分子生物学实验报告
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姓名,
学号, 分子生物学实验报告一实验名称:一、基因DNA提取及电泳检测
专业班级,姓名,
学号,Email,
实验日期,
同组者,
一,实验名称：CTAB 法提取条浒苔基因DNA
二,实验目的和要求：
1.学习和掌握CTAB方法提取基因组DNA的原理、方法和技术
2.为PCR扩增提供模板三,实验仪器,设备与材料
10μl移液枪、100μl移液枪、镊子、离心机、条浒苔、CTAB
四,实验原理
CTAB法是一种快速简便的提取植物总DNA的方法，其原理是：采用机械破碎植物细胞，然后加入CTAB分离缓冲液将DNA溶解出来，再经氯仿－异戊醇抽提除去蛋白质，最后得到DNA。
五,实验步骤
①取新鲜条浒苔适量，用液氮快速磨成粉末
②将粉末转移到eppendorf管中，加入0.5ml Lysis buffer,55℃消化过夜；
③加入82.5μL 5M NaCl及82.5μL CTAB 56℃恒温20分钟
④加入等体积试剂（试剂成分为酚：氯仿：异丙醇=25：24：1）12000rpm离心10分钟，取上清，转移到新的eppendorf管中
⑤加入等体积氯仿，12000rpm离心10分钟，取上清，转移到新的eppendorf管中
⑥加入等体积异丙醇，轻柔地摇晃，直到看见絮状沉淀；
⑦12000rpm离心15分钟，去除上清；
⑧加入0.5ml 75%乙醇洗涤沉淀，6000rpm离心2分钟，除去上清，小心的将管壁上残留的液体去除.
⑨晾晒DNA 5-10分钟；
⑩用30-50μL无菌水溶解DNA；
制备0.8％琼脂糖凝胶电泳检测DNA产物，取8μlDNA溶液并与1.5μl上样缓冲液混合，用移液枪加入凝胶孔。电泳缓冲液为0.5×TBE溶液，电泳结束后用凝胶呈像系统观察，并拍照记录。
六,实验数据,结果分析
七,讨论、心得与体会;
分子生物学实验报告二实验名称:二、多聚酶链式反应（PCR）基因扩增及电泳检测
专业班级,姓名,
学号,Email,
实验日期,
同组者,
一,实验名称：PCR扩增二,实验目的和要求：
1.学习和掌握PCR实验原理及操作步骤
2.掌握移液器的使用和电泳操作三,实验仪器,设备与材料
10μl移液枪、100μl移液枪、镊子、离心机、条浒苔,
四,实验原理
PCR (Polymerase Chain Reaction) 技术就是在体外中通过酶促反应有选择地大量扩增（包括分离）一段目的基因的技术。PCR是体外酶促合成特异DNA片段的方法，主要由高温变性、低温退火和适温延伸三个步骤反复的热循环构成,即在高温（95℃）下，待扩增的靶DNA双链受热变性成为两条单链DNA模板；而后在低温（37～55℃）情况下，两条人工合成的寡核苷酸引物与互补的单链DNA模板结合，形成部分双链；在Taq酶的最适温度（72℃）下，以引物3’端为合成的起点，以单核苷酸为原料，沿模板以5’→3’方向延伸，合成DNA新链。这样，每一双链的DNA模板，经过一次解链、退火、延伸三个步骤的热循环后就成了两条双链DNA分子。如此反复进行，每一次循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板，每一次循环都使两条人工合成的引物间的DNA特异区拷贝数扩增一倍，PCR产物得以2n的批数形式迅速扩增，经过25～30个循环后，理论上可使基因扩增109倍以上，实际上一般可达106～107倍。
五,实验步骤
实验流程：
加样
primer1 1μL
primer2 1μL
dNTP 4μL
50μL buffer 5μL
Temple 1μL
ddH2O 37μL
Taq 1μL
2,反应条件
94℃ 3min
94℃ 30s
55℃ 1.5min 30cycles
72℃ 1min
72℃ 5min
4℃ hold
3,电泳
制备0.8％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，取8μlDNA溶液并与1.5μl上样缓冲液混合，用移液枪加入凝胶孔。电泳缓冲液为0.5×TBE溶液，电泳结束后用凝胶呈像系统观察，并拍照记录。
六,实验数据,结果分析
七,讨论、心得与体会;
分子生物学实验报告三实验名称,三、条浒苔总RNA的提取和反转录
专业班级,姓名,
学号,Email,
实验日期,
同组者,
一,实验名称：PCR扩增二,实验目的和要求：
1.学习和掌握植物总RNA的提取方法
2.学习和掌握反转录PCR的方法三,实验仪器,设备与材料
10μl移液枪、100μl移液枪、条浒苔、RNA提取液、PCR仪
四,实验原理
RT—PCR是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要用于对表达信息进行检测或定量分析,还可以用来检测基因表达差异而不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、oligo(dT)或基因特异性的引物（GSP）起始。在实际应用中，RT—PCR又常常分为一步法RT—PCR和两步法RT—PCR。
五,实验步骤
①液氮研磨藻体，分装到1.5ml离心管中末
②向离心管中加入1ml TRIzol，充分振荡；
③12000rmp/10min 取上清
④加200微升氯仿，充分振荡15秒，静置2分钟
⑤12000rpm/15分钟，取上清
⑥加500微升异丙醇，混匀，静置10分钟，12000rpm/10分钟；
⑦去上清，加1ml 75%酒精，混匀，7500rpm/5分钟；
⑧晾晒RNA
⑨30微升DEPC处理水溶解RNA；
制备0.8％琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，取8μlDNA溶液并与1.5μl上样缓冲液混合，用移液枪加入凝胶孔。电泳缓冲液为0.5×TBE溶液，电泳结束后用凝胶呈像系统观察，并拍照记录。
A.反转录反应
1按下列组成配制反转录反应液：
10XRNA PCR Buffer 1μl
MgCl2 (25mM) 2μl
DNTP Mixture (10mM) 1μl
AMV Reverse Transcriptase XL (5U/μl) 0.5μl
RNase Inhibitor (40U/μl) 0.25μl
Oligo Dt-3sites Adaptor Primer (2.5μM) 0.5μl
Positive Control RNA (2X105 copies/μl) 0.5μl
RNase Free dH2O 4.25μl
2按以下条件进行反转录反应
30℃ 10min
50℃ 30min
95℃ 5min
5℃ 5min
六,实验数据,结果分析
七,实验心得与体会
分子生物学实验报告四实验名称,四、定量PCR原理与实验操作
专业班级,姓名,
学号,Email,
实验日期,
同组者,
一,实验名称：定量PCR原理与实验操作二,实验目的和要求：
1.学习和掌握定量PCR原理与应用
2.学习和掌握定量PCR实验操作三,实验仪器,设备与材料
10μl移液枪、100μl移液枪、荧光定量PCR仪,
四,实验原理实时荧光定量PCR（Real-Time Q-PCR）：在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。常规PCR技术:对PCR扩增反应的终点产物进行定量和定性分析，无法对起始模板准确定量，无法对扩增反应实时检测，实时定量PCR技术:利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析.
五,实验步骤准备模板(DNA或RNA，RNA反转录成cDNA)
↓
PCR反应(DNA/cDNA+引物探针+PCR mix)
↓
填样品表(样品名、孔位，样品类型、探针颜色)
↓
设置参数(循环参数、反应体积、熔解曲线)
↓
运行PCR，自动分析数据
↓
进一步分析数据(基线、阈值、CT值、相对表达等)
六,实验数据,结果分析
七,讨论、心得与体会;
分子生物学实验报告五实验名称,五、蛋白质分离纯化
专业班级,姓名,
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实验日期,
同组者,
一,实验名称：蛋白质分离纯化二,实验目的和要求：
1.掌握蛋白质层析技术的原理和实验步骤
2.学习层析仪的使用三,实验仪器,设备与材料层析仪等四,实验原理层析原理：待分离蛋白质溶液（流动相）经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电核多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同的速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的。
五,实验步骤
.柱平衡——样品准备——上样——过柱——收集——洗柱
六,实验数据,
Sephadex G-25层析参数：
样品：高盐BSA蛋白溶液2ml
仪器：蛋白质层析仪 Biologic DuoFlow
Sephadex G-25层析柱规格：1.2cm*20cm（直径*高）
洗脱液：1mM磷酸钠缓冲液（Ph7.4）
流速：1ml/min
七 结果分析
八,实验心得与体会