三、填空题 1.RNA是由核糖核苷酸通过 键连接而成的一种 。几乎所有的 RNA都是由 DNA 而来,因此,序列和其中一条链 。 2.多数类型的RNA是由加工 产生的,真核生物前体tRNA的 包 括 的切除和 的拼接。随着 和 端的序列切除,3’端加上了序列 。在四膜虫中,前体tRNA 的切除和 的拼接是通过 机制进行的。 3.RNase P是一种 ,含有 作为它的活性部位,这种酶在 序 列的 切割 。 4.Cot1/2实验测定的是 。 5.假定摆动假说是正确的,那么最少需要 种tRNA来翻译61种氨基酸密码子。 6.写出两种合成后不被切割或拼接的RNA: 和 。 7.在 DNA合成中负责复制和修复的酶是 。 8.染色体中参与复制的活性区呈Y型结构,称为 。 9.在 DNA复制和修复过程中修补 DNA螺旋上缺口的酶称为 。 10. 在 DNA复制过程中,连续合成的子链称 ,另一条非连续合成的子链称为 。 11. 如果 DNA聚合酶把一个不正确的核苷酸加到3’末端,—个含3’→5’活性的独立催化区会将这个错配碱基切去。这个催化区称为 酶。 12. DNA后随链合成的起始要一段短的 ,它是由 以核糖核苷酸为底物合成的 。 13. 复制叉上DNA双螺旋的解旋作用由 催化的,它利用来源于ATP水解产生的能量沿 DNA链单向移动。 14.帮助 DNA解旋的 与单链DNA结合,使碱基仍可参与模板反应。 15. DNA引发酶分子与 DNA解旋酶直接结合形成一个 单位,它可在复制叉上沿后随链下移,随着后随链的延伸合成 RNA引物。 16. 如果 DNA聚合酶出现错误,会产生一对错配碱基,这种错误可以被一个通过甲基化作用来区别新链和旧链的特别 系统进行校正。 17. 对酵母、细菌以及几种生活在真核生物细胞中的病毒来说,都可在 DNA独特序列 处观察到复制泡的形成。 18. 可被看成一种可形成暂时单链缺口(Ⅰ型)或暂时双链缺口(Ⅱ型)的可逆核酸酶。 19. 在大肠杆菌中发现了 种 DNA聚合酶。 DNA修复时需要 DNA聚合酶 。 20.真核生物中有5种DNA聚合酶。它们是:(l) (2) (3) (4) (5) 。 21. 在 DNA修复过程中,需要第二种酶, ,作用是将 DNA中相邻的碱基 起来。 DNA聚合酶具有外切核酸酶的活性。有两种外切核酸酶的活性,它们分别从 和 降解 DNA。DNA聚合酶 只有 外切核酸酶活性。 22. 只有真核 DNA聚合酶 和 显示 外切核酸酶活性。 23.DNA大多数自发变化都会通过称之为 的作用很快被校正。仅在极少情况下,DNA将变化的部分保留下来导致永久的序列变化,称为 。 24.偶然情况下,在同一基因两个稍微不同拷贝(等位基因)间发生重组的过程中,一个等位基因经过 过程会被另一等位基因代替。 25.通过 基因重组,游动 DNA序列和一些病毒可进入或离开一条目的染色体。 26.DNA修复包括3个步骤: 酶对 DNA链上不正常碱基的识别与切除, 酶对已切除区域的重新合成, 酶对剩下切口的修补。 27.一种主要的 DNA修复途径称 ,包括一系列 酶,它们都能识别并切去 DNA上不正常碱基。 28. 途径可以切去任何造成 DNA双螺旋大片段改变的 DNA损伤。 29. 大肠杆菌中,任何由于 DNA损伤造成的 DNA复制障碍都会诱导 的信号,即允许跨过障碍进行复制,给细胞一个生存的机会。 30. 在 中,基因交换发生在同源 DNA序列间,最常见是发生在同一染色体的两个拷贝间。 31. 在交换区域,一个 DNA分子的一条链与另一个 DNA分子的一条链相互配对,在两个双螺旋间形成一个 。 32. 通过 ,两个单链的互补 DNA分子一起形成一个完全双链螺旋,人们认为这个反应从一个慢的 步骤开始。 33. 大肠杆菌的染色体配对需要 ;它与单链 DNA结合并使同源双链 DNA与之配对。 34. 一般性重组的主要中间体是 ,也用它的发现者名字命名为 。 35. 产生单个碱基变化的突变叫 突变,如果碱基的改变产生一个并不改变氨基酸残基编码的 ,并且不会造成什么影响,这就是 突变。如果改变了氨基酸残基的密码,这就是 突变。这种突变对蛋白质功能影响程度要根据被改变的氨基酸残基在蛋白质 或 结构中的重要程度,或是与酶的 的密切性来决定,活性变化范围可从 到接近正常。 36. 一种由于蛋白质序列中丢失了 残基引起的突变将会阻止 的形成,这种蛋白质更容易 。如果在 温度是稳定的而在 温度是不稳定的,将它称为 突变,是 突变的一个例子。 37. 无义突变是将一种氨基酸的 转变成 密码子,结果使蛋白质链 。一个碱基的插入或 叫 突变。由于三联 的移动,突变位置 的整个氨基酸序列都会被改变。上述两种类型的突变(插入和缺失)所产生的蛋白质同 的不同,通常是完全 。 38. 下面所列的是由突变而产生的一些异常表型(A),同时也列出了表型由突变而造成的缺陷的可能原因(B)。请尽可能地将 A项所列的异常表型同 B项所列的可能原因配对。 A 异常表型: B 缺陷可能出现在: (a)细菌的营养缺陷型 (t)合成途径 (b)细菌温度敏感突变体 (u)降解途径 (c)细菌的诱导酶变成组成酶 (v)DNA的修复 (d)果蝇的红眼变成白眼 (w)转录控制 (e)果蝇形成两个胸节 (x)细胞分裂控制 (f)人的镰刀状细胞贫血症 (y)胚胎发育控制 (g)人的原卟啉症 (z)蛋白质的稳定性 (h)人着色性干皮病 (i)苯丙酮尿症 (j)人肿瘤的发生 39.下面各句是对不同诱变剂作用的叙述,写出相应情况的诱变剂的名称: (1)通过同双螺旋的结合,引起变构,并激活修复性内切核酸酶的诱变剂是: 。 (2)引起总染色体的损伤如断裂和转位的诱变剂是: 。 (3)取代正常的碱基而掺人到 DNA中,并通过互变异构引起复制错误的诱变剂是: 。 (4)只能够除去胞嘧啶和甲基胞嘧啶的氨基基团的诱变剂是: 。 (5)主要是引起同一条链上的相邻嘧啶间的交联的诱变剂是: 。 (6)主要是在 DNA双螺旋的形变和链的错排过程中引起插入或缺失的诱变剂是: 。 (7)可以除去 DNA中任何一个带有氨基基团的碱基上氨基基团的诱变剂是: 。 40. 据估计,单倍体人基因组包括50O00个基因,如果每个世代每个基因的突变率为5×10—5,那么,每个个体中存在 刚产生的突变。 41. DNA中两种常见的自发突变是由于腺嘌呤、鸟嘌呤与脱氧核糖间的N-糖基连接断裂而导致的 和使胞嘧啶变为尿嘧啶而导致的 。 42.能够诱导操纵子但不是代谢底物的化合物称为 诱导物。能够诱导乳糖操 纵子的化合物 就是其中一例。这种化合物同 蛋白质结合,并使之与 分离。乳糖操纵子的体内功能性诱导物是 。 43.色氨酸是一种调节分子,被视为 。它与一种蛋白质结合形成 。 乳糖操纵子和色氨酸操纵于是两个 控制的例子。 cAMP—CAP蛋白通过 控制起作用。色氨酸操纵子受另一种系统一的调控,它涉及到第一个结构基因被转录前的转录 。 44.负责把RNA转录成互补 DNA分子的 酶可以解释由 引起的永久性基因转变。 45.利用自已的位点专一重组酶把自己从寄主基因组中的一个地方移到另一地方的遗传元件叫 ,也叫作 。 46.酵母的 Tyl元件是一种 ,它的转座需一段完整RNA转录物的合成,这个转录物又被复制成一个双螺旋 DNA,随后被整合到一个新的染色体位置。 47.真核生物的mRNA加工过程中,5’端加上 ,在3’端加上 ,后者由 催化。如果被转录基因是不连续的,那么, 一定要被切除,并通过 过程将 连接在一起。这个过程涉及许多RNA分子,如Ul和U2等,它们被统称为 。它们分别与一组蛋白质结合形成 ,并进一步地组成40S或60S的结构,叫 。 48.胶原蛋白通过在不同的脯氨酸残基上添加 基团而被化学修饰。这个反应是由两种酶催化的,它们是 和 。其他的一些蛋白质被 磷酸化。蛋白质上添加寡聚糖的过程叫 ,而添加脂肪酸链则叫 。O—寡聚糖是一种同 或 残基上氧连接的寡聚糖,而 N—寡聚糖是通过与 上的氮原子连接而成。N—寡 聚糖又是从同一种叫做 脂的前体寡聚糖衍生而来。 49. 阿黑皮素原是 被切割以后可以产生很多活性蛋白质的一个例子。如 之类的RNA病毒也能合成类似的结构物。蛋白水解过程也涉及细胞外毒素的活性,如蜜蜂的 和动物激素的活性,如 和 。 50. 可使每个氨基酸和它相对应的tRNA分子相偶联形成一个 分子。 51. 包括两个tRNA分子的结合位点: ,即 P位点,紧密结合与多肽链延伸尾端连接的 tRNA分子,和 ,即 A位点,结合带有一个氨基酸的tRNA分子。 52. 催化肽键的形成,一般认为这个催化反应是由核糖体大亚基上 的 分子介导的。 53.释放因子蛋白与核糖体上 A位点的 密码结合,导致肽基转移酶水解连接新生多肽与tRNA分子的化学键。 54.任何mRNA序列能以三种 的形式被翻译,而且每一种都对应一种完全不同的多肽链。 55.蛋白质合成的起始过程很复杂,包括一系列被 催化的步骤。 56.在所有细胞中,都有一种特别的 识别 密码子 AUG,它携带一种特别的氨基酸,即 ,作为蛋白质合成的起始氨基酸。 57.核糖体沿着 mRNA前进,它需要另一个延伸因子 ,这一步需要 的水解。当核糖体遇到终止密码( 、 、 )的时候,延长作用结束,核糖体和新合成的多肽被释放出来。翻译的最后一步被称为 ,并且需要—套 因子。 58.基因工程是 年代发展起来的遗传学的一个分支学科。基因工程技术的诞生,使人们从简单地利用现存的生物资源进行诸如发酵、酿酒、制醋和酱油等传统的生物技术时代,走向 的时代。 59.随着基因工程技术的诞生和发展,人类可以通过 、 和 三种主要生产方式,大量取得过去只能从组织中提取的珍稀蛋白,用于研究或治病。 60. Cohen等在 年构建了第一个有功能的重组 DNA分子。 61.基因工程的两个基本特点是:(1) ,(2) 。 62.基因克隆中三个基本要点是: ; 和 。 63. 年,美国斯坦福大学 等 上在发表了题为: “将新的遗传信息插入SV40病毒 DNA的生物化学方法:含有λ噬菌体基因和E.coli半乳糖操纵子的环状 SV40 DNA”的论文,标志着基因工程技术的诞生。这一工作具有划时代的意义,但是他们并没有 。 64.克隆基因的主要目的有四:(1) ;(2) ; (3) ;(4) 。 65.严格地说限制性内切核酸酶(restriction endonuclease)是指已被证明是 的酶。基因工程中把那些具有识别 内切核酸酶统称为限制性内切核酸酶。 66. 年 Luria和 Human在 T偶数噬菌体对大肠杆菌感染实验中首次发现了细 菌的 现象。 67.1970年,Smith和wilcox从流感嗜血杆菌中分离到一种限制酶,能够特异性的切割DNA,这个酶后来被命名为 ,这是第一个分离到的Ⅱ类限制性内切核酸酶。 68.通过比较用不同组合的限制性内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段,可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的 。 69.Ⅱ类限制性内切核酸酶分子量较小.一般在20~40kDa,通常由 亚基所 组成。它们的作用底物为双链 DNA,极少数Ⅱ类酶也可作用于单链 DNA,或DNA/RNA杂合双链。这类酶的专一性强,它不仅对酶切点邻近的两个碱基有严格要求,而且对更远的碱基也有要求,因此,Ⅱ类酶既具有专一性,也具有 专一性,一般在识别序列内切割。切割的方式有 ,产生末端的 DNA片段或 的 DNA片段。作用时需要作辅助因子,但不需要 和 。 70.完全的回文序列具有两个基本的特点,就是:(1) (2) 。 71.Ⅱ类限制性内切核酸酶一般识别 个碱基,也有识别多序列的限制性内切核酸酶。根据对限制性内切核酸酶识别序列的分析,限制性内切核酸酶识别序列具有 倾向,即它们在识别序列中含量较高。 72.EcoK是 Ⅰ类限制性内切核酸酶,分子组成是α2β2γ,分子量是300kDa。在这些亚基中,α亚基具有 作用;β亚基具有 的活性;γ亚基的作用则是 。 73.个体之间 DNA限制性片段长度的差异叫 。 74.限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原则命名的,第一个大写字母取自 ,第二、三两个字母取自 ,第四个字母则用 表示。 75.限制性内切核酸酶 Acy Ⅰ识别的序列是5’-GRCGYG-3’,其中R , Y 。 76.在酶切反应管加完各种反应物后,需要离心2秒钟,其目的是 和 。 77.部分酶切可采取的措施有:(1) (2) (3) 等。 78.第一个分离的限制性内切核酸酶差异是 ;而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是 。 79.限制性内切核酸酶 BsuR Ⅰ和HaeⅢ的来源不同,但识别的序列都是 , 它们属于 。 80.由于 DNA是由4种碱基组成的,所以任何限制性内切核酸酶的切割频率的理论值应该是 。 81.Sal Ⅰ和 Not Ⅰ都是哺乳动物中识别序列稀有的酶,在哺乳动物基因组的5kb片段中,找到Not Ⅰ切点的概率是 。 82.部分酶切是指控制反应条件,使得酶在 DNA序列上的识别位点只有部分得到切割,它的理论依据是 。 83.Ⅰ类限制酶识别 DNA的位点和切割的 DNA位点是不同的,切割位点的识别结合有两种模型,一种是 ,另一种是 。 84.限制性内切核酸酶通常保存在 浓度的甘油溶液中。 85.连接酶(ligase)是一类用于核酸分子连接形成 键的核酸合成酶,有DNA连接酶和RNA连接酶之分。 86.原核生物主要有两种类型的 DNA连接酶: E.coli DNA连接酶和 T4 DNA连接酶。 基因工程中使用的主要是 T4 DNA连接酶,它是从 T4噬菌体感染的E.coli中分离的一种单链多肽酶,分子量为 kDa,由 T4噬菌体基因 编码。E.coli DNA连接酶是由大肠杆菌基因 编码,也是一条多肽链的单体,分子量为 kDa。这两种 DNA连接酶有两个重要的差异:第一是它们在催化反应中所用的能量来源不同,T4 DNA连接酶用 ,而E.coli DNA连接酶则用 作为能源。第二是它们催化平末端连接的能力不同,在正常情况下只有 T4 DNA连接酶能够连接平末端,E.coli DNA连接酶则不能。即使是调整反应条件,E.coli DNA连接酶催化平末端的连接效率也只有 T4 DNA连接酶的 。 87.DNA连接酶的单位通常用Weiss单位表示,一个Weiss单位是: 。 88.DNA聚合酶Ⅰ是 在1965年从大肠杆菌细胞中分离的,所以又称为 聚合酶。该酶由大肠杆菌基因 编码,是一种单链球蛋白,分子量为109kDa,酶蛋白中含有一个 Zn原子。 89.T4 DNA聚合酶与 Klenow酶一样,具有5’→3’聚合酶和3’→5’外切酶两种活性,但是它的3’→5’外切酶的活性比 Klenow酶强 倍。该酶的3’ →5’外切活性既能作用于单链 DNA也能作用于双链 DNA,不过作用于 链的活性要强于 链。 90.反向转录酶(reverse transcriptase)是由 kDa和 kDa两个亚单位组成的二聚体,作用时以RNA为模板合成 DNA。 91.从小牛胸腺中分离纯化的末端转移酶催化的基本反应是将 ,同时释放出游离的无机磷。催化反应时不需 ,但需要引物,单链 DNA是最好的引物,单链 DNA受体的长度最短需有 个 dNTP。具有3’突出末端的双链 DNA也是较好的反应底物。二价离子和 DNA末端状态对催化反应影响较大,但是用 作为辅助离子,可以催化任何形式的末端(突出的、隐含的、平齐的)加接单核苷酸,但突出的3’端效率较高。以 Mn2+/Mg2+作为辅助因子,只能在单链 DNA或双链 DNA的3’突出端加尾。 92. S1核酸酶(S1 nuclease)是从米曲霉(Aspergilluc oryzae)中分离纯化的一种含 的金属蛋白,分子量为32kDa,是一种耐热的酶(37—65℃)。 93.在 S1保护实验中, S1切割的温度有两种:20℃和45℃,这是因为:在20℃时, ;在45℃时, 。 94. 技术可以用来鉴定 DNA分子中与 DNA结合蛋白相互作用的特定序列。 95.真核生物有两种 DNA连接酶,连接酶Ⅰ主要是参与 ,而连接酶Ⅱ则是参与 。 96.T4RNA连接酶是1972年发现的,并于 1977年纯化。该酶是由 T4噬菌体基因 编码,作用是不需要模板。它在体内的作用是参与 T4噬菌体 不参与 DNA合成的连接,但在 中可能有作用。 97.DNA聚合酶 Ⅰ的Klenow大片段是用 切割 DNA聚合酶Ⅰ得到的分子量为76KDa的大片段,具有两种酶活性:(1) 。 (2) 的活性。 98.反向转录酶除具有以 DNA和RNA为摸板合成 DNA的5’→3’合成酶的活性外,还具有4种酶的活性:(1) ; (2) ; (3) ;(4) 。 99.RNA连接酶作用时除了需要 ATP和 Mg2+外,还需要 。 100.DNA聚合酶 Ⅰ是一种单体酶,分子量为109kDa,它含有金属离子 。 101. 为了防止 DNA的自身环化,可用 脱去双链DNA 。 102.T4单核苷酸激酶进行DNA片段的5’端标记时,主要是通过两种反应即 和 。 103.CIP催化脱磷酸时有两种最适温度,一种是37℃,适用于 端脱磷酸;另一种是56℃,适用于 端脱磷酸。 104. λ外切核酸酶可从双链 DNA的5’端依次切下5’单核背酸,但对不同末端的底物来说,作用效率不同, 最高, 最低。 105.EGTA是 离子螯合剂。 106.测序酶是修饰了的 T7 DNA聚合酶,它只有 酶的活性,而没有 酶的活性。 107.切口移位(nick translation)法标记 DNA的基本原理在于利用 的 和 的作用。 108.欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA分子转变成平末端的双链形式,通常可采用 或 。 109.反转录酶除了催化 DNA的合成外,还具有 的作用,可以将 DNA-RNA杂种双链中的 水解掉。 110.基因工程中有3种主要类型的载体: 、 、 。 111.由于不同构型的 DNA插入 EB的量不同,它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不 同, SC DNA的泳动速度 ,OC DNA泳动速度 , LDNA居中,通过凝胶电泳和 EB染色的方法可将不同构型的 DNA分别开来。 112.质粒的复制像染色体的复制一样,是从特定的起始点区开始的。然而,质粒的复制可以是 向的、或是 向的。在杂种质粒中,每个复制子的起点都可以有效地加以使用。但是在正常条件下只有一个起点可能居支配地位。并认为:当某些具有低拷贝数的严紧型质粒与松弛性质粒融合后,在正常情况下的复制起点可能被关闭。 113.就克隆一个基因(DNA片段)来说,最简单的质粒载体也必需包括三个部 分: 、 、 。 另外,一个理想的质粒载体必须具有低分子量。 114.如果两个质粒不能稳定地共存于同一个寄主细胞中,则属于 群, 这是因为它们的 所致。 115.质粒拷贝数是指细胞中 。 116. 复制子由三部分组成:(1) (2) (3) 。 117.酵母的2μm质粒有 ,可以配对形成哑铃结构。 118.一个带有质粒的细菌在有 EB的培养液中培养一段时间后,一部分细胞中已测不出质粒,这种现象叫 。 119.pBR322是一种改造型的质粒,它的复制子来源于 ,它的四环素抗性基因来自于 ,它的氨苄青霉素抗性基因来自于 。 120.质粒的消失同染色体基因的突变是不同的,前者不能恢复,后者可以通过 恢复该基因的性状。 121.Co1El质粒复制的起始需要三种酶,即 、 和 。 122.YAC的最大容载能力是 ,BAC载体的最大容载能力是 。 123.pSC101是一种 复制的质粒。 124.把那些没有可检测表型的质粒称为 。 125.转座子主要由下列部分组成:(l) (2) (3) 。 126. pUC18质粒是目前使用较为广泛的载体。 pUC系列的载体是通过 和 两种质粒改造而来。它的复制子来自 , Amp抗性基因则是来自 。 127.在基因型的表示中,符号Ω表示 ;符号A表示 。 128.噬菌体之所以被选为基因工程载体,主要有两方面的原因:一是 ;二是 。 129.第一个报道的全测序的单链 DNA噬菌体是φX174,DNA长5386个碱基对,共 个 基因,为一环状 DNA分子,基因组的最大特点是 。 130.λ噬菌体的基因组 DNA为 kb,有 多个基因。在体内,它有两种复制方式,扩增时(早期复制)按 复制,成熟包装(晚期复制)则是按 复制。它有一个复制起点,进行 向复制。λ噬菌体的 DNA既可以以线性存在又可以环状形式存在,并且能够自然成环。其原因主要是在λ噬菌体线性DNA分子的两端各有一个 个碱基组成的天然粘性末端。这种粘性末端可以自然成环。成环后的粘性末端部位就叫做 位点。 131.根据噬菌体的包装能力,将野生型λ噬菌体的基因组 DNA改造成插入型载体,该载体的最小分子大小约为 kb,插入的外源片段最大不超过 kb。 132.野生型的M13不适合用作基因工程载体,主要原因是 和 。 133.粘粒(cosmid)是质粒-噬菌体杂合载体,它的复制子来自 、cos位点序列来自 ,最大的克隆片段达到 kb。 134.有两类改造型的λ噬菌体载体,即插入型和取代型。从酶切点看,插入型为 个, 取代型为 个。 135.野生型的λ噬菌体 DNA不宜作为基因工程载体,原因是:(1) (2) (3) 。 136.M13单链噬菌体的复制分为三个阶段:(1) (2) (3) 。 137.噬菌粒是由质粒和噬菌体 DNA共同构成的,其中来自质粒的主要结构是 ,而来自噬菌体的主要结构是 。 138.M13单链噬菌体基因2和基因4之间的 IG区有三个最重要的功能,即(l) (2) (3) 。 139.野生型的 M13有10个基因,分为三个功能集团,其中与复制有关的两个基因是: 和 。 140.以λ噬菌体载体和粘粒载体构建文库时,起始 DNA的长度是不同的,前者为 kb后者为 kb。 141.λ噬菌体载体由于受到包装的限制,插入外源 DNA片段后,总的长度应在噬菌体基因组的 的范围内。 142.不同的宿主细胞其核酸酶的活性是不同的,如细菌中的 HB101菌株及 JM系列的宿主菌所含核酸酶的活性比 DHl、 LE392等菌株 。 143. SDS是分离DNA时常用的一种阴离子除垢剂,它有四个作用: (1) ; (2) ; (3) ; (4) 。 144.酚是蛋白变性剂,用酚抽提细胞 DNA时,具有两方面的作用:(1) (2) 。 145.用酚—氯仿抽提 DNA时,通常要在氯仿或酚—氯仿中加少许异戊醇。这是因为:异戊醇 。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含 DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维 持稳定。 146.同其他水解蛋白酶相比,蛋白水解酶 K具有两个显著的优点:(1) (2) 。 147.在分离 DNA时要使用金属离子整合剂,如EDTA和柠檬酸钠等,其目的是 。 148.用乙醇沉淀 DNA时,通常要在DNA溶液中加入单价的阳离子,如 NaCl和 NaAc,其目的是 。 149.浓缩 DNA的方法有:(1) ;(2) ;(3) (4) 。 150.通常可在三种温度下保存 DNA:4~5℃、—20℃、—70℃,其中以 最好。 151.用于分离质粒 DNA的细菌培养浓度达到0.8×109细胞/ml时,即可通过离心收 集菌体。收集菌体使用定角转子,离心的速度以 为宜。 152.引物在基因工程中至少有4个方面的用途:(1) ; (2) ; (3) ;(4) 。 153.Clark发现用Taq DNA聚合酶得到的 PCR反应产物不是平末端,而是有一个突出碱基末端的双链DNA分子。根据这一发现设计了克隆 PCR产物的 。 154.在用 SDS分离 DNA时,要注意 SDS的浓度,0.1%和 l级的 SDS的作用效果是不同的,前者 ,后者 。 155.碱解法和清亮裂解法是分离质粒的两种常用的方法,二者的原理是不同的,前者是根据 ,后者则是根据 。 156.在 DNA分离过程中,通常要进行透析,其目的是 。 157.在分离质粒 DNA的菌体培养过程中,加入氯霉素有两个好处:(1) (2) 。 158.在 DNA分离过程中造成 DNA分子断裂的因素很多,主要有(1) (2) (3) 。 159.在分离 DNA时,常用 法、 法、 法 及 法等方法去除蛋白质。 160.在 DNA保存液中,常加一滴氯仿,主要是起 作用。 161.按照人们的意愿,改变基因中碱基的组成,以达到 的技术称为 。 162.1955年,英国剑桥大学的 第一个合成了具有3’,5’—磷酸二酯键的 TpT和 pTpT,为此获得了 年的诺贝尔奖。 163.可以用 除去 DNA溶液中的氯化绝。 164.在 cDNA的合成中要用到 S1核酸酶,其作用是切除在 。 165.在简并引物的设计中,常常要用到 dI(次黄嘌呤),原因是 。 166.在分离 DNA时,要戴手套操作,原因是 。 167.乙醇沉淀 DNA的原理是 。 168.简并引物 PCR主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计 引物来合成相应的基因。 169.超离心法纯化质粒 DNA时,选用 CsCl作介质的优点是: (1) (2) ,从而使不同分子量的 DNA分子得以分开。 170.缺失突变的原理是缺失了 。 171.用核酸酶 Bal 31作系列缺失突变,得到的产物是: 。 172.SSC是由 NaCl和柠檬酸钠组成的试剂,其中 NaCl的作用是使 ,而柠檬酸钠的作用是 。 173.在重蒸酚中加入0.1%的8—羟基喹啉及少量β-硫基乙醇,不仅可以防止酚的氧化,还可以 的活性及 作用。 174.对于 HB101及其衍生株不宜用煮沸法分离质粒 DNA,其原因是 。 175.克隆策略有三层涵义:(1)第一层是 ; (2)第二层涵义是 ; (3)第三层涵义就是 。 176.假定克隆一个编码某种蛋白质的基因,必须考虑其表达的三个基本条件: (1) (2) (3) (4) 。 177.现有的基因克隆策略大体上分为三类: 、 、 。 178.受体细胞的感受态是 。 179.DNA重组连接的方法大致分为四种:(1) (2) (3) (4) 。 180.平末端连接法(blunt end ligation)的连接效率比粘性末端连接的效率低得多,所以通常在连接反应体系中适量添加促进大分子凝聚的凝聚剂,以提高平末端 DNA连接的效率。常用的凝聚剂是 。 181.一个细菌的表面大约有 个同 DNA结合的位点。 182.1984年,Hung和 Wesink发现如果两个不同的5’粘性末端通过部分填补得到如下的单链突出末端,即可有效地相互连接:(1) (2) (3) 。 183.将含有外源基因组一个酶切片段的质粒称之为含有一个 ,各种此类质粒的集合体称之为构建了一个 。 184.将含有一个 mRNA的 DNA拷贝的克隆称作一个 ,源于同一批RNA制备 物的克隆群则构建了一个 。 185.在构建 CDNA克隆之前,可以用 来富集一特殊的核苷酸序列。做法是:用来自于能够产生目的蛋白的细胞 mRNA分子同来自于另一类型细胞(不产生这种 蛋白质,但亲缘关系密切)的过量 mRNA分子杂交。 186.一旦克隆了一个遗传定位的基因,就可以用 技术来鉴定基因组DNA文库中与之相邻的基因克隆。 187.只要知道基因组中某一特定区域的部分核苷酸组成,用 可以将这段 DNA进行百万倍的扩增。 188.SD序列是 mRNA分子中同 结合的序列,其结构特征是 的全部或一部分。 189.环状质粒的转化效率很低,通常是线性双链 DNA转化效率的 。 190.cDNA技术是进行真核生物基因克隆的一种通用方法,因为它可以用 为模板通过反转录合成一个双链的、无 的基因,因而有利于在原核细胞中进行功能表达。 191.产生平末端的方法通常有:(1) (2) (3) 。 192.不同细菌出现感受态的时期是不同的,如肺炎球菌感受态出现的时期是 、而枯草杆菌感受态的出现是在 。 193. 人工感受态的大肠杆菌细胞在温度为 时吸附 DNA, 时摄入 DNA。 194.感受态细胞是可以诱导的,诱导的方法有 、 、 。 195.影响酶切的主要因素之一是底物DNA,底物的影响包括 , , , 。 196.sal Ⅰ是识别6个核苷酸的酶,其识别切割的理论值是 个碱基就有一个切点,但在哺乳动物中,大约 才有一个切点。 197.在精简基因组文库中,用标记的 同末标记的杂交,最后建成的是 库。 198.构建基因组文库时连接方法主要是 ;而构建 cDNA文库,可用 或 。 199.将携带有外源基因并能持久传递给子代的动物称为 动物,这些外源基因就叫做 。 200.为了提高重组 DNA分子对E.coli转化效率,通常可采取 处理和 。 201.重组体的筛选有两层涵义,一是将 ,二是将 。 202.目前,在重组体的筛选中,已经发展了许多构思巧妙、具有极高准确性的筛选方法。大致可以分为:(1) (2) (3) (4) 等。 203.噬菌斑形成选择法有两种判断标准,一是 ,二是 。 204. PCR扩增筛选重组体是比较简便的筛选方法,它适合于 。 205.核酸杂交探针可分为两大类: DNA探针和RNA探针。其中 DNA探针又分为 探针和 探针。 206. 如果用限制性内切核酸酶切割双链 DNA产生3’突出的粘性末端,则可以用 进行3’末端标记。如果用限制性内切核酸酶切割 DNA产生的是3’突出的粘性末端,可以用 行3’末端标记。 207.单链 DNA探针的标记可以采用下列方法:(1) (2) (3) 。 208.根据 Northern杂交的结果可以说明: 。 209.差示杂交(differential hybridization)技术需要 。 210.RNA分子经凝胶电泳后按大小不同分开,然后被转移到一张硝酸纤维素膜(尼龙膜)上,同一放射 DNA探针杂交的技术称 。 211.在 技术中, DNA限制性片段经凝胶电泳分离后,被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上,然后与放射性的 DNA探针杂交。 212. 使用核酸探针检测细胞和组织中特定核苷酸序列的位置。 213.为了鉴定某一具有特殊功能蛋白质的结构,可以用一个容易检测的报告蛋白制 备 ,然后跟踪报告蛋白在细胞中的行为即可。 214.可用 T4 DNA聚合酶进行平末端的 DNA标记,因为这种酶具有 和 的活性。 215.硝酸纤维素膜(NC)结合 DNA的能力为 ,尼龙膜(Nylon)为 。 216.如果对一个克隆的基因进行遗传操作,使互补的链转录,会产生同正常的RNA转录物互补的 分子。 217.在 Southern印迹中, DNA转移的速度取决于 和 。 218.根据噬菌斑的清晰程度筛选重组体主要是 cI基因的 。 219.用不对称 PCR合成单链 DNA探针时。两个引物的浓度比为: 。 220.微细胞是一种E.coli的突变体,通常只有正常细胞的 、而且不含 。 221.点杂交的主要缺点是 。 222.根据外源片段提供的遗传表型筛选重组体,必需考虑三种因素:(1) (2) (3) 。 223.阻断翻译杂交法是 同 的杂交。 224.在切口移位标记探针时,DNAaseⅠ处理DNA的温度应控制在 温度过高, ,不利于标记。 225.Northern印迹和Southern印迹有两点根本的区别: (1) (2) 。 226.放射免疫筛选原理基于以下三点:(1) (2) (3) 。 227.分子遗传学认为,生物体的第I类遗传信息是指 。第II类遗传信息是指 。 228.E. coli Trp合成酶的Attenuator存在于 序列中,Attenuator序列的结构特点是 。当Trp饥饿时,Attenuater开启转录的机理是 。 229. 核基因组mRNA内含子剪接的Chambon rule是 。snRNA的作用是 。切除内含子不需能量,仅由内含子中的A发生 反应来完成。 230.卫星DNA形成的理论主要有 、 、 。 231.基因表达在转录水平上的调控机制中,调节蛋白的 特性与调节区序列的特性 与调节区序列的 特征相统一,调节蛋白中的特异氨基酸识列DNA双螺旋体 内的特异碱基序列。 232.真核生物成熟mRNA的Cap结构特点是 ,加尾识别序列是 。 233.真核生物基因启动子包括 , , Box,原核生物基因启动子包括 , , box。 234.检测某DNA分子具有呼吸作用,这意味着,该DNA分子的序列具有 特点 235.采用双脱氧法进行DNA序列分析时,在A系统反应中,每一DNA片段的3’-末端是 核苷酸,这是因为 。 236.在自发和化学诱发引起的取代突变中以 类型为主。 237.a1……a5是5个不同位点发生突变而表型相同的突变型,分析互补测验的结果,你认为分属 个顺反子,其关系是 。 238.多肽链的第一个氨基酸多数情况下是 ,其密码是 相对应于DNA反意链上的序列是 。在真核生物中,如果某一mRNA中这种密码子在多处出现,由于 核糖体会选择第一密码进行准确翻译。 239. 年 对T.噬菌体γⅡ区的突变研究提出了顺反子假说。 年 对玉米胚乳色斑不稳定遗传现象进行研究提出了基因跳跃的概念。 年 对E. coli半乳糖代谢操纵子突变型研究重新发现了基因跳跃现象。 年 对人工合成的3(dG—dC)核苷酸研究提出DNA存在Z—DNA构象。 240.原核生物的S. D序列在 S rRNA的 端,它是富含 序列。 241.原核生物的启动子包括有 个site,它们分别是 以RNA的第一个Nt是 或 。 242.真核生物mRNA的加尾识别序列是 。 243.在Northern Blot的分子杂交过程中,被固定在纤维膜上的是 核酸片段。 244.McClintock考察过一个玉米果穗的三倍体胚乳,其基因型为a1a1A1∶∶DS; ∶∶,∶∶,Wx; 有色A对无色a为显性,直链淀粉对支链淀粉Wx为显性,为非活化状态,这些籽粒胚乳的表型是 ,如果某些细胞中的一个处于活化状态,其表型是 。如果某些细胞中的两个都处于活化状态,其表型是 。 245.将mtDNA放在含52Ci/mmol的H3一T条件下开始进行体外复制,中途转入5Ci/mmol H3—T条件下复制,接近未期时又转入52ci/mmol H3—T条件下复制,完成一个周期,如果两个子代DNA分子还未分离,它的放射自显影图象是 。 246.将一个重组质粒PMRI感染整合有不同PROR区(W.t或OR1—或OR2—)的λ噬菌体的三个溶原性E. coli,培养于含ONPG 的培养皿中,随加入IPTG 量的逐步增加检测被分解的邻硝基苯的黄色色度,并换算成Dac Z酶的酶活,请根据测定的结果,判断这三条曲线分别代表哪一个测验体系(wt, OR1—, OR2—)。 247.a、b为两个不同的顺反子,基因型为的细胞,其表型为 型,基因型为的细胞,其表型为 型。 248.某核酸分子的A+G/T+C=1.5,你认为这种核酸分子的特点是 。 249.以某真核生物的DNA分子的Cot1/2值所估算的长度(dNt数目)低于在电镜下所测量的长度(换算成dNt)这是因为 。 250.按顺序写出的DNA链上一个加工基因的各个区域。 (5’ 3’) 在电镜下观察到两种双链DNA分子经变性后再复性的图象。 (1) (2) 请分别说明它们的特点 。 251. mRNA的5’端第一个碱基是 或 。 5’-AAG……27ATGAAA…………GGCTTTTTTT140—3’ a+ b+ a+ b+ 252. 设a、b分别为两个cistron中的muton位点,基因型为 的基因型为 a- b- a- 的细胞,表现型为 ,(表现型为V. t. mut) 253.在RNA转录过程中 K因子的作用是 。 pho 因子的作用是 。 Sigma 因子的作用是 。 βˊ因子的作用是 。 NusAp因子的作用是 。 254.一段poly(dG-dc)的双螺旋DNA分子在 mol浓度的NaCl溶液中较易形成Z-DNA构型,测定其长度为37.2?,推测这段DNA分子含 个bp,每一bp由 氢键连接,其中 为顺式构象, 为反式构象,与相同序列的B—DNA分子比较,当用烷化剂处理时Z—DNA分子中的 核苷酸易发生烷化,主要原是 。 255.编码一个短肽链的双链DNA的分子序列为 第一单链 TCATTTGCGTAGTGCCAT 第二单链 AGTAAACGCATCACGGTA 第 单链为有意链,极性方向为(左 右 ),mRNA的转录方向是(左 右),能翻译 个氨基酸的短肽,以第 链为有意链可转录出其micRNA,它的序列和极性方向为 。 256.将玉米叶片H3-mDNA进行RNA Driven杂交,叶片H3-mDNA与子房N—RNA进行RNA Driven杂交,根据Indiscriminate transcription-post transcription selection理论,两者Rot/2的比值应为 。 257.在分子杂交过程中选 65℃的杂交温度,其目的在于 。 258.原核生物中Attenuator存在于 序列中,其调控机理是 Enhancer存在于 序列中,其调控机理是 。 A B D 259.根据Whitehouse的palaron Hybrid DNA理论,在杂合体 中,如果 a b d plaron发生在B/b基因内,形成AD,Ad, aD, ad配子的比例为 ,形成 AB,Ab配子的情况为 。 四、简答题 1.碱基对间在生化和信息方面有什么区别? 2.在何种情况下有可能预测某一给定的核苷酸链中“G”的百分含量? 3.真核基因组的哪些参数影响 Cot1/2值? 4.请问哪些条件可促使 DNA复性(退火)? 5.为什么 DNA双螺旋中维持特定的沟很重要? 6.大肠杆菌染色体的分子量大约是2.5×109Da1),核苷酸的平均分子量是330Da,两个邻近核苷酸对之间的距离是0.34mn;双螺旋每一转的高度(即螺距)是3.4nm,请问: (l)该分子有多长? (2)该 DNA有多少转? 7.曾经有一段时间认为,DNA无论来源如何,都是4个核甘酸的规则重复排列(如, ATCG.ATCG.ATCG.ATCG…),所以 DNA缺乏作为遗传物质的特异性。第一个直接推翻该四核苷酸定理的证据是什么? 8.为什么在 DNA中通常只发现 A—T和 C—G碱基配对? 9.列出最先证实是 DNA(或RNA)而不是蛋白质是遗传物质的一些证据。 10.为什么只有 DNA适合作为遗传物质? ll.什么是连锁群?举一个属于连锁基因座的例子。 12.什么是顺反子?用“互补”和“等位基因”说明“基因”这个概念。 13.对于所有具有催化能力的内含子,金属离子很重要。请举例说明金属离子是如何作用的。 14.列出真核生物mRNA与原核生物mRNA的区别。 15.列出各种tRNA所有相同的反应及个别 tRNA的特有反应。 16.在体内,rRNA和 tRNA都具有代谢的稳定性,而 mRNA的寿命却很短,原因何在? 17.为什么真核生物核糖体RNA基因具有很多拷贝? 18.为什么说信使RNA的命名源自对真核基因表达的研究,比说源自对原核基因表达的研究更为恰当? 19.说明为什么mRNA仅占细胞RNA总量的一小部分(3%一5%)。 20.为何rRNA和tRNA分子比 mRNA稳定? 21.起始tRNA具有哪两种与其他 tRNA不同的特性? 22.区别rRNA和mRNA在翻译中的作用。 23.氨基酸分子如何与正确的tRNA分子连接? 24.简要说明证明信使的存在及其本质为RNA的证据。 25.列举4种天然存在的具有催化活性的RNA。 26.Ⅰ型内含子发生改变后,可以产生其他酶的活性吗?如果可以,是哪些活性?这意味着Ⅰ型内含子的催化中心有什么特点? 27.某些自剪接的内含子具有可读框,它们编码何种蛋白?这与内含子的移动有什么关系? 28.描述 Meselson-Stahl试验,说明这一实验加深我们对遗传理解的重要性。 29.请列举可以在线性染色体的末端建立线性复制的三种方式。 30.为什么一些细菌完成分裂的时间比细菌基因组的复制所需的时间要少?为什么在选择营养条件下,E. coli中可以存在多叉的染色体或多达4个以上的开环染色体拷贝, 而正常情况下染色体是单拷贝的? 31.在 DNA聚合酶Ⅲ催化新链合成以前发生了什么反应? 32.DNA复制起始过程如何受DNA甲基化状态影响? 33.请指出在 oriC或фX型起点起始的 DNA复制之间存在的重要差异。 34.大肠杆菌被 T2噬菌体感染,当它的 DNA复制开始后提取噬菌体的 DNA,发现一些RNA与 DNA紧紧结合在一起,为什么? 35.DNA连接酶对于 DNA的复制是很重要的,但RNA的合成一般却不需要连接酶。解释这个现象的原因。 36.曾经认为 DNA的复制是全保留复制,每个双螺旋分子都作为新的子代双螺旋分子的模板。如果真是这样,在Meselson和 Stahl的实验中他们将得到什么结果? 37.描述 Matthew和Franklin所做的证明 DNA半保留复制的实验。 38.解释在DNA复制过程中,后随链是怎样合成的。 39.描述滚环复制过程及其特征。 40.假如发生了碱基对的错配会产生什么表型,它们怎样被修复? 41.为什么 DNA的甲基化状态可以为复制的调节和 DNA的修复所利用? 42.错配修复的方向可以怎样被调节(突变型到野生型或野生型到突变型)? 43.RecA蛋白是怎样调节 SOS反应的? 44.以图4.1A为例,画出图4.1B所示分子同源区域交叉重组的产物,图中用一条单线表示 DNA双螺旋,同源重组的靶位点用箭头标出。 图4.1 各种重组的底物 45.图4.2所示为两条同源的亲代双螺旋和两套可能的重组产物。请画图表示两亲代双螺旋间可以产生指定重组产物的 Holliday连接,在每条链的左端标明 Holliday连接的3’或5’端,这样亲代和重组双螺旋间的关系就比较清楚。请指明为了产生每套重组产物哪些链应被切去。最后,画出经过一轮 DNA复制后的重组产物。 图4.2 亲代与重组的双螺旋 46.为什么基因内互补只发生在:(1)某一基因座的等位基因间;(2)这些基因座的特殊等位基因对间? 47.有很多突变对于野生型基因是隐性的,也就是说,在一个含有突变型和野生型基因二倍体细胞中,野生型的特性能够得到表达。请根据对突变过程的认识解释这一事实。对于说明为什么有些突变是显性的,有何见解? 48.为了选择下面两种突变型,应对只含有葡萄糖、硫酸铵以及无机离子的基本培养基作何调整? (1) leu—,亮氨酸营养缺陷型; (3) gal—,不能以半乳糖作为唯一碳源的突变型。 49.写出利用突变研究以下问题的步骤: (l)氨基酸 X的代谢途径; (2)E.coli中细胞分裂的控制。 50.在工业微生物菌种的选育中,人们喜欢用诱变的方法筛选解除了酶合成阻遏的突变株,而不要解除了酶活性反馈抑制的突变株。请解释原因。 51.为什么一个基因座的正向突变发生的频率要比回复突变高? 52.一个基因间阻遏物突变怎样阻遏了一个错义突变? 53.为什么吖啶类染料诱导的突变较碱基类似物诱导的突变对生物体更有害? 54.羟胺对游离噬菌体和转化 DNA都是高度特异的致变剂。它只与 DNA中的C反应,使之转变成偶尔可与 A错配的形式。 (1)羟胺诱导的碱基替代是什么? (2)推测羟胺是否可回复自身诱导的突变? (3)羟胺可以回复5—溴尿嘧啶诱导的突变吗? (4)5—溴尿嘧啶可以回复羟胺诱导的突变吗? 55.在下列哪些基因中你可以分离到温度敏感突变和琥珀突变? (l) lacO;(2) lacZ; (3) lacP;(4) lacI 56.区别反向突变、回复突变和第二位点回复突变。 57.指出突变频率和突变率的区别。 58.简述大肠杆菌中的增变基因。 59.简述怎样利用化学诱变剂在细菌中的诱变来检测它们致癌作用。 60.简述 Muller—5技术,并说明如何利用它测得 X射线对果蝇突变频率的影响。 61.列举几种具以下特征突变:(1)不能合成特殊多肽;(2)组成型合成多肽。 62.突变能影响高等真核生物结构基因表达的几个水平?并指出每种突变最明显的分子表型。 63.当E.coli菌株 K同时被两个特异的 T4噬菌体 rⅡ突变体所感染时,感染细胞裂解并释放出正常数量的噬菌体后代。这些后代是重组的结果还是互补作用的结果?应怎 样辨别? 64.在E.coli中, A和 B基因座相隔了大约5%的基因组,另一对标记 C和 D间隔1%的基因组。哪对能被(1)共转化;(2)共转导? 65.当一个烈性噬菌体的所有基因全部表达时,如果不对转录进行时序性调控,将出现 什么问题? 66.为什么λ噬菌体感染产生的溶源菌通常对其他的λ噬菌体的感染有免疫? 67.请预测具有下列突变的λ噬菌体感染细菌的表型。并说明原因: (1)产生一个抗蛋白酶的λ cⅡ蛋白的突变。 (2)具有阻止蛋白结合的λOR2的突变。 (3)使λN基因失去作用的突变。 (4)编码λ c I蛋白的基因突变。 68.鉴定化合物的致癌性的一个通用实验是爱姆斯试验,通过营养缺陷型菌的回复突变 确定其致癌性。用人噬菌体和E.coli设计一个实验使之能用于致癌物的检测。 69.为什么像流感病毒这样的RNA 病毒的生命周期,有力地支持了以下这一论点:与其说病毒是生命有机体,不如说它是“寄生的遗传因子”。 70.大肠杆菌噬菌体 T2的染色体是一个线性 DNA分子,它的两端都有冗余并且可作循 环变换。解释冗余的含义并说明这些分子是怎样产生的。 71.烈性噬菌体和温和噬菌体的区别是什么? 72.从噬菌体 MS2中提取出来的裸露染色体可以感染大肠杆菌的原生质球(去除胞壁的细菌),这会产生和具感染能力的噬菌体一样的噬菌体颗粒。如果染色体先用RNA酶处理,就会失去感染能力;另外,如果标记感染的RNA,在子代中不出现标记。解释这些现象。 73.从λ噬菌体中提取的 DNA用两种只攻击单链 DNA的外切核酸酶处理。外切核酸酶 A只从突出的5’端消化 DNA,而外切核酸酶 B只攻击自由的3’端。这种处理对λ噬菌体 DNA的生物活性有什么影响? 74.比较真核生物与原核生物转录起始的第一步有什么个同。 75.转录涉及模板链和编码链的分离,解释在转录中单链 DNA是怎样被保护的。 76.概括说明σ因子对启动子调节的辅助功能。 77.什么是增效与减效突变? 78.细菌促旋酶突变通常是致死的,但是促旋酶/拓扑异构酶Ⅰ突变却可以成活,其原何在? 79.解释因子是怎样选择专一性启动子共有序列而启动不同基因表达的(考虑对环境压力的应答)。 80. rpoN基因编码σ因子:σ54,它具有不同于已知原核生物的因子的特征。请与E. coli的因子:σ70(RpoD)作比较讨论这些特征。 81.在原核生物中,核心酶与 DNA的松散结合和紧密结合之间存在—种平衡,为什么这比核心多聚酶自身形成游离与结合平衡更有利? 82.正调控和负调控的主要不同是什么? 83.区别(1)启动子增效突变与启动子减效突变;(2)上游序列和下游序列。 84.解释为什么操纵子和启动子是反式隐性、顺式显性的,而编码阻碍蛋白的基因既是反式显性又是顺式显性。 85.为什么只有 DNA双螺旋中的一条链能被正常的转录? 86.哪三个序列对原核生物mRNA的精确转录是必不可少的? 87.说明因 RNA聚合酶—启动子不同的相互作用如何导致不同基因的转录。 88.原核生物的核糖体 RNA和 tRNA的相对较稳定并且半衰期长,而 mRNA却不稳定,很快被降解,请解释这种稳定性的差异。 89.列举两种受调控蛋白控制的、与氨基酸的生物合成有关的操纵子。 90.什么是安慰诱导物? 91.葡萄糖是如何影响涉及糖代谢的操纵子(葡萄糖敏感型操纵子)的表达? 92.在大多数细菌操纵子中,结构基因通常紧靠在一起并由单个操纵序列—启动子区调控,而在一些例子中结构基因分散在染色体上。请问这些基因是如何以简单的方式达到协同调节的。 93. 反转录病毒与反转录转座子有什么不同? 94. gag和pol基因的蛋白产物是怎样生成的? mRNA编码的 Env蛋白是怎样生成的? 95. 蛋白酶为什么对反转录病毒生活史很重要? 96. 列出转化病毒正链RNA掺入到宿主双链 DNA的详细过程。 97. 噬菌体整合到宿主基因组后,4~6个宿主 DNA的核苷酸被复制,这是为什么?这与转座子插入新位点有何相似之处?另外,两个核苷酸从5’U3的5’和3’被切除,这意味着遗传信息从反转录病毒中被丢失吗? 98.反转录病毒怎样获得像onc基因这样的细胞基因?获得此类基因会对反转录病毒基 因产生影响吗?一个反转录病毒怎样才会丢失如 pol和 env这样的重要的基因而复制? 99.描述酵母 Ty元件的结构。它与反转录病毒有何相似之处?为什么它不形成感染粒子? 100.你如何证明 Ty元件在转座时经历了一个RNA中间体? 101.FB元件与copia因子有何不同? 102.列出病毒和非病毒超家族反转录转座子之间的4种差异。 103.为什么说 Alu元件可能作为 DNA复制的起点?有什么理由不支持这种假说呢? 104.描述两种转座子引起基因组重排的方式。 105. IS元件整合到靶位点时会发生什么? 106.一个复合转座子和一个 IS元件之间的关系是什么? 107.列出一个转座子插入到一个新位点所要求的步骤。 108.当(l)DNA在两个定向重复之间(2)DNA在两个反向重复之间发生重组的效应各是什么? 109.在什么过程中会形成一个共整合体?它的结构是什么? 110.Tn10元件只有在自己的转座酶基因具有活性时发生转座(与利用基因组中 Tn10元件表达的转座酶的情况正好相反),这种偏爱的原因是什么? 111.什么是杂种不育?是什么引起的? 112.即使不携带癌基因,反转录病毒依然会导致癌变转化。列举这种现象发生的三种方式。 113.简述大肠杆菌的插入序列,并指出它们对自发突变的重要性。 114.比较基因组的大小和基因组复杂性的不同: —个基因组有两个序列,一个是 A,另—个是 B,各将2000bP长。其中—个是由400bp的序列重复5次而成,另一个则由50bp的序列重复40次而成,问: (1)这个基因组的大小怎样? (2)这个基因组的复杂性如何? 115. 一个基因如何产生两种不同类型的mRNA分子? 116. 在一个克隆基因的分析中发现:—个含有转录位点上游3.8kb DNA的克隆,其 mRNA直接转录活性比仅含有3.1kb上游 DNA的克隆的转录活性大50倍。这表明了什么? 117.被加工的假基因与其他假基因有哪些不同?它是如何产生的? 118.非转录间隔区与转录间隔区分别位于 rRNA重复的什么位置?转录间隔区与内含子 有何区别? 119.请描述 C值矛盾,并举一个例说明。 120.在酵母基因中,其生活必需基因占多大比例?为什么有些基因可能是不必要的? 121.酵母mRNA的大小一般与基因的大小相—致。而哺乳动物 mRNA比对应的基因明显小。为什么? 122.在一个基因复制后,外显子发生突变的机率比内含子小。但是,所有 DNA的突变率是相同的。请解释原因。 123.什么证据表明外显子与蛋白质的功能结构域相一致?这一证据如何支持外显子改组 (exon shuffling)假说? 124.为什么卫星 DNA在密度梯度离心时会形成一个清晰的峰? 125. 为什么基因组 DNA在用限制性内切核酸酶消化时,哺乳类的卫星 DNA会产生特 异的带? 126.举例说明什么是梯级重复,这样的序列是如何产生的? 127.跳跃复制的结果是什么? 128.重复序列并不是在选择压力下存在,因此能快速积累突变。这些特性表明重复序列相互间应存在很大的不同,但事实并不是这样的。请举例说明。 129.哪些细胞器带有自身基因组?为什么这些细胞器带有自身的基因组? 130.线粒体 DNA的突变率与细胞核 DNA突变率有什么不同?为什么? 131.人线粒体 DNA的哪些特征表明了其基因组的组织方式具有经济性? 132. RNA分子能被运到细胞器中吗? 133.什么证据表明细胞器与原核生物关系比真核生物关系密切? 134.酵母 rho—小菌落突变株的线粒体DNA发生了什么变化? 135.除了自身免疫疾病,机体如何实现不对“自己”产生免疫? 136. 简述重链免疫球蛋白基因重排的步骤。 137.列举产生免疫多样性的途径。 138.当J区与 V区发生重排后,其5’端的命运如何?3’端呢? 139. 假设免疫球蛋白是由基因组中完整的基因编码,而不是多个片段组装而成,那么人 体识别百万个不同的抗原需要多少个基因参与免疫反应?这些基因占人基因组的多 大比率? 140.地中海贫血症是一类因α和β珠蛋白合成降低而导致的疾病,什么类型的 DNA重排能引发这些疾病? 141.列举一个已知的 DNA序列编码一种以上蛋白质的三种方法。 142.哺乳动物中,从母亲与父亲遗传而来的基因是差异表达的,这种现象的理论基础是什么? 143.简述 T—DNA转化所需的细菌及质粒基因。 144.氨甲蝶呤对哺乳动物细胞有何作用?细胞是如何对这种药物产生抗性的?其中稳定 和不稳定抗性有什么不同? 145.一个tRNA基因的启动子序列突变将会分别对(l)基因产物和(2)细胞或生物体的表型有什么影响? 146.列举原核生物同真核生物转录的差异。 147.增强子具有哪些特点? 148.哪些转录因子含有 TBP?为什么它们被称为定位因子?请用一个模型解释为什么所 有三种RNA聚合酶都能与 TBP发生作用? 149.什么是转录起始前复合体? 150.RNA聚合酶的内部启动子位于起始位点下游50个核苷酸的位置,它是如何被定位并正确起始转录的? 151.对带有内部启动子的RNA聚合酶Ⅲ基因有什么样的编码限制因素? 152.当一段活性转录 DNA受损时,模板首先被修复。请用一个模型解释这一现象。 153.真核生物中,基因的表达受不同水平的调控,请列举其中3种。 154.甾醇类转录因子与锌指蛋白类转录因子的区别是什么? 155.亮氨酸拉链蛋白所识别的 DNA有何特点?如何理解亮氨酸拉链转录因子的二聚体结构同识别位点的关系? 156.虽然同源异型蛋白与锌指蛋白差别很大,但是它们识别 DNA序列的结构元件相 似的,这个元件是什么? 157.协同控制(coordinate control)下的基因是如何被同时激活的? 158.列出调控转录因子被激活的7种途径,并各举一例。 159.许多转录因子是细胞原癌基因的产物,为什么突变的转录因子可能导致癌变? 160.转录因子能够与装配成核小体的 DNA序列结合吗? 161.有两个模型可以解释染色质中的基因是如何被转录的。优先模型(preemptive model)中,转录因子和RNA聚合酶是如何与启动子结合的?为什么在动态模型中需要ATP? 162.为什么酵母SWI与SNF基因的突变会影响不同靶基因的转录? 163.一般认为,染色体中具有多个调控基因表达的结构域。每个结构域中可以找到哪些功能位点,它们的作用如何? 164.MyoD是一种 bHLH蛋白,对肌肉细胞的发育很重要,它的活性是如何被调控的? 165.酵母 U6 sRNA基因有一个TATA盒位于上游,在基因内有一个弱的 A盒,基因下游的远端还有一个保守的 B盒。体外实验时,RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ都可以转录这个基因,但体内实验发现只有RNA聚合酶Ⅲ可以转录它。如何确定该基因启动子的聚合酶特异性? 166.举例说明单链核酸中形成茎环结构的重要性。 167.用负超螺旋环状 DNA样品进行体外转录实验。但是预实验中并没有获得满意的结果,试讨论改进实验的可行方法。 168.组蛋白 H2A基因在所有细胞中都进行表达,而免疫球蛋白基因只在淋巴样细胞中表达。两类基因的启动子都含有转录因子 Oct-1的结合位点, Oct-1也存在于这两类细胞中,但为什么免疫球蛋白只在淋巴样细胞中表达? 169.RNA聚合酶Ⅱ起始转录后,起始复合物必须转变为延伸复合物。因此聚合酶复合 物必须解旋一小段 DNA。在线性 DNA上,解旋需要ATP, TFⅡE, TFⅡH和解旋酶活性。然而,超螺旋 DNA的转录并不需要这些因子。请解释这一现象。 170.RNA聚合酶Ⅲ特异性地转录小分子RNA,但为什么不转录5.8S rRNA? 171.当剪接的分支位点被移到内含子内的另一个位置,其活性将会消失。相反,正确位置附近隐藏的一个分支位点被激活。请作出解释。 172.请列举剪接体组装过程中的各个步骤,其中哪一个复合物是具有活性的剪接体? 173. Ul SnRNP与5’剪接位点间作用的基础是什么?如何证明? 174.列举前体mRNA剪接过程中发生的6种RNA-RNA相互作用? 175.通过遗传筛选,在酵母中分离得到许多与前体mRNA剪接有关的基因。其中几个基因编码RNA解旋酶。如何解释前体mRNA的剪接需要多个RNA解旋酶?这些酶可能在哪一步反应中起作用? 176.前体mRNA剪接体的催化中心是什么?它是如何形成的?有什么证据可以证明这 个模型? 177.据说前体mRNA的剪接是从Ⅱ型剪接进化而来的。有什么证据可以证明这一点?是如何发生的?这种进化为什么对生物体有利? 178.可变剪接如何控制果蝇中的性别分化? 179.比较RNA聚合酶 Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ催化的转录终止过程和转录产物3’端的形成。 180.组蛋白mRNA3’端的加工需要什么样的RNA结构?如何证明所涉及的是RNA的二级结构而不是初级结构?在其他反应中会形成类似的结构吗? 181.为什么把同样的第一外显子(SL外显子)加在所有mRNA上对锥虫是有利的? 182.如何确定在一个多内含子基因的剪接过程中,内含子被切除的顺序? 183.为什么mRNA的翻译起始密码子的上游必须含有不被翻译的核糖核苷酸? 184.在RNA编辑中,向导RNA(gRNA)的作用是什么?它的哪些部分分别与:(1)编辑前mRNA;(2)编辑后的前体 mRNA互补? 185.指出下列序列中的3’剪接位点: 5’—ACGUACUAACAUUCUAUUCCUUAAG/UUCAUAAGUUGAGUC—3’ 如果3’剪接位点的保守序列发生突变,附近的一个“隐藏”3’剪接位点通常取而代之。这个位点在哪里?这将对该前体mRNA所编码的蛋白产生什么影响? 186.既然真核rRNA的 poly(A)尾不是由 DNA编码的,为什么能将它准确地加到3’末端上呢? 187. 解释什么是“套索结构”,在内含子套索中的磷酸二酯键有什么特别之处? 188.哪一种真核生物RNA不需要加工? 189.为什么剪接是一个精确的过程? 191. 如果剪接发生在一个内含子的 GU序列与相邻内含子的AG序列间,会有什么结果? 192. N—甲酰甲硫氨酸—tRNA的功能是什么? 193. 解释核糖体肽基转移反应。 194.简述真核细胞中翻译终止的过程。 195.真核与原核核糖体的主要区别是什么? 196.简述真核与原核细胞中翻译起始的主要区别。 197.氨酰tRNA合成酶的功能是什么? 198.有两个系统发育上十分接近的物种,它们染色体中的(G十C)%含量不同, A株(G+C)含量为55%而 B株是68%。同源及异源转化/重组实验表明:来自(G+C)%低的DNA易于转化入(G十C)%高的生物体/基因组中,反之则不然。请说明原因。 199.根据翻译过程所涉及的各个步骤,设计出至少六种抑制翻译的方案。 200.根据遗传密码字典,将mRNA序列5’-AUGUUCCAGAGCACGGGCCCUAAA-3’翻译成多肽,假定翻译从5’端的 AUG开始。如果: (1) C改成 G; (2) C改成 A; (3) C被缺失。 上述变化对多肽有何影响? 201.在大肠杆菌的一个无细胞蛋白质合成系统中,耗尽内源 mRNA后与 poly(AG)的随机多聚体共温育,其中 A∶G=3∶1。预测何种氨基酸能够掺人到多肽中,以及它们的相对掺入频率。 202.为什么说翻译后氨基酸的化学修饰与蛋白质总体构象的形成有关? 203.说明氨基酸残基的磷酸化怎样调节蛋白质的活性? 204.比较并指出O-连接和N-连接合成途径的异同。 205.为什么大多数移码突变导致多肽链的提前终止? 206.为什么说基因工程技术是60年代末70年代初发展起来的? 207.重组 DNA的含义是什么? 208.如何理解基因工程的两个特点? 209.在 Cohen构建有生物功能重组体的第一步实验中,用EcoR Ⅰ切割了 R6—5质粒,然后转化正E.coliC600,在卡那霉素抗性平板上筛选到了 pSC102,它是由 R6—5的三个E.coR Ⅰ片段组成,请推测这个质粒具有什么遗传特性: 210.什么是动物乳腺生物反应器? 211.现分离到X82噬菌体的一个突变型,它同野生型的噬菌斑相当不同,并已分离到这两种噬菌体的 DNA,请设计一个实验,初步鉴定是点突变、插人突变还是缺失突变? 212.说明 Sanger DNA测序法的原理。 213.在酶切反应缓冲液中加入 BSA的目的是什么?机理是什么? 214. Fredrick和 McClarin等用一个由13个碱基对的 DNA片段与EcoR Ⅰ反应,然后分离到酶和 DNA共结晶的复合物,通过 X射线分析发现了什么? 215. 有些噬菌体和质粒常常编码一些抗限制性酶的蛋白以中和宿主的限制系统。你认为 噬菌体和质粒还有哪些可能的方式避免宿主的限制作用? 216.某学生在用EcoR Ⅰ切割外源片段时,出现了星号活性,请分析可能的原因? 217.在序列5’—CGAACATATGGAGT-3’中含有一个6bp的 Ⅱ类限制性内切核酸酶的识别序列,该位点的序列可能是什么? 218.下面几种序列中你认为哪一个(哪些)最有可能是Ⅱ类酶的识另别序列: GAATCG,AAATTT, GATATC,ACGGCA?为什么? 219.用连接酶将Sau 3AI(↓GATC)切割的 DNA与经BamHⅠ(G↓GATCC)切割的DNA连接起来后,能够被BamH Ⅰ切割的机率有多大(用百分比表示)? 220.用Klenow酶填补的办法可使5’粘性末端转变成平末端。这种方法常使 DNA上的 某些限制酶的识别位点消失。请问,对于下列限制酶,用这种方法处理会不会使它们的识别序列都消失?BamH (G ↓ GATCC);Taq Ⅰ(T ↓ CGA),BssH Ⅱ(G↓ CGCGC)。 221.请推测细菌的染色体上是否会有编码识别8个碱基的内切酶?怎样验证? 222.当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时,若要进行双酶切,应采取什么措施?为什么? 223.按适当的顺序,列出将一种mRNA的 cDNA克隆到表达载体所用到的酶。 224.为什么反转录酶在聚合反应中会出错? 225.什么是测序酶(sequenaseTM)? 226. 什么是 S1核酸酶作图(S1 nuclease mapping)? 227. 基因工程中,为什么不喜欢用 BAP来脱去 DNA的5’端的磷酸基团? 228.RNase A和RNase H在催化活性和应用上有何不同? 229.切口移位(nick translation)标记 DNA前,用 DNase Ⅰ处理 DNA时,应注意什么? 230.核酸酶与外切核酸酶Ⅲ用于系列缺失突变有什么不同? 231.YAC载体具有什么样的功能性 DNA序列?为什么在克隆大片段时,YAC具有优越性? 232.列举质粒载体必须具备的4个基本特性。 233.什么叫穿梭载体? 234.说明