抗微生物药物和敏感性试验
李向阳
临床常用抗菌药物
? β-内酰胺类
? 氨基糖苷类
? 喹诺酮类
? 大环内酯类
? 四环素
? 氯霉素
? 林可霉素
? 糖肽类
? 磺胺类
? 合成类
β-内酰胺类
? 青霉素类
– 天然青霉素
? 青霉素 G
– 耐酶青霉素
? 甲氧西林、苯唑西林、氯唑西林
– 广谱青霉素
? 氨基类
– 氨苄西林、羟氨苄西林
? 羧基类
– 替卡西林、羧苄西林
? 脲基类
– 派拉西林、美洛西林
β-内酰胺类
? 头孢菌素类
– 一代头孢菌素
? 头孢噻吩、头孢氨苄、头孢匹林、头孢拉啶
? 头孢唑林
– 二代头孢菌素
? 头孢呋辛、头孢克罗、头孢尼西
– 三代头孢菌素
? 头孢噻肟、头孢他定、头孢派酮、头孢曲松、
–,四代”头孢菌素
? 头孢匹肟
其它 β-内酰胺类
? 单环类 β-内酰胺类
– 氨曲南
? 头霉素类和氧头孢烯类
– 头孢西丁、头孢替坦、头孢美唑
? 碳青霉烯类
– 亚胺培能、米洛培能
? β-内酰胺酶抑制剂
– 克拉维酸（棒酸）、舒巴坦、他唑巴坦
氨基糖苷类抗生素
? 链霉素、卡那霉素、妥布霉素、新霉素
? 庆大霉素
? 阿米卡星、奈替米星、地贝卡星
? 大观霉素
喹诺酮类抗生素
? 奈啶酸
? 环丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、喏氟
沙星、培氟沙星
? 司帕沙星、左氧沙星
大环内酯类
? 红霉素、柱晶白霉素、麦迪霉素、乙酰
螺旋霉素
? 克拉霉素、罗红霉素、阿齐霉素、地红
霉素
? 四环素类
– 四环素、米喏环素、多西环素、美他环素、
强力霉素
? 氯霉素
? 林可霉素类
– 林可霉素、氯林可霉素
糖肽类抗生素
? 万古霉素
? 替考拉宁
磺胺类
? 磺胺甲基异恶唑、磺胺嘧啶
? 磺胺二甲嘧啶
其它
? 硝基呋喃类
– 呋喃坦啶、呋喃唑酮
? 硝基咪唑类
– 甲硝唑、替硝唑
体外药敏试验的意义
? 指导临床正确使用抗生素
? 研究细菌耐药性的发展
? 流行病学调查
进行药敏试验的指征
? 感染的细菌，需要化疗，但不能根据细
菌种类推断可靠的敏感药物
? 流行病学调查
? 研制新的抗微生物药物
? 公认的某种细菌对某种抗生素高度敏感
则不必进行
抗生素选择
抗生素选择的原则
1、根据抗生素的抗菌谱
2、根据细菌的种类
3、根据某些特殊的耐药机理
4、根据抗生素的药代动力学特点
5、根据流行病学资料
葡萄球菌
? 青霉素、苯唑青霉素
? 氨苄青霉素 +舒巴坦、羟氨苄青霉素 +棒酸
? 磺胺甲基异恶唑 +甲氧卞胺嘧啶
? 万古霉素
? 红霉素、氯林可霉素
? 氯霉素、庆大霉素、利福平、四环素、环丙沙
星、呋喃妥因
肠球菌
? 氨苄青霉素、庆大霉素（高浓度）、链
霉素（高浓度）、万古霉素、替考拉宁
? 利福平、氯霉素、红霉素、四环素
? 尿路感染时添加：环丙沙星、左旋氧氟
沙星、呋喃妥因
肠球菌 HLAR筛选
? High lever aminoglycosides resistance 高水平
氨基糖苷类耐药
? 纸片法 庆大霉素 120μg/片,链霉素 300μg/片
? 稀释法
– 庆大霉素 500μg/ml、
– 链霉素
? 肉汤稀释法 1000μg/ml
? 琼脂稀释法 2000μg/ml
肺炎链球菌
? 青霉素（苯唑青霉素纸片）
? 红霉素
? 磺胺甲基异恶唑 +甲氧卞胺嘧啶
? 左旋氧氟沙星、四环素、万古霉素
? 头孢噻肟、头孢曲松
? 氯霉素、利福平
淋病奈瑟菌
? 头孢噻肟、头孢曲松
? 头孢呋辛、头孢西丁
? 环丙沙星
? 青霉素
? 壮观霉素
? 四环素
肠杆菌科（一）
? 氨苄青霉素、头孢唑林
? 庆大霉素、阿米卡星
? 氨苄青霉素 +舒巴坦 /羟氨苄青霉素 +棒酸
? 哌拉西林、替卡西林
? 哌拉西林 +他唑巴坦 /替卡西林 +棒酸
? 头孢呋辛
? 头孢吡肟
? 头孢西丁
? 头孢派酮
? 环丙沙星
肠杆菌科（二）
? 头孢噻肟 /头孢曲松
? 头孢他啶
? 氨曲南
? 亚胺培南 /美罗培南
肠杆菌科（三）
? 磺胺甲基异恶唑 +甲氧卞胺嘧啶
氯霉素、卡那霉素、奈替米星、四环素、
妥布霉素
铜绿假单胞菌和不动杆菌
? 头孢他啶、头孢派酮、氨曲南、头孢吡肟
? 哌拉西林、替卡西林
? 庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、
? 环丙沙星
? 亚胺培南 /美罗培南
? 磺胺甲基异恶唑 +甲氧卞胺嘧啶
? 氯霉素、四环素
嗜血杆菌属
? 氨苄青霉素、头孢噻肟 /头孢曲松、氯霉素、美
罗培南 严重感染时报告
? 阿奇霉素、克拉霉素、头孢克洛、头孢尼西、
头孢呋辛、氨苄青霉素 +舒巴坦 /羟氨苄青霉素
+棒酸 临床经验用药
磺胺甲基异恶唑 +甲氧卞胺嘧啶、头孢他啶、
头孢呋辛、氨曲南、头孢克洛、头孢尼西、环
丙沙星、亚胺培南、利福平、四环素 补充药敏
试验
参考书籍
? 实用抗菌药物学
? 临床药理学
? NCCLS M100-S14
? Manual of clinical microbiology
体外药敏试验的方法
? 纸片扩散法 （ Antimicrobial disk susceptibility test)
? 稀释法 （ Dilution antimicrobial susceptibility test)
? 杀菌试验
? 体外联合药敏试验
? 临床标本直接药敏试验
? 特殊耐药方式测定
? 其他细菌药敏试验
体内抗菌药物的活性和
浓度测定
? 血清抑菌力和杀菌力测定
– （ serum inhibitory/bactericidal test)
? 体内抗菌药物浓度测定
– 微生物测定法
– 非微生物测定法
? 荧光偏振免疫测定（ TDX）
? 高效液相层析法
纸片扩散法
（ Disk susceptibility test)
? 也称 Kirby-Bauer法
? 原理
抗生素在琼脂平板中的扩散方式
? 抗生素在琼脂平板中
的扩散方式
A 含药纸片
B 含药小杯
C 含药小孔
纸片扩散法原理
纸片扩散法原理
纸片扩散法适用范围
? 在 MH琼脂上快速生长的需氧或兼性厌氧
细菌
? 经改良后也适用于
– 链球菌 -添加 5%羊血
– 嗜血杆菌属 -使用 HTM培养基
– 淋病奈瑟菌 -使用 GC培养基
材料
? 含药纸片
? MH培养基
? 菌株
? 标准比浊管
方法
? 准备 MH培养基
? 准备菌悬液
? 涂布平板
? 贴含药纸片
? 孵育
? 测量抑菌环直径
? 与解释标准核对得出结论
解释标准
? 敏感 (susceptible)
? 中介 (intermediate)
? 耐药 (resistant)
敏感（ susceptible)
? 表明测试菌株所致感染可以用推荐用于
此型感染及病原菌的抗微生物药剂量，
进行恰当地治疗，除非存在禁忌症。
中介 (intermediate)
? 表明该抗微生物药的 MICs能达到接近于
血液和组织中通常能达到的水平，但对
测试菌株的治疗反应率可能低于敏感。
? 该抗微生物药在机体内如有生理浓集部
位，则在该部位可以有临床效果或加大
剂量可能有效（在药物许可情况下，如
β-内酰胺类）
? 技术缓冲区
耐药 (resistant)
? 表明该抗微生物药在常规剂量应用时达
到的血液或组织浓度，不能抑制测试菌
株的生长，临床治疗效果不可靠
解
释
标
准
的
建
立
质控
? 培养基质控
? 含药纸片质控
? 接种量
? 孵育条件
? 全面质控
稀释法
? 可用来定量测试某一抗微生物药对某一
种细菌分离物的体外活性
? 最低（小）抑菌浓度（ minimal
inhibitory concentration,MIC)
– 所测得的某抗微生物药能抑制检测菌肉眼可
见生长的最低浓度
稀释法
方法：
肉汤稀释法
琼脂稀释法
微量稀释法
E-test
肉汤稀释法
? 抗微生物药的来源
? 培养基的要求
? MH肉汤：阳离子调节
肉汤稀释法
? 配置抗微生物药母液
? 系列倍比稀释
? 加入菌悬液
? 孵育
? 判读结果
E-test
微量稀释法
杀菌试验
? 最低杀菌浓度测定（ minimal bactericida
concentration,MBC)
? 时间 -杀菌曲线法 (time-kill method)
? 严重感染病人、免疫缺陷病人
? 影响因素多，难以标准化
? 重复性差
李向阳
临床常用抗菌药物
? β-内酰胺类
? 氨基糖苷类
? 喹诺酮类
? 大环内酯类
? 四环素
? 氯霉素
? 林可霉素
? 糖肽类
? 磺胺类
? 合成类
β-内酰胺类
? 青霉素类
– 天然青霉素
? 青霉素 G
– 耐酶青霉素
? 甲氧西林、苯唑西林、氯唑西林
– 广谱青霉素
? 氨基类
– 氨苄西林、羟氨苄西林
? 羧基类
– 替卡西林、羧苄西林
? 脲基类
– 派拉西林、美洛西林
β-内酰胺类
? 头孢菌素类
– 一代头孢菌素
? 头孢噻吩、头孢氨苄、头孢匹林、头孢拉啶
? 头孢唑林
– 二代头孢菌素
? 头孢呋辛、头孢克罗、头孢尼西
– 三代头孢菌素
? 头孢噻肟、头孢他定、头孢派酮、头孢曲松、
–,四代”头孢菌素
? 头孢匹肟
其它 β-内酰胺类
? 单环类 β-内酰胺类
– 氨曲南
? 头霉素类和氧头孢烯类
– 头孢西丁、头孢替坦、头孢美唑
? 碳青霉烯类
– 亚胺培能、米洛培能
? β-内酰胺酶抑制剂
– 克拉维酸（棒酸）、舒巴坦、他唑巴坦
氨基糖苷类抗生素
? 链霉素、卡那霉素、妥布霉素、新霉素
? 庆大霉素
? 阿米卡星、奈替米星、地贝卡星
? 大观霉素
喹诺酮类抗生素
? 奈啶酸
? 环丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、喏氟
沙星、培氟沙星
? 司帕沙星、左氧沙星
大环内酯类
? 红霉素、柱晶白霉素、麦迪霉素、乙酰
螺旋霉素
? 克拉霉素、罗红霉素、阿齐霉素、地红
霉素
? 四环素类
– 四环素、米喏环素、多西环素、美他环素、
强力霉素
? 氯霉素
? 林可霉素类
– 林可霉素、氯林可霉素
糖肽类抗生素
? 万古霉素
? 替考拉宁
磺胺类
? 磺胺甲基异恶唑、磺胺嘧啶
? 磺胺二甲嘧啶
其它
? 硝基呋喃类
– 呋喃坦啶、呋喃唑酮
? 硝基咪唑类
– 甲硝唑、替硝唑
体外药敏试验的意义
? 指导临床正确使用抗生素
? 研究细菌耐药性的发展
? 流行病学调查
进行药敏试验的指征
? 感染的细菌，需要化疗，但不能根据细
菌种类推断可靠的敏感药物
? 流行病学调查
? 研制新的抗微生物药物
? 公认的某种细菌对某种抗生素高度敏感
则不必进行
抗生素选择
抗生素选择的原则
1、根据抗生素的抗菌谱
2、根据细菌的种类
3、根据某些特殊的耐药机理
4、根据抗生素的药代动力学特点
5、根据流行病学资料
葡萄球菌
? 青霉素、苯唑青霉素
? 氨苄青霉素 +舒巴坦、羟氨苄青霉素 +棒酸
? 磺胺甲基异恶唑 +甲氧卞胺嘧啶
? 万古霉素
? 红霉素、氯林可霉素
? 氯霉素、庆大霉素、利福平、四环素、环丙沙
星、呋喃妥因
肠球菌
? 氨苄青霉素、庆大霉素（高浓度）、链
霉素（高浓度）、万古霉素、替考拉宁
? 利福平、氯霉素、红霉素、四环素
? 尿路感染时添加：环丙沙星、左旋氧氟
沙星、呋喃妥因
肠球菌 HLAR筛选
? High lever aminoglycosides resistance 高水平
氨基糖苷类耐药
? 纸片法 庆大霉素 120μg/片,链霉素 300μg/片
? 稀释法
– 庆大霉素 500μg/ml、
– 链霉素
? 肉汤稀释法 1000μg/ml
? 琼脂稀释法 2000μg/ml
肺炎链球菌
? 青霉素（苯唑青霉素纸片）
? 红霉素
? 磺胺甲基异恶唑 +甲氧卞胺嘧啶
? 左旋氧氟沙星、四环素、万古霉素
? 头孢噻肟、头孢曲松
? 氯霉素、利福平
淋病奈瑟菌
? 头孢噻肟、头孢曲松
? 头孢呋辛、头孢西丁
? 环丙沙星
? 青霉素
? 壮观霉素
? 四环素
肠杆菌科（一）
? 氨苄青霉素、头孢唑林
? 庆大霉素、阿米卡星
? 氨苄青霉素 +舒巴坦 /羟氨苄青霉素 +棒酸
? 哌拉西林、替卡西林
? 哌拉西林 +他唑巴坦 /替卡西林 +棒酸
? 头孢呋辛
? 头孢吡肟
? 头孢西丁
? 头孢派酮
? 环丙沙星
肠杆菌科（二）
? 头孢噻肟 /头孢曲松
? 头孢他啶
? 氨曲南
? 亚胺培南 /美罗培南
肠杆菌科（三）
? 磺胺甲基异恶唑 +甲氧卞胺嘧啶
氯霉素、卡那霉素、奈替米星、四环素、
妥布霉素
铜绿假单胞菌和不动杆菌
? 头孢他啶、头孢派酮、氨曲南、头孢吡肟
? 哌拉西林、替卡西林
? 庆大霉素、阿米卡星、妥布霉素、奈替米星、
? 环丙沙星
? 亚胺培南 /美罗培南
? 磺胺甲基异恶唑 +甲氧卞胺嘧啶
? 氯霉素、四环素
嗜血杆菌属
? 氨苄青霉素、头孢噻肟 /头孢曲松、氯霉素、美
罗培南 严重感染时报告
? 阿奇霉素、克拉霉素、头孢克洛、头孢尼西、
头孢呋辛、氨苄青霉素 +舒巴坦 /羟氨苄青霉素
+棒酸 临床经验用药
磺胺甲基异恶唑 +甲氧卞胺嘧啶、头孢他啶、
头孢呋辛、氨曲南、头孢克洛、头孢尼西、环
丙沙星、亚胺培南、利福平、四环素 补充药敏
试验
参考书籍
? 实用抗菌药物学
? 临床药理学
? NCCLS M100-S14
? Manual of clinical microbiology
体外药敏试验的方法
? 纸片扩散法 （ Antimicrobial disk susceptibility test)
? 稀释法 （ Dilution antimicrobial susceptibility test)
? 杀菌试验
? 体外联合药敏试验
? 临床标本直接药敏试验
? 特殊耐药方式测定
? 其他细菌药敏试验
体内抗菌药物的活性和
浓度测定
? 血清抑菌力和杀菌力测定
– （ serum inhibitory/bactericidal test)
? 体内抗菌药物浓度测定
– 微生物测定法
– 非微生物测定法
? 荧光偏振免疫测定（ TDX）
? 高效液相层析法
纸片扩散法
（ Disk susceptibility test)
? 也称 Kirby-Bauer法
? 原理
抗生素在琼脂平板中的扩散方式
? 抗生素在琼脂平板中
的扩散方式
A 含药纸片
B 含药小杯
C 含药小孔
纸片扩散法原理
纸片扩散法原理
纸片扩散法适用范围
? 在 MH琼脂上快速生长的需氧或兼性厌氧
细菌
? 经改良后也适用于
– 链球菌 -添加 5%羊血
– 嗜血杆菌属 -使用 HTM培养基
– 淋病奈瑟菌 -使用 GC培养基
材料
? 含药纸片
? MH培养基
? 菌株
? 标准比浊管
方法
? 准备 MH培养基
? 准备菌悬液
? 涂布平板
? 贴含药纸片
? 孵育
? 测量抑菌环直径
? 与解释标准核对得出结论
解释标准
? 敏感 (susceptible)
? 中介 (intermediate)
? 耐药 (resistant)
敏感（ susceptible)
? 表明测试菌株所致感染可以用推荐用于
此型感染及病原菌的抗微生物药剂量，
进行恰当地治疗，除非存在禁忌症。
中介 (intermediate)
? 表明该抗微生物药的 MICs能达到接近于
血液和组织中通常能达到的水平，但对
测试菌株的治疗反应率可能低于敏感。
? 该抗微生物药在机体内如有生理浓集部
位，则在该部位可以有临床效果或加大
剂量可能有效（在药物许可情况下，如
β-内酰胺类）
? 技术缓冲区
耐药 (resistant)
? 表明该抗微生物药在常规剂量应用时达
到的血液或组织浓度，不能抑制测试菌
株的生长，临床治疗效果不可靠
解
释
标
准
的
建
立
质控
? 培养基质控
? 含药纸片质控
? 接种量
? 孵育条件
? 全面质控
稀释法
? 可用来定量测试某一抗微生物药对某一
种细菌分离物的体外活性
? 最低（小）抑菌浓度（ minimal
inhibitory concentration,MIC)
– 所测得的某抗微生物药能抑制检测菌肉眼可
见生长的最低浓度
稀释法
方法：
肉汤稀释法
琼脂稀释法
微量稀释法
E-test
肉汤稀释法
? 抗微生物药的来源
? 培养基的要求
? MH肉汤：阳离子调节
肉汤稀释法
? 配置抗微生物药母液
? 系列倍比稀释
? 加入菌悬液
? 孵育
? 判读结果
E-test
微量稀释法
杀菌试验
? 最低杀菌浓度测定（ minimal bactericida
concentration,MBC)
? 时间 -杀菌曲线法 (time-kill method)
? 严重感染病人、免疫缺陷病人
? 影响因素多，难以标准化
? 重复性差
