第四章
微生物的营养
微生物的特点:
食谱广、胃口大
营养物质, 那些能够满足微生物机体生长、繁殖和完成各种
生理活动所需的物质
营养,微生物获得和利用营养物质的过程
营养物质是微生物生存的物质基础,而营养是生物维持和
延续其生命形式的一种生理过程。
(参见 P75)
第一节 微生物的营养要求
一、微生物细胞的化学组成
微生物细胞
水,70%-90%
干物质
有机物
蛋白质、糖、脂、核酸、维生素等
及其降解产物
无机物(盐)
微生物、动物、植物之间存在“营养上的统一性”
细胞化学元素组成:
主要元素, 碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、镁、钙、铁等;
微量元素, 锌、锰、钠、氯、钼、硒、钴、铜、钨、镍、硼等。
(微生物们需要吃什么?)
二、营养物质及其生理功能
微生物与动植物营养要素的比较
三、微生物的营养类型
异养型生物
自养型生物
生长所需要的营养物质
生物生长过程中能量的来源 光能营养型
化能营养型
光能自养型,以光为能源,不依赖任何有机物即可正常生长
光能异养型,以光为能源,但生长需要一定的有机营养
化能自养型,以无机物的氧化获得能量,生长不依赖有机营养物
化能异养型,以有机物的氧化获得能量,生长依赖于有机营养物质
微生物营养类型 ( Ⅰ)
微生物的营养类型 (Ⅱ)
(参见 P81)
(参见 P82)
1,光能无机自养型(光能自养型)
能以 CO2为主要唯一或主要碳源;
进行光合作用获取生长所需要的能量;
以无机物如 H2,H2S,S等作为供氢体或电子供体,
使 CO2还原为细胞物质;
例如,藻类及蓝细菌等和植物一样,以水为电子供体(供氢体),
进行产氧型的光合作用,合成细胞物质。而红硫细菌,以 H2S为
电子供体,产生细胞物质,并伴随硫元素的产生。
CO2+ 2H2S 光能光合色素 [ CH2O] + 2S+ H2O
2,光能有机异养型(光能异养型)
不能以 CO2为主要或唯一的碳源;
以有机物作为供氢体,利用光能将 CO2还原为细胞物质;
在生长时大多数需要外源的生长因子;
例如,红螺菌属中的一些细菌能利用异丙醇作为供氢体,将 CO2
还原成细胞物质,同时积累丙酮。
CHOH + CO2
H3C
H3C
2
光能
光合色素
2 CH3C0CH3 +[ CH2O] + H2O
光能无机自养型和光能有机异养型微生物可利用光能生长,
在地球早期生态环境的演化过程中起重要作用。
4,化能有机异养型(化能异养型)
生长所需要的能量均来自有机物氧化过程中放出的化学能;
生长所需要的碳源主要是一些有机化合物,
如淀粉、糖类、纤维素、有机酸等。
有机物通常既是碳源也是能源;
大多数细菌、真菌、原生动物都是化能有机异养型微生物;
所有致病微生物均为化能有机异养型微生物;
(参见 P81)3,化能无机自养型(化能自养型)
生长所需要的能量来自无机物氧化过程中放出的化学能;
以 CO2或碳酸盐作为唯一或主要碳源进行生长时,利用 H2,H2S、
Fe2+,NH3或 NO2-等作为电子供体使 CO2还原成细胞物质。
腐生型 (metatrophy):
可利用无生命的有机物 (如动植物尸体和残体 )作为碳源;
寄生型 (paratrophy):
寄生在活的寄主机体内吸取营养物质,离开寄主就不能生存;
在腐生型和寄生型之间还存在中间类型:
兼性腐生型 (facultive metatrophy);
兼性寄生型 (facultive paratrophy);
(参见 P82)
不同营养类型之间的界限并非绝对( P82):
异养型微生物并非绝对不能利用 CO2;
自养型微生物也并非不能利用有机物进行生长;
有些微生物在不同生长条件下生长时,其营养类型也会发生改变;
例如紫色非硫细菌 (purple nonsulphur bacteria):
没有有机物时,同化 CO2,为自养型微生物;
有机物存在时,利用有机物进行生长,为异养型微生物 ;
光照和厌氧条件下,利用光能生长,为光能营养型微生物;
黑暗与好氧条件下,依靠有机物氧化产生的化学能生长,
为化能营养型微生物;
微生物营养类型的可变性无疑有利于提高其对环境条件变化的适应能力
5.营养缺陷型
某些菌株发生突变 (自然突变或人工诱变 )后,失去合成某种 (或某些 )
对该菌株生长必不可少的物质 (通常是生长因子如氨基酸、维生素 )
的能力,必须从外界环境获得该物质才能生长繁殖,这种突变型菌
株称为 营养缺陷型 (auxotroph),相应的野生型菌株称为 原养型
(prototroph).
营养缺陷型菌株经常用来进行微生物遗传学方面的研究。
(见 P82)
微生物生长需要的生长因子与营养缺陷型之间的关系?
第二节 培养基
培养基几乎是一切对微生物进行研究和利用工作的基础
培养基( medium) 是人工配制的,适合微生物生长繁殖或
产生代谢产物的营养基质 。
任何培养基都应该具备微生物生长所需要六大营养要素:
碳源、氮源、无机盐、能源、生长因子、水
(参见 P82)
任何培养基一旦配成,必须立即进行灭菌处理(参见 P85);
常规高压蒸汽灭菌:
1.05kg/cm2,121.3℃ 15-30分钟; 0.56kg/cm2,112.6℃ 15-30分钟
某些成分进行分别灭菌;过滤除菌;
(如何给微生物们做饭?)
(参见 P82)
一、选用和设计培养基的原则和方法
在微生物学研究和生长实践中,配置合适的培养基是一项最基本的要求。
1、选择适宜的营养物质
2、营养物的浓度及配比合适
3、物理、化学条件适宜
4、经济节约
5、精心设计、试验比较
2、营养物质浓度及配比合适
营养物质的浓度适宜;营养物质之间的配比适宜 ;
高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进
微生物的生长,反而起到抑制或杀菌作用。
培养基中各营养物质之间的浓度配比也直接影响微生物的生长
繁殖和 (或 )代谢产物的形成和积累,其中碳氮比 (C/N)的影响较
大。
发酵生产谷氨酸时:
碳氮比为 4/1时,菌体大量繁殖,谷氨酸积累少;
碳氮比为 3/1时,菌体繁殖受到抑制,谷氨酸产量则大量增加。
(参见 P84)
1,选择适宜的营养物质 (参见 P82)
1) pH
培养基的 pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型
微生物的生长繁殖或产生代谢产物。
通常培养条件:
细菌与放线菌,pH7~7.5
酵母菌和霉菌,pH4.5~6范围内生长
为了维持培养基 pH的相对恒定,通常在培养基中加入 pH缓冲剂,
或在进行工业发酵时补加酸、碱。
pH; 水活度;氧化还原电位;
3、物理化学条件适宜
2) 水活度
(参见 P80)
在天然环境中,微生物可实际利用的自由水或游离水的含量,
一般用在一定的温度和压力条件下,溶液的蒸汽压力与同样条
件下纯水蒸汽压力之比表示,即:
α w=Pw/Pow
式中 Pw代表溶液蒸汽压力,POw代表纯水蒸汽压力。
纯水 α w为 1.00,溶液中溶质越多,α w越小。
微生物一般在 α w为 0.60~ 0.99的条件下生长,α w过低时,
微生物生长的迟缓期延长,比生长速率和总生长量减少。
微生物不同,其生长的最适 α w不同。
3)氧化还原电位
(参见 P85)
氧化还原电位 又称氧化还原电势( redox potential),是度量
某氧化还原系统中的还原剂释放电子或氧化剂接受电子趋势
的一种指标,其单位是 V( 伏)或 mV( 毫伏)。
就向微生物与 pH的关系一样,不同类型微生物生长对
氧化还原电位 (Ф)的要求不同
好氧性微生物,+0.1伏以上时可正常生长,以 +0.3~ +0.4伏为宜;
厌氧性微生物,低于 +0.1伏条件下生长;
兼性厌氧微生物,+0.1伏以上时进行好氧呼吸,
+0.1伏以下时进行发酵。
氧化还原电位与氧分压和 pH有关,也受某些微生物代谢产物的影响
增加通气量 (如振荡培养、搅拌 )提高培养基的氧分压,或加入
氧化剂,从而增加 Ф 值;在培养基中加入抗坏血酸( 0.1%)、硫化
氢 (0.025%)、半胱氨酸 (<0.05%)、谷胱甘肽、二硫苏糖醇、庖肉
等还原性物质可降低 Ф 值。
培养基中加入氧化还原指示剂刃天青可对氧化还原电位进行间接测

氧化还原电位与氧分压和 pH有关,也受某些微生物代谢产物的影响
4,经济节约
(参见 P85)
配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成份,
特别是在发酵工业中,以降低生产成本。
以粗代精,
以“野”代“家”,
对微生物来说,各种粗原料营养更加完全,效果更好。
而且在经济上也节约。
以野生植物原料代替栽培植物原料,如木薯、橡子、薯芋等
都是富含淀粉质的野生植物,可以部分取代粮食用于工业发
酵的碳源。
以废代好,
以工农业生产中易污染环境的废弃物作为培养微生物的原料。
例如,糖蜜 (制糖工业中含有蔗糖的废液 )、乳清 (乳制品工业中
含有乳糖的废液 )、豆制品工业废液及黑废液 (造纸工业中含有戊
糖和己糖的亚硫酸纸浆 )等都可作为培养基的原料。
工业上的甲烷发酵主要利用废水、废渣作原料,在我国农村,已
推广利用粪便及禾草为原料发酵生产甲烷作为燃料。
另外,大量的农副产品或制品,如麸皮、米糠、玉米浆、酵母浸
膏、酒糟、豆饼、花生饼、蛋白胨等都是常用的发酵工业原料。
以简代繁,
某制药厂改进链霉素发酵液中的原有配方,设法减去 30-50%的
黄豆饼粉,25%的葡萄糖和 20%硫酸铵,结果反而提高了产量。
以烃代粮,
以石油或天然气副产品代替糖质原料来培养微生物。
生产石油蛋白将石油产品转化成一些产值更高的高级醇、脂肪
酸、环烷酸等化工产品和若干合成物;对石油产品的品质进行
改良,如脱硫、脱蜡等。
以纤代糖,
开发利用纤维素这种世界上含量最丰富的可再生资源。将大
量的纤维素农副产品转变为优质饲料、工业发酵原料、燃料
及人类的食品及饮料。
以无机氮代蛋白,
以大气氮、铵盐、硝酸盐或尿素等一类非蛋白质或非氨基酸
廉价原料用作发酵培养基的原料,让微生物转化成菌体蛋白
质或含氮的发酵产物供人们利用。
5、精心设计、试验比较
进行生态模拟,研究某种微生物的培养条件;
文献查阅,设计特定微生物的培养基配方;
试验比较,确定特定微生物的最佳培养条件;
合成培养基 (synthetic medium)
是由化学成份完全了解的物质配制而成的培养基,也称
化学限定培养基 (chemically defined medium).
(参见 P86)
二,培养基的类型及应用
1.根据物理状态划分
固体培养基;
半固体培养基;
液体培养基;
(参见 P86)
2.按用途划分
1)基础培养基 (minimum medium)
在一定条件下含有某种微生物生长繁殖所需的基本营养物质的培养基,
也称为 基本培养基 。
2)完全培养基 (complete medium)
在一定条件下含有某种微生物生长繁殖所需的所有营养物质的培养基
牛肉膏蛋白胨培养基就是枯草芽孢杆菌等的完全培养基
(参见 P87)
3)加富培养基和富集培养基 (enrichment medium)
在普通培养基(如肉汤蛋白胨培养基)中加入某些特殊营养物质
制成的一类营养丰富的培养基。
这些特殊营养物质包括血液、血清、酵母浸膏、动植物组织液等。
用来培养营养要求比较苛刻的异养型微生物,如培养百日咳博德
氏菌 (Bordetella pertussis)需要含有血液的加富培养基 。
根据待分离微生物的特点设计的培养基,用于从环境中富集和
分离某种微生物。
(目的微生物在这种培养基中较其他微生物生长速度快,并逐渐
富集而占优势,从而容易达到分离该种微生物的目的。)
(参见 P88)
4)鉴别培养基 (differential medium)
用于鉴别不同类型微生物的培养基
特定的化学反应,产生明显的特征性变化,
根据这种特征性变化,可将该种微生物与其他微生物区分开来。
伊红和美蓝 二种苯胺染料可抑制 G+细菌和一些难培养的 G— 细菌。
在低酸度时,这二种染料结合形成沉淀,起着产酸指示剂的作用。
试样中的多种肠道菌会
在 EMB培养基上产生相互易区分的特征菌落,因而易于辨。例如
大肠杆菌强烈分解乳糖而产生大量的混合酸,菌体呈酸性,菌落被
染成深紫色,从菌落表面的反射光中还可看到绿色金属闪光。
5)选择培养基 (selective medium)
用于将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的培养基,
根据不同种类微生物的特殊营养需求或对某种化学物质的敏感性不
同,在培养基中加入相应的特殊营养物质或化学物质,抑制不需要
的微生物的生长,有利于所需微生物的生长。
(参见 P90)
一,扩散 (diffusion)
物质跨膜扩散的能力和速率与该物质的性质有关,分子量小、
脂溶性、极性小的物质易通过扩散进出细胞。
扩散并不是微生物细胞吸收营养物质的主要方式,水是唯一可以通过
扩散自由通过原生质膜的分子,脂肪酸、乙醇、甘油、苯、一些气体
分子 (O2,CO2)及某些氨基酸在一定程度上也可通过扩散进出细胞。
第三节 营养物质进入细胞
(微生物们是怎样吃东西的?)
(参见 P91)二,促进扩散 (facilitated diffusion)
被动的物质跨膜运输方式
物质运输过程中不消耗能量
参与运输的物质本身的分子结构不发生变化
不能进行逆浓度运输
运输速率与膜内外物质的浓度差成正比。
通过促进扩散进行跨膜运输的物质需要借助与载体 (carrier)
的作用才能进入细胞 (图 4-1),而且每种载体只运输相应的
物质,具有较高的专一性。
载体只影响物质的运输速率,并不改变该物质在膜内外形成的动态
平衡状态;这种性质都类似于酶的作用特征,因此载体蛋白也称为
透过酶;透过酶大都是诱导酶,只有在环境中存在机体生长所需的营
养物质时,相应的透过酶才合成。
(参见 P92)
三、主动运输 (active transport)
在物质运输过程中需要消耗能量
可以进行逆浓度运输
主动运输是广泛存在于微生物中的一种主要的物质运输方式
运输物质所需能量来源:
好氧型微生物与兼性厌氧微生物直接利用呼吸能;
厌氧型微生物利用化学能 (ATP);
光合微生物利用光能;
嗜盐细菌通过紫膜 (purple membrane)利用光能;
(参见 P92)
2、次级主动运输
(secondary active transport)
同向运输 (symport)
逆向运输 (antiport)
单向运输 (uniport)
为什么被称为,次级主动运输?
1、初级主动运输 (primary active transport)
(参见 P93)
3、基团转位 (group translocation)
基团转位主要存在于厌氧型和兼性厌氧型细菌中,主要用于糖
的运输。脂肪酸、核苷、碱基等也可通过这种方式运输。
有一个复杂的运输系统来完成物质的运输;
物质在运输过程中发生化学变化;
4,Na+,K+-ATP酶 (Na+,K+-ATPase)系统
四、膜泡运输 (memberane vesicle transport)
膜泡运输主要存在于原生动物中,特别是变形虫 (amoeba),
为这类微生物的一种营养物质的运输方式 )。
本章思考题:
试比较营养物质进入微生物细胞的几种
方式的特点。