柯赫氏法则( Koch’ Rule),一种新病害的诊断和病原生物的 鉴定
在病植物上常伴随有一种病原生物存在;
该微生物可在离体的或人工培养基上分离纯化而得到纯培养;
将纯培养接种到相同品种的健株上,表现出相同症状的病害;
从接种发病的植物上再分离到其纯培养,性状与原来的记录相同。
第二节 林木病原原核生物及其所致病害
原核生物是指含有原核结构的单细胞生物。它的遗传物质分散在细胞质中,没有明显的细胞核。细胞质中含有小分子的核蛋白体,但没有内质网、线粒体等细胞器。包括细菌、放线菌和菌原体等。
一,病原细菌的形态和结构
病原细菌大多是杆状菌,少数为球状。有细胞壁。大多有鞭毛,无芽孢,细胞壁外有粘质层,但很少有荚膜。有些细菌中,还有独立于核质之外呈环状结构的遗传因子,称为质粒,它编码控制细菌的抗药性、育性或致病性等形状。依革兰氏染色反应分为两类。
原核生物的主要类群
按伯杰氏细菌鉴定手册(第九版,1994),原核生物界分为 4个门,7个纲,35个组群。区分组的依据是菌体形态特征、能源及营养利用特性、活动性、革兰氏染色反应、芽孢或外生孢子特点、对氧的需求等表型特征等,近年来还增加了细胞壁成分分析、蛋白质和核酸的组成,DNA-DNA杂交以及 rRNA序列分析等内容。
4个门分别是:薄壁菌门( Phylum Gracilicutes)、厚壁菌门( Phylum Firmicutes)、软壁菌门( Phylum
tenericutes)和疵壁菌门( Phylum Mendosicutes),其中前 3个门与植物病害有关。
病原细菌的类群
分属于薄壁菌门和厚壁菌门的 18个属。
薄壁菌门有 12个属,其中较重要的有 7个属:土壤杆菌属 (Agrobacterium),布克氏菌属 (Burkholderia),欧文氏菌属 (Erwinia),假单孢杆菌属 (Pseudomonas),黄单孢杆菌属 (Xanthomonas),木质部小菌属 (Xylella)(以前称为类立克次氏体或木质部难养菌,可培养),韧皮部杆菌属 (Liberobacter) (以前称为类细菌或韧皮部难养菌,
不能培养)。
厚壁菌门有 6个属:较重要的有 2个属:棒形杆菌属
(Clavibacter),短小杆菌属( Curtobacterium).
植物病原细菌的属和种区分属的依据:
形态特征和培养形状:菌体形状与大小、鞭毛、荚膜、
芽孢,在固体和液体培养中的形态特征和色素的产生,
生化性状:革兰氏染色反应,细胞壁结构与组分,色素和毒素的生化性状、抗原性、代谢类型、对碳源氮源和大分子物质的利用能力与分解产物等。
遗传形状,DNA中的 G+C mol%、寡聚核苷酸序列、以及 DNA-rRNA杂交的同源性等。
原核生物的种及种下分类单元
原核生物“种”的概念比动物和植物的“种”概念要模糊得多,因为形态差异不大,“性”的概念也很难应用到分类中。
在细菌“种”的下面,也可以根据寄主范围、生理生化形状、血清学反应、噬菌体反应等进一步区分为
“亚种”、“致病变种”、“生化变种”、“血清变种”和“嗜菌变种”等。
致病变种( pathovar,简称 pv.),在种下以寄主范围和致病性差异为依据划分的组群。例如,Pseudomonas
syringae pv.mori 是 P,syringae寄生在桑树上的组群。
细菌病害的症状和诊断
林木细菌病害的主要症状有 斑点、溃疡、萎蔫、
瘤肿 等。共同特点是病组织呈水渍状,在潮湿条件下,从生病部分的伤口、气孔、皮孔等向外溢出细菌粘液。木质部小菌属引起叶灼,韧皮部杆菌属引起黄化和枯萎症状。
取新鲜病组织切开,在显微镜下可见切口处有细菌菌液流出。木质部小菌属和韧皮部杆菌属引起的病害除外。
杨树根癌病
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杉木细菌性叶枯病和核桃细菌性黑斑病细菌病害的侵染循环和防治
侵入途径:伤口。寄生性较强的种类,还可通过气孔、
水孔或皮孔等自然孔口侵入植物。
潜育期:一般只需几天。往往有再侵染。
传播:雨水、灌溉水和昆虫。
越冬(侵染来源):种子和苗木;生病植株;病株残体;土壤和肥料。前两个途径是主要途径。
防治:着重消除侵染来源,作好种苗消毒和清除植物的病组织和病残体;使用抗菌素进行苗木病害的消毒和防治;选用抗病品种;防止造成伤口和及时保护伤口。
类菌原体及其所致病害
类菌原体( Mycoplasma like organism,MLO)是属于软壁菌门的原核生物,包括螺原体属
( Spiroplasma)和植原体属( Phytoplasma),
约有 300种高等植物发生了类菌原体病害,重要的有枣疯病、泡桐丛枝病、桑萎缩病等。
(参考书:刘仲健等,植原体病理学,1999,中国林业出版社)
类菌原体的基本特性
无细胞壁,只有单位膜组成的原生质膜包围,在寄主细胞内为球形或椭圆形,繁殖期可以是丝状或哑铃状。
螺原体属的菌体为螺旋形。
植原体属目前尚不能人工培养,螺原体属则能培养。
螺原体属在固体培养基上形成煎蛋状的菌落。
对青霉素不敏感,而对四环素敏感。
寄生在植物韧皮部的筛管和伴胞细胞内,偶尔也在韧皮部的薄壁细胞中发现。
筛管中的植物菌原体螺原体泡桐丛枝病类菌原体病害的症状和侵染循环
症状,黄化、丛枝、萎缩和韧皮部坏死 。丛枝上的叶片常表现失绿、变小、发脆等特征。丛枝上的花有时转变为叶,后期果实往往变形。
病程:通过轻微伤口侵入 。潜育期较长。菌体通过韧皮部组织先向下,再向上,增殖到一定浓度时表现症状。
传播:叶蝉、木虱等昆虫;菟丝子;嫁接。
侵染来源:生病植株,传病昆虫,接穗、插条、种根等繁殖材料。
类菌原体病害的防治
严格挑选无病的繁殖材料;对于怀疑有病菌的繁殖材料用高温消毒可起到一定的抑制作用。使用组培苗。
防除传病昆虫。
选育抗病品种。
用四环素处理病苗和繁殖材料。
林木病原病毒及其所致病害
病毒( virus)是包被在蛋白或脂蛋白保护性衣壳中,只能在适合的寄主细胞内完成自身复制的一个或多个基因组的核酸分子,又称分子寄生物。病毒的复制依赖于寄主的蛋白质合成系统,需要寄主提供原材料,靠脂蛋白双层膜定位在寄主细胞内的位点上。
病毒在林木病害上的重要性较小。杨树花叶病是林木上的重要病害。
病毒的一般性状
病毒是细胞内专性寄生物,但寄主范围一般较广。体积比细菌小得多,其大小一般约 10-
30nm。
病毒的形状可分为等轴的和不等轴的两类。等轴的为球形(多面体),不等轴的为杆状和纤维状。
寄生于植物上的病毒所含核酸绝大多数为 RNA,
少数为 DNA.
病毒病的症状和诊断
病毒病绝大多数是 系统侵染 的,但病毒很少进入种子,
根尖和梢尖的组织也可能不带毒。发病后一般表现为系统症状 。无病征出现。
病毒病的症状类型,叶片变色;畸形;生长停滞 。
病毒病的诊断:症状观察;人工诱发试验。
病毒种类的确定:病毒的传染方式、寄主范围、血清反应、病毒粒体的形态、核酸类型、核酸含量、核酸分子量,核酸序列分析,以及其他一些理化特性(失毒温度、稀释限点、体外保毒期)等。
Virus-infected leaves
杨树花叶病月季花叶病病毒病的侵染循环及防治
侵入途径:轻微伤口。侵入后依靠寄主的运输机制被动扩展。潜育期较长。
传播方式:接触传播;嫁接传播;宿主动植物传播,
如昆虫、螨、线虫、菟丝子、真菌等。传播病毒的昆虫主要是具有刺吸式口器的种类,如蚜虫、叶跳蝉。
侵染来源:生病植株;植物繁殖材料;媒介昆虫。
防治途径:基本与植物菌原体病害相同,除了四环素药物防治以外。
病毒病害实例:臭椿花叶病
症状:花叶、畸形,
接种试验:三生烟、苋色藜产生局部斑,
内含体:风轮状,
病毒粒体:弯曲线状,长约 725nm.
病毒衣壳蛋白亚基分子量的测定,SDS-
聚丙烯酰胺凝胶电泳法,35000道尔顿,
病毒种类:马铃薯 Y病毒组病毒,
臭椿花叶病在烟草上接种在苋色藜上接种风轮状内含体病毒粒体蛋白电泳图林木线虫病害
线虫属圆虫动物门线虫纲( Nematoda).整个发育分卵、
幼虫和成虫几个时期。从卵孵化出来的幼虫一般经三次脱皮变为成虫。
植物线虫都是专性寄生的。按寄生的方式,可分为外寄生和内寄生两类。
根结线虫属( Meloidogyne)和松材线虫
( Bursaphelenchus xylophilus)是重要的林木病原线虫。
线虫与其他病原在一起常使病害比单独一种严重得多
(复合侵染)。如穿孔线虫( Radopdolus similis)与尖孢镰刀菌香蕉专化性( Fusarium oxysporum f,sp,
cubense)之间存在联合作用。
Pinus massoniana killed by the pinewood nematode
寄生性种子植物
常见的有桑寄生( Loranthaceae)和菟丝子科( Cuscutaceae),
寄生性种子植物都是严格寄生物。根据对寄主的依赖性不同分为半寄生种子植物(如桑寄生科)和全寄生种子植物
(如菟丝子科)。
菟丝子害