滨 州 职 业 学 院第十二章 马铃薯的组织培养目的要求,
(1)掌握马铃薯脱毒培养的大致过程，
了解马铃薯脱毒苗的鉴定方法 ;
(2)掌握马铃薯的生物学习性：
(3)熟悉微型薯的生产过程滨 州 职 业 学 院微型薯滨 州 职 业 学 院滨 州 职 业 学 院滨 州 职 业 学 院马铃薯是一种全球性的重要经济作物。适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物也是一种调节市场供应的重要蔬菜。
马铃薯原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。
滨 州 职 业 学 院但是,当发现从外地引种栽培 1~2个周期后，明显发现产量降低，植株变矮，并有卷叶的现象产生，经检测证明这是由于病毒引起的退化现象。
滨 州 职 业 学 院危害马铃薯的病毒有 17种之多，
如 X病毒,S病毒,Y病毒,M病毒、
A病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。由于马铃薯是无性繁殖作物，
病毒逐代积累，日益严重，引起严重退化。马铃薯病毒可使块茎产量减少 50%~80%。
滨 州 职 业 学 院法国 Morel和他的同事们，
1955年从患病马铃薯植株中选取到了无病植株，为治疗作物病毒开辟了新途径。
滨 州 职 业 学 院一、特性和生物学习性
1、马铃薯的形态特性
(1)根 马铃薯的根系由出生根和匍匐根两部分组成。
(2)茎 马铃薯分地上部分和地下部分，地上主茎在形成 16片叶子后，由花芽封顶，
并在花的下部发生两个侧枝，从而构成马铃薯的主要同化系统。地下茎包括主茎的地下部分、匍匐茎和块茎。
滨 州 职 业 学 院
（ 3）叶 马铃薯先出土的叶是初生叶，全缘，
心脏形。以后发生的叶奇数羽状全裂单叶，
在叶柄基部与主茎相连处着生有托叶。
（ 4）花 马铃薯的花为聚伞花序，第一或第二花序开放，恰是块茎强盛膨大之时，此时是需要不断浇水的形态标志。
(5) 果实、种子 马铃薯果实为球形或椭圆形浆果。种子小。扁平肾形。种子可用来繁殖，但后代性状分离大。
滨 州 职 业 学 院
2,生物学习性马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻，解除休眠的块茎 4℃ 下发芽，发芽适温为 12~18℃ 。地上茎叶生长温度为 17~21℃,25℃ 以上时生长不良，叶变小，
超过 30℃ 和 7℃ 以下茎叶停止生长,-1℃ 时受冻。块茎形成要求昼温 14~24℃,夜温 12~14℃,土温
16~18℃ 。土温 20℃ 以上时块茎形成缓慢，而且容易引起退化，高温下养分多用于芽和匍匐茎生长不易形成块茎,25~30℃ 时已经长成的块茎也变成细长茎，结薯期要求 12h左右的短日照和疏松、湿润、肥沃以及通气良好的土壤条件。土壤板结，薯块表面粗糙和薯形不整。
滨 州 职 业 学 院马铃薯生产中普遍存在有种性退化问题，表现为植株长势衰弱，株形矮化，分枝变少，薯块变小，产量逐降低，造成退化的原因和学说多种，综合而言，主要是薯块生长锥细胞发生阶段性衰老而导致种性退化，而病毒和细菌病害的侵染，以及肥水、营养条件不良等都会加剧其退化程度。
滨 州 职 业 学 院二、马铃薯脱毒技术马铃薯在营养繁殖时易受病毒的浸染，当条件适合时，病毒就会在植株内增殖，转运和积累，
随着世代传递，病毒危害逐年加重，一般可造成减产 50％以上。研究发现，有 30多种病毒易感染马铃薯，并引起品种退化，严重影响马铃薯的生产。通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除 PLRV,PVY,PVA,PAF,PVG、
PVM,PSW等病毒。
滨 州 职 业 学 院因此，采用组织培养技术，
通过一定良种繁殖体系，生产优质种薯，是保证马铃薯高产、稳产的一项有效措施。
滨 州 职 业 学 院全国现有马铃薯播种面积 300多万公顷，
且有逐步增加的趋势，每年需合格种薯
45亿公斤，脱毒原种 4亿公斤，脱毒小薯或微型薯 45亿粒。因此，脱毒马铃薯推广具有广阔的市场前景，对于增加农民收入和发展马铃薯产业化生产具有十分重要的意义。
滨 州 职 业 学 院我国的马铃薯平均单产仅为 13.60吨 /公顷，是世界单产最高国这瑞士（ 48.80吨 /公顷）的
1/4。造成如此大的差别，最主要的因素就是种薯质量差，品种布局不合理。采用脱毒快繁技术，种用脱毒种薯，一般可增产 30-50%，
甚至成倍增产，充分发挥品种的潜能，提高马铃薯生产能力。如果我国现有马铃薯播种面积的 1/3（即 114万公顷）用脱毒种薯，就可年增产粮食 100多亿公斤。
滨 州 职 业 学 院我国在 70年代用茎尖组织培养方法得到脱毒马铃薯试管苗，并成功地获得脱毒复壮的马铃薯，开始了脱毒种薯的生产和推广。 "八五 "期间，农业部在全国范围内设立了 6个马铃薯原原种基地建设和种薯生产项目，初步形成了脱毒草种薯生产体系。共推广脱毒种薯 36.5-40万公顷，
获经济效益近 30.8亿元。
滨 州 职 业 学 院我国已有许多科研、推广单位开展了脱毒马铃薯的研究和生产，在生产上产生了一定的经济效益和增产效果，但由于长期以来各自为政，技术方法和脱毒标准不尽统一，未能发挥出脱毒种薯应有的增产潜力。
到目前为止，我国仍未建立国家级的脱毒种薯质量监督和病毒检测制度。
滨 州 职 业 学 院
1．脱毒种薯生产程序采用微茎尖组织培养的方法，诱导出苗，采用联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后，无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱毒试管基础苗。
滨 州 职 业 学 院试管基础苗在无菌条件下，采用固体、液体培养基相结合的方法，进行扩繁基础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插，生产出原原种（或称脱毒小薯）。用原原种在一定隔离条件下产生原种 1代，以后逐级称为原种 2代、良种 1代、良种 2代。
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2．茎尖培养脱毒
（ 1） 取材和培养一般多采用在室内发芽，芽经热处理
（ 38℃ ） 2周。然后取顶芽或侧芽 1厘米的茎尖，在自来水下冲洗干净，无菌条件下先用 70％的酒精浸润组织 15-20秒，
再用 2％的次氯酸钠溶液浸泡 4--5min，
然后用无菌水冲洗 3次。
滨 州 职 业 学 院把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离，逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可以留 1-2个叶原基,0.2—
0.3毫米，随即接种于 MS液体培养基上，每升加 0.1mgNAA,
0.2mgGA3,0.5BA,2%蔗糖,p H
值 5.8。
滨 州 职 业 学 院培养条件,21~25℃,2000-
3000 lx,12h/d。
2-3周愈伤,4-5周绿点,3--6月长成 2-3厘米小芽，越慢越好，
出芽很快的扔掉。
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（ 2） 继代和生根培养成功的马铃薯脱毒苗，经 ELISA（试剂盒）鉴定后（试管苗应每 3月检测一次，每年 4
次） 鉴定后，采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。取试管苗单节切段扦插在
（或平放）固体培养基上，每瓶可插 20
个左右茎段，经 20d左右发育成 5~10cm
高小植株，继续进行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖 5~8倍，试管苗多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体培养。
滨 州 职 业 学 院培养基,MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙 10,3%蔗糖,20-25度,3000-
4000LX,14-16小时光照，每 3周继代一次，单芽茎段约 1厘米，可插也可平放，原则试管苗用 2年 — 3年。
滨 州 职 业 学 院滨 州 职 业 学 院
(3) 驯化 为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力，移植前对试管苗要进行光、温锻炼。
炼苗期温室内的温度：白天 23~27℃,夜间不低于 14℃ 。炼苗的具体方法是：移植前 7d左右，
将长有 3~5片叶、高 2~3cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从培养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管苗，在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。
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3,脱毒苗切繁 基础苗成活进入正常后便可切繁，但切繁量的多少和质量的高低，除与前边提到的水与温湿度条件有关外，能否掌握正确的切繁方法和适宜的切繁苗龄也是非常重要的。脱毒苗切繁主要是剪取顶部芽尖茎段（主茎芽尖和腋芽芽尖）直接扦插。
滨 州 职 业 学 院微型薯生产,网室内，铺 6厘米蛭石,3%撒可富稀释一倍，喷潮湿即可。
插前浇水湿润，插后浇透。覆膜一周（但不要压紧），湿度 80%以上，期间喷水 2次。
揭膜后喷营养液撒可富 3%，喷水冲洗（每周
2次），每周喷一次 0.5%硫酸铜（叶面），
中后期喷药防病，防早疫、晚疫病，连续喷 2-
3-4次。喷辛硫磷防害虫。
苗高 6— 8厘米培蛭石防绿薯,1-2厘米厚，约
35-40天出现气生薯，不断盖蛭石。
滨 州 职 业 学 院四、马铃薯无病毒苗的鉴定材料
1、指示植物鉴定在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。
2、鉴定寄主的准备马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红，茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物应在无虫网室中培养。
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３,接种液制备及接种叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱布滤出汁液，再用蒸馏水稀释１０倍作为接种物，在鉴定寄主植物的叶面，６００目的金刚砂混入接种物中，然后用左手心紧靠在寄主的背面，以右手实指蘸取接种液，均匀的在叶背面擦过，以不造成叶片产生伤痕为度，最后把叶面上多余的接种物用清水冲洗干净，放臵在１５～２４的防虫室中，一般５－１０天可发病 。
滨 州 职 业 学 院五、马铃薯无病毒株的繁殖和保存
1．无病毒株的繁殖通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植株，而生产上需要数以万计的健康种薯。
同时无病毒植株并没有对该病毒获得免疫能力，仍会在繁殖中再次侵染。如何在以后繁殖中防止受病毒再侵染是很关键的一环。目前在生产上来用的方法很多，下面介绍主要的几种。
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（１） 直接块茎繁殖
（２） 扦插繁殖
（３） 组织培养切段繁殖
A：继代培养
B：低温保存滨 州 职 业 学 院复习思考题
（１） 对马铃薯脱毒苗的培养大致分几个阶段？各阶段是怎样操作的？
（２） 马铃薯的生物学习性有哪些？
(1)掌握马铃薯脱毒培养的大致过程，
了解马铃薯脱毒苗的鉴定方法 ;
(2)掌握马铃薯的生物学习性：
(3)熟悉微型薯的生产过程滨 州 职 业 学 院微型薯滨 州 职 业 学 院滨 州 职 业 学 院滨 州 职 业 学 院马铃薯是一种全球性的重要经济作物。适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物也是一种调节市场供应的重要蔬菜。
马铃薯原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。
滨 州 职 业 学 院但是,当发现从外地引种栽培 1~2个周期后，明显发现产量降低，植株变矮，并有卷叶的现象产生，经检测证明这是由于病毒引起的退化现象。
滨 州 职 业 学 院危害马铃薯的病毒有 17种之多，
如 X病毒,S病毒,Y病毒,M病毒、
A病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。由于马铃薯是无性繁殖作物，
病毒逐代积累，日益严重，引起严重退化。马铃薯病毒可使块茎产量减少 50%~80%。
滨 州 职 业 学 院法国 Morel和他的同事们，
1955年从患病马铃薯植株中选取到了无病植株，为治疗作物病毒开辟了新途径。
滨 州 职 业 学 院一、特性和生物学习性
1、马铃薯的形态特性
(1)根 马铃薯的根系由出生根和匍匐根两部分组成。
(2)茎 马铃薯分地上部分和地下部分，地上主茎在形成 16片叶子后，由花芽封顶，
并在花的下部发生两个侧枝，从而构成马铃薯的主要同化系统。地下茎包括主茎的地下部分、匍匐茎和块茎。
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（ 3）叶 马铃薯先出土的叶是初生叶，全缘，
心脏形。以后发生的叶奇数羽状全裂单叶，
在叶柄基部与主茎相连处着生有托叶。
（ 4）花 马铃薯的花为聚伞花序，第一或第二花序开放，恰是块茎强盛膨大之时，此时是需要不断浇水的形态标志。
(5) 果实、种子 马铃薯果实为球形或椭圆形浆果。种子小。扁平肾形。种子可用来繁殖，但后代性状分离大。
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2,生物学习性马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻，解除休眠的块茎 4℃ 下发芽，发芽适温为 12~18℃ 。地上茎叶生长温度为 17~21℃,25℃ 以上时生长不良，叶变小，
超过 30℃ 和 7℃ 以下茎叶停止生长,-1℃ 时受冻。块茎形成要求昼温 14~24℃,夜温 12~14℃,土温
16~18℃ 。土温 20℃ 以上时块茎形成缓慢，而且容易引起退化，高温下养分多用于芽和匍匐茎生长不易形成块茎,25~30℃ 时已经长成的块茎也变成细长茎，结薯期要求 12h左右的短日照和疏松、湿润、肥沃以及通气良好的土壤条件。土壤板结，薯块表面粗糙和薯形不整。
滨 州 职 业 学 院马铃薯生产中普遍存在有种性退化问题，表现为植株长势衰弱，株形矮化，分枝变少，薯块变小，产量逐降低，造成退化的原因和学说多种，综合而言，主要是薯块生长锥细胞发生阶段性衰老而导致种性退化，而病毒和细菌病害的侵染，以及肥水、营养条件不良等都会加剧其退化程度。
滨 州 职 业 学 院二、马铃薯脱毒技术马铃薯在营养繁殖时易受病毒的浸染，当条件适合时，病毒就会在植株内增殖，转运和积累，
随着世代传递，病毒危害逐年加重，一般可造成减产 50％以上。研究发现，有 30多种病毒易感染马铃薯，并引起品种退化，严重影响马铃薯的生产。通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除 PLRV,PVY,PVA,PAF,PVG、
PVM,PSW等病毒。
滨 州 职 业 学 院因此，采用组织培养技术，
通过一定良种繁殖体系，生产优质种薯，是保证马铃薯高产、稳产的一项有效措施。
滨 州 职 业 学 院全国现有马铃薯播种面积 300多万公顷，
且有逐步增加的趋势，每年需合格种薯
45亿公斤，脱毒原种 4亿公斤，脱毒小薯或微型薯 45亿粒。因此，脱毒马铃薯推广具有广阔的市场前景，对于增加农民收入和发展马铃薯产业化生产具有十分重要的意义。
滨 州 职 业 学 院我国的马铃薯平均单产仅为 13.60吨 /公顷，是世界单产最高国这瑞士（ 48.80吨 /公顷）的
1/4。造成如此大的差别，最主要的因素就是种薯质量差，品种布局不合理。采用脱毒快繁技术，种用脱毒种薯，一般可增产 30-50%，
甚至成倍增产，充分发挥品种的潜能，提高马铃薯生产能力。如果我国现有马铃薯播种面积的 1/3（即 114万公顷）用脱毒种薯，就可年增产粮食 100多亿公斤。
滨 州 职 业 学 院我国在 70年代用茎尖组织培养方法得到脱毒马铃薯试管苗，并成功地获得脱毒复壮的马铃薯，开始了脱毒种薯的生产和推广。 "八五 "期间，农业部在全国范围内设立了 6个马铃薯原原种基地建设和种薯生产项目，初步形成了脱毒草种薯生产体系。共推广脱毒种薯 36.5-40万公顷，
获经济效益近 30.8亿元。
滨 州 职 业 学 院我国已有许多科研、推广单位开展了脱毒马铃薯的研究和生产，在生产上产生了一定的经济效益和增产效果，但由于长期以来各自为政，技术方法和脱毒标准不尽统一，未能发挥出脱毒种薯应有的增产潜力。
到目前为止，我国仍未建立国家级的脱毒种薯质量监督和病毒检测制度。
滨 州 职 业 学 院
1．脱毒种薯生产程序采用微茎尖组织培养的方法，诱导出苗，采用联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定马铃薯病毒和类病毒，经鉴定后，无主要病毒及类病毒的试管苗可定为脱毒试管基础苗。
滨 州 职 业 学 院试管基础苗在无菌条件下，采用固体、液体培养基相结合的方法，进行扩繁基础苗，在防虫网室栽植或封闭温室扦插，生产出原原种（或称脱毒小薯）。用原原种在一定隔离条件下产生原种 1代，以后逐级称为原种 2代、良种 1代、良种 2代。
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2．茎尖培养脱毒
（ 1） 取材和培养一般多采用在室内发芽，芽经热处理
（ 38℃ ） 2周。然后取顶芽或侧芽 1厘米的茎尖，在自来水下冲洗干净，无菌条件下先用 70％的酒精浸润组织 15-20秒，
再用 2％的次氯酸钠溶液浸泡 4--5min，
然后用无菌水冲洗 3次。
滨 州 职 业 学 院把消毒好的芽放在解剖镜下仔细剥离，逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，可以留 1-2个叶原基,0.2—
0.3毫米，随即接种于 MS液体培养基上，每升加 0.1mgNAA,
0.2mgGA3,0.5BA,2%蔗糖,p H
值 5.8。
滨 州 职 业 学 院培养条件,21~25℃,2000-
3000 lx,12h/d。
2-3周愈伤,4-5周绿点,3--6月长成 2-3厘米小芽，越慢越好，
出芽很快的扔掉。
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（ 2） 继代和生根培养成功的马铃薯脱毒苗，经 ELISA（试剂盒）鉴定后（试管苗应每 3月检测一次，每年 4
次） 鉴定后，采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。取试管苗单节切段扦插在
（或平放）固体培养基上，每瓶可插 20
个左右茎段，经 20d左右发育成 5~10cm
高小植株，继续进行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖 5~8倍，试管苗多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体培养。
滨 州 职 业 学 院培养基,MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙 10,3%蔗糖,20-25度,3000-
4000LX,14-16小时光照，每 3周继代一次，单芽茎段约 1厘米，可插也可平放，原则试管苗用 2年 — 3年。
滨 州 职 业 学 院滨 州 职 业 学 院
(3) 驯化 为增强试管苗对温室内环境条件的适应能力，移植前对试管苗要进行光、温锻炼。
炼苗期温室内的温度：白天 23~27℃,夜间不低于 14℃ 。炼苗的具体方法是：移植前 7d左右，
将长有 3~5片叶、高 2~3cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从培养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管苗，在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。
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3,脱毒苗切繁 基础苗成活进入正常后便可切繁，但切繁量的多少和质量的高低，除与前边提到的水与温湿度条件有关外，能否掌握正确的切繁方法和适宜的切繁苗龄也是非常重要的。脱毒苗切繁主要是剪取顶部芽尖茎段（主茎芽尖和腋芽芽尖）直接扦插。
滨 州 职 业 学 院微型薯生产,网室内，铺 6厘米蛭石,3%撒可富稀释一倍，喷潮湿即可。
插前浇水湿润，插后浇透。覆膜一周（但不要压紧），湿度 80%以上，期间喷水 2次。
揭膜后喷营养液撒可富 3%，喷水冲洗（每周
2次），每周喷一次 0.5%硫酸铜（叶面），
中后期喷药防病，防早疫、晚疫病，连续喷 2-
3-4次。喷辛硫磷防害虫。
苗高 6— 8厘米培蛭石防绿薯,1-2厘米厚，约
35-40天出现气生薯，不断盖蛭石。
滨 州 职 业 学 院四、马铃薯无病毒苗的鉴定材料
1、指示植物鉴定在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。
2、鉴定寄主的准备马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红，茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物应在无虫网室中培养。
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３,接种液制备及接种叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱布滤出汁液，再用蒸馏水稀释１０倍作为接种物，在鉴定寄主植物的叶面，６００目的金刚砂混入接种物中，然后用左手心紧靠在寄主的背面，以右手实指蘸取接种液，均匀的在叶背面擦过，以不造成叶片产生伤痕为度，最后把叶面上多余的接种物用清水冲洗干净，放臵在１５～２４的防虫室中，一般５－１０天可发病 。
滨 州 职 业 学 院五、马铃薯无病毒株的繁殖和保存
1．无病毒株的繁殖通过茎尖培养只能得到很少的无病毒植株，而生产上需要数以万计的健康种薯。
同时无病毒植株并没有对该病毒获得免疫能力，仍会在繁殖中再次侵染。如何在以后繁殖中防止受病毒再侵染是很关键的一环。目前在生产上来用的方法很多，下面介绍主要的几种。
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（１） 直接块茎繁殖
（２） 扦插繁殖
（３） 组织培养切段繁殖
A：继代培养
B：低温保存滨 州 职 业 学 院复习思考题
（１） 对马铃薯脱毒苗的培养大致分几个阶段？各阶段是怎样操作的？
（２） 马铃薯的生物学习性有哪些？
