,基因工程概论,
第一章 导 论第二章 基因操作的工具酶第三章 基因克隆的载体第四章 基因克隆的策略第五章 克隆基因的表达第六章 基因工程的基本技术第一章 导 论第一节 基因工程的诞生第二节 基因工程的研究内容第三节 基因工程的成就和前景展望第二章 基因操作的工具酶第一节 限制性核酸内切酶及其应用第二节 DNA连接酶及其应用第三节 DNA聚合酶及其应用第四节 修饰性工具酶
Genetic engineering is largely an exercise in carefully
controlled enzymology,A variety of enzymes form the
basic toolkit of the genetic engineer,
第三章 基因克隆的载体引 言（ introduction）
第一节 质粒载体（ plasimid vectors）
第二节 噬菌体载体（ phage vectors）
第三节 柯斯质粒载体（ cosmid vectors）
第四章 基因克隆的策略引 言第一节 目的基因的获得第二节 重组载体的构建及细菌转化第三节 重组克隆的筛选和鉴定大肠杆菌作为寄主进行 DNA克隆的实验方案
DNA片段的获得载体构建细菌转化重组体的鉴定限制性内切酶消化 机械切割双链 cDNA
的合成化学法直接合成同聚物加尾粘性末端连接平末端连接加接头造成粘性末端重组噬菌体
DNA转染重组质粒的转化体外包装进行转导表型鉴定 核酸杂交 免疫学分析 酶切鉴定第五章 克隆基因的表达第一节 基因表达的基本条件第二节 原核表达载体的构建第三节 克隆基因在植物细胞中的表达启动子（ promoter）,在基因序列中，标志着转录起始的可被 RNA聚合酶识别的位点 (DNA区段 )，一般位于基因的上游。
终止子（ terminator）,位于基因的编码序列之外（一般在下游）的一段标志着转录停止的 RNA聚合酶识别位点。
有效转录的基本条件
Prokaryotic gene regulation differs from eukaryotic
regulation,but since prokaryotes are much easier to
work with,we focus on prokaryotes at this point.
Promoters are sequences of DNA that are the start
signals for the transcription of mRNA,Terminators
are the stop signals,mRNA molecules are long (500-
10,000 nucleotides).
正确翻译的基本条件
1、具备起始密码子
2、具备终止密码子
3、具有正确的阅读框
Promoter SD ATG Gene TerminatorTAA
mRNA
第六章 基因工程的基本技术第一节 DNA的分离和检测第二节 DNA聚合酶链式反应第三节 DNA的序列分析第四节 植物转基因技术
5’3’
5’
A G C T
ATCAGCGAAT
末端终止法 DNA序列的分析原理示意图农杆菌介导法基因枪法植物转基因技术花粉管通道法其它方法优点,低成本易操作、转基因的低拷贝数低、导入片段的确定性好。 缺点,受作物基因型的影响较大优点,低成本易操作、不受基因型影响、不需要经过组织培养可以获得转基因种子。 缺点,导入片段的确定性差、转化效率很低。
优点
：
不受作物基因型的限制
。
缺点
：
成本高
、
转基因的拷贝数高
、
导入片断的确定性差聚乙二醇法
、
显微注射法
、
激光介导法
、
脂质体介导法基因工程的基本流程基因分离酶切载体酶切基因和载体连接导入细菌重组质粒繁殖重组克隆的选择序列分析和基因表达等研究导入植物细胞
第一章 导 论第二章 基因操作的工具酶第三章 基因克隆的载体第四章 基因克隆的策略第五章 克隆基因的表达第六章 基因工程的基本技术第一章 导 论第一节 基因工程的诞生第二节 基因工程的研究内容第三节 基因工程的成就和前景展望第二章 基因操作的工具酶第一节 限制性核酸内切酶及其应用第二节 DNA连接酶及其应用第三节 DNA聚合酶及其应用第四节 修饰性工具酶
Genetic engineering is largely an exercise in carefully
controlled enzymology,A variety of enzymes form the
basic toolkit of the genetic engineer,
第三章 基因克隆的载体引 言（ introduction）
第一节 质粒载体（ plasimid vectors）
第二节 噬菌体载体（ phage vectors）
第三节 柯斯质粒载体（ cosmid vectors）
第四章 基因克隆的策略引 言第一节 目的基因的获得第二节 重组载体的构建及细菌转化第三节 重组克隆的筛选和鉴定大肠杆菌作为寄主进行 DNA克隆的实验方案
DNA片段的获得载体构建细菌转化重组体的鉴定限制性内切酶消化 机械切割双链 cDNA
的合成化学法直接合成同聚物加尾粘性末端连接平末端连接加接头造成粘性末端重组噬菌体
DNA转染重组质粒的转化体外包装进行转导表型鉴定 核酸杂交 免疫学分析 酶切鉴定第五章 克隆基因的表达第一节 基因表达的基本条件第二节 原核表达载体的构建第三节 克隆基因在植物细胞中的表达启动子（ promoter）,在基因序列中，标志着转录起始的可被 RNA聚合酶识别的位点 (DNA区段 )，一般位于基因的上游。
终止子（ terminator）,位于基因的编码序列之外（一般在下游）的一段标志着转录停止的 RNA聚合酶识别位点。
有效转录的基本条件
Prokaryotic gene regulation differs from eukaryotic
regulation,but since prokaryotes are much easier to
work with,we focus on prokaryotes at this point.
Promoters are sequences of DNA that are the start
signals for the transcription of mRNA,Terminators
are the stop signals,mRNA molecules are long (500-
10,000 nucleotides).
正确翻译的基本条件
1、具备起始密码子
2、具备终止密码子
3、具有正确的阅读框
Promoter SD ATG Gene TerminatorTAA
mRNA
第六章 基因工程的基本技术第一节 DNA的分离和检测第二节 DNA聚合酶链式反应第三节 DNA的序列分析第四节 植物转基因技术
5’3’
5’
A G C T
ATCAGCGAAT
末端终止法 DNA序列的分析原理示意图农杆菌介导法基因枪法植物转基因技术花粉管通道法其它方法优点,低成本易操作、转基因的低拷贝数低、导入片段的确定性好。 缺点,受作物基因型的影响较大优点,低成本易操作、不受基因型影响、不需要经过组织培养可以获得转基因种子。 缺点,导入片段的确定性差、转化效率很低。
优点
：
不受作物基因型的限制
。
缺点
：
成本高
、
转基因的拷贝数高
、
导入片断的确定性差聚乙二醇法
、
显微注射法
、
激光介导法
、
脂质体介导法基因工程的基本流程基因分离酶切载体酶切基因和载体连接导入细菌重组质粒繁殖重组克隆的选择序列分析和基因表达等研究导入植物细胞
