3、固定相和流动相
3.1 固定相
3.1.1液固吸附色谱固定相 —— 吸附剂
（ 1）表面多孔型固定相：实心玻璃珠外覆盖一层多孔活性材料，如硅胶、氧化铝、分子筛等。
（ 2）全多孔型固定相：直径为 10nm的硅胶微粒凝聚而成。易实现高效、高速。适合复杂物分析主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中。
（ 3）固定相的选择,比表面积、含水量。
大分子量选大孔径，含水量多 k小，容量小。
3.1.2液液吸附色谱固定相涂有固定液的载体，涂渍方式机械涂层和化学键合。
化学键合固定相,将有机基团利用化学反应通过共价键结合到载体 （ 硅胶 ） 表面而形成 。
化学键合相色谱法,稳定,不易流失,适于梯度淋洗,
（ l） 硅酸酯 （ ≡ Si一 OR） 键合固定相,用醇与硅醇基发生酯化反应：
≡ Si－ 0H＋ ROH→≡Si － OR＋ H20
易水解且受热不稳定,适用不含水或醇的流动相 。
（ 2） 硅烷化 （ ≡Si—O－ Si－ C） 键合固定相
≡ Si－ 0H＋ C18H37SiCl3→C 18H37Si (≡Si － O) ＋ H20
这类键会固定相具有热稳定好,不易吸水,耐有机溶剂的优点 。 能在 70℃ 以下,PH=2～ 8范围内正常工作,应用较广泛,
3.2 流动相
3.2.1 在键合相色谱中选择流动相的一般原则
（ 1） 溶剂对于待测样品,有合适的极性和选择性 。
（ 2）溶剂要与检测器匹配。检测波长比溶剂的紫外截止波长要长。所谓溶剂的紫外截止波长指当小于截止波长的辐射通过溶剂时，溶剂对此辐射产生强烈吸收，此时溶剂是光学不透明的，干扰组分吸收测量。
（ 3）高纯度。引起基线不稳，或产生“伪峰”。
（ 4）化学稳定性好。不能与样品发生反应或聚合。
（ 5）低粘度。高粘度溶剂，会增高压力，不利分离。
常用的低粘度溶剂有如丙酮等。但粘度过于低的易形成气泡，影响分离。如戊烷、乙醚等。
3.2.2 改善色谱分离选择性的方法
（ 1）调节流动相的极性
（ 2）向流动相中加入改性剂
① 离子抑制法 ② 离子强度调节法
3.2.3 流动相的选择吸附色谱、分配、离子、凝胶色谱等
3.2.3.1液固吸附色谱：样品与洗脱剂的极性一致。
3.2.3.2液液分配色谱：流动相和固定相极性不同。
正相键合相色谱法：键合固定相的极性大于流动相的极性。用于分离异构体和极性化合物。
反相键合相色谱法：键合固定相的极性小于流动相的极性，分离非极性物质，其应用范围更广泛。
4,色谱分离条件选择及定性定量分析
4.1 色谱分离条件选择
减小柱内展宽，提高柱效
（ 1）固定相：①粒度小，均匀，以减小涡流扩散和流动相传质阻力；②改进结构，采用大孔径和浅孔道的表面多孔型载体或全多孔微粒型载体，减少滞留流动相传质阻力。
（ 2）流动相：选用低粘度的流动相，有利于增大组分在溶剂中的扩散系数 Dm，减少传质阻力。
（ 3）流速：从 H-U曲线可知,HPLC的最佳流速在流速很小处，减少流速有利于提高柱效，但为加快分析速度，常采用比最佳流速高数倍的流速。
（ 4）柱温：提高柱温，可降低流动相粘度，减少传质阻力，但柱温升高将使分辨率降低，柱寿命短，易产生气泡，一般在室温下进行。
4,色谱分离条件选择及定性定量分析
柱外展宽 (又称,柱外效应,)
指从进样点到检测池之间除柱子本身以外的所有死体积所引起的色谱峰展宽，柱效下降。可分为：
（ 1）柱前展宽：主要由进样引起，减小进样器的死体积，用阀门进样可减少柱前谱带展宽，提高柱效。
（ 2）柱后展宽：主要由接管、检测器流通池体积及检测器响应时间等因素所引起。因此，用短而内径细的接管，减少流通池体积，改进检测器和记录系统的响应速度等都是克服柱后展宽的途径。
4.2 定性定量分析归一化法,外标法和内标法等 。
5、高效液相色谱法的特点及应用
5.1 无机分析中的应用
5.2 在生物化学和生物工程中的应用
5.3 食品分析
5.4 环境分析
5、高效液相色谱法的特点及应用
HPLC应用远广于气相色谱法。广泛用于石油化学、生命科学、临床化学、药物研究、环境监测、食品检验及法学检验等领域。
一,在食品分析中的应用
1．食品营养成分分析：蛋白质、氨基酸、糖类、色素、维生素、香料、有机酸、
有机胺、矿物质等；
2．食品添加剂分析：甜味剂、防腐剂、着色剂、抗氧化剂等；
3.食品污染物分析：霉菌毒素、微量元素、多环芳烃等。
二,在环境分析中的应用多环芳烃（特别是稠环芳烃）、农药（如氨基甲酸脂类，反相色谱）残留等。
三,在生命科学中的应用生物化学家和医学家在分子水平上研究生命科学、遗传工程、临床化学、分子生物学等必不可少的工具。
1,低分子量物质，如氨基酸、有机酸、有机胺、类固醇、卟啉、糖类、维生素等的分离和测定。
2,高分子量物质，如多肽、核糖核酸、蛋白质和酶（各种胰岛素、激素、细胞色素、
干扰素等）的纯化、分离和测定。
四,在医学检验中的应用体液中代谢物测定；药代动力学研究；临床药物监测：
1,合成药物：抗生素、抗忧郁药物、黄胺类药等。
2,天然药物生物碱（吲哚碱、颠茄碱、鸦片碱、强心甙）等五．在无机分析中的应用,阳、阴离子的分析等。
建立高效液相色谱分析方法的一般步骤
① 根据被分析样品的特性选择适用于样品分析的一种高效液相色谱分析方法 。
② 选择一根适用的色谱柱,确定柱的规格
（ 柱内径及柱长 ） 和选用固定相 （ 粒径及孔径 ） 。
③ 选择适当的或优化的分离操作条件,确定流动相的组成,流速及洗脱方式 。
④由获得的色谱图进行定性分析和定量分析。
表 1 液相色谱分离类型选择参考表溶于水 ——排阻色谱,水为流动相相对分子质量
＞ 2000 不溶于水 ——排阻色谱,非水流动相同系物 ——分配色谱不溶于水 异构体 ——吸附色谱样品 分子大小差异 ——排阻色谱反相液一液色谱相对分子质量 溶于水,不离解
＜ 2000 排阻色谱,水为流动相碱 ——阳离子交换色谱溶于水,可离解酸 ——阴离子交换色谱溶于水,离子与非离子 — 反相离子对色谱离子色谱法离子色谱（ ion chromatography,IC）
优点,1）简单，快速。 2）灵敏度高 nmol/L
3）选择性好。 4）应用范围广。
一、基本概念
1、离子色谱：是以离子交换树脂为固定相，洗脱液为流动相的一种柱色谱。
2、原理：试样中各离子对交换树脂的亲和力不同，在色谱柱上移动的速度不同。而分离成不连续的谱带，
再依次被洗脱液洗脱，以时间为横坐标，信号为纵坐标，即可得到一张 IC图谱。
3、离子交换树脂的类型和性能：
1）类型：阳离子交换树脂，阴离子交换树脂两大类。
R-SO3-H+ +Na+=R-SO3-Na++H+
R-N(CH3) 3+Cl- + OH+ =R-SO3- H+ +Cl-
2）性能指标：交联度和交换容量
4、选择系数,R-A+ +B+= R- B++ A+
二、离子色谱仪 洗脱液储器、泵、进样阀、
1、分离柱
2、抑制住
3、检测器三、常用的洗脱液四、影响色谱峰扩张的因素五、离子色谱法的类型
1、高效离子色谱法
2、高效离子排斥色谱法
3、流动相离子色谱法六、色谱条件的选择
1、树脂的选择
2、洗脱液的选择
3、流速的选择七、定性、定量分析及其应用毛细管电泳一、概述二、毛细管电泳的分离分析方法
1、毛细管区带电泳
2、胶束电动力学毛细管色谱（ MECC）
3、毛细管凝胶电泳（ CGE）
4、毛细管等电电泳 (CIEF)
5、毛细管等速电泳 (CITP)
三、毛细管电泳仪及其操作
1、分析流程
2、毛细管电泳仪的基本结构及其操作技术四、毛细管电泳分析法的应用
1、血清中碘的测定
2、有机酸测定
3、电中性物质的分离
4、鸦片类毒品的分离谢谢！