生物细胞本身而致死。
电离辐射
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
重金属
盐类
微生物浸在 O,1％ -
0,5％硝酸银、升汞溶液
中，几分钟就会死亡。食
用菌组织分离及菇木分离
菌种时，常用 0,1％升汞
溶液进行表面消毒。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
氧化剂
常用于消毒的氧化剂
有,1％高锰酸钾,1％过
氧化氢,0,2％ --0,5％
过氧乙酸,0,5％ — 1％漂
白粉等。其杀菌机制是通
过强烈的氧化作用，破坏
微生物的原生质或酶蛋白
质结构。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
还原剂
甲醛是常用的杀菌还原剂。
市售的福尔马林含 37％一 40％
的甲醛溶液。 5％的甲醛溶液
常用于防腐。培养室、无菌室
消毒常以 lOmL／ m3福尔马林原
液加 5g高锰酸钾氧化熏蒸。甲
醛能与微生物细胞蛋白质的氨
基结合，引起蛋白质变性，使
原生质失去正常活动能力。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
还原剂
喷雾消毒时甲醛溶液体积
分数为 5％。甲醛还有防腐作
用，以 1,9稀释液可浸制食用
菌标本。但甲醛有毒，对人的
眼睛、呼吸道、皮肤等有强烈
刺激，应注意防护。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
表面活
性剂
表面活性剂主要破坏菌体细
胞膜结构，造成胞内物质泄漏；
蛋白变性，菌体死亡。 0,25％
肥皂溶液是一种阴离于表面活性
剂，它对链球菌作用比 0,1％升
汞或 0,7％来苏尔还要强。常用
的 0,25％新洁尔灭液用于皮肤
消毒，它是人工合成的季胺盐阳
离子表面活性剂。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
酚 类
常用的苯酚又称石炭酸，
其 0,5％可用于皮肤消毒，
2％ — 5%可用于器皿消毒,5
％可用于空气喷雾消毒。来
苏尔是甲酚与肥皂的混合液，
常用其 3％ — 5%消毒皮肤、
用具；接种箱表面以及器皿。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
醇 类
醇类可使膜受伤，同时能
使蛋白质变性：通常使用乙醇。
无水乙醇与菌体接触后使细胞
迅速脱水、表面蛋白凝固，在
菌体表面形成保护膜，阻止乙
醇分子进一步渗入，影响杀菌
力。在实际工作中常使用 75％
的乙醇，杀菌效果最好。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法
④ 过滤除菌
对含有加热不稳定物质的培养基，如含有维生素、
酶、抗菌素及某些化学药品的培养液进行除菌时，通
常采用过滤除菌。膜滤器采用微孔滤膜作材料，当含
有微生物的液体通过微孔滤膜时，大于滤膜孔径的微
生物不能穿过滤膜而被阻拦在膜上，与通过的滤液分
离开来；微孔滤膜具有孔径小、价格低、可高压灭菌、
不易阻塞、滤速快及可处理大容量的液体等优点。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法
④ 过滤
除菌
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法
⑤ 渗透压消毒
利用高渗透压杀菌或抑菌的方法，称
为渗透压消毒。在高渗溶液中，水从细
胞中流出使细胞脱水，也因脱水发生质
壁分离，微生物不能进行正常新陈代谢
而死亡。盐水菇就是利用高渗透压的食
盐溶液来杀菌。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离
将子实体的局部组织或孢子移接在斜面试管培养
基上，获得纯培养菌丝的操作称为 菌种分离,
菌种分离主要指一级种 (母种 )的分离。
有些与高等植物共生的菌根菌，如红菇、松菇以
及有些要在动物（如白蚁）存在下才产生子实体的菌
类，因营养条件复杂，在目前实验条件下，较难在简
单的培养基上获得纯菌种。
菌
种
分
离
孢子分离法
组织分离法
菇木分离法
孢子弹射分离法
整菇插种法
钩悬法
贴附法菌褶上涂抹法
孢子印分离法
单孢子分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离
平板稀释法
连续稀释法
子实体组织分离法
菌核组织分离法
菌索分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
在无菌操作条件下使孢子在适宜的培养基上萌发，
长成菌丝体而获得纯菌种的方法称为 孢子分离法 。
特 点
菌丝菌龄短，因是有性
繁殖产物，其菌丝生命力强。
侵染病毒的菌类可用孢
子分离法脱毒。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
种菇的选择
在生产中必
须选择优良品系
中的优良个体作
分离材料。
选取八、九
分成熟的，健壮
无杂的第一或第
二茬的子实体。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
孢子弹射分离 法
它是利用孢子能自动
弹射出子实体层的特
性来收集孢子。
① 整菇插种法
孢子收集器
来收集孢子
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
① 整菇插种法
将钟罩上的孔加上棉塞或包上
6-8层纱布，放在垫有 4— 6层纱布
(浸过 0,1％升汞液 )的塘瓷盘上，
纱布上放一培养器，内放一个不锈
钢支架。
把收集器包装好，灭菌备用。
将菌幕未破裂的成熟子实体洗
干净，用 0,1％升汞溶液或 0,25
％的新沽尔灭浸泡 2-3min，以杀死
表面的杂菌。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
① 整菇插种法
对于菌幕破裂、子
实层已外露的子实体或
无菌幕包裹的子实体，
可用棉花蘸 75％酒精涂
擦子实体表面消毒。
按无菌操作要求移
人孢子收集器，插在支
架上，在适宜的温度中
培养。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
① 整菇插种法
2-3天后孢子
散落在培养皿中，
加入无菌水，用针
筒吸取孢子液，接
种在斜面培养基中
央，臵于 22-26℃
恒温箱中培养即可。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
② 钩 悬 法
在生产上，采集木耳、银
耳孢子常用此法，伞菌也可采
用此法。
先将新鲜成熟的耳片用无
菌水冲洗，然后用无菌纱布将
水吸干，取一小片挂在灭菌的
钩子上 (伞菌则消毒后挂上，
钩子的另一端挂在三角瓶口。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
瓶内装有培养基，在 25℃ 下，培养 24H。孢子落到培养基
上后，取出耳片，塞上棉塞继续培养，然后再转入试管中培养。
②
钩
悬
法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
取一小块成熟的菌褶或小块菌盖，用溶化的琼脂或胶水、浆糊 (需先灭
菌 )贴附在试管斜面的上方或培养皿皿盖上，经 6— 12h，待孢子落下后，立
即将试管或培养皿中的培养基移到另一消毒过的空试管或培养皿中进行培养。
③
贴
附
法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(2)菌褶上涂抹法
将伞菌子实体用 75％酒精表面消毒，按无菌操作
用接种环直接插入两片菌褶之间，轻轻地抹过褶片表
面，然后用划线法涂抹于试管培养基上。
(3)孢子印分离法
取成热子实体经表面消毒后，切去菌柄，将菌
褶向下放臵于灭过菌的有色纸上，在 20-24℃ 静臵一
天，大量孢子落下形成孢子印，然后移少量孢子在
试管培养基上培养。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(4)单孢子分离法
进行单孢子分离后，在人工控制的条件下，使两个优良品
系的单孢于进行杂交，从而培育出新品种。
挑取少许孢子在无菌水中形成孢子悬浮液，取几
滴涂于培养基上，用无菌玻璃三角架推平。经 48-72h
后，镜检孢子萌发情况。在单个孢子旁做好标记，然
后将其转接到斜面培养基上，待菌落长到 lcm左右时进
行镜检，观察有无锁状联合；初步确定是否是单核菌
丝。
① 平 板 稀 释 法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(4)单孢子分离法
挑取一定量孢
子，经连续稀释后，
直到每滴稀释液中
只有一个孢子，然
后滴人试管中保温
培养。当发现单个
菌落时，转到新试
管中继续培养，并
通过镜检以确定是
否为单孢菌落。
② 连续稀释法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 2,组织分离法
组织分离 法 是利用子实体内部菌肉组织来获得
菌种的一种最简便的方法，是生产上常用的一种分离
菌种的方法。
组织分离是一种无性繁殖过程，所得到的菌种是
营养后代，后代不易变异,菌株可保持原品种的优良
品质 。但如采用感染病毒的子实体进行组织分离时，
常得到带病毒的菌丝体。
（ 1）子实体组织分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 2,组织分离法
选择优良的种菇作为
分离材料，用无菌水冲洗
后，用 75%的酒精溶液表面
消毒。取消毒过的刀片从
菌柄或菌盖中部纵切、撕
开，挑取菌盖与菌柄交界
处的一小块组织 (火柴头大
小 )，接种到 PDA培养基上
3-5天后，接种块上产生白
色绒毛状菌丝。
（ 1）子实体组织分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 2,组织分离法
（ 2）菌核组织分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 2,组织分离法
茯苓、猪苓等的子实体不易采集，而它们的菌核
却易获得，利用菌核分离，能得到该菌的纯菌种。
将菌核表面洗净，用 75％酒精溶液消毒，切开菌
核，取中间一小块组织接种在 PDA斜面培养基上，塞
上棉塞，在 25℃ 下培养。
在挑取组织块时，应取大一点，因 菌核是贮藏器官,其大
部分是由贮藏物质一多糖物质构成，仅有少量菌丝。若挑得
过小，只挑到贮藏物质而没有挑到菌丝，分离就不成功。
（ 3） 菌索分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 2,组织分离法
蜜环菌、假蜜环菌等子实体难得，也无菌核，可
用菌索来分离获得其菌种。
操作方
法为：
用沾有 75％酒精溶液的棉花将菌索表
面黑色皮层轻轻揩擦 2— 3次，在无菌操作
条件下去掉黑色外皮层 (菌鞘 )，抽出其中
白色菌髓部分，用无菌剪刀将菌髓剪下一
小段，移植在培养基上，保温培养，即可
获得菌种。
菌索比较细小，在分离时极易污染，因此在培养
基中应加入适量的抑菌的青霉素或链霉素。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
利用菇木中菌丝的分
离而获得纯菌种的方法。
这种方法污染较大
菇木分离法
能用孢
子分离或
组织分离
的菌类，
一般不用
这种方法。
在自然界，银耳菌丝与香灰
菌丝在一起才能产生银耳子实体，
而用长有菌丝的段木来分离，能
同时得到银耳菌丝及香灰菌丝，
因此，生产上用的银耳菌种常采
取菇木分离法，香菇、木耳等菌
类也可采用菇木分离 法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
（ l） 菇木的
选择与处理
菇木应在
子实体发生季
节采集，由于
菇木含有很多
水分，细菌繁
殖较快，分离
易受污染，需
将分离材料风
干，则分离成
功率较高。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
（ l） 菇木的
选择与处理
分离时仅
需取 1cm厚的
一片或一块菇
木，一般选取
菇木的中间部
位，不取两端，
因两端裸露在
外，污染率高。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
（ 2） 菇木表
面消毒
将菇木切成
2-2,5m3的小块，
用 0,1％的升汞
水浸泡 0.25—
lmin，然后用无
菌水冲洗，无菌
纱布吸干。或用
75％的酒精溶液
揩擦表面进行消
毒。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
（ 3） 接种块
的选择
取米粒大小
一块接入 PDA试
管培养基上，接
种块小，污染的
机会小。接种后
把试管放到 25℃
下培养,长出白
色菌丝后，挑其
尖端部位转接到
新培养基上，即
得到纯化的菌种。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
菇
木
分
离
法
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养
将试管中
的菌种移接
至另外的试
管培养基上
称为转管 。
1、一级种的扩大培养
步 骤
① 将待接
的斜面试管以
及一级种接种
针等放人已消
毒的接种箱内。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养
步 骤
② 用 75％
的酒精溶液棉
球擦双手消毒。
③ 左手持
住空白斜面试
管和一级种，
右手夹持棉塞，
火焰封口。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养
步 骤
④ 将
接种针顶
端烧红，
并将整支
接种棒在
火焰上过
火。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养
步 骤
⑤ 挑
取黄豆大
小的菌丝
琼脂块，
迅速移接
到空白斜
面中央，
将棉塞塞
回试管。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养
步 骤
⑥ 将
已接种好
的试管放
人恒温培
养箱，在
24— 28℃
下培养，
长满试管
即可使用。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养
改
进
扩
接
法
（
左
手
拿
一
支
试
管
）
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 2．二 级种的扩大培养
二级种培养基灭
菌后应及时送人接种
室 (箱 )或超净工作台
内；待冷却至 30℃ 以
下后，按无菌接种操
作要求接种，每瓶接
入一块稍带培养基的
母种 (如蚕豆大小 )，
接人瓶中的小洞口，
并塞好棉塞，操作步
骤与转管相似 。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 2．二 级种的扩大培养
每支斜面母种
一般可接原种 6-8
瓶。灭菌的原种培
养基不宜久放，最
迟在第二天必须接
种完毕。接种后的
菌种瓶应移人温度
适宜的培养室内培
养，待菌丝长满即
成原种。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 2．二 级种的扩大培养
菌种瓶口先
向上直立放于培
养架，待菌丝已
吃料后可重叠卧
放。培养过程中
应经常检查，如
有污染应及时去
除污染瓶。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 3．三 级种的扩大培养
二级种进一步扩大培
养即成三级种
三级种培养料常用耐高
温的聚丙烯塑料袋装；也可
用瓶装。灭菌的接种培养料
应移人接种室接种。只需几
粒玉米 (或麦粒 )原种，接人
一袋栽培种培养料的洞中或
料面上。 一瓶原种可接 30-50
瓶 (袋 )栽培种,已接种的袋
(瓶 )放在适宜温度下培养至
菌丝长满瓶即可用于生产。
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定 1、母种质量鉴定
母种分离
后菌种是否优
良，早期判断
困难，要经过
全面的鉴定，
符合标准的母
种才能扩大繁
殖，制备原种
和栽培种用于
生产。其鉴定
的主要项目：
① 母种菌丝的形态
② 菌丝耐干耐湿试验
③ 菌丝生长速度
④ 菌丝的高温锻炼
⑤ 菌丝吃料能力
⑥ 出菇试验
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定 1、母种质量鉴定
① 母种菌丝的形态
挑取少许菌丝在载片上, 盖片后在显微镜下观察菌丝形态是
否属于所要培养的菌类 。 有锁状联合的菌类还应看到锁状联合 。
② 菌丝耐干耐湿试验
将母种移接到不同含水量 (如 50％,60％,70％ )的原种培
养料中，观察菌丝吃料及生长情况。如蘑菇含水量以 60％为宜，
若它在较低及较高含水量的培养料中仍能正常生长，则说明其
对干、湿度的适应性较强，可以用做扩大繁殖。
将母种菌丝接人干、湿度适宜的斜面培养基上，在适宜温
度下培养。若菌丝生长快，且整齐、浓密、健壮的则是优良母
种；若菌丝生长慢或特别快，且不整齐、凌乱的则不是好菌种。
③ 菌丝生长速度
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定 1、母种质量鉴定
④ 菌丝的高温锻炼
将母种在适宜温度 20-25℃ 下培养 1周后，臵于 35℃ 下进行
24h高温锻炼，再回到适宜的温度下培养。如恢复萌发快，菌丝
不发黄、不倒伏，仍然旺盛生长的，说明该母种耐高温性强，
可用来扩大培养。
⑤ 菌丝吃料能力
将母种接人培养料上，若吃料快，则可用于扩大繁殖。
⑥ 出菇试验
将菌种接入木屑或其它培养料上，培养至菌丝长满，然后
降温，提供散射光等出菇条件让其出菇，出菇又快又多又大的
是优良菌种，可扩大培育。
通常分离的母种应控制转管次数, 次数过多会引起菌种老化或变异, 一
般应控制在 2-3次为宜, 最多不超过 4次 。 平菇等生活力强的可以多转 1-2次 。
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
2,原种和栽培种的质量鉴定
原
种
和
栽
培
种
的
质
量
鉴
定
（ 1）菌种传代和菌龄应在规定的范围内
（ 2）原种及栽培种的外观要求
（ 3）生理生化指标
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
2,原种和栽培种的质量鉴定
原
种
和
栽
培
种
的
质
量
鉴
定
（ 1） 菌种
传代和菌
龄应在规
定范围内
（ 2） 原种
及栽培种
外观要求
（ 3）生理
生化指标
① 用转管在 4— 5次以内的
母种生产的原种和栽培种。
② 一般菌类原种和栽培种
在常温下的菌龄 (指菌丝长
满瓶后存放的时间 )在 3个月
内有效 。 草菇等繁殖快的菌
类 1个月内有效 。 超过上述
期限的菌种, 即使外观健壮,
生产上也不使用 。
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
2,原种和栽培种的质量鉴定
原
种
和
栽
培
种
的
质
量
鉴
定
（ 1） 菌种
传代和菌
龄应在规
定范围内
（ 2） 原种
及栽培种
外观要求
（ 3）生理
生化指标
① 菌丝已长满培养基。
② 菌丝生长健壮 。
③ 菌丝色泽洁白或符合该菌类菌丝特
有的色泽 。 银耳菌种除有白色的银耳
菌丝外, 还应有烟灰色的香灰菌丝 。
④ 菌种内无杂菌污染，无其它杂色。
⑤ 若种瓶底部出现黄色分泌液，则表
明菌种老化。
⑥ 若瓶内菌丝柱和瓶壁脱离，说明菌
种老化或培养基偏于。
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
2,原种和栽培种的质量鉴定
原
种
和
栽
培
种
的
质
量
鉴
定
（ 1） 菌种
传代和菌
龄应在规
定范围内
（ 2） 原种
及栽培种
外观要求
（ 3）生理
生化指标
王振福 （ 1997)用
液体菌种栽培香菇的
试验表明, 香菇液体
菌种的脱氢酶含量与
固体培养料栽培的子
实体产量成正相关,
因此, 菌种脱氢酶含
量可作为鉴定菌种质
量优劣的生理生化指
标 。
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
3,菌种的选购方法
很多栽培者
常直接购买
二级种或三
级种用于扩
接三级种或
生产栽培之
用 。 在选购
这些菌 种时
应掌握一些
基本方法：
提 用手抓住棉塞轻
提起来，看棉塞松紧
是否适度。过松过紧
均达不到过滤空气的
目的，从而 无法保证
能得到优质的菌种。
手提还可以通过手测
重量判断失水情况和
菌龄。
闻
看
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
3,菌种的选购方法
很多栽培者
常直接购买
二级种或三
级种用于扩
接三级种或
生产栽培之
用 。 在选购
这些菌 种时
应掌握一些
基本方法：
提
闻
从一批菌种中随机
抽取一些菌种，把棉塞
拔起，将瓶 (袋 )口或管
口靠近鼻子嗅菌种的气
味，若闻到一种不愉快
的霉、臭、酸等异味，
则说明菌种有杂菌污染，
培养的不是纯菌丝或已
有变质腐败的菌种。 正
常菌种具有特殊的香味 。看
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
3,菌种的选购方法
很多栽培者
常直接购买
二级种或三
级种用于扩
接三级种或
生产栽培之
用 。 在选购
这些菌 种时
应掌握一些
基本方法：
提
闻
① 看菌种外形是否破管、破瓶或
破袋。
看
③ 看菌种是否, 纯、正、壮、阔,,
即菌种纯度应高，不能感染杂菌；
② 菌丝色泽要纯正，通常为纯白，
原种栽培种菌丝应连结成块，无
老化、变色、吐黄水、长子实体
原基等现象；
④ 菌丝要粗壮，长势强，分枝多而
密 (可借助放大镜或显微镜观察 )；
⑤ 培养基质要湿润, 含水适宜,
不干缩脱壁 。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
在食用菌生产和科研中，选育出一个优良的菌株
是很不容易的，而要保持其菌种的遗传稳定性更是困
难。菌种的退化、老化以及保藏方法是影响食用菌生
产的重要因素。
1、菌种退化
指菌种突然或逐渐丧失原有的
生命力和生产性能的现象。
菌种
退化
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
1、菌种退化
菌种
退化
（ 1）菌丝生长速度减缓，在培养基上
出现白色、浓密的扇形菌落。
（ 2）对不良的外界条件 (如温度、酸
碱度、二氧化碳、杂菌等 )的抵抗力变弱，
（ 3）子实体形成期提前或推迟，出
菇潮次不分明，菌盖、菌柄呈畸形，产
量明显下降，品质变劣等。
注意经常选种育种，减少转接次数，改善保藏条
件，可以有效地防止菌种的退化。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
2、菌种复壮
菌种复壮 是使生活力和丰产性能降低的菌种，恢复或
提高到原有健壮程度。在退化的菌种中仍有一些保持原有菌种
特性的细胞，可采取一些手段，使这些细胞生长繁殖，以更新
退化的菌株。
① 对已退化的菌株进行单细胞分离纯化；
② 以高剂量的紫外线和低剂量的 (NTG)联合对退
化菌株进行处理；
③ 采取改善栽培条件 (如更换培养基 )等措施；恢
复和提高菌种的种性。
④ 无性繁殖和有性繁殖交替使用也是菌种复壮
的一种手段。
菌
种
复
壮
方
法
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
菌种保藏 是根据菌种的遗传性能和生理、生化
特性，人为地创造环境条件，使优良菌株稳定地保存。
保持优良菌株原有特性，使其不死亡，不受污染，
能长期在生产上应用，这是菌种保藏的主要任务。
菌种保藏 的基本原理是采用 低温、缺氧及干
燥 等技术，使菌体生长繁殖受到抑制，延缓代谢速度，
使生命活动处于休眠状态；以减少变异的发生，从而
达到既保持菌种的纯正，又延长保藏时间，防止死亡
和衰退的目的。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
（ 1）斜面冰箱保藏法
（ 2）矿油保藏法
（ 3）滤纸 (孢子 )保藏法
（ 4）菌丝球保藏法
（ 5）自然基质保藏法
（ 6）载体保藏法
（ 7）液氮超低温保藏法
菌
种
保
藏
常
用
方
法
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
①
斜
面
冰
箱
保
藏
法
将需要保藏的长满菌丝的斜面菌种放在 4℃ 的冰箱
中保藏。用于保藏的斜面．菌种棉塞要用硫酸纸包扎，
防止霉菌污染。
斜面试管冰箱保藏菌种一般 2-3个月转管一次。
此法适应于大多数食用菌的保藏，但草菇菌种不
耐低温，不能在冰箱中保藏，应在 10-15℃ 下保藏。
保藏时间较短，一般为 3-6个月，转管次数增多，
变异的可能性也就增大，不适宜长期保藏菌种。
用斜面冰箱保藏法保藏的菌种在使用时应提前 12-
24h从冰箱中取出，经适温培养、恢复活力后才能用于
转管接种。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
②
矿
油
保
藏
法
即采用矿油覆盖斜面试管保藏菌种的方法。
其方法是,先将矿油于 110kPa压力下
灭菌 30min，置 40℃ 温箱中数日，以排除水
分，取适量矿油注入斜面菌种试管，使其
淹没并高出斜面顶端 lcm，再用无菌橡皮塞
封口，在室温条件下垂直保藏 (不宜在冰箱
中保存 )，有效期可达 1年以上。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
②
矿
油
保
藏
法
液体石蜡保存的菌
种在使用肘，不必倒去
石蜡油，只要用接种铲
从斜面 上铲取一小块菌
丝块即可，原管仍可重
新封蜡，继续保存。初
次从矿油中移接的菌种，
常沾有石蜡油，生活力
弱，需再转接一次方能
恢复活力。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
③
滤
纸(
孢
子)
保
藏
法
以无菌滤纸作为
食用菌孢子吸附载体
长期保藏菌种的方法。
将不同颜色的无
菌滤纸剪成 (2—
3)cmX(0,5-0,8)cm的
长条，平铺在无菌培
养皿内；
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
③
滤
纸(
孢
子)
保
藏
法
将经表面消毒的种
菇 (耳 )用支架搁臵在皿
内 (或悬吊于皿的上方 )，
罩上玻璃通气钟形罩，
臵无菌箱中收集孢子。
将带孢子的滤纸条
放入无菌试管中，臵干
燥器内 2-3天，吸除滤
纸上的水分。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
③
滤
纸(
孢
子)
保
藏
法
用无菌胶塞封口后保
藏。本保藏法简便，有效
保存期较长，一般为 2-4年。
启用时取 1片滤纸条，
将带孢子的一面贴附于斜面
培养基或平板上，待孢子萌
发并形成菌落后转管培养。
缺点 是在收集孢子时易
遭污染，保藏过程中亦易
产生变异，故需做结实性
试验后方能用于生产。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
④
菌
丝
球
保
藏
法
利用特殊物质为媒介
保存菌丝球的方法。常用
的媒介有生理盐水、蒸馏
水、各种营养液等。
取对数生长期的菌丝球
4— 5个，放人经灭菌并盛有
5mL生理盐水 (或蒸馏水、营养
液等 )的试管中，用无菌胶塞
封口，在 4℃ 冰箱中或室温下
保藏，有效期 1-3年。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
⑤
自
然
基
质
保
藏
法
以不含毒性、刺激性和抑菌性成分又富
含营养的天然物质作培养基保存食用菌菌种
的方法。
天然物质如小木块、小枝条、木屑、麸
皮、麦粒等，取材方便，培养基的制作方
法简单，保藏的有效期也较长。启用或转
管继代保藏时，只需取一块 (粒、条 )培养
物臵新鲜培养基上适温培养即可。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
⑥
载
体
保
藏
法
使食用菌孢子吸附在适当的载体上 (土壤、
砂子等 )进行干燥保存的方法。最常用的有土
壤保藏法。
使用的土壤
原则上为肥沃的
耕土，灭菌后放
人干燥器中，使
其水分逸散，然
后接入孢子，分
干接和湿接 两种
方法。
干接 就是在无菌条件下将孢
子直接接人土壤中拌匀即可。
湿接 是将孢子刮人无菌水中
充分摇匀制成孢子悬浮液，然后
用 lmL无菌吸管吸取悬浮液，滴
入壤中，充分干燥后，密封保存。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
⑦
液
氮
超
低
温
保
藏
法
即将菌种密封在有保护剂的安瓿管内，
其活细胞在超低温 (— 196℃) 液态氮中处
于休眠状态而设计的一种长期保藏菌种的
方法。
此法适用于保藏所有的食用菌菌种。
其主要优点是：有效保藏期长，方法简
便，被保藏的菌种基本上不发生变异，
因此是目前保藏菌种的最好方法。
食用菌的栽培一般包含几个步骤：首先是制作菌种，
即通过孢子或菇体组织分离出菌丝体，并加以扩大繁
殖形成生产菌种；其次是将制好的菌种接于培养基质，
生产出食用菌子实体。
孢子
菇体组织
菌丝体 菌 种
培养基质
子实体
萌发
分离
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
食用菌菌种有特定的制作程序，只有掌握了制种
技术，才能生产出优良菌种，使食用菌栽培获得成功。
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型
使用目的的不同
保藏用菌种
实验用菌种
生产用菌种
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型
物理性状
固化菌种
固体菌种
液体菌种
外观形态
颗粒状菌种
片状菌种
砖状菌种
培养
容器 袋装菌种
瓶装菌种
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型
培养基的主料
粪草菌种
谷粒菌种
木块菌种
木屑菌种
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型
菌种按生产程序
一级种 (母种）
二级种 （原种）
三级种 (栽培种 ）
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型 ① 一级种
一级种又称母种、试管种。
将经孢子分离法或组织分离法得到的纯培养物，移接到
试管斜面培养基上培养而得到的纯种。
采用分离法获得的母种数量有限，一般可将菌丝再次转
接到新的斜面培养基上进行转管繁殖，能得到更多的母种，
称为 再生母种,即可用于生产，也适用于纯种的保藏 。
一支长满菌丝体的试管母种可分移成 10多支新试
管。试管种若不马上使用，可臵于 4℃ 的冰箱中保存。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型 ② 二级种
二级种又称 原种,这是由母种转接到装有麦粒等
固体培养基质的专有菌种瓶中经过培养后形成。原种
可采用 750mL菌种瓶或 500mL罐头瓶作为培养容器。
一般一支母种可扩大繁殖 6-8瓶原种。
若原种直接用于生产，则成本太高，因此，原种
还必须进一步扩大繁殖成三级种，使菌种数量增多，
才能用于栽培。由于原种的培养基质接近栽培所用的
基质，因此原种也可用于小规模的栽培。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序
（ 1）菌种类型 ③ 三级种
三级种又称栽培种，它是由二级种进一步扩大繁
殖而得。
栽培种的培养基质与二级种相似，更接近于栽
培基质。三级种数量多、成本低。
栽培种一般采用固体培养基，用聚乙烯塑料袋
或玻璃瓶作堵养容器。通 常一瓶原种可繁殖 30-50
袋栽培种。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
1、菌种类型及制种程序 （ 2）制种程序
菌种
生产是指
通过无菌
操作，大
量培养繁
殖菌种的
过程。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ l）配料设备
切片机
是将本材切
成规格木片
的专用机械，
是食用菌培
养基质粉碎
处理的预前
工序设备。
切 片 机
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ l）配料设备
粉碎机
是将木片,
秸秆等原料
粉碎成一定
粗细度碎屑
的专用机械 。
粉 碎 机
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ l）配料设备
搅拌机
是将培养料
通过搅拌使
其分布充分
均匀的专业
机械。其配
套动力为
3KW，每次
拌料量为
100KG湿重 。 搅 拌 机
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ l）配料设备
装袋机是将搅
拌混合均匀后的培
养料装入塑料薄膜
筒内的机械。
装 袋 机
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ l）配料设备
将培养料
装入料瓶的机
械。生产上采
用的均匀螺旋
挤入式装瓶机。
装 瓶 机
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 2）灭菌设备
高压灭菌锅是密闭耐压的金属灭菌容器。其工作
原理是在驱尽锅内空气的前提下，通过加热把密闭锅
内的水蒸气压力升高，从而使蒸汽温度相应提高到
100℃ 以上。压力在 98Pa时，蒸汽温度可达 121 ℃ 。常
见的高压灭菌锅有手提式、立式与卧式，也有自制的
高压灭菌锅。手提式主要用于一级种制作，立式和卧
式主要用于二级种、三级种和栽培瓶、袋的制作。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 2）灭菌设备
手提式高压灭
菌锅的容积小，适
用于试管培养基、
三角瓶或平皿、无
菌水、少量菌种瓶
及一些器皿的灭菌。
手提式高压灭菌锅
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 2）灭菌设备
立式高压灭
菌锅容量大，可
用于菌种瓶、罐
头瓶及塑料袋装
培养基的灭菌。
立式高压灭菌锅
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 2）灭菌设备
卧式高压灭
菌锅容量大、盛
物多，灭菌彻底，
效果好。
卧式高压灭菌锅
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 2）灭菌设备
常压灭菌灶是在
自然压力下产生
100℃ 蒸汽进行灭菌
的炉灶，如土蒸锅。
常压灶制作简单，造
价低，很受菇农欢迎。
常压灭菌灶
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 3）接种设备
无菌室是食用菌生产中无菌操作的环境。无菌室
要求严密、清洁。
无菌室一般有内外两间，外间较小，作为缓冲间。
缓冲间可放臵工作服、拖鞋、口罩、消毒用药品等。
无菌室门应采用推拉门，内外两间的门应呈对角线安
装，以提高隔离缓冲效果。必 要时可安装一个双层小
型玻璃推拉窗，以便于内外物品传递，减少进出无菌
室的次数。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 3）接种设备
为了在使用之后能排湿、通风，应在室内顶部
设臵小型排风扇，在室内的侧面底部设臵玻 璃纤维
过滤进气口。
无菌室 (包括缓冲间 )除照明用光源外，还应安
装紫外线杀菌灯，吊装在接种操作台的正上 方。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 3）接种设备
超净工作台 是一种
局部层流 (平行流 )装臵，
它能在局部造成高洁净
度的工作空间；使小房
间内的空气经预过滤器
和高效过滤器除尘、洁
净后，以垂直或水平层
流状态通过操作区，因
此，可使操作区保持既
无尘又无菌的环境。 超净工作台
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 3）接种设备
接种箱是用木材与
玻璃制成密闭箱 。 有单
人式或双人对接式 。 接
种箱前后斜面为玻璃窗,
便于操作时观察, 可开
启, 以便取放物品 。 玻
璃窗下的木板有一对椭
圆形开孔, 操作孔装有
白布袖套, 一端固定在
圆孔上, 另一端套口用
松紧带箍住操作者的手
腕 ·,以防杂菌进入 。 箱
内可安装 20W日光灯和
30W紫外线灯管 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 3）接种设备
A、接种针
B、接种钩
C、接种环
D、接种铲
E、接种锄
F、接种耙
G、接种刀
H、接种勺
I、接种镊
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 4）培养设备
在 制 作 一
级种和少量二级
种时, 可采用电
热恒温箱或隔水
式电热恒温箱,
目的是控制温度,
适温培养
恒 温 箱
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 4）培养设备
培养室是专门用于培养菌种的场所。各级菌种
在接种完毕之后，即移人培养室。冬季培养室应有专
用加温设备。无论采用何种方法加温，都要注意培养
室内空气的相对湿度，一般维持在 65％ — 70％，否则
菌瓶失水过多。菌种培养架可用木制，也可用钢材或
铝合金材料制成，宽度 1— 1.5m，有 4-6层，层间距
0.4- 1m,培养室内还需温、湿度计，用于培养室温度、
湿度的测量。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
2、菌种生产的主要设备 （ 5）菌种保藏设备
多数菌种要在低
温, 干燥, 隔绝空气
等环境中保藏 。 常用
的主要设备是电冰箱,
干燥器, 真空抽气机
等 。 高温型菌类的菌
种需继代保藏, 由于
要越过寒冷的冬季,
常用电热恒温箱,
电
冰
箱
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (1)药品
① 基物药品
制作母种时常
用的药品有
琼脂、葡萄糖、蔗糖、
磷酸二氢钾、硫酸镁、
蛋白胨、麦芽汁、酵
母膏和维生素 B1等。
原种和栽培种
常用药品有
石膏粉、碳酸钙、过
磷酸钙、蔗糖、红糖、
尿素、硫酸铵等。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (1)药品
② 消毒及杀菌药品
5％甲醛
5％石碳酸
0.l％高锰酸钾
75％酒精
2％～ 5％漂白粉
0.1％升汞
1％～ 2％煤酚皂溶液 (又称来苏尔 )
0.25％新洁而灭
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (2)配料用具
常见的配
料用具有
搅拌机
天平
杆秤
水泥地
水桶
铁铲、铝锅、
铁锅、搪瓷
杯、大烧杯、
筐、木箱、
塑料箱
脸盆
废油桶
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (3)分装及检测用具
分装
用具有
铁架台
漏斗
试管筐
菌种袋 (17cmX 33cm,14cmX 28cm等的聚乙烯或聚
丙烯插角、平底袋 )
试管 (18mmXl80mm,20mmX200mm)
量杯 (100,250,500mL)
菌种瓶 (750mL,500mL盐水瓶或罐头瓶 )
培养皿 (d＝ 9cm)
三角瓶 250mL
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (3)分装及检测用具
检测用
具有
生物显微镜
温度计
干湿球温度计
pH试纸
卡尺
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作
3,制种用品及材料 (4)分离及其用具
常用分
离用具
钟罩
棉花
纱布
记录本、标签纸、笔
尖头镊子
酒精灯
广口瓶
手术剪
95％酒精 其他用具及材料有：纱布、工作衣、托
鞋、口罩、无菌水、
颈圈、绳线、回形
针、钉书机等。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 1）培养基 (料 )的配制原则
①
选
择
适
宜
的
营
养
物
质
食用菌所需的营养物质，不外是碳源、氮源和矿质元素等，对
每一种营养物质的种类和数量要求又有所不同。
如培养 木耳、猴头 等木腐菌原种和栽培时，多采用木屑、棉籽
壳等为主要原料的培养基；而培养 双孢蘑菇、草菇 等草腐菌的原种
和栽培种时，要采用粪草为主要原料的培养基。
在整个菌种制备过程中，从母种，原种到栽培种各个阶段的
目的和要求不同，所选用的培养基营养成分也应有不同。
母种 的初生菌丝比较嫩弱，分解养分能力差，因此要求营养
丰富、完全，氮源和维生素的比例要高，需选用容易被菌丝吸收
利用的物质，如葡萄糖、蔗糖、马铃薯、玉米粉、麦芽汁、酵母
膏、蛋白胨、无机盐类和生长素等为原料。
原种、栽培种 所需培养基数量较多，而且菌丝分解物质能力
强，可利用大量农作物秸秆、粪草，锯木屑、棉籽壳、麸皮和米
糠等原料作为培养基。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 1）培养基 (料 )的配制原则
②
注
意
各
种
营
养
成
分
的
比
例
培养基 (料 )中各种营养物质的比例是影
响菌丝生长的重要因素。营养物质比例适当，
菌丝生长发育就好，否则就差。
应根据不同培养对象的需要，配以适当
比例。菌丝生长要求培养基 (料 )有一定的碳
氮比，一般碳氮比 (C,N)以 20:1为好。
如培养基 (料 )中碳源供应不足时，容易
引起菌丝的过早衰老和自溶，如氮源过多或
过少时，会引起菌丝的过于旺盛生长或生长
缓慢，对菌丝生长造成不良影响。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 1）培养基 (料 )的配制原则
③
调
节
适
宜
的
酸
碱
度
(pH)
培养基 (料 )需要保持菌丝生长发育所需
要的酸碱度，因此配制培养基 (料 )时，要用
氢氧化钠、石灰或过磷酸钙等调节 pH值。
各种食用菌所需要的 pH值不同，培养基
(料 )的酸碱度也应不同。
如猴头菌丝喜欢酸性环境，需调节 pH值
为 4— 5;又如草菇菌丝喜碱性环境，需将 pH
值调为 7,5～ 8。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 1）培养基 (料 )的配制原则
④
选
择
经
济
实
用
的
原
料
制做培养基 (料 )的原料, 有些价格比较贵, 成
本高, 可用一些价格低廉的代用原料理,
可用一些农副产品代替化学药品，常用的有马
铃薯、麦芽，玉米面、麦麸等。
在食用菌制种中，原种和栽培种因原料用量
较大，选择合适的代用原料，其经济意义就更大。
过去多用麦粒和玉米，现在可用锯木屑和棉
籽壳等来代替。但是选用代用料时，必须就地取
材，来源丰富、价格便宜的原则，而且原料没有
毒性。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型
培
养
基
的
类
型
① 营养来源
② 物理状态
③ 表面形式
④ 用途
天然培养基
合成培养基
半合成培养基 固体培养基
液体培养基
半固体培养基斜面培养基
平面培养基
高层培养基 母种培养基
原种培养基
栽培种培养基
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ① 营养来源
天然培养基
天然的有机物质
配制而成。如农副产
品麦麸，米糠，豆饼
及许多农作物秸秆等，
也有动植物浸出液，
如牛肉膏、麦芽汁、
豆芽汁及马铃薯汁等。
培养基的优点 是营养
丰富、经济方便，但它的
化学成分不能定量，每批
成分也不稳定，不宜用作
精确的实验。常用的天然
培养基有马铃薯培养基、
麦芽汁培养基等。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ① 营养来源
合成培养基
用已知成
分的化学药
品配制而成 。
培养基的优点 优
点是各种成分简单而
清楚，容易控制，适
于进行某些定性、定
量测定。
常用的合
成培养基有
高氏一号培
养基、察氏
培养基等 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ① 营养来源
半合成培养基
在天然培养基中适当添
加一些无机盐类，或者在
合成培养基中添加少数天
然有机物质配制而成。
培养基的优点 是
营养全面丰富、宜于
控制。常用的有综合
马铃薯培养基等。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ② 物理状态
液体培养基
培养基
呈液体状态。
它含有食用
菌菌丝生长
发育所需要
的各种营养
物质。
食用菌孢子或菌丝
在这种 培养基 中能够
更好地接触和吸收养料，
因而菌丝体生长迅速而
粗壮，同时这种液体菌
种便于接种工作的机械
化、自动化，有利于提
高生产效率。
缺点 是要发
酵设备，成本较
高，也较复杂。
液体培养基常用
来观察菌种的培
养特征以及检查
菌种的污染情况。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ② 物理状态
固体培养基
在液体
培养基中加
入凝固剂即
成为固体培
养基。常用
的凝固剂是
琼脂。
根据季节和用途的不
同，凝固剂的添加量一般
在 1,8％～ 2％ 之间。固
体培养基可制成试管斜面，
也可制成平皿平面（平
板），试管斜面用来培养
和保存菌种，平皿平面可
用来分离和纯化菌种。
除了加凝固剂
的固体培养基外，
天然的固体基质做
成的培养基也称固
体培养基。在菌种
制作中，用麦粒、
玉米粒、木屑、棉
籽壳、甘蔗渣等农
副产品制成的培养
基也属固体培养基。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ② 物理状态
半固体培养基
在 1000毫升液体培养基中，将加入的琼脂量减
少为 8～ 10克，即成为半固体培养基。它主要用来
培养一些特殊菌类。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ③ 培养基的表面形状
斜面培养基
将琼脂培
养基装入试管
灭菌后，乘热
放臵成斜面，
凝固后即成。
它用于菌种扩
大转管及菌种
的保藏。
平面培养基 高层培养基
将琼脂培养基
装入三角瓶中灭菌
后，冷至 50℃ 左右，
乘热倒入灭菌平
皿,(或不倒入平皿 )
凝固后即成。它用
于菌种分离和研究
菌类的某些特征。
将琼脂培养基装
入试管内灭菌后，不
摆成斜面，即成高层
培养基。接入高层培
养基的菌种，发育的
面积虽然小，但这种
培养基厚度大，营养
丰富，存放时间长，
也不易干燥开裂。常
用于保存菌种。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 4、菌种培养基的制备
（ 2） 培养基的类型 ④ 培养基的用途
母种培养基
也称一级培养
基。它是分离母
种或试管种扩大
繁殖用的培养基。
因母种培养基装
在试管内，并摆
成斜面，因此也
叫斜面培养基 。
原种培养基 栽培种培养基
也称二级培养
基．通常装在罐头
瓶或者 750毫升容积
的菌种瓶内，也可
装在 1000毫升客积
的白色聚丙烯塑料
瓶内 。
也称三级培养基，
它是供食用菌栽培用
的菌种培养基。通常
装在罐头瓶或 750毫
升容积的菌种瓶内，
也可装在 17X 33厘米
或 l7X28厘米大小的
聚丙烯塑料袋内。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
① 母种（一级种）培养基的配制
种菇或种木的
选择和处理
孢子、组织、
种木分离
马铃薯、琼脂、
葡萄糖等原料
装入试管
的培养基
排成斜面
的培养基
母 种
接种
配制 灭菌
培养
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(1)母种（一级种）培养基的配制
母种培养基种类很多，常用的有以下几种：
① 马铃薯、葡萄糖、琼脂培养基 (PDA培养基 ) 马
铃薯 (去皮 )200克，葡萄糖 20克，琼脂 18— 20克，水
1000毫升。
② 马铃薯、蔗糖、琼脂培养基 (PSA培养基 ) 马
铃薯 (去皮 )200克，蔗糖 20克，琼脂 18~20克，水
1000毫升。
③ 蛋白胨、葡萄糖、琼脂培养基 蛋白胨 2克，葡萄糖 20
克，磷酸氢二钾 1克，，磷酸二氢钾 0,5克，维生素 B10,05
毫克，硫酸镁 0,5克，琼脂 18--20克，水 1000毫升。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
工艺流程
计算 配方
各物用量
按比例称
量各物质 配制 调 pH
分装试管塞棉塞灭菌及摆斜面无菌检查
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
工
艺
流
程
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
首先要选择合适的浸煮容器，一般选用铝锅、搪
瓷缸或玻璃烧杯等，而不能用铜，铁器皿，以免铜锈
或铁锈混进培养基中。
母种培养基的制作，按以下顺序操作
① 计算 先选好培养基配方，按照培养基需要的
数量计算各种成分的用量，然后称量。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
② 称量 用架盘天平称取培养基各种成分的用量，
对一些不易称量的成分，需采用特殊方式称量，如牛
肉膏比较粘稠，可先称好一根玻棒和烧杯，再用玻棒
取牛肉膏放在烧杯中一起称。微量元素与生长因子等，
需要量很少，难以称准，可先配成较浓的原液，再从
中取出需要的量。
③ 配制 为避免发生沉淀，加入的顺序一般是先
加缓冲化合物，溶解后加入主要元素，然后是微量元
素，再加入维生素等。最好是每种成分溶解后，再加
入第二种营养成分。若各种成分均不发生沉淀，也可
以一起加入。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
③ 配制
若用马铃薯、玉米粉、苹果、米粉、木屑等原料
时，应先制取这些原料的煮汁，然后再把煮汁与其它
成分混合．
以马铃薯葡糖琼脂培养基为例，说明其配制方法。
把选好的马铃薯洗净，去皮挖去芽眼，切成薄
片或 1厘米大小的方块，称取 200克放在容器中，加
水 1000毫升，加热煮沸 20～ 30分钟，至软而不烂的
程度，用四层纱布过滤；取其滤液。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
③ 配制
在滤液中加入琼脂，小火加热，用玻璃棒不断
搅拌，以防溢出或焦底，至琼脂全部溶化，再加入
葡萄糖和其它营养物质使其溶化，最后加水至 1000
毫升即成。
④ 调 pH 一般用 10％盐酸 (HCl)或 10％氢氧化
钠 (NaOH)调 pH，用 pH试纸进行测试。调时要小心，
要几滴几滴地加碱或加酸，调至所需要的 pH值。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑤ 分装 培养基配制好后，趁热倒人大的玻璃漏
斗中，打开弹簧夹，按需要分装于试管或三角瓶内。
装入试管的培养基量，以试管总长的 1/4～ 1/5为好
(装入的培养基切勿沾附管口壁 )。装入三角瓶培养
基量，一般不要超过瓶容量的 1／ 3．每装完一支试
管或一个三角瓶．随即关闭弹簧夹，并把试管放进
小铁丝筐内。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑥ 塞棉塞 培养基分装到试管或三角瓶后，管口
或瓶口要塞上棉塞。棉塞用普通棉花,不要用脱脂棉，
因脱脂棉易吸水变潮，导致杂菌生长。 棉塞的作用是
过滤空气，避免杂菌污染培养基。
棉塞的制作是取适量棉花作成均匀片状，将一边
向里折叠．再将对面的另一边向里折叠，然后从一毛
边开始将棉花卷紧。使之成为两边齐的一柱形，末端
的棉絮自然地平贴在棉柱上。棉塞长度一般为 4,5CM
左右；最后将棉塞塞入试管内，塞入管内长度约为棉
塞总长度的 2／ 3。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑥ 塞棉塞
棉
塞
制
作
过
程
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑥ 塞棉塞
棉塞塞入试管后要
紧贴管壁，不留缝隙，
大小、松紧均要合适，
既便于通气，又能防止
杂菌侵入。检查松紧的
方法是，将棉塞提起，
试管跟着被提起而不滑
下，表明棉塞不 松，
将棉塞拔出，可听到有
轻微的声音但不明显，
这表明棉塞不紧。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑥ 塞棉塞
棉塞塞好后，每 7～
1O支包扎成捆，并在试
管上部包上一层牛皮纸，
用线绳扎紧。包纸的作
用是避免灭菌时冷凝水
淋湿棉塞，并能防止接
种前培养基水分散失或
杂菌污染。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
⑦ 灭菌及摆斜面
将包扎好的试管竖直放人手
提高压灭菌锅内,1,05千
克／厘米 2灭菌 30分钟，冷
却到 70℃ 左右，从锅内取出，
趁热摆成斜面。一般斜面长
度达试管长度的 1/2为宜，
待冷却后即成斜面培养基。
灭菌的三角瓶中的培养基，
倒入无菌培养皿中 (每皿倒
入 15～ 20毫升 )，凝固后即
成平板培养基。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(2)母种（一级种）培养基的配制方法
灭菌后的培养基要进行无菌检查，取数支斜面培
养基放人 25℃ 左右的恒温箱中培养 2— 3天，若无杂菌
生长便可使用。若暂时用不完，用纸包好放人 4℃ 冰
箱保存。
⑧ 无菌检查
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
工艺流程
设计培养
基质配方
按比例称
量各物质
天然材料如棉
籽壳、木屑等
主料的预处理
混合
调节含水 量装瓶装袋灭菌冷却使用
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
① 常用培养料配方
阔叶树木屑 78％,木
屑
麸
皮
培
养
料
米糠或麸皮 20％,
石膏 1 ％,
糖 1％ 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
① 常用培养料配方
棉籽壳 68％,棉
籽
壳
木
屑
培
养
料
木屑 10％,
麸皮或米糠 20％,
碳酸钙 1,5％,
石灰 0.5％。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
① 常用培养料配方
玉米粒 90％,
玉
米
培
养
料
麦麸 5％,
玉米粉 2％,
葡萄糖 1 ％,
过磷酸钙 1％，
石膏 1％ 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
原种、栽培种培养基配制时应注意的问题
① 除针叶树松、杉、柏和具芳香、异味和有毒的樟、楠木
荷等树种外，一般阔叶树的木屑均可利用。木屑需晒干保存。
陈木屑比新鲜木屑好。松、杉木屑经陈放或加石灰堆制处理后
可与杂木屑搭配用，用量占总量的 1／ 3为宜。麻栎树等鞣酸高
的木屑对香菇生长有利，但对其他食用菌菌丝生长有一定的抑
制作用。使用时应加以选择。
② 麸皮、米糠要求新鲜，凡久存、变质、结块的麸糠，不
再采用；麸糠的用量一般不低于 15％，不高于 30％；天冷可多
些，天热宜少些；平菇、凤尾菇可少加些，金针菇应稍多些。
香菇培养基中加米糠更好，而木耳以麸皮为好。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
原种、栽培种培养基配制时应注意的问题
③ 碳酸钙应采用轻质碳酸钙，它与石膏可通用，熟石膏与
生石膏有效成分相同。
④ 白糖、饴糖、砂糖、甘薯糖等均可用，红糖更好。糖精
不是糖，不可代替。
⑤ 水应清洁无油污, 每天首次使用的自来水, 应先排放掉前
面含铁锈高的一段水, 而后再用于拌料 。
⑥ 配方中各种成分必须正确称取，不可随意增减。
⑦ 加水拌制，就意味着杂菌开始生长、繁殖。因此，拌 料、
分装至灭菌时间越短越好，特别是夏季，时间拖长，易引起培
养基酸败、变质。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
② 配制方法
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
以棉籽壳、木屑为主的干培养料，应将其加水 120％ -130
％，充分拌和：使其充分吸进水，使混合培养料含水量在 55％
-65％。其含水量可用手握法简单测定，抓一把培养料子手掌
心，用力握捏，手指缝间有水迹渗出，但不成滴。
以小麦、玉米；稻谷为主料的，则应先将主料加水浸泡
4--6h，然后加热煮沸 15— 20分钟，麦粒、玉米不能煮得过软，
以粒心尚有干白部分为度，然后捞出备用。对于辅料，则加
少量水溶解后，与培养料混合即成。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
③ 装瓶灭菌
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
为便于观察和接种,
原种容器一般采用透明
的专用菌种瓶；瓶口内
径为 32— 25MM,瓶径高
度为 40MM, 容 量 为
750ML。 也可采用 500ML
罐头瓶；但因其瓶径大,
易造成污染和干燥, 且
瓶颈过短, 棉塞塞不牢
固, 易脱落 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
③ 装瓶灭菌
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
栽培种容器采用瓶子外, 也可用聚丙烯塑料袋,
其规格长 15CM,宽 28CM,厚度 0.06CM,过薄易破裂,
感染杂菌 。 袋口套上塑料环, 其高为 2-3CM,直径 4CM、
采用塑料袋制种可节省掏瓶人工, 减少麻烦,
除谷粒 (玉米、麦粒等 )料直接装至瓶肩处外，木屑、粪
草等料都要松紧适度，过紧则接种后透气不良，菌丝生长缓慢；
过松则菌丝生长虽快，但稀疏无力。装料时要压实，装料量以
袋子的 2/3为宜，使上部留有一定空间，有利于菌丝生长。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 5、菌种培养基的制备
③ 装瓶灭菌
(3)二级种、三级种 培养基的配制方法
装好料后，在料面中央从表面用水棒往下打一
洞直至瓶 (袋 )底或接近瓶底。擦拭瓶 (袋 )，用棉塞
塞好，然后用防水纸或牛皮纸将瓶口棉花塞包好，
及时送入高压锅，在 147KPa压力下灭菌 1.5-2小时。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(1)消毒与灭菌的概念
物品上存在着的微生物，为培养出食用菌的纯菌体，必须
对食用菌栽培的各环节进行杀菌，这是生产中的一项基本技术。
消毒 具有杀死致病微生物的作用或方法，称为消毒。
就食用菌菌种生产而言，消毒是指用物理或化学方法杀灭或
消除对食用菌生长发育有害的微生物，通常只能消灭物体表
面或环境中的一部分微生物，有能达到消灭所有微生物。
灭菌 指彻底杀菌，用物理或化学等方法，杀死物体上的
一切微生物，以及它们的芽孢和孢子，使物体成为无菌状态。
防腐 指防止或抑制微生物的生长繁殖, 是一种抑菌作
用, 不能杀死微生物群体
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法
① 热力灭菌
干热灭菌 烘烤灭菌法
焚烧灭菌法
湿热灭菌
高压蒸汽灭菌法
常压蒸汽灭菌法
间歇灭菌法
煮沸消毒法
巴氏消毒法② 辐射灭菌
紫外线辐射
电离辐射
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法
① 热力灭菌
热力灭菌 是指利用高温杀死微生物
的方法。 高温可引起微生物蛋白质和核酸
不可逆变性，细胞原生质凝固，酶被破坏，
代谢停止，最后引起微生物细胞死亡，这
种灭菌方法简便易行、经济有效，是食用
菌生产中最普遍采用的消毒灭菌方法。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
采用灼烧或干热空气进行的灭菌, 称为干热灭菌 。
焚烧灭菌法
通过火焰高温进行的灭菌。适
用于耐热的接种工具如接种环、接
种针、接种铲、接种匙等，以及试
管口、玻璃瓶口的灭菌等，通过酒
精灯几次火焰灼烧，一切微生物和
芽孢可全部杀死。
干热灭菌
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
采用灼烧或干热空气进行的灭菌, 称为干热灭菌 。
焚烧灭菌法
干热灭菌
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
采用灼烧或干热空气进行的灭菌, 称为干热灭菌 。
干热灭菌
烘烤灭菌法
通过加热的高温空气进行灭菌的方法。
电热于燥箱是干热灭菌的常用仪器，它是
通过电热丝进行加温，既可灭菌，也可用
于器皿的烘干。适用于固体材料的灭菌如
培养皿、三角瓶、试管等，通常采用 160℃
灭菌 2h，待温度下降到 45℃ 以下，方可取
出灭菌物品，否则玻璃物品会固温度骤然
下降而破裂。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
通过蒸汽杀死微生物的方法, 称为 湿热灭菌 。
在同一温度下, 湿热 灭菌比干热灭菌效果好,
因为湿热灭菌的穿透力比干热灭菌大, 杀伤力
强 。 蛋白质, 原生质胶体在湿热条件下容易变
性凝固, 酶系统容易被破坏, 而且蒸汽进入细
胞内凝结成水, 放出潜在热量面提高了环境温
度, 使杀菌力增强 。
湿热灭菌
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
高压蒸汽
灭菌法
利用高温高压蒸汽锅进行灭菌的方法。
可以杀死一切微生物，包括细胞芽孢、真菌
休眠体或孢子等耐高温个体。
在密闭系统中，蒸汽压力增高，温度也
增高，从而提高了杀菌效力。它是一种有效
的使用普遍的灭菌方法。
一般母种培养基及液体培养基灭菌采用 103,4kPa的压力，
温度 121.2℃,灭菌时间 30分钟。如原种及栽培种等采用
15Qkpa的压力，温度为 128℃,灭菌时间为 1-2小时。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌高压蒸汽
灭菌法
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
高压蒸汽
灭菌法
在使用高压锅时，需注意要将锅内
的冷空气全部排尽。如果锅内留有冷空
气，当加热时，冷空气变热很快膨胀，
使压力上升，造成灭菌锅内压力与温度
不一致，产生假性蒸汽压，即假上磅现
象。锅内实际温度低于蒸汽压对应的相
应温度，致使灭菌不彻底而达不到灭菌
目的。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
高压蒸汽
灭菌法
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌高压蒸汽
灭菌法
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌高压蒸汽
灭菌法
当开始加热灭菌
时，先关闭排气阀，
当压力升到 5kPa左右
时，打开排气阀，集
中排出空气，让压力
降到零，然后关闭排
气阀进行升压灭菌。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
高压蒸汽
灭菌法
在高压灭菌过程中，其
压力、温度、时间对营养成
分有影响，可采用提高温度、
压力和缩短灭菌时间的办法
减少对营养成分的破坏。虽
然温度升高了，破坏增加，
但受热时间缩短，则总的破
坏量减少。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
常压蒸汽
灭菌法
采用自然压力的蒸汽进行灭
菌的方法。有蒸笼灭菌、流通蒸
汽灭菌灶等。常见的是用钢筋水
泥砌成大型的流通蒸汽灭菌灶，
一般流通蒸汽温度为 1OO℃,杀
菌时间为 6-8H。其灭菌容量大，
可充分杀死微生物，有的一次可
灭菌几千瓶菌种。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
常压蒸汽
灭菌法
灭菌灶结
构简单，成本
低廉，可自行
建造，使用普
遍，但是灭菌
时间长，储耗
大且常有灭菌
不彻底的现象。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
间歇灭
菌法
指间歇一定时间，连续消毒几次而
灭菌的方法，适合于不耐高温的培养基
的灭菌，此法是在常压下加热到 100℃,
保持 20-30分钟，以杀死其中的营养体细
胞，然后将培养基在常温下或保温箱中
(28— 37℃) 培养，使芽孢发芽长成营养
体，再用同法杀死新长成的营养体细胞，
如此反复三次，即可杀死培养基中的全
部芽孢和营养体，达到灭菌的目的。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
煮沸消
毒法
将物品放入水中煮沸一定时间
进行消毒的方法。可杀死微生物的
营养体，但对细菌的芽孢、真菌休
眠体效果差。若在水中加入 2％ — 5
％的石炭酸或 1％的碳酸氢钠，可
提高消毒效果。此法适于制种及栽
培过程中所需的一些物品、器具、
器材的消毒。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ① 热力灭菌
湿热灭菌
巴氏消
毒法
将物品在 60-70度的温度下经一
定时间消毒，杀死有害微生物的方
法。适合于不耐高温的培养基以及
一些食品如牛奶、酒类、饮料的消
毒，既可杀死有害微生物，又不破
坏营养成分。如在蘑菇培养的发酵
期间，通常采用 60--62度的巴氏消
毒法，消毒 4— 7h，可杀死培养料中
的病虫杂菌。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ② 辐射灭菌
利用辐射所产生的能量进行杀菌
的方法，称为 辐射灭菌 。它可分为电
离辐射和非电离辐射。 a射线,b射线、
r射线,X射线等属电离辐射；紫外线
等为非电离辐射。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ② 辐射灭菌
紫外线辐射
在 200— 300nm范围内紫外
线的杀菌作用最好。紫外线的
杀菌作用是因为它可以被蛋白
质 (约 280nm)和核酸 (约 260nm)
吸收，造成变性失活,引起致死。
紫外线的另一杀菌机制是因辐
射空气产生臭氧，臭氧遇水又
化合成双氧水，这两种物质都
能杀菌。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ② 辐射灭菌
紫外线辐射
无菌室、接种箱、超净工作
台内安装的紫外线灯管，一般照
射 20-30min，可杀死空气中的微
生物。但紫外线穿透力很弱，一
层普通玻璃或水均能滤去大量的
紫外线，它也不能穿过衣物、纸
张等大多数物体。因此，紫外线
只适用于空气和物体表面的消毒。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ② 辐射灭菌
紫外线辐射
我国蘑菇生产中使用的覆土，在日
光下曝晒，就是利用日光及其中的紫外
线进行杀菌。但必须注意，经紫外线照
射致死或损伤的微生物，通过自然光照
又能复活，称为光复活作用。因此,经
紫外线杀菌后，不要立即开启日光灯。
如白天灭菌，无菌室、接种室需用黑窗
帘或黑布套遮光半小时，以防止光复活
作用，提高灭菌效果。紫外线对人体有
害，特别对眼睛有损伤，因此，不能在
开启的紫外灯下工作 。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ② 辐射灭菌
将被照射物质的原子核周围的电子击出，使其
变为阳离子，击出的电子可附着在其它原子上，使
其变成阴离子，也可以再冲击其它原子，引起继发
电离。在液体中，射线使水电离成 H+和 OH一,可直
接作用于微生物细胞本身而致死。
电离辐射
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
重金属
盐类
微生物浸在 O,1％ -
0,5％硝酸银、升汞溶液
中，几分钟就会死亡。食
用菌组织分离及菇木分离
菌种时，常用 0,1％升汞
溶液进行表面消毒。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
氧化剂
常用于消毒的氧化剂
有,1％高锰酸钾,1％过
氧化氢,0,2％ --0,5％
过氧乙酸,0,5％ — 1％漂
白粉等。其杀菌机制是通
过强烈的氧化作用，破坏
微生物的原生质或酶蛋白
质结构。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
还原剂
甲醛是常用的杀菌还原剂。
市售的福尔马林含 37％一 40％
的甲醛溶液。 5％的甲醛溶液
常用于防腐。培养室、无菌室
消毒常以 lOmL／ m3福尔马林原
液加 5g高锰酸钾氧化熏蒸。甲
醛能与微生物细胞蛋白质的氨
基结合，引起蛋白质变性，使
原生质失去正常活动能力。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
还原剂
喷雾消毒时甲醛溶液体积
分数为 5％。甲醛还有防腐作
用，以 1,9稀释液可浸制食用
菌标本。但甲醛有毒，对人的
眼睛、呼吸道、皮肤等有强烈
刺激，应注意防护。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
表面活
性剂
表面活性剂主要破坏菌体细
胞膜结构，造成胞内物质泄漏；
蛋白变性，菌体死亡。 0,25％
肥皂溶液是一种阴离于表面活性
剂，它对链球菌作用比 0,1％升
汞或 0,7％来苏尔还要强。常用
的 0,25％新洁尔灭液用于皮肤
消毒，它是人工合成的季胺盐阳
离子表面活性剂。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
酚 类
常用的苯酚又称石炭酸，
其 0,5％可用于皮肤消毒，
2％ — 5%可用于器皿消毒,5
％可用于空气喷雾消毒。来
苏尔是甲酚与肥皂的混合液，
常用其 3％ — 5%消毒皮肤、
用具；接种箱表面以及器皿。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法 ③ 药剂消毒
利用化学药剂进行杀菌或抑菌的方法称为药剂消毒
醇 类
醇类可使膜受伤，同时能
使蛋白质变性：通常使用乙醇。
无水乙醇与菌体接触后使细胞
迅速脱水、表面蛋白凝固，在
菌体表面形成保护膜，阻止乙
醇分子进一步渗入，影响杀菌
力。在实际工作中常使用 75％
的乙醇，杀菌效果最好。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法
④ 过滤除菌
对含有加热不稳定物质的培养基，如含有维生素、
酶、抗菌素及某些化学药品的培养液进行除菌时，通
常采用过滤除菌。膜滤器采用微孔滤膜作材料，当含
有微生物的液体通过微孔滤膜时，大于滤膜孔径的微
生物不能穿过滤膜而被阻拦在膜上，与通过的滤液分
离开来；微孔滤膜具有孔径小、价格低、可高压灭菌、
不易阻塞、滤速快及可处理大容量的液体等优点。
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法
④ 过滤
除菌
第四章 食用菌菌种的生产
一,菌种的制作 6,消毒与灭菌
(2)常用消毒和灭菌方法
⑤ 渗透压消毒
利用高渗透压杀菌或抑菌的方法，称
为渗透压消毒。在高渗溶液中，水从细
胞中流出使细胞脱水，也因脱水发生质
壁分离，微生物不能进行正常新陈代谢
而死亡。盐水菇就是利用高渗透压的食
盐溶液来杀菌。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离
将子实体的局部组织或孢子移接在斜面试管培养
基上，获得纯培养菌丝的操作称为 菌种分离,
菌种分离主要指一级种 (母种 )的分离。
有些与高等植物共生的菌根菌，如红菇、松菇以
及有些要在动物（如白蚁）存在下才产生子实体的菌
类，因营养条件复杂，在目前实验条件下，较难在简
单的培养基上获得纯菌种。
菌
种
分
离
孢子分离法
组织分离法
菇木分离法
孢子弹射分离法
整菇插种法
钩悬法
贴附法菌褶上涂抹法
孢子印分离法
单孢子分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离
平板稀释法
连续稀释法
子实体组织分离法
菌核组织分离法
菌索分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
在无菌操作条件下使孢子在适宜的培养基上萌发，
长成菌丝体而获得纯菌种的方法称为 孢子分离法 。
特 点
菌丝菌龄短，因是有性
繁殖产物，其菌丝生命力强。
侵染病毒的菌类可用孢
子分离法脱毒。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
种菇的选择
在生产中必
须选择优良品系
中的优良个体作
分离材料。
选取八、九
分成熟的，健壮
无杂的第一或第
二茬的子实体。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
孢子弹射分离 法
它是利用孢子能自动
弹射出子实体层的特
性来收集孢子。
① 整菇插种法
孢子收集器
来收集孢子
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
① 整菇插种法
将钟罩上的孔加上棉塞或包上
6-8层纱布，放在垫有 4— 6层纱布
(浸过 0,1％升汞液 )的塘瓷盘上，
纱布上放一培养器，内放一个不锈
钢支架。
把收集器包装好，灭菌备用。
将菌幕未破裂的成熟子实体洗
干净，用 0,1％升汞溶液或 0,25
％的新沽尔灭浸泡 2-3min，以杀死
表面的杂菌。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
① 整菇插种法
对于菌幕破裂、子
实层已外露的子实体或
无菌幕包裹的子实体，
可用棉花蘸 75％酒精涂
擦子实体表面消毒。
按无菌操作要求移
人孢子收集器，插在支
架上，在适宜的温度中
培养。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
① 整菇插种法
2-3天后孢子
散落在培养皿中，
加入无菌水，用针
筒吸取孢子液，接
种在斜面培养基中
央，臵于 22-26℃
恒温箱中培养即可。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
② 钩 悬 法
在生产上，采集木耳、银
耳孢子常用此法，伞菌也可采
用此法。
先将新鲜成熟的耳片用无
菌水冲洗，然后用无菌纱布将
水吸干，取一小片挂在灭菌的
钩子上 (伞菌则消毒后挂上，
钩子的另一端挂在三角瓶口。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
瓶内装有培养基，在 25℃ 下，培养 24H。孢子落到培养基
上后，取出耳片，塞上棉塞继续培养，然后再转入试管中培养。
②
钩
悬
法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(1)孢子弹射分离法
取一小块成熟的菌褶或小块菌盖，用溶化的琼脂或胶水、浆糊 (需先灭
菌 )贴附在试管斜面的上方或培养皿皿盖上，经 6— 12h，待孢子落下后，立
即将试管或培养皿中的培养基移到另一消毒过的空试管或培养皿中进行培养。
③
贴
附
法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(2)菌褶上涂抹法
将伞菌子实体用 75％酒精表面消毒，按无菌操作
用接种环直接插入两片菌褶之间，轻轻地抹过褶片表
面，然后用划线法涂抹于试管培养基上。
(3)孢子印分离法
取成热子实体经表面消毒后，切去菌柄，将菌
褶向下放臵于灭过菌的有色纸上，在 20-24℃ 静臵一
天，大量孢子落下形成孢子印，然后移少量孢子在
试管培养基上培养。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(4)单孢子分离法
进行单孢子分离后，在人工控制的条件下，使两个优良品
系的单孢于进行杂交，从而培育出新品种。
挑取少许孢子在无菌水中形成孢子悬浮液，取几
滴涂于培养基上，用无菌玻璃三角架推平。经 48-72h
后，镜检孢子萌发情况。在单个孢子旁做好标记，然
后将其转接到斜面培养基上，待菌落长到 lcm左右时进
行镜检，观察有无锁状联合；初步确定是否是单核菌
丝。
① 平 板 稀 释 法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 1、孢子分离法
(4)单孢子分离法
挑取一定量孢
子，经连续稀释后，
直到每滴稀释液中
只有一个孢子，然
后滴人试管中保温
培养。当发现单个
菌落时，转到新试
管中继续培养，并
通过镜检以确定是
否为单孢菌落。
② 连续稀释法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 2,组织分离法
组织分离 法 是利用子实体内部菌肉组织来获得
菌种的一种最简便的方法，是生产上常用的一种分离
菌种的方法。
组织分离是一种无性繁殖过程，所得到的菌种是
营养后代，后代不易变异,菌株可保持原品种的优良
品质 。但如采用感染病毒的子实体进行组织分离时，
常得到带病毒的菌丝体。
（ 1）子实体组织分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 2,组织分离法
选择优良的种菇作为
分离材料，用无菌水冲洗
后，用 75%的酒精溶液表面
消毒。取消毒过的刀片从
菌柄或菌盖中部纵切、撕
开，挑取菌盖与菌柄交界
处的一小块组织 (火柴头大
小 )，接种到 PDA培养基上
3-5天后，接种块上产生白
色绒毛状菌丝。
（ 1）子实体组织分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 2,组织分离法
（ 2）菌核组织分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 2,组织分离法
茯苓、猪苓等的子实体不易采集，而它们的菌核
却易获得，利用菌核分离，能得到该菌的纯菌种。
将菌核表面洗净，用 75％酒精溶液消毒，切开菌
核，取中间一小块组织接种在 PDA斜面培养基上，塞
上棉塞，在 25℃ 下培养。
在挑取组织块时，应取大一点，因 菌核是贮藏器官,其大
部分是由贮藏物质一多糖物质构成，仅有少量菌丝。若挑得
过小，只挑到贮藏物质而没有挑到菌丝，分离就不成功。
（ 3） 菌索分离法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 2,组织分离法
蜜环菌、假蜜环菌等子实体难得，也无菌核，可
用菌索来分离获得其菌种。
操作方
法为：
用沾有 75％酒精溶液的棉花将菌索表
面黑色皮层轻轻揩擦 2— 3次，在无菌操作
条件下去掉黑色外皮层 (菌鞘 )，抽出其中
白色菌髓部分，用无菌剪刀将菌髓剪下一
小段，移植在培养基上，保温培养，即可
获得菌种。
菌索比较细小，在分离时极易污染，因此在培养
基中应加入适量的抑菌的青霉素或链霉素。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
利用菇木中菌丝的分
离而获得纯菌种的方法。
这种方法污染较大
菇木分离法
能用孢
子分离或
组织分离
的菌类，
一般不用
这种方法。
在自然界，银耳菌丝与香灰
菌丝在一起才能产生银耳子实体，
而用长有菌丝的段木来分离，能
同时得到银耳菌丝及香灰菌丝，
因此，生产上用的银耳菌种常采
取菇木分离法，香菇、木耳等菌
类也可采用菇木分离 法
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
（ l） 菇木的
选择与处理
菇木应在
子实体发生季
节采集，由于
菇木含有很多
水分，细菌繁
殖较快，分离
易受污染，需
将分离材料风
干，则分离成
功率较高。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
（ l） 菇木的
选择与处理
分离时仅
需取 1cm厚的
一片或一块菇
木，一般选取
菇木的中间部
位，不取两端，
因两端裸露在
外，污染率高。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
（ 2） 菇木表
面消毒
将菇木切成
2-2,5m3的小块，
用 0,1％的升汞
水浸泡 0.25—
lmin，然后用无
菌水冲洗，无菌
纱布吸干。或用
75％的酒精溶液
揩擦表面进行消
毒。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
（ 3） 接种块
的选择
取米粒大小
一块接入 PDA试
管培养基上，接
种块小，污染的
机会小。接种后
把试管放到 25℃
下培养,长出白
色菌丝后，挑其
尖端部位转接到
新培养基上，即
得到纯化的菌种。
第四章 食用菌菌种的生产
二,菌种的分离 3,菇木分离法
菇
木
分
离
法
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养
将试管中
的菌种移接
至另外的试
管培养基上
称为转管 。
1、一级种的扩大培养
步 骤
① 将待接
的斜面试管以
及一级种接种
针等放人已消
毒的接种箱内。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养
步 骤
② 用 75％
的酒精溶液棉
球擦双手消毒。
③ 左手持
住空白斜面试
管和一级种，
右手夹持棉塞，
火焰封口。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养
步 骤
④ 将
接种针顶
端烧红，
并将整支
接种棒在
火焰上过
火。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养
步 骤
⑤ 挑
取黄豆大
小的菌丝
琼脂块，
迅速移接
到空白斜
面中央，
将棉塞塞
回试管。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养
步 骤
⑥ 将
已接种好
的试管放
人恒温培
养箱，在
24— 28℃
下培养，
长满试管
即可使用。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 1、一级种的扩大培养
改
进
扩
接
法
（
左
手
拿
一
支
试
管
）
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 2．二 级种的扩大培养
二级种培养基灭
菌后应及时送人接种
室 (箱 )或超净工作台
内；待冷却至 30℃ 以
下后，按无菌接种操
作要求接种，每瓶接
入一块稍带培养基的
母种 (如蚕豆大小 )，
接人瓶中的小洞口，
并塞好棉塞，操作步
骤与转管相似 。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 2．二 级种的扩大培养
每支斜面母种
一般可接原种 6-8
瓶。灭菌的原种培
养基不宜久放，最
迟在第二天必须接
种完毕。接种后的
菌种瓶应移人温度
适宜的培养室内培
养，待菌丝长满即
成原种。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 2．二 级种的扩大培养
菌种瓶口先
向上直立放于培
养架，待菌丝已
吃料后可重叠卧
放。培养过程中
应经常检查，如
有污染应及时去
除污染瓶。
第四章 食用菌菌种的生产
三, 菌种的接种培养 3．三 级种的扩大培养
二级种进一步扩大培
养即成三级种
三级种培养料常用耐高
温的聚丙烯塑料袋装；也可
用瓶装。灭菌的接种培养料
应移人接种室接种。只需几
粒玉米 (或麦粒 )原种，接人
一袋栽培种培养料的洞中或
料面上。 一瓶原种可接 30-50
瓶 (袋 )栽培种,已接种的袋
(瓶 )放在适宜温度下培养至
菌丝长满瓶即可用于生产。
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定 1、母种质量鉴定
母种分离
后菌种是否优
良，早期判断
困难，要经过
全面的鉴定，
符合标准的母
种才能扩大繁
殖，制备原种
和栽培种用于
生产。其鉴定
的主要项目：
① 母种菌丝的形态
② 菌丝耐干耐湿试验
③ 菌丝生长速度
④ 菌丝的高温锻炼
⑤ 菌丝吃料能力
⑥ 出菇试验
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定 1、母种质量鉴定
① 母种菌丝的形态
挑取少许菌丝在载片上, 盖片后在显微镜下观察菌丝形态是
否属于所要培养的菌类 。 有锁状联合的菌类还应看到锁状联合 。
② 菌丝耐干耐湿试验
将母种移接到不同含水量 (如 50％,60％,70％ )的原种培
养料中，观察菌丝吃料及生长情况。如蘑菇含水量以 60％为宜，
若它在较低及较高含水量的培养料中仍能正常生长，则说明其
对干、湿度的适应性较强，可以用做扩大繁殖。
将母种菌丝接人干、湿度适宜的斜面培养基上，在适宜温
度下培养。若菌丝生长快，且整齐、浓密、健壮的则是优良母
种；若菌丝生长慢或特别快，且不整齐、凌乱的则不是好菌种。
③ 菌丝生长速度
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定 1、母种质量鉴定
④ 菌丝的高温锻炼
将母种在适宜温度 20-25℃ 下培养 1周后，臵于 35℃ 下进行
24h高温锻炼，再回到适宜的温度下培养。如恢复萌发快，菌丝
不发黄、不倒伏，仍然旺盛生长的，说明该母种耐高温性强，
可用来扩大培养。
⑤ 菌丝吃料能力
将母种接人培养料上，若吃料快，则可用于扩大繁殖。
⑥ 出菇试验
将菌种接入木屑或其它培养料上，培养至菌丝长满，然后
降温，提供散射光等出菇条件让其出菇，出菇又快又多又大的
是优良菌种，可扩大培育。
通常分离的母种应控制转管次数, 次数过多会引起菌种老化或变异, 一
般应控制在 2-3次为宜, 最多不超过 4次 。 平菇等生活力强的可以多转 1-2次 。
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
2,原种和栽培种的质量鉴定
原
种
和
栽
培
种
的
质
量
鉴
定
（ 1）菌种传代和菌龄应在规定的范围内
（ 2）原种及栽培种的外观要求
（ 3）生理生化指标
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
2,原种和栽培种的质量鉴定
原
种
和
栽
培
种
的
质
量
鉴
定
（ 1） 菌种
传代和菌
龄应在规
定范围内
（ 2） 原种
及栽培种
外观要求
（ 3）生理
生化指标
① 用转管在 4— 5次以内的
母种生产的原种和栽培种。
② 一般菌类原种和栽培种
在常温下的菌龄 (指菌丝长
满瓶后存放的时间 )在 3个月
内有效 。 草菇等繁殖快的菌
类 1个月内有效 。 超过上述
期限的菌种, 即使外观健壮,
生产上也不使用 。
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
2,原种和栽培种的质量鉴定
原
种
和
栽
培
种
的
质
量
鉴
定
（ 1） 菌种
传代和菌
龄应在规
定范围内
（ 2） 原种
及栽培种
外观要求
（ 3）生理
生化指标
① 菌丝已长满培养基。
② 菌丝生长健壮 。
③ 菌丝色泽洁白或符合该菌类菌丝特
有的色泽 。 银耳菌种除有白色的银耳
菌丝外, 还应有烟灰色的香灰菌丝 。
④ 菌种内无杂菌污染，无其它杂色。
⑤ 若种瓶底部出现黄色分泌液，则表
明菌种老化。
⑥ 若瓶内菌丝柱和瓶壁脱离，说明菌
种老化或培养基偏于。
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
2,原种和栽培种的质量鉴定
原
种
和
栽
培
种
的
质
量
鉴
定
（ 1） 菌种
传代和菌
龄应在规
定范围内
（ 2） 原种
及栽培种
外观要求
（ 3）生理
生化指标
王振福 （ 1997)用
液体菌种栽培香菇的
试验表明, 香菇液体
菌种的脱氢酶含量与
固体培养料栽培的子
实体产量成正相关,
因此, 菌种脱氢酶含
量可作为鉴定菌种质
量优劣的生理生化指
标 。
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
3,菌种的选购方法
很多栽培者
常直接购买
二级种或三
级种用于扩
接三级种或
生产栽培之
用 。 在选购
这些菌 种时
应掌握一些
基本方法：
提 用手抓住棉塞轻
提起来，看棉塞松紧
是否适度。过松过紧
均达不到过滤空气的
目的，从而 无法保证
能得到优质的菌种。
手提还可以通过手测
重量判断失水情况和
菌龄。
闻
看
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
3,菌种的选购方法
很多栽培者
常直接购买
二级种或三
级种用于扩
接三级种或
生产栽培之
用 。 在选购
这些菌 种时
应掌握一些
基本方法：
提
闻
从一批菌种中随机
抽取一些菌种，把棉塞
拔起，将瓶 (袋 )口或管
口靠近鼻子嗅菌种的气
味，若闻到一种不愉快
的霉、臭、酸等异味，
则说明菌种有杂菌污染，
培养的不是纯菌丝或已
有变质腐败的菌种。 正
常菌种具有特殊的香味 。看
第四章 食用菌菌种的生产
四,食用菌菌种的质量鉴定
3,菌种的选购方法
很多栽培者
常直接购买
二级种或三
级种用于扩
接三级种或
生产栽培之
用 。 在选购
这些菌 种时
应掌握一些
基本方法：
提
闻
① 看菌种外形是否破管、破瓶或
破袋。
看
③ 看菌种是否, 纯、正、壮、阔,,
即菌种纯度应高，不能感染杂菌；
② 菌丝色泽要纯正，通常为纯白，
原种栽培种菌丝应连结成块，无
老化、变色、吐黄水、长子实体
原基等现象；
④ 菌丝要粗壮，长势强，分枝多而
密 (可借助放大镜或显微镜观察 )；
⑤ 培养基质要湿润, 含水适宜,
不干缩脱壁 。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
在食用菌生产和科研中，选育出一个优良的菌株
是很不容易的，而要保持其菌种的遗传稳定性更是困
难。菌种的退化、老化以及保藏方法是影响食用菌生
产的重要因素。
1、菌种退化
指菌种突然或逐渐丧失原有的
生命力和生产性能的现象。
菌种
退化
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
1、菌种退化
菌种
退化
（ 1）菌丝生长速度减缓，在培养基上
出现白色、浓密的扇形菌落。
（ 2）对不良的外界条件 (如温度、酸
碱度、二氧化碳、杂菌等 )的抵抗力变弱，
（ 3）子实体形成期提前或推迟，出
菇潮次不分明，菌盖、菌柄呈畸形，产
量明显下降，品质变劣等。
注意经常选种育种，减少转接次数，改善保藏条
件，可以有效地防止菌种的退化。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
2、菌种复壮
菌种复壮 是使生活力和丰产性能降低的菌种，恢复或
提高到原有健壮程度。在退化的菌种中仍有一些保持原有菌种
特性的细胞，可采取一些手段，使这些细胞生长繁殖，以更新
退化的菌株。
① 对已退化的菌株进行单细胞分离纯化；
② 以高剂量的紫外线和低剂量的 (NTG)联合对退
化菌株进行处理；
③ 采取改善栽培条件 (如更换培养基 )等措施；恢
复和提高菌种的种性。
④ 无性繁殖和有性繁殖交替使用也是菌种复壮
的一种手段。
菌
种
复
壮
方
法
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
菌种保藏 是根据菌种的遗传性能和生理、生化
特性，人为地创造环境条件，使优良菌株稳定地保存。
保持优良菌株原有特性，使其不死亡，不受污染，
能长期在生产上应用，这是菌种保藏的主要任务。
菌种保藏 的基本原理是采用 低温、缺氧及干
燥 等技术，使菌体生长繁殖受到抑制，延缓代谢速度，
使生命活动处于休眠状态；以减少变异的发生，从而
达到既保持菌种的纯正，又延长保藏时间，防止死亡
和衰退的目的。
第四章 食用菌菌种的生产
五,食用菌菌种的退化、复壮和保藏
3、菌种保藏
（ 1）斜面冰箱保藏法
（ 2）矿油保藏法
（ 3）滤纸 (孢子 )保藏法
（ 4）菌丝球保藏法
（ 5）自然基质保藏法
（ 6）载体保藏法
（ 7）液氮超低温保藏法
菌
种
保
藏
常
用
方
法
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3、菌种保藏
①
斜
面
冰
箱
保
藏
法
将需要保藏的长满菌丝的斜面菌种放在 4℃ 的冰箱
中保藏。用于保藏的斜面．菌种棉塞要用硫酸纸包扎，
防止霉菌污染。
斜面试管冰箱保藏菌种一般 2-3个月转管一次。
此法适应于大多数食用菌的保藏，但草菇菌种不
耐低温，不能在冰箱中保藏，应在 10-15℃ 下保藏。
保藏时间较短，一般为 3-6个月，转管次数增多，
变异的可能性也就增大，不适宜长期保藏菌种。
用斜面冰箱保藏法保藏的菌种在使用时应提前 12-
24h从冰箱中取出，经适温培养、恢复活力后才能用于
转管接种。
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3、菌种保藏
②
矿
油
保
藏
法
即采用矿油覆盖斜面试管保藏菌种的方法。
其方法是,先将矿油于 110kPa压力下
灭菌 30min，置 40℃ 温箱中数日，以排除水
分，取适量矿油注入斜面菌种试管，使其
淹没并高出斜面顶端 lcm，再用无菌橡皮塞
封口，在室温条件下垂直保藏 (不宜在冰箱
中保存 )，有效期可达 1年以上。
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3、菌种保藏
②
矿
油
保
藏
法
液体石蜡保存的菌
种在使用肘，不必倒去
石蜡油，只要用接种铲
从斜面 上铲取一小块菌
丝块即可，原管仍可重
新封蜡，继续保存。初
次从矿油中移接的菌种，
常沾有石蜡油，生活力
弱，需再转接一次方能
恢复活力。
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3、菌种保藏
③
滤
纸(
孢
子)
保
藏
法
以无菌滤纸作为
食用菌孢子吸附载体
长期保藏菌种的方法。
将不同颜色的无
菌滤纸剪成 (2—
3)cmX(0,5-0,8)cm的
长条，平铺在无菌培
养皿内；
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③
滤
纸(
孢
子)
保
藏
法
将经表面消毒的种
菇 (耳 )用支架搁臵在皿
内 (或悬吊于皿的上方 )，
罩上玻璃通气钟形罩，
臵无菌箱中收集孢子。
将带孢子的滤纸条
放入无菌试管中，臵干
燥器内 2-3天，吸除滤
纸上的水分。
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③
滤
纸(
孢
子)
保
藏
法
用无菌胶塞封口后保
藏。本保藏法简便，有效
保存期较长，一般为 2-4年。
启用时取 1片滤纸条，
将带孢子的一面贴附于斜面
培养基或平板上，待孢子萌
发并形成菌落后转管培养。
缺点 是在收集孢子时易
遭污染，保藏过程中亦易
产生变异，故需做结实性
试验后方能用于生产。
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3、菌种保藏
④
菌
丝
球
保
藏
法
利用特殊物质为媒介
保存菌丝球的方法。常用
的媒介有生理盐水、蒸馏
水、各种营养液等。
取对数生长期的菌丝球
4— 5个，放人经灭菌并盛有
5mL生理盐水 (或蒸馏水、营养
液等 )的试管中，用无菌胶塞
封口，在 4℃ 冰箱中或室温下
保藏，有效期 1-3年。
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⑤
自
然
基
质
保
藏
法
以不含毒性、刺激性和抑菌性成分又富
含营养的天然物质作培养基保存食用菌菌种
的方法。
天然物质如小木块、小枝条、木屑、麸
皮、麦粒等，取材方便，培养基的制作方
法简单，保藏的有效期也较长。启用或转
管继代保藏时，只需取一块 (粒、条 )培养
物臵新鲜培养基上适温培养即可。
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3、菌种保藏
⑥
载
体
保
藏
法
使食用菌孢子吸附在适当的载体上 (土壤、
砂子等 )进行干燥保存的方法。最常用的有土
壤保藏法。
使用的土壤
原则上为肥沃的
耕土，灭菌后放
人干燥器中，使
其水分逸散，然
后接入孢子，分
干接和湿接 两种
方法。
干接 就是在无菌条件下将孢
子直接接人土壤中拌匀即可。
湿接 是将孢子刮人无菌水中
充分摇匀制成孢子悬浮液，然后
用 lmL无菌吸管吸取悬浮液，滴
入壤中，充分干燥后，密封保存。
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3、菌种保藏
⑦
液
氮
超
低
温
保
藏
法
即将菌种密封在有保护剂的安瓿管内，
其活细胞在超低温 (— 196℃) 液态氮中处
于休眠状态而设计的一种长期保藏菌种的
方法。
此法适用于保藏所有的食用菌菌种。
其主要优点是：有效保藏期长，方法简
便，被保藏的菌种基本上不发生变异，
因此是目前保藏菌种的最好方法。
