第八章 动物实验基本技
术和方法
一,实验前准备
?理论准备:了解动物实验基础知识
制定研究计划和方案
查阅关于实验方法的参考文献
?条件准备:仪器、器械、药品
运输
实验和饲养场所
二、抓取和固定
? 小鼠
? 大鼠
?豚鼠
?家兔
? 犬
猫的抓取
? 猴
三、性别、发情、配种与怀孕
鉴定
四、编号和标记
1、染色法:浅色动物
3.5-5%苦味酸溶液(黄色)
0.5%中性红或碱性品红溶液(红色)
2%硝酸银溶液(咖啡色,涂后光照 10
分钟)
煤焦油酒精溶液(黑色)
龙胆紫溶液(紫色)
2、打耳孔法:小型动物
3、剪趾法:小型动物
4、剪尾法:大、小鼠,仅限与两组间区分
5、烙印法:刺号钳,中、大型动物
6、针刺法:中、大型动物
7、号牌法:耳标签、项圈、腿圈,中、大
型动物
8、剪毛法:大动物
9、笼子标号
五、分组
? 随机化分组:避免人为影响
? 例:将 14只小鼠随机分成两组。
? ① 先将小鼠编为 I~ 14号,
? ② 在随机数字表上任点一数,按任意方
向连续抄 12个随机数字。 编排如下;
? 动物编号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14
? 随机数日 16 22 77 94 39 49 54 43 54 82 17 37 93 23
? 归 组 B B A B A A B A B B A A A A
? ③ 奇数代表 A织,偶数代表 B组
? ④ A组,3 5 6 8 11 12 13 14
? B组,1 2 4 7 9 10
? ⑤ 调整分组:接刚才随机数字 23继续抄表
得随机数字 78,用 78除以 8(因为需要把 C
组的 8个数字调整掉一个),得余数 6,所
以把 A组的第 6个动物,即 12号动物调整到
B组
? ⑥ 最终分组
? A组,3 5 6 8 11 13 14
? B组,1 2 4 7 9 10 12
例,12只大鼠随机分为 3组
①大鼠编号 1~12
②在随机数字表上任点一数,按任意方向连续抄 12个
随机数字。
③每个数分别用 3除,记录余数,
④ 根据余数分组
大鼠编号,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12
随机数字,08,27,01,50,15,29,39,39,43,79,69,10
余数,2,0,1,2,0,2,0,0,1,1,0,1
组别,B,C,A,B,C,B,C,C,A,A,C,A
⑤ A,3,9,10,12
B; 1,4,6
C,2,5,7,8,11
⑥ 调整分组:接刚才随机数字 10继续抄表得随机
数字 61,用 61除以 5(因为需要把 C组的 5个数
字调整掉一个),得余数 1,所以把 C组的第 1
个动物,即 2号动物调整到 B组。
⑦最终分组
A,3,9,10,12
B; 1,2, 4,6
C,5,7,8,11
六、去毛
1、剪毛:弯头剪毛剪
2、拔毛:大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射
3、剃毛:将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍,蘸
温肥皂水润湿,用剃刀顺着被毛方向剃毛,
用电动剃毛推剪,则逆被毛向剃毛。
4、化学脱毛,
常用脱毛剂
① 8%硫化钠水溶液
②硫化钠 3份,洗衣粉 1份、淀粉 7份,加水
调成糊状
③硫化钡 50克,氧化锌 25克,淀粉 25克,
加水 100毫升调成糊状
④硫化钠 10克,生石灰 15克,加水到 100
毫升,适合犬和其他大动物。
七、给药
1、自动口服:加入饲料或饮水
2、投喂药片:掰开口,放到舌根部
3、灌胃( i.g),
4、直肠给药
5、呼吸道给药
6、滴鼻
7、点眼
8、经皮肤给药:常用于检测药物、毒物、
化妆品等的透皮吸收、局部作用、至敏
作用等。家兔和豚鼠选择脊柱两侧皮肤,
大小鼠常采取浸尾方式。
9、皮内注射 (i.d),一般用于接种或过敏
实验。将药液注射在真皮和表皮之间。
10、皮下注射 (s.c),颈背部、腋下、腿、
侧腹
11、肌肉注射 (i.m),股部肌肉
12、腹腔注射 (i.p),下腹部腹中线两侧
13、静脉注射 (i.v),
? 小鼠:尾静脉
? 大鼠:尾静脉,
阴茎静脉,
舌下静脉,
浅背侧跖静脉
尾静脉注射,
大小鼠有上、左、右
3根尾静脉
阴茎静脉注射
舌下静脉注射
浅背侧跖静脉注射
猴的后肢皮下静脉注射
? 豚鼠:浅背侧跖静脉、耳静脉注射
? 家兔:耳静脉注射
? 猪:耳缘静脉
? 猴:前肢桡静脉、后肢隐静脉注射
? 猫、狗:前肢内侧头静脉、后肢外侧小隐静脉
注射
狗前肢内侧头静脉 狗后肢外侧小隐静脉
14、脑腔注射,
( 1)小鼠
小指夹鼠尾,拇指和是指置小鼠头两侧固定,中
指和无名指压住鼠身,在注射处消毒后,右
手持注射器,以食指固定针芯,垂直刺入针
头深度约 5~ 7mm
( 2)兔
将兔用固定器固定好,剃去头顶的被毛,左手
将头皮绷紧,消毒后,右手持锥子,自头顶
正中稍偏一侧部位,锥穿头骨,即换以左手
固定锥子,右手持注射器,使针头沿锥尖刺
入,慢慢拔出锥子,即刻将针头刺入约 10~
20mm,即可推液
15、关节腔注射,
16、椎管内注射:注射入蛛网膜下腔
17、淋巴囊内注射:蛙和蟾蜍
18、小脑延髓池注射,
八、采血
1、大小鼠,
? 眶静脉丛(窦),
少量多次采大小鼠血。
小鼠 0.2~ 0.3ml,
大鼠 0.4~ 0.6ml
? 摘眼球:用于一次大量采小鼠血,可得到
4~ 5%体重的血量
? 尾静脉:用于少量多次采大小鼠血
?剪头:用于一次性大量采小鼠血,可得
到 0.5~ 1.0ml的血量
?大血管:包括颈动脉(静脉),股动脉
(静脉),腋下动脉(静脉),腹主动
脉。此方法不常用于小鼠采血,而多用
于大鼠一次性大量采血。可得 5ml左右
血量。
?心脏采血:小鼠少用,可用于大鼠一次
性(开胸)或多次采血(不开胸)。
2,家兔,
?耳缘静脉:可反复采血,每次 5~ 10ml。
?耳中央静脉:可反复采血,每次 10~
15ml。
?心脏采血:可用于
一次性(开胸)或
多次采血(不开胸)。
一次性开胸采血可
得到 80~ 100ml血量
?颈动静脉采血:用于一次性采血,需要
手术,可得血量 80~ 10ml。
3、豚鼠,
?心脏采血:可用于一次性(开胸)或多
次采血(不开胸)。一次性开胸采血可
得到 5~ 10ml血量。
?背跖静脉采血:用于少量反复采血。
4、犬猫:和静脉注射部位相同,前肢内侧
头静脉、后肢外侧小隐静脉。也可颈静
脉(动脉)或心脏采血
5、猪:心脏采血或耳大静脉采血
6、羊:颈静脉采血
7、猴:前肢头静脉,
后肢皮下静脉
或耳缘静脉等。
8、禽类:翼下静脉
?常用抗凝剂,
? 肝素:抑制凝血酶活力,阻止血小板凝集。
纯品肝素 1mg= 125U,10U~20U抗 1ml血
凝集,但通常应用 2~3倍剂量。
用法:可配成 1%肝素溶液,用时取 0.1ml
于试管内,100℃ 烘干,每管可抗凝
5~10ml血。或用 1%肝素溶液湿润采血注
射器。
肝素可改变蛋白质等电点,当用盐析法分
离蛋白作分类测定时,不可用肝素抗凝。
? 枸橼酸钠:使凝血必需的钙离子失活。
常用 3~5%水溶液,碱性较强。
? 草酸盐合剂:草酸铵 1.2g,草酸钾 0.8g,
福尔马林 1.0ml,加蒸馏水至 100ml。 使
凝血必需的钙离子失活。每毫升血加草
酸盐合剂 0.1ml。
? 氟化钠:每毫升血加 6mg。
九、其他体液采集
1、胸水、腹水采集:穿刺
2、消化液采集:唾液,胃液,胰液,胆

3、精液采集:中、大动物用假阴道,小
动物穿刺附睾来采集精液。
4、脑脊液采集:手术或小脑延髓池抽取
5、骨髓采集:大动物活体穿刺,小动物
处死后取股骨或胸骨骨髓
6、尿液采集,
?代谢笼收集
?导尿管采集
?膀胱穿刺
?压迫排尿
十、麻醉
1、麻醉方法,
?全麻
吸入麻醉,静脉注射、腹腔注射。
?局麻
浸润麻醉。根据手术,按皮下、筋膜、
肌肉、腹膜、骨膜等顺序逐步深入注射
到术野周围。
2、麻醉前准备,
?禁食 8~12h,防止呕吐,可饮水
?根据实验部位和种类,给动物脱毛。
?犬、猪、猴等大动物可在麻醉前给予一
些药物以减少动物紧张,减少支气管分

? 阿托品:减少支气管和唾液腺分泌,防
止气管阻塞。副作用:加快心率。用量:
肌肉或皮下注射 0.04mg/kg
? 安定:产生镇静作用,加强麻醉效果,
使骨骼肌松弛。用量,2.5~5mg/kg
? 吗啡:产生镇静作用。副作用:抑制呼
吸中枢。用量:皮下注射 1~2mg/kg,肌
肉注射 10~20mg/kg,
3、麻醉药物,
?全麻药物
? 乙醚:强挥发性、易燃。乙醚是最常用
的吸入麻醉剂,各种动物适用。
机制:抑制中枢神经系统。
特点:安全范围大,肌肉完全松弛,对
肝肾毒性小,麻醉诱导期和苏醒期较长。
副作用:局部刺激大,引起上呼吸道黏
膜分泌增加,导致呼吸道阻塞,可用阿
托品对抗解救。
? 巴比妥类:种类很多,有巴比妥钠,戊
巴比妥钠,硫喷妥那,苯巴比妥钠等。
适用于各种动物。
特点;安全范围广,毒性小,麻醉潜伏
期短,麻醉维持时间长。可腹腔或静脉
给药。机理:阻断神经冲动传递到大脑。
副作用:过量使用可导致呼吸肌麻痹而
死亡,同时抑制末梢循环,导致血压降
低,并影响基础代谢,导致体温降低
? 氯胺酮:常用其盐酸盐。
特点:麻醉潜伏期短,麻醉维持期仅
10~20min,麻醉浅,安全性高,可重复
给药。
机制:阻断大脑联络途径。
副作用:兴奋心血管系统,使血压升高,
心率加快,偶尔引起呕吐。
? 水合氯醛:作用特点和巴比妥类相似。
但安全范围小,麻醉剂量和中毒剂量接
近,对皮肤和黏膜有较强刺激。
?局麻药物
? 普鲁卡因:是无刺激性的局麻药物。
特点:麻醉速度快,注射后 1~3分钟就可
产生麻醉。可以维持 30~45分钟。对皮
肤和黏膜穿透力很弱,需要注射给药才
能产生局麻效果。它可以使血管舒张,
易被吸收入血液而失去效果。在其溶液
中加入肾上腺素(每 100ml加入 0.1%肾
上腺素 0.2~0.5ml) 可以使麻醉时间延长
1~2小时。
? 利多卡因:效力和穿透力比普鲁卡因强
? 的卡因:化学结构和普鲁卡因类似,效
力和穿透力比普鲁卡因强。
4、实验动物的急救
?呼吸停止,
? 人工呼吸
? 尼可刹米:适用于各种原因的中枢性呼吸
衰竭,每次 0.25g~0.5g,静脉注射。
? 戊四氮:对抗巴比妥类和氯丙嗪过量导致
的呼吸衰竭,每次 0.1g,静脉注射或心内
注射
? 美解眠:对抗巴比妥类和水合氯醛中毒,
每次 50mg,静脉缓慢注射
?心跳停止,
? 心脏按摩
? 针刺或脉冲电刺激
? 肾上腺素:用于心脏骤停的急救。每次
0.5~1.0ml静脉注射
? 碳酸氢钠:纠正急性酸中毒。可注射肾
上腺素后立即静脉注射 5%碳酸氢钠
1~2ml/kg
十一、处死
1、颈椎脱臼法:小鼠、大鼠
2、空气栓塞法:兔、猫、犬等大动物
3、放血法:心脏放血或大血管放血
4、断头法:小鼠、大鼠
5、吸入二氧化碳
6、注射巴比妥类药物
十二,动物的大体解剖和脏器识别
? ( 1)切面术语
? ① 矢状面:是与动物体长轴平行面与地面垂
直的切面。其中把动物体等分成左、右对称
两半的叫正中矢面;与正中矢面相平行的所
有切面均称为矢状面。
? ② 横断面:是与动物体长轴相垂直的切面,
把动物体分成前、后两部分。与器官长轴相
垂直的切面也叫横断面。
? ③ 额切面(水平面):与地面平行面与矢状
面和横断面相垂直的切面,可把动物体分成
背、腹两部分。
1.横切面 2、矢状面 3、额切面 4、颅侧 (前侧 ) 5、尾侧 (后侧 ) 6、背
侧 7、腹侧 8、内侧 9、外侧 10、口侧 11,远口侧 12、背侧 13、掌
侧,14、跖侧 15、近端 16、远端 17、轴侧 18、远轴侧
狗躯体各部名称
小鼠的淋巴系统
小鼠乳腺区域
外科手术
大鼠无创血压测量
,尸体剖检等

?尸体需要做无害化处理:高压、焚烧、
深埋等