第
三
章
基
因
工
程
教学重点、难点、学时
一、概述
二、基因
三、酶
四、载体
五、基因重组
1,要点
基因工程的分子生物学基础、基因工程工具酶、基因
工程载体、目的基因的获得、目的基因导入受体细胞、重
组体的筛选,DNA序列分析、基因工程在环境污染治理中
的应用
2、重点
基因工程的分子生物学、目的基因的获得、基因工程
工具酶、基因工程载体、目的基因导入受体细胞、重组体
的筛选
3、学时
5学时
教
学
要
点
、
重
点
、
学
时
一
、
概
述
（一）基因组的相关名词
1,DNA,遗传物质脱氧核糖核酸的简称。每个 DNA分子
都包含螺旋结构的双股链。
2、基因,DNA上有遗传意义的片段叫基因，基因包含一
定数量的碱基。基因是基础的遗传单位，它们决定一个人
眼睛的颜色、耳朵的大小、脑容量等所有人的生理特征和
一些行为特征。更重要的是，基因与许多疾病有关。
一
、
概
述
3、测序：确定 DNA双股链上每个独立结构单元或碱基的
确切顺序的过程。测序经常被称为, 破译,,因为其结果
就像解码一样。解码结果包含数百页和成千上万行 4种字
母的序列，这些字母表示 4种不同的碱基，它们是腺嘌呤、
鸟嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶，分别用它们的首字母 A,T、
C,G表示，其排列顺序中蕴藏着各种各样的遗传信息和生
命指令。
4、基因诊断,也叫 DNA诊断、分子诊断，是通过从患者
体内提取样本用基因检测方法来判断患者是否有基因异常
或携带病原微生物。目前，基因诊断检测的疾病主要有三
大类：感染性疾病的病原诊断、各种肿瘤的生物学特性的
判断、遗传病的基因异常分析。
一
、
概
述
5、ＤＮＡ芯片，又称基因芯片（ｇｅｎｅｃｈｉｐ），
实质上是一种高密度的寡聚核苷酸（ＤＮＡ探针）阵列。
它采用在位组合合成化学和微电子芯片的光刻技术，或者
利用其他方法将大量特定系列的ＤＮＡ片段（探针）有序
地固化在玻璃或磋衬底上，从而构成储存有大量生命信息
的ＤＮＡ芯片。
6、所谓转基因技术就是把外源基因整合到动植物基因
组中去。下面分别对转基因动物和转基因植物来进行描述。
一
、
概
述
7、基因突变是指由于 DNA碱基对的置换、增添或缺失而
引起的基因结构的变化，亦称点突变。
8、人类基因组（ＨｕｍａｎＧｅｎｏｍｅ）：是建立
人体所需的化学密码或蓝图，而这幅蓝图的基本组成是Ｄ
ＮＡ。ＤＮＡ是一条由磷酸盐和糖组成的分子链，呈双螺
旋形，即两条互相缠绕的螺旋形分子带，中间以称为碱基
的横条紧扣。除了孪生子女外，每个人的ＤＮＡ都是独一
无二的。
一
、
概
述
9、染色体（Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）：人体每个细胞
内皆有２３对染色体，它们位于细胞的核心，当中染色体
ＸＹ是决定性别的。一个人体内所有细胞的染色体的长度
加起来，足足有１６００亿公里长。
10,克隆是英文 clone的音译，简单讲就是一种人工
诱导的无性繁殖方式。
一
、
概
述
（二）基因工程
1、定义：将外源基因体外重组后导入受体细胞内，
使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作。
2、理论和技术支撑
（ 1）理论,40年代发现了生物的遗传物质是 DNA,50
年代弄清了 DNA的双螺旋结构,60年代确定了遗传信息的
传递方式。
一
、
概
述
（ 2）技术：工具酶、载体、逆转录酶
2、基因工程实施至少四个必要条件：工具酶、基因、
载体、受体细胞
3、基因工程的内容
4、遗传工程、基因工程,DNA重组技术的区别
5、基因工程操作的基本技术
一
、
概
述
二
、
基
因
（一）结构与功能
（二） DNA的变性、复性与杂交
（三）中心法则
（一）结构与功能
1,DNA的组成
碱基、脱氧核糖、磷酸基
二
、
基
因
（一）结构与功能
2,DNA的 结构
核心是 碱基配对（ A＝ T,G＝ C）
1） DNA双螺旋结构模型：
a.两链平行反向且右旋，也发现了三股 DNA和左旋 Z－
DNA
b.以碱基配对
c.每周含 10个碱基对，现发现碱基对也可变,A－ DNA
d.磷酸－核糖主链在外侧，碱基以平面在内侧且与主链
垂直
e.超螺旋结构普遍存在
二
、
基
因
Nu
cl
eot
ide
Genes
2）理论意义
a.细胞减数分裂和有性生殖
b.个体发育
c.遗传与变异
d.性状控制
二
、
基
因
（一）结构与功能
3.DNA的复制
1）在复制起始点形成复制起始叉；
2）半保留复制；
3）具有高度忠实性；
4）需要多种酶
4,DNA作为遗传物质的 优点
1）信息量大，可以微缩；
2）表面互补，电荷互补；
3）在水溶液中稳定性好
4）可突变，能求进化
5）有 T无 U,基因组得以增大，不会带来潜在危险
注,RNA拟酶 ?RNA蛋白质 ?DNA世界
二
、
基
因
（一）结构与功能
DN
A
Re
pl
ica
tion
变性（熔解） － 在 加热 或某些 试剂 的作用下，
DNA配对碱基之间的氢键结构受到破坏，双链 DNA多
核苷酸链能完全分离，此分离过程称为变性。
复性 －变性 DNA在一定条件下能恢复其双是螺旋
结构的过程。
二
、
基
因
（二） DNA的变性、复性与杂交
1,变性
1）变性表象
ａ粘度降低 ｂ沉速加快 ｃ紫外吸收值增大
2） 影响因素
ａ DNA本身稳定性 ｂ外部条件
3）变性研究
Tｍ
二
、
基
因
（二） DNA的变性、复性与杂交
2,复性
1） 影响因素
ａ DNA分子的大小和顺序复杂性
ｂ样品的浓度
ｃ溶液的离子强度
ｄ温度
2）复性条件
ａ盐浓度要高 ｂ温度要高得适当
3） 复性动力学
满足二级动力学
注,复杂度－ DNA中最长的没有重复序列的核苷酸对的个数值。
二
、
基
因
（二） DNA的变性、复性与杂交
3,杂交
当复性的 DNA分子由不同的两单链
分子形成时，称为杂交。
复性是分子杂交的理论基础。
二
、
基
因
（二） DNA的变性、复性与杂交
转录 －利用 DNA为模板合成 RNA的过程。
翻译 －以 RNA为模板合成蛋白质的过程。
1,RNA的转录
1） RNA聚合酶结合于 DNA分子上的特定位置；
2）使 DNA双链解旋，起始 RNA合成；
3） RNA链的延伸；
4） RNA合成的终止和释放。
二
、
基
因
（三）中心法则
2、逆转录和逆转录酶
逆转录 －以 RNA为模板在逆转录酶催化下合成 DNA
的过程。
逆转录酶 －是一种依赖于 RNA的 DNA聚合酶。
意义,逆转录和逆转录酶的发现使我们可以用真核
ｍ RNA为模板，通过逆转录而获得为特定蛋白质编码
的基因。
3,翻译 －蛋白质的生物合成
二
、
基
因
（三）中心法则
RN
A
Ri
bon
uc
lei
c A
cid
RN
A
Ri
bon
uc
lei
c A
cid
-A
M
or
e D
etai
led
D
esc
rip
tion
mR
NA
依照 DNA 上面的核甘酸序列，可 翻译 成蛋白 质 的 氨 基酸序列，
这 是如何做到的？
(1) DNA 的序列可以 A=U 及 C=G 的互 补关系, 转 成
messenger RNA。
(2) mRNA 与核糖体结合, 准备开始进行转译蛋白质 。
(3) mRNA 序列以三 个为一组, 称为, 遗传密码,, 每组密
码可对应一种氨基酸 。
(4) 由 RNA 译成胺基酸序列时,需要有, 翻译者,, 此 翻译
者即为 tRNA。
(5) 每个 tRNA可说是一种介面,一 边认得特定的 RNA密码，
一 边携带对应的氨基酸 。
(6) 当 tRNA 一边认出其特定密码，一边可把所携带的氨基酸
接上连 成蛋白 质 。
三
、
酶
（一）限制性内切酶
（二）连接酶
（三）修饰酶
四
、
载
体
（一）定义、分类、要求
（二）载体因宿主而不同
1、原核
2、真核
3、植物
4、动物
（
一
）
定
义
、
分
类
、
要
求
1、定义
能承载外源 DNA片段（基因）并带入受体细胞的传递
者。
2、分类
克隆载体、穿梭载体、表达载体
3、要求
（ 1）自主复制能力
（ 2）可利用的限制酶切点
（
二
）
载
体
因
宿
主
而
不
同
1、原核
（ 1） 质粒 载体：能装载 10kb左右的 DNA片段
质粒：是能自主复制的双链环状 DNA分子，它们在细
菌中以独立于染色体之外的方式存在，一个质粒就是一
个 DNA分子,1kb--200kb。
a,pBR322(p100)
b,pUC18/19(p101)
颜色反应：带有没有插入 DNA片段的 Puc18/19质柆
的菌落呈蓝色；插入有目的 DNA片段，那么就会破坏 lacZ’
的结构，导致细菌无法产生功能性的 lacZ蛋白，也就无
法形成杂合 β － 半乳糖苷酶，因而菌落是白色的。
（ 2）噬菌体载体：能装载 24kb左右的外源 DNA（ p102)
噬菌体内含双链环形、单链环形、双链线形、单链线
形等多种形式、大小不一的 DNA,且感染率高。
（
二
）
载
体
因
宿
主
而
不
同
（ 3）人工载体：大多具有大肠杆菌质粒的抗药性和
噬菌体强感染力，同时满足携带真核生物的目的基因大
片段 DNA。
柯斯质粒：又称质粒载体，是将质粒与 λ 噬菌体
DNA包装有关的区段（ cos序列）相结合构建而成的克隆
载体。能装载 35kb— 45kb的外源 DNA。（ p103)
（
二
）
载
体
因
宿
主
而
不
同
2、真核
穿梭载体：既可在原核中复制扩增，也可在真核
中扩增、表达。具备 p104的五个条件。
（ 1）酵母质粒
（ 2）人工染色体载体：整合质粒（ YIP）,复制型载
体（穿梭载体） YRP,附加体型载体（ YEP）
a,YAC b,BAC C,PACs d,MAC
（
二
）
载
体
因
宿
主
而
不
同
3、植物
（ 1） Ti质粒
（ 2）植物 DNA病毒（很少应用）
（ 3）植物转座子（很有前景）
4,动物
（ 1）取代型
（ 2）病毒－质粒重组型
（
二
）
载
体
因
宿
主
而
不
同
In
ser
tin
g a
DN
A
Sam
ple
in
to
a P
lasm
id
Cl
on
ing
i
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o
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G
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e
Cl
on
ing
into
a Y
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t A
rti
fic
ial
Ch
rom
osom
e (Y
AC
)
五
、
基
因
重
组
（一）目的基因的获得
1,基因的组成,结构基因、调节基因、操纵基因
2、目的基因的获得
（ 1）原核,基因文库
（ 2）真核,cDNA,DNA的化学合成,PCR
（二）目的基因导入受体细胞
1,受体细胞及分类
（ 1）定义：也称宿主细胸或表达系统，主目的基因
的表达，名手为复制、转录、翻译、后加工、分泌等提
供条件。
五
、
基
因
重
组
（ 2）受体细胞选择的原则（ p118)
(3)分类：微生物表达系统、植物细胞表达系统、动
物细胞表达系统
（ 4）注意区分几个概念
a 融合系统与融合蛋白
b 瞬时表达系统与稳定表达系统
c 导入方法：高等动植物－－－显微注射、电穿孔
原核细胞－－－转导、转化
转化：是指某一基因型的细胞从周围介质中吸收来
自另一基因型细胞的 DNA而使它的基因型和表型发生相
应变化的现象。
转导：是由病毒介导的细胞间进行遗传交换的一种
方式，即一个细胞的 DNA或 RNA通过病毒载体的感染转移
到另一个细胞中。
2、导入过程
（ 1）目的基因导入克隆载体：强启动子、便于连接、
因细胞不同选用合适的载体
五
、
基
因
重
组
（ 2）重组 DNA分子导入受体细胞：共有 9种方法
转化、高压电穿孔法、多聚物介导法、磷酸钙或 DEAE
－ 葡聚糖介导的转染法、原生质体融合法、脂质体介导
法、显微注射法、粒子轰击法、激光微束穿孔法
(三） 重组体的筛选
1、物理方法：如电泳
2、生物学方法
（ 1）遗传学方法：利用抗生素抗性基因、营养缺陷互补
法
（ 2） 免疫学方法 （ western,eastern）
（ 3） 利用噬菌斑筛选
3,核酸杂交
基本原理,(探针－ prob)
(1)原位杂交
（ 2） southern
(3)northern
(四） DNA序列分析
1,Maxam－ Gilbert化学降解法
2,Sanger双脱氧法
xon
-A
M
or
e D
etai
led
D
esc
rip
tion
Pol
ym
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zati
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)
Sou
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n Bl
ott
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Ge
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Tr
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sfe
r
三
章
基
因
工
程
教学重点、难点、学时
一、概述
二、基因
三、酶
四、载体
五、基因重组
1,要点
基因工程的分子生物学基础、基因工程工具酶、基因
工程载体、目的基因的获得、目的基因导入受体细胞、重
组体的筛选,DNA序列分析、基因工程在环境污染治理中
的应用
2、重点
基因工程的分子生物学、目的基因的获得、基因工程
工具酶、基因工程载体、目的基因导入受体细胞、重组体
的筛选
3、学时
5学时
教
学
要
点
、
重
点
、
学
时
一
、
概
述
（一）基因组的相关名词
1,DNA,遗传物质脱氧核糖核酸的简称。每个 DNA分子
都包含螺旋结构的双股链。
2、基因,DNA上有遗传意义的片段叫基因，基因包含一
定数量的碱基。基因是基础的遗传单位，它们决定一个人
眼睛的颜色、耳朵的大小、脑容量等所有人的生理特征和
一些行为特征。更重要的是，基因与许多疾病有关。
一
、
概
述
3、测序：确定 DNA双股链上每个独立结构单元或碱基的
确切顺序的过程。测序经常被称为, 破译,,因为其结果
就像解码一样。解码结果包含数百页和成千上万行 4种字
母的序列，这些字母表示 4种不同的碱基，它们是腺嘌呤、
鸟嘌呤、胞嘧啶和胸腺嘧啶，分别用它们的首字母 A,T、
C,G表示，其排列顺序中蕴藏着各种各样的遗传信息和生
命指令。
4、基因诊断,也叫 DNA诊断、分子诊断，是通过从患者
体内提取样本用基因检测方法来判断患者是否有基因异常
或携带病原微生物。目前，基因诊断检测的疾病主要有三
大类：感染性疾病的病原诊断、各种肿瘤的生物学特性的
判断、遗传病的基因异常分析。
一
、
概
述
5、ＤＮＡ芯片，又称基因芯片（ｇｅｎｅｃｈｉｐ），
实质上是一种高密度的寡聚核苷酸（ＤＮＡ探针）阵列。
它采用在位组合合成化学和微电子芯片的光刻技术，或者
利用其他方法将大量特定系列的ＤＮＡ片段（探针）有序
地固化在玻璃或磋衬底上，从而构成储存有大量生命信息
的ＤＮＡ芯片。
6、所谓转基因技术就是把外源基因整合到动植物基因
组中去。下面分别对转基因动物和转基因植物来进行描述。
一
、
概
述
7、基因突变是指由于 DNA碱基对的置换、增添或缺失而
引起的基因结构的变化，亦称点突变。
8、人类基因组（ＨｕｍａｎＧｅｎｏｍｅ）：是建立
人体所需的化学密码或蓝图，而这幅蓝图的基本组成是Ｄ
ＮＡ。ＤＮＡ是一条由磷酸盐和糖组成的分子链，呈双螺
旋形，即两条互相缠绕的螺旋形分子带，中间以称为碱基
的横条紧扣。除了孪生子女外，每个人的ＤＮＡ都是独一
无二的。
一
、
概
述
9、染色体（Ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ）：人体每个细胞
内皆有２３对染色体，它们位于细胞的核心，当中染色体
ＸＹ是决定性别的。一个人体内所有细胞的染色体的长度
加起来，足足有１６００亿公里长。
10,克隆是英文 clone的音译，简单讲就是一种人工
诱导的无性繁殖方式。
一
、
概
述
（二）基因工程
1、定义：将外源基因体外重组后导入受体细胞内，
使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作。
2、理论和技术支撑
（ 1）理论,40年代发现了生物的遗传物质是 DNA,50
年代弄清了 DNA的双螺旋结构,60年代确定了遗传信息的
传递方式。
一
、
概
述
（ 2）技术：工具酶、载体、逆转录酶
2、基因工程实施至少四个必要条件：工具酶、基因、
载体、受体细胞
3、基因工程的内容
4、遗传工程、基因工程,DNA重组技术的区别
5、基因工程操作的基本技术
一
、
概
述
二
、
基
因
（一）结构与功能
（二） DNA的变性、复性与杂交
（三）中心法则
（一）结构与功能
1,DNA的组成
碱基、脱氧核糖、磷酸基
二
、
基
因
（一）结构与功能
2,DNA的 结构
核心是 碱基配对（ A＝ T,G＝ C）
1） DNA双螺旋结构模型：
a.两链平行反向且右旋，也发现了三股 DNA和左旋 Z－
DNA
b.以碱基配对
c.每周含 10个碱基对，现发现碱基对也可变,A－ DNA
d.磷酸－核糖主链在外侧，碱基以平面在内侧且与主链
垂直
e.超螺旋结构普遍存在
二
、
基
因
Nu
cl
eot
ide
Genes
2）理论意义
a.细胞减数分裂和有性生殖
b.个体发育
c.遗传与变异
d.性状控制
二
、
基
因
（一）结构与功能
3.DNA的复制
1）在复制起始点形成复制起始叉；
2）半保留复制；
3）具有高度忠实性；
4）需要多种酶
4,DNA作为遗传物质的 优点
1）信息量大，可以微缩；
2）表面互补，电荷互补；
3）在水溶液中稳定性好
4）可突变，能求进化
5）有 T无 U,基因组得以增大，不会带来潜在危险
注,RNA拟酶 ?RNA蛋白质 ?DNA世界
二
、
基
因
（一）结构与功能
DN
A
Re
pl
ica
tion
变性（熔解） － 在 加热 或某些 试剂 的作用下，
DNA配对碱基之间的氢键结构受到破坏，双链 DNA多
核苷酸链能完全分离，此分离过程称为变性。
复性 －变性 DNA在一定条件下能恢复其双是螺旋
结构的过程。
二
、
基
因
（二） DNA的变性、复性与杂交
1,变性
1）变性表象
ａ粘度降低 ｂ沉速加快 ｃ紫外吸收值增大
2） 影响因素
ａ DNA本身稳定性 ｂ外部条件
3）变性研究
Tｍ
二
、
基
因
（二） DNA的变性、复性与杂交
2,复性
1） 影响因素
ａ DNA分子的大小和顺序复杂性
ｂ样品的浓度
ｃ溶液的离子强度
ｄ温度
2）复性条件
ａ盐浓度要高 ｂ温度要高得适当
3） 复性动力学
满足二级动力学
注,复杂度－ DNA中最长的没有重复序列的核苷酸对的个数值。
二
、
基
因
（二） DNA的变性、复性与杂交
3,杂交
当复性的 DNA分子由不同的两单链
分子形成时，称为杂交。
复性是分子杂交的理论基础。
二
、
基
因
（二） DNA的变性、复性与杂交
转录 －利用 DNA为模板合成 RNA的过程。
翻译 －以 RNA为模板合成蛋白质的过程。
1,RNA的转录
1） RNA聚合酶结合于 DNA分子上的特定位置；
2）使 DNA双链解旋，起始 RNA合成；
3） RNA链的延伸；
4） RNA合成的终止和释放。
二
、
基
因
（三）中心法则
2、逆转录和逆转录酶
逆转录 －以 RNA为模板在逆转录酶催化下合成 DNA
的过程。
逆转录酶 －是一种依赖于 RNA的 DNA聚合酶。
意义,逆转录和逆转录酶的发现使我们可以用真核
ｍ RNA为模板，通过逆转录而获得为特定蛋白质编码
的基因。
3,翻译 －蛋白质的生物合成
二
、
基
因
（三）中心法则
RN
A
Ri
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uc
lei
c A
cid
RN
A
Ri
bon
uc
lei
c A
cid
-A
M
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e D
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D
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mR
NA
依照 DNA 上面的核甘酸序列，可 翻译 成蛋白 质 的 氨 基酸序列，
这 是如何做到的？
(1) DNA 的序列可以 A=U 及 C=G 的互 补关系, 转 成
messenger RNA。
(2) mRNA 与核糖体结合, 准备开始进行转译蛋白质 。
(3) mRNA 序列以三 个为一组, 称为, 遗传密码,, 每组密
码可对应一种氨基酸 。
(4) 由 RNA 译成胺基酸序列时,需要有, 翻译者,, 此 翻译
者即为 tRNA。
(5) 每个 tRNA可说是一种介面,一 边认得特定的 RNA密码，
一 边携带对应的氨基酸 。
(6) 当 tRNA 一边认出其特定密码，一边可把所携带的氨基酸
接上连 成蛋白 质 。
三
、
酶
（一）限制性内切酶
（二）连接酶
（三）修饰酶
四
、
载
体
（一）定义、分类、要求
（二）载体因宿主而不同
1、原核
2、真核
3、植物
4、动物
（
一
）
定
义
、
分
类
、
要
求
1、定义
能承载外源 DNA片段（基因）并带入受体细胞的传递
者。
2、分类
克隆载体、穿梭载体、表达载体
3、要求
（ 1）自主复制能力
（ 2）可利用的限制酶切点
（
二
）
载
体
因
宿
主
而
不
同
1、原核
（ 1） 质粒 载体：能装载 10kb左右的 DNA片段
质粒：是能自主复制的双链环状 DNA分子，它们在细
菌中以独立于染色体之外的方式存在，一个质粒就是一
个 DNA分子,1kb--200kb。
a,pBR322(p100)
b,pUC18/19(p101)
颜色反应：带有没有插入 DNA片段的 Puc18/19质柆
的菌落呈蓝色；插入有目的 DNA片段，那么就会破坏 lacZ’
的结构，导致细菌无法产生功能性的 lacZ蛋白，也就无
法形成杂合 β － 半乳糖苷酶，因而菌落是白色的。
（ 2）噬菌体载体：能装载 24kb左右的外源 DNA（ p102)
噬菌体内含双链环形、单链环形、双链线形、单链线
形等多种形式、大小不一的 DNA,且感染率高。
（
二
）
载
体
因
宿
主
而
不
同
（ 3）人工载体：大多具有大肠杆菌质粒的抗药性和
噬菌体强感染力，同时满足携带真核生物的目的基因大
片段 DNA。
柯斯质粒：又称质粒载体，是将质粒与 λ 噬菌体
DNA包装有关的区段（ cos序列）相结合构建而成的克隆
载体。能装载 35kb— 45kb的外源 DNA。（ p103)
（
二
）
载
体
因
宿
主
而
不
同
2、真核
穿梭载体：既可在原核中复制扩增，也可在真核
中扩增、表达。具备 p104的五个条件。
（ 1）酵母质粒
（ 2）人工染色体载体：整合质粒（ YIP）,复制型载
体（穿梭载体） YRP,附加体型载体（ YEP）
a,YAC b,BAC C,PACs d,MAC
（
二
）
载
体
因
宿
主
而
不
同
3、植物
（ 1） Ti质粒
（ 2）植物 DNA病毒（很少应用）
（ 3）植物转座子（很有前景）
4,动物
（ 1）取代型
（ 2）病毒－质粒重组型
（
二
）
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五
、
基
因
重
组
（一）目的基因的获得
1,基因的组成,结构基因、调节基因、操纵基因
2、目的基因的获得
（ 1）原核,基因文库
（ 2）真核,cDNA,DNA的化学合成,PCR
（二）目的基因导入受体细胞
1,受体细胞及分类
（ 1）定义：也称宿主细胸或表达系统，主目的基因
的表达，名手为复制、转录、翻译、后加工、分泌等提
供条件。
五
、
基
因
重
组
（ 2）受体细胞选择的原则（ p118)
(3)分类：微生物表达系统、植物细胞表达系统、动
物细胞表达系统
（ 4）注意区分几个概念
a 融合系统与融合蛋白
b 瞬时表达系统与稳定表达系统
c 导入方法：高等动植物－－－显微注射、电穿孔
原核细胞－－－转导、转化
转化：是指某一基因型的细胞从周围介质中吸收来
自另一基因型细胞的 DNA而使它的基因型和表型发生相
应变化的现象。
转导：是由病毒介导的细胞间进行遗传交换的一种
方式，即一个细胞的 DNA或 RNA通过病毒载体的感染转移
到另一个细胞中。
2、导入过程
（ 1）目的基因导入克隆载体：强启动子、便于连接、
因细胞不同选用合适的载体
五
、
基
因
重
组
（ 2）重组 DNA分子导入受体细胞：共有 9种方法
转化、高压电穿孔法、多聚物介导法、磷酸钙或 DEAE
－ 葡聚糖介导的转染法、原生质体融合法、脂质体介导
法、显微注射法、粒子轰击法、激光微束穿孔法
(三） 重组体的筛选
1、物理方法：如电泳
2、生物学方法
（ 1）遗传学方法：利用抗生素抗性基因、营养缺陷互补
法
（ 2） 免疫学方法 （ western,eastern）
（ 3） 利用噬菌斑筛选
3,核酸杂交
基本原理,(探针－ prob)
(1)原位杂交
（ 2） southern
(3)northern
(四） DNA序列分析
1,Maxam－ Gilbert化学降解法
2,Sanger双脱氧法
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