《动物繁殖学》实验指导 动物科学、动物医学专用 杨素芳 黄凤玲 蒋如明 陆凤花编 广西大学动物科技学院 2005年10月 目 录 实验一 实验二实验三 实验四 实验五 实验六 实验七 实验八 采精……………………………………………………………………….3 精子活率、密度、畸形率和精液PH值的测定………………………..6 公畜精液的稀释及低温保存…………………………………………….10 精液的冷冻保存…………………………………………………………13 活体母牛的直肠触诊及直肠把握输精…………………………………16 母牛的发情鉴定…………………………………………………………22 妊娠诊断…………………………………………………………………25 兔的超数排卵和卵子、胚胎的收集……………………………………29   实验一 采精 一、实验目的 认识各种动物（尤其是家畜）的采精器具；了解假阴道的构造及其各部分的用途；初步掌握假阴道的安装方法；练习各种动物采精的操作过程，为以后独立采精打下基础。 二、材料和设备 各种动物（尤其是家畜）的假阴道、75％酒精棉球、0.1%高锰酸钾溶液、消毒用的医用中性石腊油、长柄钳、漏斗、量杯、温度计、镊子、玻片、玻棒、肥皂、毛巾、脸盆、提桶、麻绳、配种架、采精台、台畜、经调教好采精用的种公畜（牛、羊、猪、兔)、显微镜、保温箱等。 三、 方法 教师讲解假阴道组成部件的名称和用途，比较各种动物（尤其是家畜）假阴道的异同，做假阴道安装的示范，并讲解各种动物（尤其是家畜）的采精方法和步骤；然后学生分组练习假阴道的安装及采精方法，最后教师做各种动物（牛、羊、猪、兔）的采精示范。 四、内容 （一）假阴道的构成 各种家畜的假阴道的大小和形状有所不同，但都由外壳、内胎、胶漏斗、集精瓶、气嘴、固定圈等组成。 1、外壳：由硬质橡胶制成（亦可用其他原料如塑料、竹筒等代替），中间有一注水孔。 2、内胎：由一长筒形的优质橡胶制成，其和外壳共同起到容纳热水和空气的作用。 3、胶漏斗：由内胎加工而成，上面有一气孔或缝，其作用是将精液导入集精瓶。 4、集精瓶：一般由有色玻璃构成（亦可用其他容器代替），其作用是贮存精液。 5、气嘴：由电木或其他材料制成，起到气体开关作用。 6、固定圈：一般由较柔软的棉扁绳构成（亦可其他材料代替），起固定作用。 （二）假阴道的安装 1、安装前的检查 （1）外壳是否有裂缝和小孔。 （2）内胎是否破烂，光滑面是否在里边，边缘是否有裂口。 （3）气嘴是否损坏或漏气，开与关是否灵活。 2、安装方法 （1）将内胎放入假阴道外壳中，光滑面向内腔，并将其等长地伸出外壳两端。 （2）将外壳垂直地夹在两腿之间，用手把伸出两端的内胎翻转与外壳之上，翻转后内胎要平整而不扭转。 （3）在离注水孔近的一端安上胶漏斗。注意漏斗上的气孔要与外壳上的注水孔成九十度角，气孔向上，注水孔向安装者。 （4）在外壳两端约1～1.5cm处用扁棉绳使劲扎紧。 （5）在注水孔上安好气嘴并检查。如无漏气现象，即取下气嘴并用长柄钳取75%酒精棉球充分消毒内胎。 （6）待内胎里酒精挥发完后，用生理盐水或稀释液冲洗1～2次，抖竿即可装上集精瓶。 （7）于注水孔注入50℃左右的热水，水温可视环境温度适当增减，要求采精时内胎温度在38～42℃之间为原则（兔的假阴道容水量小，热量损耗快，故水温要增高到70℃左右）。注意量约八成满即可（牛、猪500～300CC；羊200～250CC）。 （8）装上气嘴并充气，使内胎中央形成“Y”字形。 （9）在内胎“Y”字形上滴入消毒过的医用中性石蜡油少许，并用消毒过的温度计将石蜡油涂抹于假阴道内胎的1/3深度，并测定内胎温度，一般以在38～42℃之间为宜。 （三）采精 1、公牛的采精 （1）将台牛固定于配种架内，尾巴拽于左侧。用0.l%高锰酸钾溶液洗擦并抹干台牛的尾根、后臀部及会阴部。 （2）用0.l%高锰酸钾溶液洗擦并抹干公牛的包皮及其周围。 （3）采精员右手持准备好的假阴道立于牛臀部右侧。 （4）公牛临近台牛时，采集员应高度集中精神，注意公牛的性反应情况。 （5）当公牛爬跨台牛并伸出阴茎时，采精员应迅速将假阴道靠于台牛臀部右侧并向上斜成35°～45°角（角度大小应视公牛与台牛体型大小而定，总之要使假阴道与公牛阴茎成一直线为原则）；与此同时，左手以敏捷的动作准确地托住公牛的包皮，将阴茎导入假阴道内。当公牛突然向前猛冲时，即表示己经射精。随即，公牛便从母牛背上下来，此时切勿马上取下假阴道，而应使假阴道顺从公牛而下，以尽可能收集全部精液。待阴茎收回包皮内时才拿开假阴道，并垂直放气放水，让精液全部流入集精瓶时才取下进行精液品质检查。（操作时，不能用手抓拿阴茎，也不要用假阴道去套公牛的阴茎，否则，公牛均不射精！同时要注意安全，既要胆大又要细心，以防踩伤）。 （6）用肥皂水洗擦采精器具，然后用清水冲洗干净，并悬挂于纱窗内凉干。 2、公羊的采精 公羊的采精方法大致与牛相同。但公羊的射精比牛快，所以，采精时的动作要迅速和准确。此外，由于羊比较矮小，采精员不能站立操作，而应以蹲状采精，其余过程同牛。 公猪的采精 公猪的采精用手握法或假阴道法。台猪往往不用真畜而以采精架（台）代替。 （1）手握法 ①采精员一手戴上胶手套，另一手拿集精瓶立于采精台后面的右侧。 ②将公猪赶入采精室，并用毛巾蘸0.l%高锰酸钾溶液将包皮洗净抹干，同时将包皮盲囊中的余尿挤出。 ③待公猪阴茎在空拳中转动一定时间后，空拳由松至紧将龟头抓住。不让阴茎来回抽动，同时使阴茎龟头的游离端伸出空拳约l～2cm左右，并顺势将阴茎往前拉出。同时，手指作有节律性的一紧一松的握压，促使公猪射精。 ④当公猪附伏于采精台上不动时，即表示开始射精，持集精瓶一手应注意收集精液（集精瓶应用单层纱布盖住以分离精液中胶样物）。 （2）假阴道法 ①采精员手握假阴道（也可将假阴道安装于采精台的腹侧后面）。 ②助手将公猪赶入采精室，并用0.l%高锰酸钾溶液将包皮洗净抹干。 ③当公猪爬上采精台并伸出阴茎时，采精员即蹲下，先将包皮盲囊中的余尿挤出，然后将阴茎导入假阴道。此时公猪不停地作交配动作，采精员应不断地有节律地握压连在假阴道气嘴上的双连球。让假阴道内的压力时紧时松，促使公猪射精。 ④当公猪射精时。假阴道接胶漏斗一端稍放低，以防精液倒流，同时应注意观察是否有副性腺分泌物（半透明胶状物）阻塞集精瓶口，如有，应及时排除。以利精液流入集精瓶。 ⑤采精用具的处理同牛。 4、公兔的采精 （1）用0.l%高锰酸钾溶液洗净抹干公兔和台兔的外生殖器官周围。 （2）将台兔放入公兔笼中，以诱起公兔的性欲，但勿使其发生本交。当公兔有性的要求后，即可将台兔拿出。 （3）稍停一下后，再将台兔放入公兔笼，采精员一手固定台兔的颈皮和耳朵，使台兔臀部向着公兔，另一手持假阴道。当公兔爬跨台兔后，持假阴道一手即伸入公兔的后腹部接纳阴茎。 （4）当公兔阴茎插入假阴道后，即向前一跳，并发出“咕”的叫声，便从台兔背上倒下时，则表示公兔已经射精。 （5）将台兔和假阴道取出，并打开假阴道上的气嘴放水放气，然后取下集精瓶。 （6）采精器具用后洗涤干净，并凉挂于原来位置，下次再用。 五、作业 l、仔细观察采精过程，分析各种公畜的性行为。 2、简单叙述各种家畜的采精方法有何异同？ 3、你认为目前的采精方法有什么优缺点？如何改进？ 实验二 精子活率、密度、畸形率和精液 PH值的测定 一、目的 通过实验，了解精子的运动方式；识别正常精子和异常精子的形态。初步学会和掌握精液密度、精子的活率、畸形率和精液酸碱度（PH）的测定方法。熟悉肉眼检查精液品质的方法。 二、材料 家畜精液、载玻片、凹灶玻片、盖玻片、球棒、医用中性石腊油、75%酒精棉球、酒精灯、伊红染液、纱布、棉花、火柴、PH比色器、PH试纸、烧杯、显微镜、保温箱。 三、方法步骤 （一）精液的肉眼检查? 1、射精量：将采得的精液倒入有刻度的试管或杯中，测其容量。各种家畜的平均射精量为：牛4（2～10mL）；羊1（0.7～2 mL）；猪250（150～500 mL）。 2、观察精液的色泽并嗅闻气味。 3、云雾状的观察：观察精液的云雾状翻腾滚动。按以下符号记入表内，云雾状显著者，以“+++”表示，有云雾状以“++”表示；云雾状不明显者以“+”表示。 （二）精子活率测定 测定精子活率的方法很多，有活精子计算法，死活精子染色法和目测法。目测法因使用的材料和工具不同，又可分为平板压片法、悬滴检查法和油盖检查法三种。现将目测法的三种方法的实验步骤分别介绍如下： 1、平板压片法 （1）将载玻片、盖玻片、玻棒等接触精液的器具洗净候干备用。用时先用蘸有75％酒精的脱脂棉球抹擦之，然后通过酒精灯进行火焰消毒，待冷候用。 （2）滴一滴精液（如太浓，可先用生理盐水稀释）于消毒过的载玻片上，盖上消毒过的干净盖玻片。 （3）将制好的片子放在显微镜载物台上，先用低倍镜观察，后用高倍镜（400～600倍）观察（如气温低，须将显微镜置于保温箱内升温到37℃后，再进行镜检）。 2、悬滴检查法 （1）滴一小滴精液于消毒好的盖玻片中央。 （2）在凹灶处周围涂上少量水，然后将凹处对准盖玻片上的精液，并覆盖于盖玻片上，使其贴在一起。 （3）将玻片倒转过来，使精液滴悬挂于盖玻片下，便可放在显微镜下观察。 3、油盖检查法 （1）滴一滴精液于消毒过的载玻片上。 （2）在精液上面滴一滴医用中性石腊油即可放在显微镜下观察。 4、活率的评定 （1）在显微镜下观察精子的运动方式，并区别直线前进式运动、旋转式运动和摆动式运动的精子活动的情况。 （2）根据视野中呈直线前进式运动的精子所占比例进行测定。如全部精子均呈直线前进式运动，看不到非直线前进式运动的精子，可评为“1.0”分；如果视野中只有80％的精子呈直线前进式运动，其余20% 呈非直线前进式运动，则评为“0.8”分，其余依此类推。测定时要求多看几个视野，然后进行综合评定。在一个视野中，如果呈前进式运动的精子占多数，则重点估测非前进式运动的精子所占比例，反之则估测前进式运动的精子所占比例。 （三）精液密度检查 测定精液密度的方法有估测法，红细胞计数法和光电比色法。其中估测法通常结合精子活率进行检查，一般用测定活率的平板压片法进行。 取一小滴精液于清洁的载玻片上，加上盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，但不得有气泡，也不能使精液外流或溢于盖玻片上，置显微镜下放大400～600倍观察，按下列等级评定其密度（如图2-1）。  1、稀：精子分散存在，精子间的空隙超过一个精子长度，这种精液一般每毫升所含精子在2亿以下。 2、中：精子之间的空隙明显，精子彼此之间距离约有一个精子的长度。有些精子的活动情况可以清楚地看到。这种精液的密度评为“中”， 一般每毫升所含精子数约在2～10亿之间。 3、密：在整个视野中精子密度很大，彼此间空隙很小，看不清各个精子运动的活动情况，这一级属于“密”，一般每毫升含精子数约在10亿以上。 （四）PH的测定 1、比色试纸法 （1）取一滴精液于清洗干净的凹玻片上，然后用一小张精密试纸（6.5～8.0）放于精液滴上。 （2）让精液渗湿试纸后即在精密试纸比色图上比色，并记录结果。 （五）精子畸形率的检查 1、滴一小滴精液于消毒过的载玻片一端。 2、用另一块边缘光滑的玻片（最好为凹灶玻片）的一端斜抵于精液前成35℃角，使凹灶玻片底面与精液接触，并向两旁散开后，即向载玻片的另一端轻快推去，使精液均匀地涂于载玻片上。（见图2-2） 3、让抹片风干后，先在显微镜下观察所抹片子如何，如理想，则可染色；否则，洗去重做。 4、在风干的抹片上滴上2 ～3滴5%伊红染液，并用玻棒稍为推开。染色3～5min，然后轻轻用水洗去多余的染料，候干镜检。 也可以用下列方法固定染色。（1）用0.5%的龙胆紫酒精染色3min，水洗，待干后即可镜检（也可用由普通红蓝墨水代替）。（2）置95%酒精中（或5%福尔马林溶液）固定5～6min，取出以水冲洗后，凉干或烘干，用蓝、红墨水等染色3～5min，再用水冲洗，干燥后置于显微镜下检查。 5、镜检：在任意若干个视野中计算200个精子中有多少个畸形精子（注意区别正常精子和头、颈、中段部以及尾部畸形的精子）。并记载于表中。（见图2-3） 6、计算精子的畸形率： 精子畸形率 = 畸形精子数 /（正常精子数＋畸形精子数）×100% 四、作业 1、列表记载本次实验所得的精液密度、精子的活率及精液PH数值。 2、将精子畸形率的检查结果详细记入下列表格中。 项目 正常精子 畸形精子 总观察数 畸形率（%）    头部 颈部 中段 尾部 总数    观察数          总计          在检查精子活率时，为了获得比较准确的结果，你认为应注意哪些事项？ 实验三 公畜精液的稀释及低温保存 一、目的 1、熟悉精液稀释液的配制方法； 2、掌握低温保存的技术。 二、材料 精液、玻棒、玻片、小试管、试管架、烧杯、三角烧瓶、温度计、量筒、注射器、标记笔、电炉、铝锅、小天平、纱布、药棉、胶圈、软木塞、蒸馏水、柠檬酸钠、葡萄糖、新鲜牛奶、新鲜鸡蛋、医用中性石腊油或白腊、75%酒精棉球、精密试纸、显微镜、冰箱或冰壶、青霉素、链霉素等。 三、方法和步骤 （一）稀释液的配制 1、牛奶稀释液（猪、牛均可用） （1）将新鲜牛奶用2～3层纱布滤入消毒过的烧杯，然后加盖隔水煮沸消毒10min，取出冷却。 （2）待牛奶冷却后，用消毒过的玻棒将奶皮去掉。 （3）按每mL牛乳加青霉素和链霉素各1000 IU，混合均匀即成。 2、蛋黄、葡萄糖稀释液（供猪用） （1）用小天平秤取2.5g葡萄糖置于消毒过的烧杯中，然后加入蒸馏水50mL。待葡萄糖完全溶解后，加盖隔水煮沸后消毒10min，然后取出冷却备用。 （2）将鸡蛋洗净抹干并用75%酒精消毒。待酒精完全挥发后。用消毒过的镊子从蛋的中间将蛋壳打成两段（注意不要将蛋壳打碎）然后互相倾倒直到蛋白流尽为止，流出的蛋白装在小烧杯内，而蛋黄留在蛋壳里或者倒出装在消毒过的培养皿里，然后用消毒过的注射器穿过蛋黄膜吸取蛋黄。注意不要吸取蛋黄膜。 （3）按比例吸取蛋黄加入于上述消毒好的葡萄糖液中（蛋黄与葡萄糖液的比例为1：4）。并将注射器反复抽打（即吸入和压出），直至蛋黄完全溶解于葡萄糖液中为止。抽打时，要注意注射器连接针头的一端不要离开液面，以免形成许多气泡。 （4）按每mL蛋黄葡萄糖液加入青霉素和链霉素各1000 IU，充分混合均匀便成。 3、蛋黄柠檬酸钠液（供牛用） （1）用小天平秤取2.9g柠檬酸钠（二水）置于消毒过的烧杯申，并加入蒸馏水100mL溶解后，加盖隔水煮沸消毒10min，取出冷却，备用。 （2）用消毒过的注射器吸取蛋黄（方法与配制蛋黄葡萄糖液同）。 （3）量取冷却后的柠檬酸钠液37.5mL装入另一消毒过的烧杯中，然后加入蛋黄12.5mL混合均匀（混合方法与蛋黄葡萄糖液同）。 （4）按每mL蛋黄柠檬酸钠液加入青霉素和链霉素各1000 IU混合均匀即成。 （二）精液的稀释与分装 l、将精液和稀释液同置于室温中存放10min左右，使其温度一致。 2、检查精子的活率，要求活率在0.7以上者，方可作稀释保存用。 3、用清毒过的注射器吸取少量的稀释液冲洗贮精瓶。 4、用消毒过的注射器将精液量入贮精瓶。 5、按稀释比例将上述三种稀释液分别沿瓶壁缓慢加入精液中，并轻轻摇动使其混合均 匀。 6、取稀释后的精液一滴于载玻片上镜检精子活率。 7、稀释后的活率如合格，即可按一定的剂量进行分装，每组稀释液分装7管。 8、每管加入消毒过的医用中性石腊油于精液面上，约l～2mm厚度。 9、贴上标签，注明畜别、公畜号、精液号数、稀释液种类和日期等。 （三）降温与保存 将分装好的精液每组一支扎成一捆（用胶圈扎紧），放在冷水盆中然后放入冰箱中保存。 （四）精液保存效果的测定 每天取出一捆，逐管进行活率检查，直至精子全部死完为止，检查结果记录于表中。 四、注意事顶 1、接触精液的用具，事先必须经过充分洗涤和消毒。 2、配制稀释液时，药物的称量要准确。 3、整个实验过程，操作应迅速，尽量做到无菌畜操作，以防精液受污染。 4、严防水份、酒精以及其他一切有害物品混入。 5、避免阳光或紫外线直接照射精液。 五、作业 l、将原精液的性状检查结果填入下表。 采精日期 公畜号数 射精量 颜色 混浊度 密度 活力 PH值 备注                                          2、将保存的精子活率检查结果记入下表。 检查时间 精子活率 稀释液种类             牛乳             蛋-葡液             蛋-柠液              3、根据上述检查结果计算精子活率0.5（猪），0.6（牛）的保存时间，精子存活指数及精子总存活时间，比较其保存效果。 实验四 精液的冷冻保存 一、目的要求 练习公猪、公牛精液冷冻保存的方法，要求学会： 1、稀释液和解冻液的配制方法； 2、精液的稀释、降温、平衡及制冻的技术； 3、冷冻精液的解冻技术。 二、材料 公猪精液、公牛精液、新鲜牛奶、新鲜鸡蛋、葡萄糖、蔗糖、甘油、柠檬酸钠（二水）、蒸馏水、量筒、玻璃注射器、烧杯、三角烧瓶、滴管、冰壶、保温杯或小液氮罐或泡沫盒、冰、液氮、0.25mL塑料吸管、冷冻架、温度计、水盆、纱布、棉花，抹镜纸、75%精棉球、镊子、捞筛、液氮罐、载玻片、小玻棒、石腊油、显微镜、水浴锅、铝锅、电炉、标记笔等。 三、方法与步骤 （一）公猪精液的冷冻保存方法 本次实验为精液的颗粒冷冻，制冻采用吊盆法。在液氮中（－196℃）保存。 1、稀释液及解冻液的配制 （1）稀释液的配制 ①用天秤分别称取葡萄糖4g、蔗糖1.2g，放入干净的烧杯中，然后加入蒸馏水57mL。搅拌混合均匀，加盖，置于水浴锅中隔水煮沸消毒10min，取出冷却备用。 ②将新鲜牛奶用3～4层纱布滤入干净烧杯。并加盖隔水煮沸消毒10min，取出冷却后，用消毒过的玻棒除去奶皮备用。 ③分别用消毒过的量筒量取葡萄糖、蔗糖液28.5mL、牛奶15mL和甘油1.5mL置于另一消毒过的烧杯中，然后再用消毒过的注射器吸取蛋黄5mL加入其中，反复抽打，使其混合均匀，便成稀释液。 （2）解冻液的配制 用天秤分别称取葡萄糖1.5g、柠檬酸钠（二水）0.75g置于干净的烧杯中，再加蒸馏水50mL，加盖隔水煮沸消毒10min，取出冷却后，加入安那咖注射液2ml便成解冻液。 2、精液的稀释 （1）将采得的精液检查其性状，包括颜色、混浊度、密度、活率及PH等顶目，并将结果记载于表中，要求活率达0.7以上的，始供稀释用。 （2）将精液与稀释液同置于室温中10min，使二者的温度一致，便按1：l的比例分别量取所需量置于消毒过的三角烧瓶中，轻轻混合均匀，镜检精子活率。 3、降温平衡 将稀释好的精液放在装有冷水的烧杯中，再移入维持7℃的冰壶里平衡1h，然后镜检精子的活率，要求活率不低于0.6，始供制冻。 4、制冻 （1）将保温杯或冰壶用小量液氮预冷2min，然后装入液氮约7成满，并将制冻用的吊盆平稳地固定于离液氮面约1～1.5cm处，加盖预冷两分钟。 （2）揭开壶盖，用滴管吸取平衡过的稀释精液，迅速滴在吊盆的凹槽内，每滴约lmL。滴完，加盖l～2min，然后揭开壶盖，当精液完全冻结，并发出“喳喳”声时，即可铲脱并倒入液氮内进行冷冻保存。 5、解冻 （1）将消毒过的小烧杯加入解冻液1mL放在50℃水浴锅进行预热。 （2）由液氮中取出一颗冷冻精液放入预热过的解冻液内并旋转摇动之，待冻精刚好解冻即提出水浴，镜检精子活率，并将结果记入表中。 （二）公牛精液的冷冻保存方法 本次实验为精液的细管冷冻，液氮熏蒸，在液氮中（－196℃）保存。 1、稀释液的配制 （1）天秤分别称取乳糖5.35g、柠檬酸钠0.04g，放入干净的烧杯中，然后加入蒸馏水50mL。搅拌混合均匀，加盖，置于水浴锅中隔水煮沸消毒10min，取出冷却备用。 （2）天秤分别称取青霉素0.0685g，链霉素0.041g置入以上所配制的乳糖-柠檬酸钠液中，再用注射器取甘油4.8mL和蛋黄10mL加入其中，反复抽打，使其混合均匀，便成稀释液。 2、精液的稀释与分装 （1）精液洗稀释方法同上，按1：3～5的比例进行稀释，然后镜检精子活率。 （2）取0.25mL塑料细管进行稀释精液的分装、封口和标记。 3、降温平衡 将分装好的精液用4～8层纱布包裹好，装于塑料袋中，置入4～5℃恒温冰箱中平衡2～3h。而后镜检精子的活率，要求活率不低于0.6，始供制冻。 4、制冻 （1）将小液氮罐、泡沫盒或者其它冰壶用小量液氮预冷2min，然后装入液氮约7成满，并将制冻用的铁架子平稳地固定于离液氮面约2～3cm处，加盖预冷2min。 （2）揭开壶盖，先将细管表面的水分擦干，摊放在冷冻架上，单层摆放，加盖2～3min，然后浸入液氮中保存。 5、解冻 （1）将消毒过的小烧杯加入温水37～40℃。 （2）用镊子取液氮罐中的细管冻精，在空气中停留10s后，投入温水中解冻，待细管中冻结的全部溶化时（大约10s）即可取出，用消毒纱布擦干，镜检精子活率，并将结果记入表中。 四、作业 1、将本次实验结果记入下表： 日期 气温 畜别 公畜号数 射精量 颜色 混浊度 密度 PH值 原精液活率 稀释后活率 冻前活率 解冻后活率 精子复苏率 备注                  2、为了提高解冻后的精子活率（即复苏率），你认为应注意哪些事顶？ 3、在此次实习中，你认为在操作过程中存在着什么问题，应如何改进？ 实验五 活体母牛的直肠触诊及直肠把握输精 一、目的 1、本次实验主要掌握直肠触诊要领、触摸卵巢的方法及卵巢的形态、大小等感觉，掌握子宫的触摸方法。 2、了解母牛的输精过程，学习母牛输精方法。 二、材料 母牛、输精器、玻璃扩张简、肥皂、手巾、提桶、0.1%高锰酸钾溶液、工作服、水鞋等。 三、方法步骤 （一）母牛的直肠触诊 1、直肠检查前的准备工作 （1）将受检母畜保定于六柱栏内，防止检查人员被踢伤。 （2）为了避免肠胃中内容物过多时妨碍操作，可事先禁食半天，或临检查时用温水灌肠。 （3）剪短指甲并锉圆，在手臂上涂肥皂沫以滑润，便于通过肛门。 （4）将受检母畜的尾巴拉向一侧。 2、检查方法 （1）检查的操作要点 ① 将被检母畜保定在六柱栏（诊疗架）内。 ② 助手将被检母畜的尾巴拉向一侧。 ③术者将衣袖挽至肩关节处，手臂上涂以润滑剂（石蜡油或肥皂水），有条件者可戴上长臂手套（操作者较多时，不宜用长臂手套，以防止刺激性过强导致直肠出血）。 ④术者站立于被检母牛的正后方，给母畜的肛门周围涂以较多的润滑剂，并抚摸肛门（起安抚作用）。 ⑤术者将手指并拢成楔状，手心向上，以缓缓地旋转动作伸入肛门。对于体型较小的母畜，掌心应朝向一侧，以便进入肛门，因为尾椎上下活动的范围较大，而左右横径由于坐骨粗隆的限制，不便扩张。 ⑥手臂伸入肛门后，直肠内如有宿粪，可用手指扩张肛门，使空气由手指缝进入直肠内，促使宿粪排出（空气排粪法），否则要以手指掏出。掏出粪便时，手掌须展平，少量而多次地取出，切勿抓粪一把向外硬拉。最好设法促使母畜自动排粪。其方法是将手掌在直肠内向前轻推，以阻止粪便排出，待粪便蓄积较多时，逐渐撤出手臂，即可促使排尽宿粪。 ⑦掏粪完毕，应再次向手臂涂以润滑剂，伸入直肠，除拇指外，将四指并拢探入结肠内，即可探摸欲检查的器官。 在直肠检查过程中，往往遇到以下三种情况，应予正确处理。 ①母畜强烈努责，将手臂向外排挤。此时手臂切忌向里硬推，否则可能会使肠壁穿孔。当母畜努责时，助手可用手指掐捏母畜的腰部，或抚摸阴蒂，或抓提膝部皮肤皱襞，或喂给饲料，以减弱或停止其努责。 ②结肠及直肠持续性收缩，肠壁紧套手术者的手臂上，但并不向外挤压，致使手臂无法自如地探摸。此时可采用上述制止努责的方法，使肠臂停止收缩。 ③直肠壁变硬，向骨盆腔周围臌起呈坛状，手掌在直肠内拍打时，可以听到瓷坛声。遇此状态，可将手指聚拢成锥状，缓缓地向前推进，刺激结肠的蠕动后移，以促使直肠壁舒展变软。如果上述措施无效，只有耐心等待，其自行舒展后，再行探摸触诊。 （2）直肠检查操作注意事项：为了避免发生操作事故，现就人、畜的安全问题做如下说明： 为了检查人员的安全，应注意以下事项： ①严冬及早春季节施行操作时，注意保暖防寒措施，防止操作人员受冻感冒。必要时，可定制棉背心，以确保操作人员不受冻。 ②手臂如有破伤口，不应操作。有条件时应提供长臂手套后，再进行直肠检查。 ③保定架的后两柱之间，不可架设横木，或拴系绳索，以免母畜滑倒下卧时导致操作人员手臂骨折或关节脱臼。 ④检查过程中，时刻提防母畜蹴踢。母牛后腿的外展肌发达，因此，操作者不宜站在母牛的外侧，而应站在母牛的正后方。 ⑤每次直肠检查完毕后，要用消毒剂（一般可用75%酒精，或0.2%的新洁尔灭）洗涤消毒手臂，并涂以皮肤滋润保护剂，以免皮肤糙裂。 为了被检查母畜的安全，应注意以下事项： ①检查者的指甲必须剪短锉圆，并要磨光（在粗布上磨擦）。 ②检查者的手臂上须涂以润滑剂，切忌用干涩的手臂向母畜肛门内硬插。 ③在直肠内探摸过程中，只允许使用指肚，切不可用指甲乱抠、乱抓、乱划。 ④直肠壁上如有虻幼虫吸附，不可揪掉，以免肠壁出血，或使幼虫吸附于检查者手臂上造成剧痛或感染。 ⑤在直肠内经久寻找不到目的物时，应间隔一定时间将手臂取出查看有无血迹，以便及时发现肠壁破损进行医治处理。一旦肠壁有轻度破损可灌注3%明矾水500～1000ml，或涂以碘甘油和磺胺粉涂于创面。 ⑥检查动作应轻缓，对于不知生理状态的母畜，尤应注意动作轻缓，以免造成孕畜流产。 ⑦如需做阴道检查，务须做好手臂的消毒及母畜外阴部的消毒工作。绝对禁止将粪便及其他污物带入阴道，造成感染。 ⑧输精过程中，应注意观察阴道粘膜、粘液性状及子宫颈状态，如有异常现象须做复查，防止因误配而造成孕畜流产。 （3）母牛生殖器官检查法 ①检查者的手指并拢成楔形，缓慢地以旋转动作插入肛门并逐渐地进入直肠。 ②直肠内如有宿粪，应分次少量地掏出。 ③当手腕进入母畜肛门后应先寻找子宫颈。手指向下轻压肠壁，摸到一个坚实的、纵向似棒状物即为子宫颈，可用拇指、中指及无名指握住子宫颈。 ④沿子宫角的弯曲部（大弯）向外侧下行，在子宫角尖端的外侧下方即可感触到呈椭圆形柔软有弹性的卵巢，然后确定其形状和质地。（如图5-1） ⑤在触摸过程中如失去子宫角不易摸到卵巢时，最好再从子宫颈开始沿着子宫角触摸卵巢。 （二）母牛的输精 1、输精前的准备 （1）输精器械的清洗消毒：金属开张器先以火焰消毒，再以75%酒精棉球消毒，输精器用蒸煮消毒或75%酒精消毒，再以生理盐水冲洗2～3次。 （2）动物在输精前，外阴部须经清洗，再使用0.l%高锰酸钾溶液或酒精棉球擦拭消毒，待干燥后，用生理盐水棉球擦拭或以凉开水冲洗。 （3）作好母畜的发精鉴定，检查有无生殖器官疾病。 （4）检查精液品质：鲜精必须活力在0.6～0.7以上，冻精活力必须在0.3以上才能用于输精。 2、牛的直肠把握输精方法（见图5-2） （1）母牛的保定：将母牛固定在六柱栏内。为了防止在操作中母牛骚动，可在臀部设攀压带。 （2）将输精器插入阴道：左手呈楔形插入母牛直肠，触摸子宫、卵巢、子宫颈的位置，并使母牛排除宿粪，然后消毒外阴部。为了保护输精器在插入阴道前不被污染，可退出左手，使左手四指留在肛门口，向下压在肛门下缘，同时用左手拇指压在阴唇上并向上提拉，使阴门张开。右手趁势将输精器插入阴道，左手再进入直肠，把握住子宫颈尽量向前推送，右手随之将输精器向上，再平插，转向下方，直至子宫颈内口附近。 （3）固定子宫颈的方法 ①左手插入直肠摸清子宫颈后，用食指和中指向下压即可固定子宫颈，用大拇指按住子宫颈外口上缘。 ②左手心朝向右侧握住子宫颈，无名指平行握在子宫颈外口周围，以便插入输精器。 ③当母牛努责难以用以上两种方法握住子宫颈时，手指可并拢将子宫颈压于耻骨体上或骨盆腔侧壁，使之固定。在遇到直肠形成坛状时，这种方法较易操作。 若母牛努责过甚，可采用喂给饲草、捏腰、拍打眼睛、按摩阴蒂等方法使之缓解。若母牛直肠呈坛状时，可用手臂在直肠中前后抽动以促使松弛。 （4）输精器插入子宫颈外口 ①左手把握好子宫颈，大拇指肚按压子宫颈外口上缘，右手持输精器通过阴道，探索抵达拇指肚，再导入子宫颈外口内。 ②左手握住子宫颈，右手持输精器沿左手臂向左手心中探插，输精器即可进入宫颈外口。 （5）输精器通过子宫颈管，抵达子宫体：进入子宫颈外口的输精器，才能通过子宫颈，因此成为输精操作最为困难的部位。操作时两手需配合好，将输精器顺利地通过子宫颈管的4～5个皱襞，进入子宫体部位。具体方法是：左手拳握住子宫颈，右手持已进入子宫颈外口的输精器做多处转换方向，向前探插，同时用左手将子宫颈前段稍做抬高，并向输精器上套。输精器通过子宫颈管内的硬皱襞时，会有明显的感觉。当输精器一旦越过子宫颈皱襞，立刻感到畅通无阻，这时即抵达子宫体处。输精器处在子宫颈管内时，手指是摸不到的，输精器一旦进入子宫体，即可很清楚地触摸到输精器的前段。 （6）注入精液，取出输精器：当确认输精器进入子宫体时，应向后抽退一点，勿使子宫壁堵塞住输精器尖端出口处，缓慢地、顺利地将精液注入，然后轻轻地抽出输精器。 附： 1、羊输精方法（见图5-3） （1）将经消毒的开膣器轻缓地插入阴道，打开阴道，寻找子宫颈外口。 （2）将吸有精液的输精器通过开膣器尽可能地插入子宫颈外口内，深度为0.5～2cm。 （3）母羊1次输精量原精液为0.05～0.1mL，稀释后精液应为0.1～0.2mL，输入前进运动精子数不少于7000万个。 2、猪输精方法 （1）右手持输精胶管插入母猪阴道，开始插入的方向稍向斜上方，然后水平旋转徐徐插入25～30cm，感到有阻力时，用力向前推进子宫颈4～6cm。 （2）将连接于输精管的精液瓶或袋抬高，将精液注入子宫内。 （3）为了防止精液倒流，可将输精器塑料管折起并套入精液袋的小孔，以刺激子宫蠕动，3～5min后取下输精器。 （4）母猪1次输精量应为25～40ml，输入前进运动精子数不少于20亿个。 四、作业 1、叙述牛直肠检查触摸卵巢的要领。 2、试述直肠检查母牛子宫的特点。 3、写出母牛输精的特点，怎样输精才能提高受胎率？ 实验六 母牛的发情鉴定 一、实验目的 掌握母牛发情的鉴定方法，以便正确确定输精时间。 二、实验材料 母牛、试情公牛、玻璃扩张简（或开腔器）、凡士林（或者消毒过的医用中性石腊油），光源灯（手电筒等），工作服、毛巾、面盆、肥皂、洗衣粉、酒精棉球、70%酒精、0.1％高锰酸钾溶液、0.9%NaCl（消毒过）、10%苛性钠溶液、长柄钳、试管、酒精灯、脱脂棉、载玻片、显微镜、母牛生殖器宫浸制标本、母牛生殖器官模型等。 三、方法及步骤 （一）公牛试情法 l、将发情母牛和未发情母牛同放人运动场中，让其自由活动。观察其精神状态的变化（包括性兴奋、举止行动和鸣叫等），并加以记录。 2、将试情公牛（一般采用结扎输精管的公牛）放入母牛运动场内，让其与母牛在一起，详细观察母牛的性欲表现（如喜欢接近公牛或尾随公牛并作频频排尿等动作以及接受公牛的爬跨情况等）和公牛的动态（如对母牛的亲善程度、喜弄状态和追随爬跨等情况）变化，并将观察结果加以记录。 （二）生殖道的检查 1、将发情母牛和未发情母牛分别保定于配种架或保定架中，首先观察其外阴部的颜色、形状、大小以及充血肿涨程度，并注意有无粘液流出等现象，将观察到结果记录之；然后用0.l%高锰酸钾溶液洗擦外阴部，抹干候检。 2、用大拇指和食指翻开阴唇，观察阴道前庭的颜色，湿润度、充血肿胀程度以及有否粘液等。 3、将消毒过的玻璃扩张器或开腔器涂上润滑剂（凡士林或中性石腊油），并慢慢插入阴道内（注意不要用力过猛）。 4、移动扩张筒，借助光源（阴道灯或手电筒）寻找子宫颈。 5、详细观察阴道壁的颜色、充血肿胀度、湿润度以及有无粘液等；然后观察子宫颈的颜色、形态、开口大小、充血肿胀情况和粘液数量性状等等。 6、慢慢抽出扩张筒，并注意有无粘液流出，如有，应收集之，并详细观察其颜色、牵缕性和粘液量。 7、将上述观察结果详细记录。 （三）直肠检查 l、在直肠内的食指和中指将卵巢固定，然后用拇指的指肚仔细触摸卵巢的表面，缓慢感觉和估测卵巢的质地、大小、形态和卵泡的发育情况。摸完一侧后，不要放过子宫角，按原路将手退回角间沟。然后按前法寻找另一侧卵巢并检查卵巢的情况和有无卵泡发育。检查完后，将手慢慢抽出。 检查时，应小心操作，如遇母畜强烈努责，要暂停操作（将手停在里面不动），以防肠壁破裂，如在检查过程中，子宫角或卵巢从手中滑脱，最好重新从子宫颈和角间沟开始。 2、记录卵巢的形状、大小、质地以及卵泡的发育情况，比较发情母牛和未发情母牛的差异。 （四）实验室检查 用长柄钳或长玻璃棒借棉花球，从子宫颈口处取下粘液，涂制抹片。在酒精灯上烘干后在显微镜下（100～150×）检查，如看到典型的羊齿状结晶花纹长而整齐，则为发情盛期；缩短呈星芒状，则为发情末期。 （五）输精适期的判断 根据上述各种方法的检查结果，综合判断输精适期。 四、作业 1、将母牛的发情鉴定的结果记入下表。 检查项目 发情牛 未发情牛 备注  试情 精神状态 公牛爬跨时的安定程度     外阴部 颜色 充血肿胀度 有否粘度     阴道 颜色 充血肿胀度 润滑度     子宫颈 颜色 形状 充血肿胀度 开口大小     卵巢 形态 大小 质地 卵泡发育程度     粘液 数量 颜色 粘度 结晶形态     2、根据检查结果，你认为你所观察到的发情牛，处于发情期中的什么阶段，是否处于输精时期，为什么？ 实验七 妊娠诊断 一、目的 1、掌握外部检查妊娠方法； 2、认识母畜妊娠后阴道内所发生的变化，从而帮助直肠检查法作出准确的妊娠诊断； 3、练习和掌握牛的直肠检查方法。 二、材料 未孕牛、羊和猪以及孕牛、羊和猪若干头，保定器械、听诊器、绳索、尾绷带、开膣器、手电筒、热水、毛巾、脸盆（或提桶）、肥皂、石蜡油，碘酒、酒精棉球、消毒棉花、玻片、滴管，95％酒精、基姆萨染色剂，蒸馏水，显微镜等。 三、方法步骤 （一）外部检查法，即指视诊、触诊和听诊 1、视诊 怀孕家畜，可以看到腹围增大、臁部凹陷、乳房增大。出现胎动。但不到怀孕末期，通常难以得到确诊。 （1）牛 ①乳房是否膨大，乳房皮肤颜色是否变红？ ②腹部是否膨大？孕牛往往为在右侧腹壁突出。 ③胎动是否有？胎动是指因胎儿活动造成母畜腹壁的颤动，即看胁腹部是否有颤动？孕牛3个月以后方能看到。其颤动与呼吸动作不同呼吸为慢而有规律，胎动仍为急剧而偶然的。牛胎动不大明显。 ④下腹壁是否有水肿？其特征是肿胀部分高起来，不热不痛，指压时凹下去，指离去后不能立刻变平，水肿的发生并非常有，如发主亦只限于孕末期产前一个月，分娩后经10天即自行清失。 （2）羊 同牛，在妊娠后半期右壁表现下垂而突出。 （3）猪 妊娠后半期，腹部显著增大下垂(在胎儿很少时，则不明显)，乳房皮肤发红，逐渐增大，乳头也增大。 2、触 诊 在怀孕后期，可以从外部触知胎儿。 （1）牛 在右侧膝皱褶的前方试用手指尖端触诊，如果腹壁紧张、可用拳头抵压、但不可过于猛烈，抵压后轻轻放松，但仍触住皮肤，如有胎儿，则觉有胎动，右侧如触不到，可再在左侧触诊，牛一般要在胎龄7～8个月后才可触到。 （2）羊 检查者在羊体右侧并列而立，或两腿夹于羊之颈部，以左手从左侧围住腹部，而右手从右侧抱之，如此用两手在腰椎下方压缩腹壁，然后用力压左侧腹壁，即可将子宫转向右腹壁而右手则施以微弱压力进行触摸，胎儿是硬的，好象漂浮于腹腔中，营养较差被毛较少的母羊有时可以摸到子宫，甚至可以摸到胎盘。 （3）猪 触诊时，使母猪向左侧卧下，然后细心地触摸腹壁，在妊娠三个月时，在乳腺的上方与最后两乳头平行处触摸可发现胎儿，有坚硬的质地，但仅是瘦的母猪在后期才能摸到。 3、听诊 目的是听取胎儿的心音，只有当胎儿胸壁紧靠母体腹壁才可听到，听诊时，系用听筒在左右侧膝皱褶的内侧听之。胎儿心音与母畜心音的区别是：胎儿心音快，一般每分钟均在100次以上，同时母畜心音不会发生在腹部。 听到心音的可以判定为怀孕，但如听不到时不能判定为无孕。 （二）直肠检查（牛） 1、注意事顶 （1）在怀孕早期，胎儿和附属膜部很脆弱，容易受到伤害而引起流产，因此在触诊子宫时，绝不可用力过大。 （2）在检查时。肠道往往大力收缩或者形成空洞。这时必须耐心等待肠蠕动弛缓再触诊，以免损伤肠壁，引起流血。 （3）在触诊时不可用指端，须用指肚。因为指肚较敏感又较安全。 2、准备工作 检查者要修剪指甲，同时磨光指甲的锐边，以免检查进弄破直肠，引起流血等不良结果。手臂必须先用肥皂水洗干净，必要时最好再用消毒液洗，遇手臂上皮肤有创伤时，应该再加涂碘酒或磺胺软膏在伤口上然后涂抹润滑油或肥皂等润滑剂于手部。直至肝关节的上方，被检查母畜保定并用0.1%高锰酸钾液清洗肛门外阴周围。 3、检查步骤 母牛肛门涂上肥皂，术者将五指拼拢成乌嘴形。伸入母牛肛门中再逐渐往前移动。如遇母牛努责时，则手停留不动，待努责过后再伸向前，以免损伤牛的直肠。如觉肠内粪便太多，不便检查，则先掏出积粪后，再行检查。掏粪时，往意手部有无血液粘着，以判断有无损伤直肠的事故发生，而后按下列步骤检查各部。 （1）子宫颈：其位置在骨盆腔的中央或稍前方，或在耻骨前缘的部位，可触到一握粗如菜刀柄、稍硬，且带有弹性的柱状物，即可判断为子官颈。判断其子宫颈的位置；方向和粗细程度。 （2）子宫角间沟：触到子宫颈后，在子宫颈前不远处，将食指和无名指分别置于左右两个子宫角上，即可用中指以触摸此沟。判别子宫角间沟是否明显或者己经消失。 （3）子宫角：由子宫角基部开始，逐渐移到尖端，注意其大小，质地波动性和位置，判别两个子宫角是否对称。 （4）子叶：妊娠四个月后才能触到子叶，其位置在耻骨前缘的子宫角内。随妊娠月数的增加，子叶可由手指大至鸡蛋大，子叶可以上下移动，而不能左右前后移动。 （5）胎儿：从耻骨前缘前方深处的妊娠子宫角按压，如感到有不规则的硬固物，多压一会，如感到有忽显忽隐的无节奏冲击时，可判为胎儿。 （6）卵巢：位置在耻骨前缘的下方或耻骨上，或子宫角基部两侧，或在子宫角的下方，触诊时可触到呈指头大小，有弹性，形状微呈三角形的物体，即为卵巢，触到卵巢后。母牛往往表示不安。将卵巢夹在中指与食指之问，或中指与无名指中间，再用拇指触摸卵巢的表；在。判断其质地如何。有无隆起而硬的黄体或波动的滤泡。 （7）中子宫动脉，左（右）侧中子宫动脉，位置在左（右）侧肠骨外角的内方，约一掌宽之处，将中子宫动脉夹在手指间，可将之移动，而其他动脉则不能移动，另一个判断方法是：在荐椎突起最高点至左（右）两侧的肠骨外角作一联线。在其中点上即可触到中子官动脉，比较两侧的中子宫动脉之脉性是否相同，大小是否相同，有无特异震动。 （三）阴道检查法 1、准备工作 （1）控制家畜：置家畜于保定架内妥为保定，并将其尾缠绷带后扎于一侧。 （2）消毒：检查用具，如脸盆、镜子、开膣器等，先用清水洗净后，再以火焰消毒，或用消毒液浸泡消毒。但其后必须再用开水或蒸馏水，将消毒液冲净。 母畜阴唇及肛门附近先用温水洗净，最后用酒精棉花涂擦。如须将手伸入阴道进行检查时，消毒手的方法与手术前手的准备相同，但最后必须用温开水或蒸馏水将残留于手上的消毒液冲净。 2、检查的方法及妊娠时阴道的变化 （1）检查阴道粘膜及子宫颈变化的方法 ①给已消毒过的开膣器前端约5cm处向后涂以滑润剂(石腊油等)，在检查之后用消毒纱布覆盖，以免灰尘沾污。 ②检查者站于母畜左右侧，右手持开膣器，左手姆食二指将阴唇分开，将开膣合拢呈侧向，并使其前端略微向上缓缓送入，待完全进入后，轻轻转动开膣器，使其两片成扁平状态，最后压紧两柄使其完全张开，进行观察。 ③检查完毕，将开膣器恢复如送入时状态，然后再缓慢抽出，抽出时切忌将开膣器闭合，否则易于损伤阴道粘膜。 ④检查完毕将开膣器进行消毒。 （2）妊娠时阴道粘膜及子宫颈之变化 ①妊娠时阴道粘膜变为苍白、干燥、无光泽(妊娠末期除外)至妊娠后半期，感觉阴道肥厚。 ②子宫颈的位置改变，向前移（随时间不同而异)，而且往往偏于一侧，子宫颈口紧闭，外有浓稠沾液，在妊娠后半期粘液量逐渐增加，非常粘稠(牛在妊娠末期则变为滑润)。 ③附着于开膣器上之粘液成条纹状或块状，灰白色。 附：子宫颈口粘液涂片检查法 从子宫颈口处取下粘液在载玻片上进行均匀微薄涂片后，让其自然干燥，用无水甲醇（或l0%硝酸银固定1min）固定5～l0min，用水冲洗，再滴上2～3滴的基姆萨氏染色液，又用水冲洗待干后，实行镜检：如为怀孕母牛，可看到短而细的毛发状纹条，颜色呈紫红或淡红；如为发情牛可看到齿类植物状条纹。 在生产实践中，一般常用直肠妊娠检查法，因为不需任何设备，准确性也高。 四、作业 1、列表比较妊娠诊断的各种外部检查法的适用时间、检查部位、检查方法及准确性。 2、将阴道检查的情况结果记录于实验报告纸上。 3、妊娠时阴道发生变化的原因是什么？其生物学意义是什么? 4、将检查结果写出实习报告，并诊断是否怀孕或怀孕时间长短。 实验八 兔的超数排卵和卵子、胚胎的收集 一、目的 1、了解促性腺激素对卵巢机能的作用； 2、练习采卵和胚胎收集的方法； 3、鉴别卵母细胞未受精卵、受精卵的形态。 二、材料 空怀母兔若干只、FSH、LH、PMSG、注射器、针头、手术刀、外科剪刀、镊子、止血钳、瓷盆、烧杯、纱布、棉花、放大镜、显微镜、解剖显微镜、表皿、拨针、生理盐水、酒精、硅橡胶管。 三、方法步骤 （一）母兔的超排处理 超排处理由老师执行或由学生在本手术前四天下午执行，分如下三种处理： 1、手术前四、三和二天，每天上下午各皮下注射FSH 25 IU，手术前二天下午由公兔交配。 2、手术前四、三和二天，每天上下午各皮下注射FSH 25 IU，前二天下午与FSH注射同时皮下注射LH 100 IU。 3、手术前四天下午注射PMSG70 IU，前二天下午由公兔交配。 4、对照兔不作处理，也在手术前二天下午由公兔交配。 （二）卵子采集 1、采卵前准备 将所用器皿摆开于瓷盘中，烧杯盛上生理盐水，剪一块与平皿大小的双层纱布放入平皿中，用生理盐水湿润。 2、手术 （1）兔由耳静脉注入约5mL空气致死。 （2）仰卧固定于手术台上。 （3）沿腹中线用毛剪前去被毛，然后用酒精棉花涂擦去毛的皮肤。 （4）用手术刀在腹正中线划开腹壁一个约l～2cm小口，然后用手术剪剪开整个腹壁（见图8-1），切开腹壁过程要小心，以免切破肠壁。 （5）找到生殖器宫，从子宫体一子宫角连接处剪下（包括卵巢），小心剪除输卵管系膜、卵巢系膜和子宫韧带及其上的脂肪组织。 3、冲卵 （1）取卵巢肉眼或用放大镜观察卵巢卵泡发育和排卵情况。凡突出于卵巢表面，半透明者为发育卵泡；下陷、有出血点的为已排卵。记录观察结果。 （2）冲卵 每两个同学冲洗一侧子宫角。 10mL注射器套上7号针头，吸取10mL生理盐水； 用镊子取出子宫角输卵管，经轻牵拉两头使之平直； 见图8-2：将针头插入子宫角—输卵管连接处，缓慢注入冲洗液，将输卵管伞对准表面皿或离心管，让冲洗液流入其中，注完10mL冲洗液后，拨下注射器。再吸取10mL冲洗液，重复冲洗一次，第二次的冲洗液另用一表面皿或离心管接收，不与第一次的冲洗液相混。或者采取图8-3方法冲卵。 卵母细胞抽吸：用1mL注射器套上6～7号针头，吸入少量生理盐水，将针头刺入无卵泡的卵巢表（见图8-4），从卵巢内剖刺入卵泡内抽吸出卵母细胞，然后在卵巢内再转刺入另一个卵泡内抽吸。抽完后将注射器中的全部液体打出放入另外－个表皿内。 （三）卵子检查 直接置表面皿于解剖镜下检卵，镜检时，用手前后左右移动表面皿仔细观察整个液面，以免遗漏。观察时若有疑似卵母细胞的脂肪球及其它细胞团，可用拨针轻轻拨动仔细辨认。观察到卵子后即用吸卵管吸出，放入一凹灶玻片，用低倍显微镜进行镜检，分辨受精卵、细胞发育阶段未受精卵和退化细胞。正常受精卵为透明带完整，外形正常，分裂球清晰；未受精卵为没有分裂球；不正常受精卵为透明带不完整，外形不正常，分裂球不清楚。  四、作 业 将实验结果填入表中。 母兔号数 超排处理 左卵巢 右卵巢 卵子检查结果    发 育 卵 泡 数 破 裂 卵 泡 数 冲 卵 数 抽卵数 发育卵泡数 破裂卵泡数 冲卵数 抽卵数 未受精卵数 受精卵数 退化卵数