西南民族大学生科院预防兽医专业
兔抗鸭瘟高免血清的制备程序设计
傅安静
TEL:13008190048
西南民族大学生科院预防兽医专业
高免血清 (antiserum)
? 高免血清又称抗病血清 (antiserum),它
为含有 高效价特异性抗体 的动物血清,能用
于治疗或紧急预防相应病原体所致的疾病,
所以又称为被动免疫制品,
? 高免血清的制作,通常通过给适当动物以 反
复多次 注射特定的病原微生物或其代谢产
物,促使动物不断产生免疫应答,在血清中
含有大量对应的特异性抗体而制成,
西南民族大学生科院预防兽医专业
基本内容
实验的目的要求
兔抗鸭瘟高免血清 检验
实验材料与试剂
操作方法
西南民族大学生科院预防兽医专业
实验目的要求
? 了解兔抗鸭瘟高免血清 的概念及制作方法
? 同时学会其它高免血清的制作及检验方法
?
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材料与试剂
? 鸭瘟疫苗 鸭瘟标准毒株 健康兔 (5只 )
SPF鸭 (2-12月龄鸭 16只 ) 9-14日龄鸭
胚 8个 健康小白鼠 2只 硫酸铵饱和溶液
透析袋 生理盐水等
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方 法
? 免疫原的制备
? 免疫程序
? 采血及血清分离
? 血清纯化
? 标记
? 记录
西南民族大学生科院预防兽医专业
检 验
? 无菌检验
? 安全检验
? 效力检验
西南民族大学生科院预防兽医专业
西南民族大学生科院预防兽医专业
标记
? 每瓶高免血清标明其名称，批号及装量，
若干瓶高免血清装于包装盒内，并附有使
用说明书。每盒高免血清应粘贴标签，注
明制品名称及批准文号、规格、用法、保
存方法、生产日期，及生产厂家等
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记 录
? 对卵黄抗体制作的全过程应做详细的记录, 以
便以后查阅 。
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效力检验
? 将 10只 2-12月龄鸭分成两组, 感染组 7只,
对照组 3只 。 感染组肌肉注射尿囊液 1ml/只,
对照组肌肉注射灭菌生理盐水 1ml/只 。 2-4
天内, 感染组出现鸭瘟症状后, 两个组同
时注射高免血清 1ml/只 。 记录实验结果 。
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免疫原的制备
? 将鸭瘟标准毒株接种于 9-14日龄鸭胚绒毛尿囊
腔 (6个接毒, 2个做生理盐水对照 ),37℃ 培育
3-6天, 收集尿囊液 。 并与 弗氏佐剂 按 1∶ 1的比
例混合 。 将 6只 2-12月龄鸭分成两组, 感染组 4只,
对照组 2 只, 感染组用所收集到的尿囊液做人工
感染, 对照组做生理盐水对照 。 肌肉注射 1ml。
2-4天内, 感染组出现鸭瘟典型症状者, 可总判
定所收集的尿囊液中含有鸭瘟病毒 。 可用作免疫
原对兔进行免疫 。
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免疫程序
? 将健康兔 5只进行免疫 。 免疫途径采用腹腔, 颈
部皮下, 后肢肌肉三个部位同时注射 。
? 基础免疫
将感染组用鸭瘟疫苗进行第一次免疫, 三个部位
同时注射, 每个部位注射 1ml。 2周后进行第二次
免疫, 每个部位注射 1.5ml。 完成基础免疫 。
? 高度免疫
基础免疫 3周后, 用所收集的尿囊液进行高度免
疫 。 除基础免疫注射的三个部位外, 另进行皮内
多点注射 。 第一次每个部位注射 1ml,7天后进行
第二次免疫, 每个部位 1.5ml,再过 7天进行
第三次免疫, 每个部位 2ml。 完成高度免疫 。
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采血及血清分离
? 采血
完成高度免疫后 10天, 可以采血 。 每只兔采血
10ml,5天后, 可进行第二次采血, 每只
10ml。
? 血清分离
采血时不加抗凝剂, 室温中自然凝固 。 在灭菌容
器中使之与空气有较大的接触面 。 血液凝固后进
行剥离 。 先置于 37℃ 1-2h,然后置于 4℃ 冰箱
过夜 。 次日离心收集血清 。 并加入终浓度为
0.01%硫柳汞或终浓度为 0.01%叠氮钠 (NaN3)或
等量的中性甘油防腐 。 分装后, -20℃ 保存 。
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血清纯化
? 取 20ml血清, 加生理盐水 20 ml,再逐滴加入硫酸铵饱和溶
液 10ml,使成 20％ 硫酸铵溶液, 边加边搅拌, 充分混合后,
静置 30min.
? 3000r/min离心 20min,弃去沉淀, 以除去纤维蛋白 。 在上清
液中再加硫酸铵饱和溶液 30ml,使成 50％ 硫酸铵溶液, 充分
混合, 静置 30min。
? 3000r/min离心 20min,弃上清 。
? 于沉淀中加 20ml生理盐水, 使之溶解, 再加入硫酸铵饱和溶
液 10ml,使成 33％ 硫酸铵溶液, 充分混合后, 静置 30min.
? 3000r/min离心 20min,弃上清,以除去白蛋白
? 用 10ml生理盐水溶解沉淀,装入透析袋,
? 透析除盐,在常水中透析过夜,再在生理盐中于 4℃ 透析 24h,
中间换液数次,
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无菌检验
将血清划线接种普通琼脂平板和鲜血琼脂平
板, 37℃ 培养 1-3天, 每天观察实验结果
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安全检验
将血清接种健康小白鼠 2只, 皮下注射
0.5ml/只, 观察 10天均应健活,
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佐剂
? 对可溶性抗原而言，为了增强其免疫原性或改变免疫反
应的类型、节约抗原等目的，常采用加佐剂的方法以刺
激机体产生较强的免疫应答。
佐剂的类型 目前实践中常应用的佐剂有氢氧化铝胶、明
矾、弗氏佐剂、脂质体和石蜡油等。也有采用结合杆菌
等分枝杆菌、白喉杆菌以及细小棒状杆菌等。
? 弗氏佐剂（ Freundadjuvant）,这是目前最常用于动
物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植
物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温 80）制
成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。如在不完
全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐
剂
兔抗鸭瘟高免血清的制备程序设计
傅安静
TEL:13008190048
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高免血清 (antiserum)
? 高免血清又称抗病血清 (antiserum),它
为含有 高效价特异性抗体 的动物血清,能用
于治疗或紧急预防相应病原体所致的疾病,
所以又称为被动免疫制品,
? 高免血清的制作,通常通过给适当动物以 反
复多次 注射特定的病原微生物或其代谢产
物,促使动物不断产生免疫应答,在血清中
含有大量对应的特异性抗体而制成,
西南民族大学生科院预防兽医专业
基本内容
实验的目的要求
兔抗鸭瘟高免血清 检验
实验材料与试剂
操作方法
西南民族大学生科院预防兽医专业
实验目的要求
? 了解兔抗鸭瘟高免血清 的概念及制作方法
? 同时学会其它高免血清的制作及检验方法
?
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材料与试剂
? 鸭瘟疫苗 鸭瘟标准毒株 健康兔 (5只 )
SPF鸭 (2-12月龄鸭 16只 ) 9-14日龄鸭
胚 8个 健康小白鼠 2只 硫酸铵饱和溶液
透析袋 生理盐水等
西南民族大学生科院预防兽医专业
方 法
? 免疫原的制备
? 免疫程序
? 采血及血清分离
? 血清纯化
? 标记
? 记录
西南民族大学生科院预防兽医专业
检 验
? 无菌检验
? 安全检验
? 效力检验
西南民族大学生科院预防兽医专业
西南民族大学生科院预防兽医专业
标记
? 每瓶高免血清标明其名称，批号及装量，
若干瓶高免血清装于包装盒内，并附有使
用说明书。每盒高免血清应粘贴标签，注
明制品名称及批准文号、规格、用法、保
存方法、生产日期，及生产厂家等
西南民族大学生科院预防兽医专业
记 录
? 对卵黄抗体制作的全过程应做详细的记录, 以
便以后查阅 。
西南民族大学生科院预防兽医专业
效力检验
? 将 10只 2-12月龄鸭分成两组, 感染组 7只,
对照组 3只 。 感染组肌肉注射尿囊液 1ml/只,
对照组肌肉注射灭菌生理盐水 1ml/只 。 2-4
天内, 感染组出现鸭瘟症状后, 两个组同
时注射高免血清 1ml/只 。 记录实验结果 。
西南民族大学生科院预防兽医专业
免疫原的制备
? 将鸭瘟标准毒株接种于 9-14日龄鸭胚绒毛尿囊
腔 (6个接毒, 2个做生理盐水对照 ),37℃ 培育
3-6天, 收集尿囊液 。 并与 弗氏佐剂 按 1∶ 1的比
例混合 。 将 6只 2-12月龄鸭分成两组, 感染组 4只,
对照组 2 只, 感染组用所收集到的尿囊液做人工
感染, 对照组做生理盐水对照 。 肌肉注射 1ml。
2-4天内, 感染组出现鸭瘟典型症状者, 可总判
定所收集的尿囊液中含有鸭瘟病毒 。 可用作免疫
原对兔进行免疫 。
西南民族大学生科院预防兽医专业
免疫程序
? 将健康兔 5只进行免疫 。 免疫途径采用腹腔, 颈
部皮下, 后肢肌肉三个部位同时注射 。
? 基础免疫
将感染组用鸭瘟疫苗进行第一次免疫, 三个部位
同时注射, 每个部位注射 1ml。 2周后进行第二次
免疫, 每个部位注射 1.5ml。 完成基础免疫 。
? 高度免疫
基础免疫 3周后, 用所收集的尿囊液进行高度免
疫 。 除基础免疫注射的三个部位外, 另进行皮内
多点注射 。 第一次每个部位注射 1ml,7天后进行
第二次免疫, 每个部位 1.5ml,再过 7天进行
第三次免疫, 每个部位 2ml。 完成高度免疫 。
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采血及血清分离
? 采血
完成高度免疫后 10天, 可以采血 。 每只兔采血
10ml,5天后, 可进行第二次采血, 每只
10ml。
? 血清分离
采血时不加抗凝剂, 室温中自然凝固 。 在灭菌容
器中使之与空气有较大的接触面 。 血液凝固后进
行剥离 。 先置于 37℃ 1-2h,然后置于 4℃ 冰箱
过夜 。 次日离心收集血清 。 并加入终浓度为
0.01%硫柳汞或终浓度为 0.01%叠氮钠 (NaN3)或
等量的中性甘油防腐 。 分装后, -20℃ 保存 。
西南民族大学生科院预防兽医专业
血清纯化
? 取 20ml血清, 加生理盐水 20 ml,再逐滴加入硫酸铵饱和溶
液 10ml,使成 20％ 硫酸铵溶液, 边加边搅拌, 充分混合后,
静置 30min.
? 3000r/min离心 20min,弃去沉淀, 以除去纤维蛋白 。 在上清
液中再加硫酸铵饱和溶液 30ml,使成 50％ 硫酸铵溶液, 充分
混合, 静置 30min。
? 3000r/min离心 20min,弃上清 。
? 于沉淀中加 20ml生理盐水, 使之溶解, 再加入硫酸铵饱和溶
液 10ml,使成 33％ 硫酸铵溶液, 充分混合后, 静置 30min.
? 3000r/min离心 20min,弃上清,以除去白蛋白
? 用 10ml生理盐水溶解沉淀,装入透析袋,
? 透析除盐,在常水中透析过夜,再在生理盐中于 4℃ 透析 24h,
中间换液数次,
西南民族大学生科院预防兽医专业
无菌检验
将血清划线接种普通琼脂平板和鲜血琼脂平
板, 37℃ 培养 1-3天, 每天观察实验结果
西南民族大学生科院预防兽医专业
安全检验
将血清接种健康小白鼠 2只, 皮下注射
0.5ml/只, 观察 10天均应健活,
西南民族大学生科院预防兽医专业
佐剂
? 对可溶性抗原而言，为了增强其免疫原性或改变免疫反
应的类型、节约抗原等目的，常采用加佐剂的方法以刺
激机体产生较强的免疫应答。
佐剂的类型 目前实践中常应用的佐剂有氢氧化铝胶、明
矾、弗氏佐剂、脂质体和石蜡油等。也有采用结合杆菌
等分枝杆菌、白喉杆菌以及细小棒状杆菌等。
? 弗氏佐剂（ Freundadjuvant）,这是目前最常用于动
物实验的佐剂，它是将抗原水溶液与油剂（石蜡油或植
物油）等量混合，再加乳化剂（羊毛脂或叶吐温 80）制
成油包水抗原乳剂，称之为不完全弗氏佐剂。如在不完
全佐剂中加入分枝杆菌（如死卡苗）则称为完全弗氏佐
剂
