! 天 津 市 科 委 重 点 攻 关 课 题 ( 编 号,"##$"%&’’)
作 者 简 介,王 新 允 ( ’(%)*),女,教 授,研 究 方 向,肺 癌 的 分 子 生 物 学 ;
朱 丛 中 ( ’(++*),女,硕 士 学 位,研 究 方 向,肺 癌 的 分 子 生 物 学 。
,摘 要 - 目 的,进 行 组 织 芯 片 制 作 可 行 性 探 讨,为 快 速,规 范,简 便,经 济 地 进 行 各 项 科 研 工 作 提 供 一 种 新 的 技 术 方 法 。
方 法,制 作 出 组 织 芯 片 蜡 块,进 行,/,免 疫 组 织 化 学 和 荧 光 原 位 杂 交 0123.4染 色,对 组 织 芯 片 免 疫 组 化 与 普 通 免 疫 组化 的 结 果 进 行 比 较 。 结 果,各 种 染 色 切 片 上 的 组 织 芯 基 本 符 合 观 察 需 要,芯 片 免 疫 组 化 结 果 与 普 通 免 疫 组 化 结 果 在统 计 学 上 无 显 著 性 差 异 。 结 论,组 织 芯 片 的 研 制 具 有 高 通 量,经 济 节 约,减 少 实 验 误 差 的 特 点,是 科 研 工 作 中 的 一 种新 方 法 。
[ 关 键 词 ] 肺 癌 ; 组 织 芯 片 ; 技 术 ; 方 法
[ 中 图 分 类 号 ] 5#6’
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8& !文 献 标 识 码 " 9 [ 文 章 编 号 ] ’""6*$’%+0&"")4"’*""&%*"#
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组 织 芯 片 是 &" 世 纪 末 发 展 起 来 的 一 种 新 技 术,
它 将 数 十 甚 至 数 百 个 小 组 织 芯 整 齐 地 排 布 于 一 张 载玻 片 上,可 以 同 时 对 多 个 组 织 样 本 进 行 研 究,并 能 与免 疫 组 织 化 学,原 位 杂 交 和 荧 光 原 位 杂 交 ( WYAETO^e
\O?\O >? ^>UA H@‘T>[>GLU>E?M 123.) 等 技 术 结 合 起 来 运用,非 常 简 便 经 济
,’-

我 们 经 过 长 期 摸 索 和 实 践,逐 渐 掌 握 了 一 套 较高 水 平 的 组 织 芯 片 制 作 方 法,现 将 在 这 方 面 的 几 点体 会 介 绍 如 下 。
C 材 料 和 方 法
CDC 供 体 蜡 块 的 选 取 和 准 备 收 集 所 需 的 供 体 蜡块,重 新 切 片 作,/ 染 色,在 显 微 镜 下 观 察 并 选 取 富含 肿 瘤 细 胞 的 区 域 作 标 记,然 后 在 供 体 蜡 块 的 相 应位 置 作 标 记 。 由 于 组 织 芯 片 中 每 一 块 组 织 的 面 积 都非 常 小,因 此 在 选 材 时 应 选 取 含 有 目 标 组 织 多 的 区域,避 开 坏 死 较 多 处 。
CDE 受 体 蜡 块 的 准 备 制 作 组 织 芯 片 的 受 体 蜡 块需 要 有 较 好 的 柔 韧 度 和 硬 度,我 们 经 过 反 复 研 究 和摸 索,最 后 选 用 了 将 德 国 蜡 和 美 国 蜡 按 %(f’ 混 合,
经 # 次 沉 淀 去 除 杂 质 。 蜡 快 制 成 后,用 阵 列 仪 按 事 先设 计 好 的 阵 列 打 孔,孔 径 "86 VV,间 距 ’ VV。
组 织 芯 片 研 制 的 几 点 体 会
!
王 新 允,朱 丛 中,刘 婷,李 艳,孙 锐,孙 翠 云,王 爱 香,吴 兴 业,赵 敏
( 天 津 医 科 大 学 病 理 教 研 室,天 津 #"""+")
第 ’’ 卷 天 津 医 科 大 学 学 报 gEY8’’
第 ’ 期 hJQC &"") ;E8’24
!"# 切 片 前 的 准 备 工 作 在 所 有 组 织 芯 注 入 受 体 蜡块 后,将 其 放 入 温 箱 中 !" #$%,待 石 蜡 软 化 使 组 织 芯和 受 体 蜡 块 融 合 均 匀 。 取 出 蜡 块,用 一 张 干 净 载 玻 片稍 用 力 按 压 组 织 芯 面,使 其 表 面 水 平 一 致 。 切 片 前 将蜡 块 置 入 & ’冰 箱 过 夜 。 连 续 切 片,厚 度 ( !#,捞 片水 温 控 制 在 &" ’左 右,有 利 于 展 片 。
!"$ 切 片 后 的 处 理 切 好 的 片 子 立 即 放 入 ") ’左右 的 温 箱 中 烤 片 !* +,以 保 证 组 织 牢 固 地 粘 附 于 载玻 片 上 。 然 后 将 切 片 取 出 自 然 降 至 室 温,装 盒 备 用 。
如 切 片 长 期 不 用 可 封 蜡 后 保 存 于 & ’冰 箱 中 。
% 结 果
%"! 芯 片 蜡 块 和,- 切 片 的 观 察 按 上 述 方 法 制 成
* 个 蜡 块,一 个 为 *).!* 点 阵,另 一 个 为 *!.!( 点阵 。 * 个 蜡 块 蜡 质 细 腻 均 匀,四 周 无 开 裂 现 象 。 切 片经,- 染 色 后 可 见 各 个 组 织 芯 整 齐 排 布 于 载 玻 片上,基 本 无 移 位 和 扭 曲 现 象,符 合 观 察 和 进 一 步 研 究的 需 要 。
%"% 免 疫 组 化 染 色 结 果 笔 者 对 肺 癌 组 织 芯 片 进行 了 一 些 指 标 的 检 测,包 括 癌 基 因 -/+0&; 肿 瘤 抑制 基 因 12-3; 调 亡 抑 制 因 子 4567$7$%,转 移 抑 制 因子 89:,89;*,<=>; 生 长 因 子?@<A*,B<@<; 核 转录 因 子,?<A!",3<A#0 等 抗 体 的 染 色 。 经 过 免 疫 组化 染 色 过 程 后,绝 大 部 分 组 织 芯 完 好 无 缺 地 排 布 于载 玻 片 上,得 出 的 阳 性 结 果 与 普 通 切 片 免 疫 组 化 阳性 结 果 基 本 一 致,在 统 计 学 上 无 显 著 性 差 异 ( !C
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。 提 示 组 织 芯 片 对 原 组 织 蜡 块 具 有 很 好 的代 表 性 。
%"# <?4,染 色 结 果 进 行 了 4567$7$% 的 #H3=
<?4,,荧 光 显 微 镜 观 察,绝 大 部 分 组 织 符 合 观 察 需要,肿 瘤 细 胞 的 胞 浆 中 可 见 黄 绿 色 荧 光 。
# 讨 论组 织 芯 片 是 将 数 十 个,数 百 个 乃 至 上 千 个 组 织芯 整 齐 地 排 列 于 某 一 载 体 上 ( 通 常 是 载 玻 片 ) 而 成 的微 缩 组 织 切 片 。 组 织 芯 片 技 术 首 先 由 >I%I%J% 等
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!::; 年 研 制 出 来,到 现 在 已 经 日 趋 完 善 。 组 织 芯 片技 术 被 认 为 是 在 生 理 学,病 理 学 和 细 胞 生 物 学 等 方面 的 一 个 革 命 性 的 技 术 创 新 。 其 主 要 优 点 有,( !) 体积 小,信 息 含 量 高,可 根 据 不 同 需 要 进 行 组 合 和 设计 。 ( *) 可 同 时 检 测 大 量 组 织,提 高 了 工 作 效 率,减 少了 时 间 和 资 金 的 消 耗 。 ( () 由 于 实 验 是 一 次 完 成,实验 条 件 相 同,大 大 降 低 了 实 验 误 差,使 其 对 比 性 和 可重 复 性 增 强 。
随 着 科 学 技 术 的 发 展,组 织 芯 片 技 术 也 在 不 断的 发 展 和 完 善,具 有 广 阔 的 应 用 前 景 。 笔 者 对 组 织 芯片 制 作 方 法 进 行 深 入 的 分 析 研 究,层 层 把 关,有 效 控制 了 每 个 步 骤 可 能 出 现 的 误 差 和 失 败,制 成 了 较 高质 量 的 组 织 芯 片 。
首 先 在 组 织 芯 的 选 取 上 。 因 为 每 个 组 织 芯 都 很小,所 以 需 要 选 取 富 含 肿 瘤 细 胞 的 区 域,并 且 避 开 坏死 等 不 利 于 观 察 的 部 位,以 保 证 芯 片 的 观 察 和 统 计 。
另 外 供 体 蜡 块 制 作 的 年 份 也 是 要 考 虑 的 因 素 之 一,
最 好 不 要 选 用 年 代 久 远 的 蜡 块,因 为 蜡 块 中 抗 原 丢失 有 逐 年 增 多 的 趋 势 。 但 是 有 学 者 报 道 组 织 中 的 抗原 在 制 成 蜡 块 K) 余 年 后 仍 然 可 以 检 测 出 其 抗 原 性
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在 受 体 蜡 块 石 蜡 的 选 用 方 面,由 于 该 蜡 块 所 含组 织 芯 较 多,组 织 芯 的 大 小 和 之 间 的 间 距 也 较 小,要求 石 蜡 的 柔 韧 度 和 硬 度 之 间 达 到 一 个 平 衡 。 太 软 则容 易 滞 针,切 片 时 容 易 掉 片 和 点 阵 移 位 ; 太 硬 则 打 孔时 容 易 引 起 点 阵 周 边 的 石 蜡 出 现 裂 纹 。 我 们 参 考 大量 文 献,最 后 选 定 将 德 国 蜡 和 美 国 蜡 按 一 定 比 例混 合 ( &:L!) 经 沉 淀 去 除 杂 质 的 方 法,保 证 了 蜡 块 的质 量 。
在 制 作 芯 片 蜡 块 前 应 根 据 研 究 的 需 要 设 计 好 阵列,充 分 利 用 现 有 的 空 间,尽 量 让 所 有 的 组 织 芯 排 布于 蜡 块 中 央 。 一 般 说 来 受 体 蜡 块 的 四 周 应 该 留 有
)D"F! M# 的 边 距 ; 另 外,各 个 组 织 芯 之 间 应 保 持 一 定的 间 距,有 文 献 报 道 两 个 组 织 芯 之 间 的 距 离 ( 两 个 中心 之 间 的 距 离 ) 应 为 组 织 芯 直 径 的 !F!D" 倍,我 们 所取 的 组 织 芯 直 径 为 )DK ##,间 距 为 ! ##,略 小 于 上述 值,但 是 效 果 也 很 好 。
由 于 供 体 蜡 块 所 用 的 石 蜡 性 质 不 一,所 以 在 所 有组 织 芯 注 入 受 体 蜡 块 后,应 将 其 放 入 温 箱 中 !" #$%,
待 石 蜡 软 化 使 组 织 芯 和 受 体 蜡 块 融 合 均 匀 。 拿 出 蜡块 后 用 一 张 干 净 的 载 玻 片 稍 用 力 按 压 组 织 芯 面,使其 表 面 水 平 一 致,以 保 证 切 出 来 的 切 片 均 含 有 组 织芯 而 不 会 出 现 组 织 空 缺 现 象 。 切 片 之 前 将 蜡 块 在 & ’
冰 箱 中 过 夜,连 续 切 片 之 前 用 冰 块 稍 微 冰 一 下 组 织,
可 以 使 组 织 收 缩 利 于 切 片 。 捞 片 的 水 温 控 制 在 &" ’
左 右,过 高 容 易 飞 片,过 低 则 不 利 于 展 片 。
切 好 的 片 子 应 立 即 放 入 ") ’左 右 温 箱 中 烤 片
!* + 以 上,以 保 证 组 织 牢 固 地 粘 附 于 载 玻 片 上,防 止后 续 实 验 中 的 掉 片 现 象 。 如 果 短 期 内 不 用,应 该 将 切片 封 蜡 并 保 存 于 & ’冰 箱 中 。
总 之,组 织 芯 片 技 术 具 备 了 其 他 方 法 无 可 比 拟的 优 越 性,还 处 在 不 断 成 熟,完 善 的 过 程 中,随 着 其
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!"# 戴 力 扬,杜 晓 冰 $ 黄 韧 带 的 形 态 学 观 察 及 其 临 床 意 义 !%#$ 中 华 外科 杂 志,&’’"()*+,-."&/
!0# 戴 力 扬,成 培 来 $ 腰 椎 韧 带 的 三 维 有 限 元 分 析 !%#$ 第 二 军 医 大 学学 报,&’’*(&)+*-.&))
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不 断 地 更 新 和 发 展,必 将 在 将 来 的 科 研 和 临 床 诊 断等 方 面 发 挥 重 大 的 作 用 。
参 考 文 献,
!&# 朱 丛 中,王 新 允,刘 婷 ( 等 $ 肺 癌 中 OG5Z" 表 达 的 生 物 学 意 义
!%#$ 世 界 肿 瘤 杂 志,*//",)+*-,&0"
!*# 李 艳,王 新 允,刘 婷 ( 等 $,@HK6K6> 在 肺 癌 中 的 表 达 和 生 物 学 意 义
!%#$ 世 界 肿 瘤 杂 志,*//",)+*-,&0,
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( *//"I&&I&’ 收 稿 )
的 吸 收 破 坏 作 用 增 加 而 引 起 骨 的 过 快 丢 失 。 可 见 [Y
关 节 局 部 炎 症 虽 不 是 引 起 骨 质 疏 松 的 独 立 危 险 因素,但 能 协 同 加 快 炎 性 关 节 附 近 骨 质 丢 失 。
参 考 文 献 !
!&# 马 东 来,李 俊,陈 敏 珠,等 $ 大 鼠 佐 剂 性 关 节 炎 的 诱 导 及 其 免 疫异 常 研 究 !%#$ 中 华 实 验 临 床 免 疫 学 杂 志 ( &’’0,,( )),&)
!*# 章 明 放,张 乃 鑫,谭 郁 彬,等 $ 不 同 剂 量 羟 乙 磷 酸 钠 周 期 口 服 对雌 性 大 鼠 去 势 后 骨 质 疏 松 的 作 用 !%#$ 中 华 骨 科 杂 志,&’’1,&1
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!0# 蔡 春 友,张 维 铭,孙 保 存,等 $ 白 细 胞 介 素 & 对 !型 胶 原 诱 导 类风 湿 性 关 节 炎 模 型 的 影 响 !%#$ 中 华 骨 科 杂 志,&’’’,&’( &/),1&"
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\PTc[YM< 6>CBH8AC6>!%#$ % Ob7 9B7( *///( &’&,*,0
( *//"I/,I/* 收 稿 )
( 上 接 第 *0 页 王 新 允 文 章 )
( 上 接 第 *’ 页 王 凯 文 章 )
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