3t/
?<?? [?
3t/
?<?? [?
yy?
?ê ?yvD fòZ
?ê ?yvD fòZ
yy?
5
2
3
4
1
6
7
8
9
×F DNA/
?Dyy?￥'à Q
×F /
?Dyy?￥'à Q
×F DNA/
?Dyy?￥'e ?
×F /
?Dyy?￥'e ?
×F DNA/
?
?3￥'Hq
×F /
?
?3￥'Hq
×F DNA/
?￥?TV?
×F /
?￥?TV?
"￥y￥ X
HDyó o￥y
"￥y￥ X
HDyó o￥y
?÷y v?? )?￥Vr
?÷y v?? )?￥Vr
?÷y ? )?￥Vr
?÷y ? )?￥Vr
?÷y ??t%?￥Vr
?÷y ??t%?￥Vr
?÷yVrát￥s ?B?
?÷yVrát￥s ?B?
3 ×F DNA/
?
?3￥'Hq
×F /
?
?3￥'Hq
C ¨?yM￥
s8 )%
¨?yM￥
s8 )%
B ¨?y X
H￥8
¨?y X
H￥8
A ¨??
??T￥y
?
¨??
??T￥y
?
A ¨??
??T￥y
?
¨??
??T￥y
?
3 ×F DNA/
?
?3￥'Hq
×F /
?
?3￥'Hq
K???
? = M
?
K???
? = M
?
DNA ?¤
?
?¤
?
DNA
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
?
??
e
?
?
??
e
?
K???
? = M
?
K???
? = M
?
K???
? = M
?￥?C#
3t? ?
K???
? = M
?￥?C#
3t? ?
MY
? y DNAs0?￥+??
i Mé DNA
? y
MY
? y s0?￥+??
i Mé
? y
?1i ?e?% )?úù% )K?? ? DNA￥ ? S
?1i ?e?% )?úù% )K?? ? ￥ ? S
% )￥K?D?
eT¨
% )￥K?D?
eT¨
hsd R I
?K???
? = M
?
I
?K???
? = M
?
hsd M I
?K??J?
?
I
?K??J?
?
hsd S I
?K??
??J?
?￥x]Vr
I
?K??
??J?
?￥x]Vr
1968 M Smith? |
n5V
@?
_ó? ) dé?s ?
M ? |
n5V
@?
_ó? ) é?s ?
Hind II? Hind III
?
K???
? = M
?
K???
? = M
?
K???
? = M
?￥ ??
K???
? = M
?￥ ??
?1+? I ? II ? III ?
?1+? ? ? ?
K??
e
K??
e
? ?
? ?
?? ?
?? ?
?? ?
?? ?
?a2
?a2
s÷ ?
8
s÷ ?
8
]÷=
8
]÷=
8
s÷=
8
s÷=
8
￡ùy0
￡ùy0 ATP Mg
2+
SAM ATP Mg
2+
SAMMg
2+
MY?
MY?
TGAN
8
TGCT
è??
è??
GAGCC
AACN
6
GTGC CAGCAG
Méê?
Méê?
MY?
1kb)
MY?
)
MY?
=?í
MY?
=?í
MY?
/3
MY?
/3
?? Mé
?? Mé
+s? Mé
+s? Mé 24-26bp)
)
K???
? = M
?
K???
? = M
?
K???
? = M
?￥
K???
? = M
?￥
? ? é
? ? é
H i n d III H i n d III
Haemophilus influenzae d
_ó
@?? ) dé
Haemophilus influenzae
_ó
@?? ) é
]B )é?
?c￥ ??]￥K???
? = M
?
]B )é?
?c￥ ??]￥K???
? = M
?
K???
? = M
?
K???
? = M
?
II ?K???
? = M
?￥'+?
?K???
? = M
?￥'+?
MY
? y DNAs0? 4 - 8a￥+??
MY
? y s0?
v?s
?￥ Méê?
MY?
=?
§
v?s
?￥ Méê?
MY?
=?
§
MY Mé?
???￥è??íó2
MY Mé?
???￥è?? íó2
5‘ … G C T G A A T T C G A G … 3’
C T G A A T T C G A G …
3‘ … C G A C T T A A G C T C … 5’
G A C T T A A G C T C …
EcoR I￥
MY?
￥
MY?
EcoR I￥ Méê?
￥ Méê?
EcoRI?á
3￥ 5‘T?
?á
3￥ T?
5‘ … G-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
-C-T-G-A-A-T-T-C-G-A-G …
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
-G-A-C-T-T-A-A-G-C-T-C …
EcoRI 37 ￥
5‘ … G-C-T-G-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
-C-T-G- -A-A-T-T-C-G-A-G …
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-POH-G-C-T-C … 5’
-G-A-C-T-T-A-A- -G-C-T-C …
| 4-7 ￥
|
5‘ … G-C-T-G A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
-C-T-GA-A-T-T-C-G-A-G …
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A G-C-T-C … 5’
-G-A-C-T-T-A-AG-C-T-C …
OH P
OHP
PstI?á
3￥ 3‘T?
?á
3￥ T?
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G … 3’
-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G …
3‘ … C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C …
PstI 37 ￥
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-OH P-G-G-A-G … 3’
-C-T-C-T-G-C-A- -G-G-A-G …
3‘ … C-G-A-G-POH-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
-G-A-G- -A-C-G-T-C-C-T-C …
| 4-7 ￥
|
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A G-G-A-G … 3’
-C-T-C-T-G-C-AG-G-A-G …
3‘ … C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
-G-A-GA-C-G-T-C-C-T-C …
OH P
OHP
PvuII?á
3￥ üh
?á
3￥ üh
5‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G … 3’
-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G …
3‘ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C … 5’
-G-A-G-T-C-G-A-C- -T-C …
PvuII 37 ￥
5‘ … G-C-T-C-A-G-OH P-C-T-G-G-A-G … 3’
-C-T-C-A-G- -C-T-G-G-A-G …
3‘ … C-G-A-G-T-C-POH-G-A-C-C-T-C … 5’
-G-A-G-T-C- -G-A-C-C-T-C …
K???
? = M
?
K???
? = M
?
II ?K???
? = M
?
?3Q?￥?T
?K???
? = M
?
?3Q?￥?T
v?s II ??
? = M
?31M
?￥Q?Hq
v?s ??
? = M
?31M
?￥Q?Hq
Tris-HCl 50 mM pH 7.5
MgCl
2
10 mM
NaCl 0 - 150 mM
DTT 1 mM
0 - 50 mM ?÷
?
?÷
?
100 mM ?÷
?
?÷
?
150 mM ú÷
?
ú÷
?
Volume 20 - 100 μl
l
T T 37 ￥ 1 - 1.5 hr
1 U ?
? = M
?￥
?? KDQ?Hq/Q? 1 l
H? ?
?
? = M
?￥
?? KDQ?Hq/Q? l
H? ?
￡3 1 μg S DNA
?3￥
?
￡3 S
?3￥
?
K???
? = M
?
K???
? = M
?
II ?K???
? = M
?
?3Q?￥?T
?K???
? = M
?
?3Q?￥?T
II ??
? = M
?￥
? ó?
?3
??
? = M
?￥
? ó?
?3
÷ i1 pM]￥
?e5
V[]
H
? M???i
÷ i1 pM]￥
?e5
V[]
H
? M???i
5‘ …GCTACATGGATCCCGGGTTCGCAT…3’
…GCTACATGGATCCCGGGTTCGCAT…3’
3‘ …CGATGTACCTAGGGCCCAAGCGTA…5’
…CGATGTACCTAGGGCCCAAGCGTA…5’
BamHI SmaI
5‘ …GCTACATG GATCCCGGGTTCGCAT…3’
…GCTACATG GATCCCGGGTTCGCAT…3’
3‘ …CGATGTACCTAG GGCCCAAGCGTA…5’
…CGATGTACCTAG GGCCCAAGCGTA…5’
5‘ …GCTACATGGATCCC GGGTTCGCAT…3’
…GCTACATGGATCCC GGGTTCGCAT…3’
3‘ …CGATGTACCTAGGG CCCAAGCGTA…5’
…CGATGTACCTAGGG CCCAAGCGTA…5’
K???
? = M
?
K???
? = M
?
II ?K???
? = M
?
?3Q?￥?T
?K???
? = M
?
?3Q?￥?T
II ??
? = M
?￥
? ó?
?3
??
? = M
?￥
? ó?
?3
÷ i1 p?]￥
? V? |/
ZE
÷ i1 p?]￥
? V? |/
ZE
P¨?L￥
?￥÷ iFvLR
?￥¨
]
H
?3
P¨?L￥
?￥÷ iFvLR
?￥¨
]
H
?3
?÷
?5 M ?a?F÷ú÷
? M
?÷
?5 M ?a?F÷ú÷
? M
B?
?5 M ?a÷D?
A
6B?
? M
B?
?5 M ?a÷D?
A
6B?
? M
0.1 8￥ 5 M NaAc pH 5.4
8￥
2.5 8￥b ?Y?
8￥b ?Y?
b? 5 sò aú
? ?ò ?? 10sò a?2
sò aú
? ?ò ?? sò a?2
K???
? = M
?
K???
? = M
?
?YK???
? = M
??￥y
í
?YK???
? = M
??￥y
í
DNA" ?￥B
" ?￥B
?aé a&p a
o_ aY? a EDTA aSDS aNaCl?
?aé a&p a
o_ aY? a ?
Fv
?￥¨
1 μg DNA ¨ 10U
?
Fv
?￥¨
¨
FvQ?98
FvQ?98
üéQ?
HW
üéQ?
HW
K???
? = M
?
K???
? = M
?
?YK???
? = M
??￥y
í
?YK???
? = M
??￥y
í
DNA" ?￥J??
" ?￥J??
v?? )?￥ damJ?
? 5‘GATC3’?
?￥Fw N
6
ê
v?? )?￥ J?
? ?
?￥Fw
? ?J
s ?Y￥
?μ Bcl I aMboI?? BamH I a
? ?J
s ?Y￥
?μ ??
Bgl II aSau3A I?
s?Y
?
s?Y
v?? )?￥ dcmJ?
? 5‘CCAGG3’ 5‘CCTGG3’?
v?? )?￥ J?
? ?
?￥}J C
5
ê
? ?J
s ?Y￥
?μ EcoR II?
?￥}J ê
? ?J
s ?Y￥
?μ ?
??t?￥J?
? 5‘CG3’?
?￥ C
5
ê
? ?J
??t?￥J?
? ?
?￥ ê
? ?J
K???
? = M
?
K???
? = M
?
?YK???
? = M
??￥y
í
?YK???
? = M
??￥y
í
?
? = M
?￥?
A?é
?
? = M
?￥?
A?é
ú i￥
? aú i￥?2 a? ?0 < a
pH′?
ú i￥
? aú i￥?2 a? ?0 < a
′ ?
?
PBt?
? = M
?￥
MY? Mé?
?
3?+s?'
?
PBt?
? = M
?￥
MY? Mé?
?
3?+s?'
?ì￥ Star activityC`
C`
EcoR I ?èHq/
MYi Mé 5‘GAATTC3’?
? ?
?èHq/
MYi Mé ?
? ?
2 i?V 5%
v/v
H9 V Mé 5‘PuPuATPyPy3’?
2 i?V
H9 V Mé ?
5‘AATT3’
DNA ?¤
?
?¤
?
DNA ?¤
?￥'?é
?¤
?￥'?é
?ˉ
? y DNA
? g)￥
?= o
?ˉ
? y
? g)￥
?= o
DNA ?¤
?
?¤
?
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A G-G-A-G … 3’
-C-T-C-T-G-C-AG-G-A-G …
3‘ … C-G-A-G A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
-G-A-GA-C-G-T-C-C-T-C …
OH P
OHP
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G … 3’
-C-T-C-T-G-C-A-G-G-A-G …
3‘ … C-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
-G-A-G-A-C-G-T-C-C-T-C …
nick
nick
DNA ?¤
?
?¤
?
DNA ?¤
?￥'?é
?¤
?￥'?é
?ˉD RNA y2?￥ DNA y
? g)￥
?= o
?ˉD y2?￥ y
? g)￥
?= o
T4-DNA ?¤
?
?¤
?
5‘ … G-C-U-C-U-G-C-C-G-G-A-G … 3’
-C-U-C-U-G-C-C-G-G-A-G …3
3‘ … C-G-A-G A-C-G-G-C-C-T-C … 5’
-G-A-GA-C-G-G-C-C-T-C …
OHP
nick
5‘ … G-C-U-C-U-G-C-C-G-G-A-G … 3’
-C-U-C-U-G-C-C-G-G-A-G …3
3‘ … C-G-A-G-A-C-G-G-C-C-T-C … 5’
-G-A-G-A-C-G-G-C-C-T-C …
DNA ?¤
?
?¤
?
DNA ?¤
?￥'?é
?¤
?￥'?é
?¤ ? üh
? y DNAs0
?¤ ? üh
? y s0
5‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G … 3’
-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G…3’
3‘ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C … 5’
-G-A-G-T-C-G-A-C- -T-C…5’
5‘ … G-C-T-C-A-G-OH P-C-T-G-G-A-G … 3’
-C-T-C-A-G- -C-T-G-G-A-G…3’
3‘ … C-G-A-G-T-C-POH-G-A-C-C-T-C … 5’
-G-A-G-T-C- -G-A-C-C-T-C…5’
T4-DNA ?¤
?
?¤
?
DNA ?¤
?
?¤
?
DNA ?¤
?￥Q?Hq
?¤
?￥Q?Hq
Tris-HCl 50 - 100 mM pH 7.5
MgCl
2
10 mM
ATP 0.5 - 1 mM
DTT 5 mM
Volume 10 - 20 μl
l
T T 4 - 15 ￥ 4 - 16 hr
1 U DNA ?¤
?￥
?? KDQ?Hq/ 15 ￥Q? 1 l
H
?¤
?￥
?? KDQ?Hq/ Q? l
H
? ? ?¤ 1 μg λ-DNA
Hind III ?
?3￥
?
? ? ?¤
?
?3￥
?
DNA ?¤
?
?¤
?
üh
? y DNA ?
￥ ?¤?T
üh
? y ?
￥ ?¤?T
Vs0? ?D￥???K?? ?
? = M
?7/￥T?
￥
?¤
??s0 =?￥ ?¤7 üh
￥ ?¤5
??s0W￥ ?
¤yNa?Q?
?1
¤¤
4ú üh
?¤r
q￥ZE ?
Vs0? ?D￥???K?? ?
? = M
?7/￥T?
￥
?¤
??s0 =?￥ ?¤7 üh
￥ ?¤5
??s0W￥ ?
¤yNa?Q?
?1
¤¤
4ú üh
?¤r
q￥ZE ?
Fv ?¤
?¨
10 v?T?
￥ ?¤
Fv ?¤
?¨
v?T?
￥ ?¤
Fv üh
?t￥ i9Fs0W ·?
Fv üh
?t￥ i9Fs0W ·?
F ? 10% PEG8000\évs0-W￥μrT¨
F ? \évs0-W￥μrT¨
F ??N ?0
NaClK? i 150-200 mM
F ??N ?0
K? i
DNA
?
?
?
?
v?? ) DNA
?
? I
DNA pol I
v?? )
?
?
‘ 1 ‘￥DNA
?
??
?
??
‘ 1 ‘￥?
?? M
??
￥?
?? M
??
‘ 1 ‘￥?
?? M
??
￥?
?? M
??
v?? ) DNA
?
? I￥'?é
v?? )
?
? ￥'?é
3‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-A… 5’
-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-A… 5’
5‘ … C-G-A-G-T-OH
-G-A-G-T-
5‘ ppp dN Mg
2+
3‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-A… 5’
-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-A… 5’
5‘ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-OH
-G-A-G-T-C-G-A-C-
DNA pol I
DNA
?
?
?
?
v?? ) DNA
?
? I
DNA pol I
v?? )
?
?
? g -MS:E
? g -MS:E
v?? ) DNA
?
? I ￥'¨o
v?? )
?
? ￥'¨o
5‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T… 3’
-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T… 3’
3‘ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A… 5‘
-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A… 5‘
Mg
2+
5‘ dNTP 5‘ ppp dA
α-
32
P-dATP
ppp
5‘ … G-C-T-C A-G-C-T-G-G-A-G-T… 3’
-C-T-C A-G-C-T-G-G-A-G-T…
3‘ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A… 5‘
-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A… 5‘
5‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T… 3’
-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T… 3’
3‘ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A… 5‘
-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A… 5‘
Nick translation
?!
32
PS:￥?
?! S:￥?
DNase I
DNA pol I
DNA
?
?
?
?
v?? ) DNA
?
? I v ?
Klenow
v?? )
?
? v ?
Klenow
?￥'?é
?￥'?é
v?? ) DNA
?
? *ü j¤? )?a
?) ?¤ N
v?? )
?
? *ü j¤? )?a
?) ?¤
?s-=￥vt
'1 Klenow
?
?s-=￥vt
'1
Klenow
? ˉ?μ ‘ 1 ‘￥DNA
?
??? ‘ 1 ‘￥?
? ˉ?μ
?
?? ?
?
?? M
???
> ?
‘ 1 ‘￥?
?? M
??
?
?? M
?? ?
> ?
￥?
?? M
??
DNA
?
?
?
?
v?? ) DNA
?
? I v ?
Klenow
v?? )
?
? v ?
Klenow
?￥'¨o
?￥'¨o
? ü??
? = M
?á
3￥ ‘T?
? ü??
? = M
?á
3￥ T?
DNA ?
￥]ê
í
S:
?
￥]ê
í
S:
cDNA?= y￥??
?= y￥??
??
??E?? DNA?
??
??E?? ?
DNA
?
?
?
?
v?? ) DNA
?
? I v ?
Klenow
v?? )
?
? v ?
Klenow
?￥'¨o ? ü??
? = M
?á
3￥ ‘T?
?￥'¨o ? ü??
? = M
?á
3￥ T?
5‘ … G-C-T-G-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
-C-T-G- -A-A-T-T-C-G-A-G …
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-POH-G-C-T-C … 5’
-G-A-C-T-T-A-A- -G-C-T-C …
Klenow dATP dTTP
5‘ … G-C-T-G-A-A-T-T-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
-C-T-G-A-A-T-T- -A-A-T-T-C-G-A-G …
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-POH-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
-G-A-C-T-T-A-A- T-T-A-A-G-C-T-C …
DNA
?
?
?
?
v?? ) DNA
?
? I v ?
Klenow
v?? )
?
? v ?
Klenow
?￥'¨o DNA ?
￥]ê
í
S:
?￥'¨o ?
￥]ê
í
S:
5‘ … G-C-T-G-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
-C-T-G- -A-A-T-T-C-G-A-G …
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-POH-G-C-T-C … 5’
-G-A-C-T-T-A-A- -G-C-T-C …
Klenow α-
32
P-pppdA dTTP
P-pppdA dTTP
5‘ … G-C-T-G-A-A-T-T-OH P-A-A-T-T-C-G-A-G … 3’
-C-T-G-A-A-T-T- -A-A-T-T-C-G-A-G …
3‘ … C-G-A-C-T-T-A-A-POH-T-T-A-A-G-C-T-C … 5’
-G-A-C-T-T-A-A- T-T-A-A-G-C-T-C …
DNA
?
?
?
?
T4-DNA
?
?
?
?
T4-DNA
?￥'+?
?￥'+?
í dNTP
H V[V ?? 3‘-OH
? M
í
H V[V ??
? M
oμB? dNTP
H? Mào??
?
]
HT?
oμB?
H? Mào??
?
]
HT?
1? dNTP (i
H
??]??1ê
1? (i
H
??]??1ê
‘ 1 ‘￥DNA
?
??? ‘ 1 ‘￥?
?? M
??
?
??? ￥?
?? M
??
DNA
?
?
?
?
T4-DNA
?
?
?
?
T4-DNA
?
?￥'¨o M ü??
? = M
?á
3￥ ’T?
?
?￥'¨o M ü??
? = M
?á
3￥ T?
5‘ … G-C-T-C-T-G-C-A-OH P-G-G-A-G … 3’
-C-T-C-T-G-C-A- -G-G-A-G …
3‘ … C-G-A-G-PHO-A-C-G-T-C-C-T-C … 5’
-G-A-G- -A-C-G-T-C-C-T-C …
T4-DNA
?
?
?
?
5‘ … G-C-T-C- OH P-G-G-A-G … 3’
-C-T-C- -G-G-A-G …
3‘ … C-G-A-G-PHO-C-C-T-C … 5’
-G-A-G- -C-C-T-C …
?i ?
?9 ??3
? y DNAo
^ ?1? y?3???
?i ?
?9 ??3
? y o
^ ?1? y?3???
DNA
?
?
?
?
T4-DNA
?
?
?
?
T4-DNA
?
?￥'¨o DNA ?
￥]ê
í
S:
?
?￥'¨o ?
￥]ê
í
S:
5‘ G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T 3’
G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T 3’
3‘ C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A 5‘
C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A 5‘
Mg
2+
5‘ ppp dN 5‘ ppp dA
α-
32
P-dATP
2+
ppp dA
5‘ G-C-T-C A-G-C-T-G-OH
G-C-T-C A-G-C-T-G-
HO-T-C-G-A-C-C-T-C-A 5‘
-T-C-G-A-C-C-T-C-A 5‘
T4-DNA pol
T4-DNA pol
5‘ G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T 3’
G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T 3’
3‘ C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A 5‘
C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A 5‘
DNA
?
?
?
?
G ?? RNA￥DNA
?
?
Q
c
?
G ??
?
?
Q
c
?
Q
c
?￥'+? [ RNA1 e
? cDNA y
Q
c
?￥'+? [ 1 e
? y
3’AAAAAAAAAAAAAA 5’mRNA
Q
c
?
Q
c
? Mg
2+
dNTP
5’TTTTTTTTTTTT oligo (dT)
12-18
3’AAAAAAAAAAAAAA 5’mRNA
5’TTTTTTTTTTTTTT
’TTTTTTTTTTTTTT
3’cDNA
DNA
?
?
?
?
G ?? RNA￥DNA
?
?
Q
c
?
G ??
?
?
Q
c
?
Q
c
?￥'+?
?_? M DNA-RNA? y?￥ RNA y
Q
c
?￥'+?
?_? M ? y?￥ y
Q
c
?
Q
c
?
3’ RNA
5’ DNA3’
5’
3’ RNA
5’ DNA3’
5’
Q
c
?
Q
c
?
5’ DNA3’
?
?
?
?
?
?
? y?
?? M
? ?
?? M
? VII
ExoVII
? y?
?? M
? ?
?? M
?
v?? )￥?
?? M
? VII?31 Mg
2+
v?? )￥?
?? M
? ?31
ExoVII
3’
5’3’
5’
3’
5’ 3’
5’
?
?
?
?
?
?
? y?
?? M
? ?
?? M
? III
ExoIII
? y?
?? M
? ?
?? M
?
ExoVII
3’
5’3’
5’
Mg
2+
3’
5’3’
5’
v?? )￥?
?? M
? III +s?1V 3‘
? M
v?? )￥?
?? M
? +s?1V
? M
?
?
?
?
?
?
? y?
?? M
? λ ?
?? M
?
λExo
? y?
?? M
? ?
?? M
?
λExo
3’
5’3’
5’
Mg
2+
λ?
?? M
?+s?1V 5‘
? M
?
?? M
?+s?1V
? M
3’
5’3’
5’
?
?
?
?
?
?
? y?
? = M
? S1?
?
?
? y?
? = M
? ?
?
?
S1?
?
?￥'+? ?1?! w
? )
Aspergillus oryzae
?
?
?￥'+? ?1?! w
? )
Zn
2+
A3
A3
K
a pHS?1 4.0 - 4.3
31 NaCl 10 - 300 mM
31
?3? y DNA￥
?1?3
? y DNA y 75000
?3? y ￥
?1?3
? y y
?3? y DNA￥
?1?3? y RNA y 7
?3? y ￥
?1?3? y y
?
?
?
?
?
?
? y?
? = M
? S1?
?
?
? y?
? = M
? ?
?
?
S1?
?
?￥'Q? = M? y DNA RNA
?
?
?￥'Q? = M? y
5‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-C-T-T-G-A-G-G-A-G-T… 3’
-C-T-C-A-G-C-T-C-T-T-G-A-G-G-A-G-T… 3’
S1 Zn
2+
5‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-C T-T-G-A-G-G-A-G-T… 3’
-C-T-C-A-G-C-T-C T-T-G-A-G-G-A-G-T…
5‘ … G-C-T-C A-G-C-T-C T-T-G-A-G G-A-G-T… 3’
-C-T-C A-G-C-T-C T-T-G-A-G G-A-G-T…
5‘ dNMPs 5‘ NMPs
?
?
?
?
?
?
? y?
? = M
? S1?
?
?
? y?
? = M
? ?
?
?
S1?
?
?￥'Q? = M{ ? g ? Y￥
? y DNA RNA
?
?
?￥'Q? = M{ ? g ? Y￥
? y
5‘ … G-C-T-C-A-G C-T-G-G-A-G-T… 3’
-C-T-C-A-G C-T-G-G-A-G-T…
3‘ … C-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A… 5‘
-G-A-G-T-C-G-A-C-C-T-C-A… 5‘
5‘ … G-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T… 3’
-C-T-C-A-G-C-T-G-G-A-G-T… 3’
3‘ … C-G-A-G-T-C A-C-C-T-C-A… 5‘
-G-A-G-T-CA-C-C-T-C-A…
nick
gap
S1
Zn
2+
5‘ … G-C-T-C-A-G
-C-T-C-A-G
3‘ … C-G-A-G-T-C
-G-A-G-T-C
T-G-G-A-G-T… 3’
T-G-G-A-G-T…
A-C-C-T-C-A… 5‘
A-C-C-T-C-A…
?
?
?
?
?
?
? y?
? = M
? S1?
?
?
? y?
? = M
? ?
?
?
S1?
?
?￥×1¨o DNA
?ê RNA
S1 mapping
?
?
?￥×1¨o
?ê
DNA
mRNA
?
?
S1
EcoRI
?
?
?
?
?
?
? y = M
? y? M￥?
?
? Bal31?
?
?
? y = M
? y? M￥?
?
? ?
?
?
S1?
?
?￥'+? ?1·
f?9? )
A.espejiana
?
?
?￥'+? ?1·
f?9? )
Ca
2+
5‘ dNMPs 5‘ NMPs
ssDNA or RNA
Ca
2+
Ca
2+
?
?
?
?
?
?
? y = M
? y? M￥?
?
? Bal31?
?
?
? y = M
? y? M￥?
?
? ?
?
?
Bal31?
?
?￥'¨o o? DNAlM
?
?
?￥'¨o o? lM
EcoRI
A
B
C
EcoRI
EcoRI
B C A
Bal31
B C A
ì?
ì?
A
C
?
??
e
?
?
??
e
?
? ? ?M
?
TdT
? ? ?M
?
TdT￥'+? ?1l d￡F
￥'+? ?1l d￡F
?31 e￥ DNA
?
?
?? ? dNTPs
?31 e￥
?
?
?? ?
5‘ p
3‘ HO
OH 3‘
p5‘
TdT Mg
2+
dATP
5‘ p
3‘ HO
AAAAAAAAAAAA OH 3‘
p5‘
TdT￥'+?
￥'+?
5‘ p
3‘ HO
OH 3‘
p5‘
TdT Co
2+
dATP
5‘ p
3‘ HO AAAAAAAAAAA
AAAAAAAAAA OH 3‘
p5‘
5‘ p
3‘ HO
OH 3‘
p5‘
TdT Co
2+
dATP
5‘ p
3‘ HO
AAAAAAAAAAAAAA OH 3‘
p5‘
AAAAAAAAAAA
?
??
e
?
?
??
e
?
a?
??
?
a?
??
?
?1l d￡F￥a?
??
?
CIP
?1l d￡F￥a?
??
?
?1v?? )￥a?
??
?
BAP
?1v?? )￥a?
??
?
5‘ p
OH 3‘
DNA or RNA
5‘ ppp dN
5‘ pppN
BAP / CIP
OH 3‘
5‘ HO
5‘ HO dN
5‘ HO N
?
??
e
?
?
??
e
?
T4- ?
?
?
?
T4-PNP
?
?
?
?
T4-PNP￥'+? DNA aRNA adNR aNR￥5‘-OH
F
￥'+?
F
5‘ HO
3‘ HO
OH 3‘
OH 5‘
T4-PNP Mg
2+
pppATP
γ-
32
P-ATP
pppA
5‘ p
3‘ HO
OH 3‘
p 5‘
¨??￥
]ê
íS:
¨??￥
]ê
íS:
B ¨?y X
H￥8
¨?y X
H￥8
3 ×F DNA/
?
?3￥'Hq
×F /
?
?3￥'Hq
é ì
plasmid
é ì
` )8hy DNA
` )8hy
I
?é ì
cosmidD
` ) ì
I
?é ì
D
` ) ì
|/ ? ?88
|/ ? ?88
8￥? ?#+?
8￥? ?#+?
8￥? ?#+?
8￥? ?#+?
8￥? ?
8￥? ?
??÷yúr ?
s8%
??÷yúr ?
s8%
1?÷y4ˉ? ? ??? ? ?
1?÷y4ˉ? ? ??? ? ?
1?÷y￥ ?9Vr4A1￥Hq
1?÷y￥ ?9Vr4A1￥Hq
8￥? ?#+?
8￥? ?#+?
8? !￥Hq
8? !￥Hq
μ?
s8%￥ T?? T??
VM?
μ?
s8%￥ T?? T??
VM?
μ?
a￥ ?êS:
μ?
a￥ ?êS:
μ?ú￥?÷ DNA￥
? ?
μ?ú￥?÷ ￥
? ?
μ ??B￥?
? = M
?
MY Méê?
μ ??B￥?
? = M
?
MY Méê?
μD+?
s8%M
a?￥ˉ?ê???ê?
μD+?
s8%M
a?￥ˉ?ê???ê?
é ì
é ì
é ì￥'+?
é ì￥'+?
é ì
^
3t% =%μ￥ a ?? ? ?7? ? ?871?ˉ? ai
é ì
^
3t% =%μ￥ a ?? ? ?7? ? ?871?ˉ? ai
$×?L.￥B ??
?s0
$×?L.￥B ??
?s0
é ìèn?e?% )?? )?
é ìèn?e?% )?? )?
'v
?￥é ì
^ DNA?￥
'v
?￥é ì
^
'v
?￥? ? DNAé ì μ N a> aì￥s02
'v
?￥? ? é ì μ N a> aì￥s02
' cccDNA
'
é ì DNA￥s0
S? 1 - 300 kb
é ì ￥s0
S?
é ì
é ì
é ì￥'+?
é ì￥'+?
é ì￥1?ˉ??
é ì￥1?ˉ??
é ì ? ?¨7?%￥ DNAˉ?"dé?1?ˉ?
é ì ? ?¨7?%￥ ˉ?"dé?1?ˉ?
é ì DNA
￥ˉ?02 %?
é ìD7?￥?1"
é ì
￥ˉ?02 %?
é ìD7?￥?1"
?
??%?￥s0
?
J
? *é ì Vs1
?
??%?￥s0
?
J
? *é ì Vs1
vˉ? ??
vˉ? ??
???ˉ? e?￥é ì 1 - 3 J stringent plasmid
???ˉ? e?￥é ì J
???ˉ? e?￥é ì 10 - 60 J stringent plasmid
???ˉ? e?￥é ì J
é ì
é ì
é ì￥'+?
é ì￥'+?
é ì￥1?ˉ?? J
?￥ e?? – é ì DNAˉ? ? e?
é ì￥1?ˉ?? J
?￥ e?? é ì ˉ? ? e?
e?ˉ??tD e￥2?
e?ˉ??tD e￥2?
ori
E.coli ColE1 plasmid
ˉ?Z_
ˉ?Z_
rop
+
Rop
RNA II
RNA I
3’
5’
5’
3’
é ì
é ì
é ì￥'+?
é ì￥'+?
é ì￥1?ˉ?? J
?￥ e?? – é ì DNAˉ? ? e?
é ì￥1?ˉ?? J
?￥ e?? é ì ˉ? ? e?
e?ˉ?
Sy0Dˉ?
Sê?
ori￥2?
e?ˉ?
Sy0Dˉ?
Sê?
￥2?
Pcop cop P/Orep rep ori
Cop Rep
é ì
é ì
é ì￥'+?
é ì￥'+?
é ì￥?M ??
é ì￥?M ??
??
?cμM
?ˉ?02￥?]é ì? ?]
Hi ?
??
?cμM
?ˉ?02￥?]é ì? ?]
Hi ?
B?%???C`?1é ì￥?M ???M ??￥é
B?%???C`?1 é ì￥?M ?? ?M ??￥é
[v?? )￥é ì1 è
[v?? )￥é ì1 è
ColE1 apMB1 ?μM
?￥ˉ?024N?M ?
?μM
?￥ˉ?024N?M ?
pSC101 aF aRP4 ?μM
?￥ˉ?024N?M ?
?μM
?￥ˉ?024N?M ?
p15A#
3é ì?μM
?￥ˉ?024N?M ?
#
3é ì?μM
?￥ˉ?024N?M ?
ìF??M ?? ?
ìF? ?M ?? ?
é ì
é ì
é ì￥'+?
é ì￥'+?
é ì￥?M ?? s0?
é ì￥?M ?? s0?
?cμM
?ˉ?02￥?]é ì ˉ?
H
s?]B?
?cμM
?ˉ?02￥?]é ì ˉ?
H
s?]B?
J
? e?"d￥? ?á
P
?é ì￥K? J
??]
J
? e?"d￥? ?á
P
?é ì￥K? J
??]
?cμ?]ˉ?02￥?]é ì ˉ?
Hò
s1-￥
?cμ?]ˉ?02￥?]é ì ˉ?
Hò
s1-￥
J
? e?"d￥??á
P
?é ì￥K? J
???
J
? e?"d￥??á
P
?é ì￥K? J
???
yN üV ??ˉ?? ù?%s
? ùa ˉ ? )?]B
yN üV ??ˉ?? ù?%s
? ùa ˉ ? )?]B
% =
% =
? J
? ￥é ì [a￥%s
? ù?÷ a
]
? J
? ￥é ì [a￥%s
? ù?÷ a
]
é ì
é ì
é ì￥'+?
é ì￥'+?
é ì￥ VM?
é ì￥ VM?
ê §
f|? )￥é ì Vs?
v ?
ê §
f|? )￥é ì Vs?
v ?
¤??é ì ? ? ?Hq/1?1VB?%M?
¤??é ì ? ? ?Hq/1?1VB?%M?
6B?%
¤?T¨ ? F aCol aRé ì?
6B?%
¤?T¨ ? é ì?
? Col aR￥
???
? ￥
???
d¤??é ì ? ? ? ?Hq/? ?1?
3¤?T¨
d¤??é ì ? ? ? ?Hq/? ?1?
3¤?T¨
′¤?i￥
^ td¤??é ì
ColE1 ¤??é ì
′¤?i￥
^ td¤??é ì
¤??é ì
￥i ?xù/9 ??
3 DNAM??V?? bom ?
￥i ?xù/9 ??
3 M??V?? ?
mob y %?
y %?
é ì
é ì
é ì￥'+?
é ì￥'+?
z{+
y￥L.S:
z{+
y￥L.S:
7
3?￥é ì DNA
aaz{B? ?L.S:y?
7
3?￥é ì
aaz{B? ?L.S:y?
P¤7?
3tá
3?è
3édA3￥?F? ?
P¤7?
3tá
3?è
3édA3￥?F? ?
té F? F
3
í a×á
? ?0 ay?| ?0 aμt
té F? F
3
í a×á
? ?0 ay?| ?0 aμt
té?? F
3
í a% )y
í aμa
té?? F
3
í a% )y
í aμa
?tS:y DNA×Fs0￥ ?ê μ×1il
?tS:y ×Fs0￥ ?ê μ×1il
é ì
é ì
é ì￥y
é ì￥y
? ?i ￥7
3?é ì??s0
v a J
?? a?B
? Mê?
aL.S:? ?X? ?J? ?
?@ X
H8￥1 pyNa
a31[ ?7
3?é ì1$é? |yy b
? ?i ￥7
3?é ì??s0
v a J
?? a?B
? Mê?
aL.S:? ?X? ?J? ?
?@ X
H8￥1 pyNa
a31[ ?7
3?é ì1$é? |yy b
" -
L
i
P¨￥v?? )é ìv
^?
?+?7
3?é ì
y￥
" -
L
i
P¨￥v?? )é ìv
^?
?+?7
3?é ì
y￥
pSC101 8.8 kb J
? 5
1ì
í F?S:y Tc
r
J
?
1ì
í F?S:y
ColE1 6.5 kb J
? 20 - 30 v?? ) =y
íS:y E1
6.5 kb J
? v?? ) =y
íS:y
RSF2124 ColE1
3é ì ?t ]
?
í F?S:y Ap
r
ColE1
3é ì ?t ]
?
í F?S:y
é ì
é ì
é ì￥s ?
é ì￥s ?
|yy￥é ì? ? ??¨o Vs? ?/+ ?
|yy￥é ì? ? ??¨o Vs? ?/+ ?
ú J é ì lM J
? e?y J
? 1000-3000 ?9y
ú J é ì lM J
? e?y J
? ?9y
? J é ì ?1 pSC101 J
?l? 10 Vr ty?y
? J é ì ?1 J
?l? Vr ty?y
?
ùé ì ?]?/VC J
? a????]?é
?
ùé ì ?]?/VC J
? a????]?é
??é ì cμ??Y¨?to??
?
?¤h polylinker
??é ì cμ??Y¨?to??
?
?¤h
??é ì
μ??\éy#ê? L??÷y￥??
??é ì
μ??\éy#ê? L??÷y￥??
,
èé ì
μ?
??]
s8￥ˉ?0 L?y X
H
,
èé ì
μ?
??]
s8￥ˉ?0 L?y X
H
Vré ì
μ <??÷yVr￥
c aJr aB?￥íq
Vré ì
μ <??÷yVr￥
c aJr aB?￥íq
?é ì
μáy L? ?0?íq￥ X
H ?ê
?é ì
μáy L? ?0?íq￥ X
H ?ê
é ì
é ì
×1￥v?? )é ì8
×1￥v?? )é ì8
???ˉ?
???ˉ?
pBR322
4363 bp
Origin of Replication
ROP
ROI
Sal I
BamH I
Tc
r
Pvu I
Pst I
Pst I
EcoR I
Cla I
Hind III
Hind II
Bal I
Ap
r
pBR322
o
?
í V ?9
o
?
í V ?9
J
? 50 - 100 / cell
J
?
¨?y X
H
¨?y X
H
é ì
é ì
×1￥v?? )é ì8
×1￥v?? )é ì8
pUC18 / 19
J
? 2000 - 3000 / cell
J
?
¨?y X
H???
¨?y X
H???
μ X
Hê?
MCS
μ X
Hê?
?ê4t ?S: lacZ’
?ê4t ?S:
BamHI
pUC18
2686 bp
Ap
r
lacZ'
ori
GAATTCGAGCTCGGTACCCGGGGATCCTCTAGAGTCGACCTGCAGGCATGCAAGCTT
396 452
EcoRI SstI KpnI SmaI XbaI SalI PstI SphI HindIII
é ì
é ì
×1￥v?? )é ì8
×1￥v?? )é ì8
pUC18 / 19 ?ê4S: lacZ’ ￥A ?e ?
?ê4S: ￥A ?e ?
pUC18/19
Plac lacZ’
’
MCS
β-? ?
?￥ α-t
? ?
?￥ t
αβ
O
H
H
H
OH
H
OH
HOH
CH
2
OH
O
N
Cl
Br
Cl
Br
Cl
Br
O
N
N
5- -4-
o -3-
) -β-D-? ?
o
) ? ?
X-gal
é ì
é ì
×1￥v?? )é ì8
×1￥v?? )é ì8
pGEM-3Z
J
J
μ
?
` )8￥ < ?0
μ
?
` )8￥ < ?0
μ X
Hê?
MCS
μ X
Hê?
?ê4t ?S: lacZ’
?ê4t ?S:
¨??÷y￥úrVr
¨??÷y￥úrVr
?i T7? SP6 ?0+s?1?
` )8 DNAI
?￥ RNA
?
?i ? ?0+s?1?
` )8
?
2743 bp
MCS
lacZ’
’
P
T7
ori
Ap
r
r
pGEM-3E P
SP6
?
?
MYyNM?￥
s8 )A?Vr
` )8 RNA
?
? ?
?
?
MYyNM?￥
s8 )A?Vr
` )8
?
? ?
E.coli BL21
DE3?
?
é ì
é ì
é ì DNA￥s ?B?
é ì ￥s ?B?
L
iB?
P¨/
??ZE?!é ì DNA
L
iB?
P¨/
??ZE?!é ì
o?ì
á0 ??E
o?ì
á0 ??E
é ì DNABú a? ùé a
!!1 pú aY?ê ?
é ì Bú a? ùé a
!!1 pú aY?ê ?
a ·E
a ·E
é ì DNAB? a y
? a?TeL
é ì B? a y
? a?TeL
m
￡?E
m
￡?E
é ì DNAB a?T? ùo?
o?ìE?a ·E-W
é ì B a?T? ùo?
o?ìE?a ·E-W
é ì
é ì
é ì DNA￥s ?B?
é ì ￥s ?B?
o?ì
á0 ??E
o?ì
á0 ??E
¨cμ EDTA￥?
A?? )8
¨cμ ￥?
A?? )8
F · )
?
3% )%C
F · )
?
3% )%C
F CsCl?Y?
F ?Y?
?
? ??V@
?
? ??V@
,?§/ | cccDNA
,?§/ |
d?? cccDNA
d??
proteins
ocDNA
L-DNA
cccDNA
RNAs
é ì
é ì
é ì DNA￥s ?B?
é ì ￥s ?B?
a ·E
a ·E
¨cμ EDTA￥?
A?? )8
¨cμ ￥?
A?? )8
F · )
?
3% )%C
F · )
?
3% )%C
F NaOH? SDS￥? ·A ?
db =ct
F ? ￥? ·A ?
db =ct
Fú i￥Z
?K ·A?? ? ?8 ?" ?
Fú i￥Z
?K ·A?? ? ?8 ?" ?
?8 DNA#v?s?aé
?8 #v?s?aé
?? |
bA¨&p
o_Y | ?"?
￥?aé
?? |
bA¨&p
o_Y | ?"?
￥?aé
Y?sd???
￡Mé ì DNA
Y?sd???
￡Mé ì
¨í DNase￥RNase ?"??￥ RNA
¨í ?"??￥
cccDNA
L-DNA
ocDNA
D-DNA
T-DNA
é ì
é ì
é ì DNA￥s ?B?
é ì ￥s ?B?
m
￡?E
m
￡?E
¨cμ EDTA? Triton X-100￥?
A?? )8
¨cμ ? ￥?
A?? )8
F · )
?
3% )%C
F · )
?
3% )%C
m
￡? 40
eò
m
￡?
eò
??¨í )é &G ???t
??¨í )é &G ???t
Y?sd???é ì DNA
Y?sd???é ì
` )8hy DNA
` )8hy
` )8hy
^B ?d%±
3t ?úr
qú+s?1 S ?
` )8hy
^B ?d%±
3t ?úr
qú+s?1 S ?
ó?% ?a1?ˉ?N2?? ?
ó?yF? .?
ó?% ?a1?ˉ?N2?? ?
ó?yF? .?
?7 O B?￥Hq/
?
?
???Mo? b
?7 O B?￥Hq/
?
?
???Mo? b
` )8hy￥
?+?
P¤
?
ì￥ DNA ?$ 7??1yy
` )8hy￥
?+?
P¤
?
ì￥ ?$ 7??1yy
?￥μ¨8y1
?￥μ¨8y1
úr
q￥? ?? ?
P?÷yúr? ?
s8%
úr
q￥? ?? ?
P?÷yúr? ?
s8%
1?ˉ?N2? ?
P?÷y
s8%?úr ?9
1?ˉ?N2? ?
P?÷y
s8%?úr ?9
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ
` )8￥
3tD+?
3t2
` )8￥
3tD+?
3t2
λ
` )8
^v?? )￥???
` )8
` )8
^v?? )￥???
` )8
λ
` )8?? T
?a? λ-DNAF?
` )8?? T
?a? F?
λ-DNA ?é 48502??
?
?é ??
?
λ-DNA
à
μ 61?y
à
μ ?y
λ
` )8
3tD+?
3t2
` )8
3tD+?
3t2
5’ TCCAGCGGCGGGG 3’
3’ CCCGCCGCTGGA 5’COS
COS
cos
h???y
h???y
á???y
á???y
· ) e?y
· ) e?y
? ù e?y
? ù e?y
DNA?? e?y
?? e?y
E3y
E3y
* ù e?y
* ù e?y
E3y
E3y
×Fy
×Fy
÷"D??y
÷"D??y
λ - DNA
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ
` )8
3tD+? ? ?? ù
` )8
3tD+? ? ?? ù
E.coli
?
? LamB
s8
s8
? ?
? ?
ˉ?
ˉ?
3
3
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ
` )8
3tD+? ? ?? ù
` )8
3tD+? ? ?? ù
8 =
8 =
100?P·￥ J
?P·￥ J
S?1e DNA￥75 - 105%
S?1e
' 36 - 51 kb
'
D
A
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ
` )8
3tD+? ·e
?
` )8
3tD+? ·e
?
λ
` )8? ?v?? )a" ?
3%?9 V ?|
DNA°¤???
ó?%￥ ? ?8 DNA
i?á
30}
` )
8 R ì?? f ?1 ·e
? b???1? λ-DNA
￥ cI? int
y￥át
?7?
?y￥ 7bD1>? | %?
ó
?%'
&￥?é b |
ì V[? 31?M λ-DNA
ó?%
￥?é
P
` )8)? · )
?)? · )
?
DNA×F/
?B?31 λ
` )8é ? · )
?
` )8? ?v?? )a" ?
3%?9 V ?|
°¤???
ó?% ? ?
i?á
30}
` )
8 R ì?? f ?1 ·e
? b???1? ?
y￥át
?7?
?y￥ 7bD1>? | %?
ó
?%'
& ?é b |
ì V[? 31?M
ó?%
￥?é
P
` )8)? · )
? )? · )
?
×F/
?B?31
` )8é ? · )
?
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA8￥y
ê é
8￥y
ê é
7
3? λ-DNA
￥
K1 51kb'
&é1 48.5kboμ
?? ?￥?÷ DNA ?
?v? 2.5kb
H? ?$
?μ? ?
?￥
` )8 R ì byN
ê 7
3? λ-DNA￥é V[4ú
b
L7
3? λ-DNA
?μ 40-50%￥ ?
^ˉ??
3
?dA3￥ b? M"￥
V| λ-DNAs?
v ?8
7
3?
￥
K1 '
&é1 oμ
?? ?￥?÷ ?
?v?
H? ?$
?μ? ?
?
` ) R ì byN
ê 7
3? ￥é V[4ú
b
L7
3?
?μ ￥ ?
^ˉ??
3
?dA3￥ b? M"￥
V| s?
v ?8
? ??8
? ??8
|}?8
|}?8
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA8￥y
ê é ? ??8
8￥y
ê é ? ??8
8?
8?
? ?ê?
? ?ê?
8?
8?
? ? ?
? ? ?
8é 37 kb
8é
? ? ?
vl
? ? ?
vl
0 - 14 kb
51 – 37
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA8￥y
ê é |}?8
8￥y
ê é |}?8
8?
8?
8?
8?
? ? ?
? ? ?
Kl
é 10 kb
Kl
é
51 – 26
8é 26 kb
8é
? ? ?
? ? ?
Kv
é 25 kb
Kv
é
36 – 26
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA8￥y ÷"×ˉ￥
? Mê?
8￥y ÷"×ˉ￥
? Mê?
7
3?￥ λ-DNA y
μ 5? EcoRIê?? 7? HindIIIê??
7
3?￥ y
μ ? ê?? ? ê??
??×F?TA? ÷"à 1 - 2?
??×F?TA? ÷"à ?
]
H1
L?ò? ?÷￥ DNA ?
￥ X
H?319FB
]
H1
L?ò? ?÷￥ ?
￥ X
H?319FB
t?B￥
? Mê?
t?B￥
? Mê?
"
e?￥ Mé??31?¨??lM/
? ?"9@
?
"
e?￥ Mé??31?¨??lM/
? ?"9@
?
ê?
ê?
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA8￥y F
ê4S:
8￥y F
ê4S:
Dé ì?]7
3? λ-DNA
?
?
a￥ê4S:yN
Dé ì?]7
3?
?
?
a￥ê4S:yN
F
ê4S:
^ λ-DNA X
H8y￥×1 = ?
F
ê4S:
^ X
H8y￥×1 = ?
λ-DNA X
H8
￥ê4S:?1μ/
?
X
H8
￥ê4S:?1μ/
?
?f? ? ?S:
?f? ? ?S:
t ?Q? ?S:
t ?Q? ?S:
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA8￥y F
ê4S: imm434
8￥y F
ê4S:
imm434yI
?B?E? λ-
` )8
yI
?B?E?
` )8
é ? · )?ì￥E3t bcμ??S:
é ? · )?ì￥E3t bcμ??S:
y￥ λ-8é ?
s8%ay ? ·
8é ?
s8%ay ? ·
e
?% )
3é?
¤?? $ê
e
?% )
3é?
¤?? $ê
??÷ DNA? ??S:y?y
?
??÷ ? ??S:y?y
?
λ-×Fs0Lé ? · )?ì??
×Fs0Lé ? · )?ì??
i
üê
i
üê
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA8￥y F
ê4S: lacZ
8￥y F
ê4S:
lacZyI
? β-? ?
? ?b?
yI
? ? ?
? ?b?
í ?￥ X-gal
3? ? ???t b??÷
3? ? ???t b??÷
y? ?? lacZy?y
?? ?
y? ?? y?y
?? ?
?? ? ???t 7 b8 λ-DNA5á
?? ? ???t 7 b8 5á
3 ? ?i
üê
3 ? ?i
üê
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA8￥y y2"
á
?0￥lM8
8￥y y2"
á
?0￥lM8
2"?lM
sup
^·? CAG
Gln_ UAG
stop￥lM b
v?? )￥ t )écμ+s?￥n?y I
?átn?
tRNA ?B?1???BlM b
|7
3? λ-DNA
D? E
?h?
?a￥y?￥ CAG
á
?
0lM? UAG b??? λ-DNAé ?B?￥v?? ) )éa?
???μ?￥h??a9ü? ?$
?
3% )?"ü
V[E?μ]×F8￥
3tê ?# ? ?7yy?
L?
P¨
￥
s85
^ μ2"?lM8n?? ?￥ )é
2"?lM
^·?
_
v?? ) )écμ+s?￥n?y I
?átn?
?B?1???BlM b
|7
3?
?
?h?
?a￥y?￥
0lM? b??? é ?B? v?? ) )éa?
???μ?￥h??a9ü? ?$
?
3% )?"ü
V[E?μ]×F8￥
3tê ?# ? ?7yy?
L?
P¨
￥
s85
^ μ2"?lM8n?? ?￥ )é
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA8￥?1 ??
8￥?1 ??
? ?
??8
? ?
??8 Charon2 aCharon6 aλgt11
|}?8
|}?8 λEMBL4 aλgtλc aλNM762 aCharon40
?ê4?8
?ê4?8 λEMBL1 aλL47 aλ1059
7
3?￥ λ
` )8? ? P2
` )8 ·÷?￥% )?N2
Spi
+
7
3?￥
` )8? ?
` )8 ·÷? ￥% )?N2
??
3é]?V?
s λ-DNA
￥ red? gam
?y e? b ?|?
??
3é]?V?
s ?
?y e? b ?|?
÷ DNA |} red? gam ×F
` )8L?μ Spi
-
V? ? P2
` )
÷ |} ? ×F
` )8L?μ
-
V? ?
` )
8 ·÷?￥v?? )
s8 )?N2i??i
üê
8 ·÷? ￥v?? )
s8 )?N2i??i
üê
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA×Fs0￥8?
×Fs0￥8?
λ-DNA×Fs03 8? |y
?μ? ? ?￥
` )8×F R
ìZ Vúr? ?
s8%
¨?8?
￥?aé V°¤V? ?
λ
` )8￥v?? )?4
|CX
?? b?t
?aYès1Moo?￥
?s
B?s ?
EFz
6B?s5 ?
DFz b
H? O??
?
?s
?aD×F λ-DNAs0?a
? ?μré
? ??B??a
A$×F λ-DNAê ?a (? ?$
?μ? ? ?￥
` )8 R ì?9
^?? ?7
!9￥
×Fs03 |y
?μ? ? ?
` ) ×F R
ìZ Vúr? ?
s8%
¨?8?
￥?aé V°¤V?
` )8￥v?? )?4
|CX
?? b?t
?aYès1Moo?￥
?s
B?s ?
Fz
6B?s5 ?
Fz b
H? O??
?
?s
?aD×F s0?a
? ?μré
? ??B??a
A$×F ê ?a (? ?$
?μ? ? ?￥
` )8 R ì?9
^?? ?7
!9￥
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNA# ×Fs0￥s ?B?
# ×Fs0￥s ?B?
|v?? ) cμ
?è￥ ?!? ?!à
?
3é ù
|v?? ) cμ
?è￥ ?!? ?!à
?
3é ù
F ? λ
` )8×F λ
` )8￥??A 37 ￥ ?! 1l
H
F ?
` )8×F
` )8￥??A ￥ ?! l
H
¨?7 ?!
d?? ?! 4 -12l
H b?
H
` )8 R ì
¨?7 ?!
d?? ?! l
H b?
H
` )8 R ì
áXr 10
13
-10
14
/ Lv?? )%X? ?
3
áXr
v?? )%X? ?
3
?
? ????
` )8
?
? ????
` )8
&p4
db λ-DNA
&p4
db
Y?sd??? λ-DNA
Y?sd???
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ λ
` )8 DNA
v?? )￥
` )8
λ-DNAT18￥a?
T18￥a?
λ-DNA V 8?
?
` )8 R ì ?úr ?v?? )
V 8?
?
` )8 R ì ?úr ?v?? )
λ-DNA8￥
? ?1 25 kbùùv?é ì￥
8￥
? ?1 ùùv?é ì￥
×F λ-DNAs0￥ ?ê?1ZL
×F s0￥ ?ê?1ZL
×F λ-DNAs0￥4 |?1eL
×F s0￥4 |?1eL
λ-DNA8
a? X
H? ?9?÷ DNA ?
??
a?Vr
8
a? X
H? ?9?÷ ?
??
a?Vr
?÷y
?÷y
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ M13? y
` )8 DNA
v?? )￥ ? y
` )8
M13
` )8￥
3tD+?
3t2
` )8￥
3tD+?
3t2
M13
` )8￥???
′
` )8￥???
′
M13
` )8?? T
?a?? y DNAF?
` )8?? T
?a?? y F?
M13 DNA ?é 6407??
?
?é ??
?
M13 DNA
à
μ 10?y
à
μ ?y
2700?? T?as0
?? T?as0
M13
` )8?
3
ó?%?]?
3é
` )8?
3
ó?%?]?
3é
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ M13? y
` )8 DNA
v?? )￥ ? y
` )8
M13
` )8￥
3tD+? ? ?? ù
` )8￥
3tD+? ? ?? ù
+ DNA
+ DNA
RFDNARFDNA
RFDNA- DNA
II
II
V
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ M13? y
` )8 DNA
v?? )￥ ? y
` )8
M13 DNA8￥y
8￥y
III VI I IV II X V VII IX VIII
7
3? M13RF-DNA
7
3?
III VI I IV II X V VII IX VIII
II X
M13mp"
8
"
8
lacZ‘polylinker
` )8hy DNA
` )8hy
v?? )￥ M13? y
` )8 DNA
v?? )￥ ? y
` )8
M13 DNA8￥+?
8￥+?
P X
H￥ DNA ?
[+?? y￥?
T
{
s8%?
P X
H￥ ?
[+?? y￥?
T
{
s8%?
? DNA?_lM?dèμ¨
? ?_lM?dèμ¨
M13×Fs0 ?êeL
×Fs0 ?êeL
$ M13
` )8? ?￥
s8%
3é?
¤??
$
` )8? ?￥
s8%
3é?
¤??
$ê^?O aGê b7 O×Fs0 v$
$ê^?O aGê b7 O×Fs0 v$
ê￥$g v
ê￥$g v
? M13-DNA8￥Kv ?J
^
loμ 1.5 kb
? 8￥Kv ?J
^
loμ
` )8hy DNA
` )8hy
D?±t
s8%M
a?￥8B?ê4M??±t￥h
D?±t
s8%M
a?￥8B?ê4M??±t￥h
yyF DNA b
yyF
?±thy? ?N
?B??±t?μ ?+s?￥h
?±thy? ?N
?B??±t?μ ?+s?￥h
y b?vyF￥2 V|?±thys?
1v ?
y b?vyF￥2 V|?±thys?
1v ?
? y DNAhy
? y hy
? y DNAhy
? y hy
? y RNAhy
? y hy
? y RNAhy
? y hy
RNAhy 1áˉ?
Hv i M?￥ DNA?WQ?t
hy 1áˉ?
Hv i M?￥ ?WQ?t
?t?W8 VT18é?è?￥ DNA×F b
?t?W8 VT18é?è?￥ ×F b
I
?é ìD
` ) ì
I
?é ìD
` ) ì
λ-DNA8? M13-DNA8￥
KvsY1 25 kb?
8? 8￥
KvsY1 ?
1.5 kb? ? f ?/aa31 X
H÷v￥?÷ DNA ?
? ? f ?/aa31 X
H÷v￥?÷ ?
I
?é ì?
` ) ì8￥yü
^1
éB?4ú
` )8 DNA
I
?é ì?
` ) ì8￥yü
^1
éB?4ú
` )8
￥
b
K%?￥Hq/v?
ê
` )8 DNA￥é
K%?￥Hq/v?
ê
` )8 ￥é
ü ?]?9F8￥
? ? b|
` )8 DNAD
μ1￥?
ü ?]?9F8￥
? ? b|
` )8 D
μ1￥?
Dé ìF
B ; ?KvK1
ê 8￥é]
H
Dé ìF
B ; ?KvK1
ê 8￥é]
H
? ? ￡×F DNAs0 8? ˉ$
?μ? ? ?￥ R ì?
? ? ￡×F s0 8? ˉ$
?μ? ? ?￥ R ì?
L
^y I
?é ì?
` ) ì8￥
±
^ b? ??? I
?é ì
L
^y I
?é ì?
` ) ì8￥
±
^ b? ??? I
?é ì
?
` ) ì? z{
?ayyN×F DNAs0 % =
?
` ) ì? z{
?ayyN×F s0 % =
? ???
` )8 R ì b
? ???
` )8 R ì b
I
?é ìD
` ) ì
I
?é ìD
` ) ì
I
?é ì
cosmid
I
?é ì
I
?é ì8￥y
I
?é ì8￥y
I
?é ì
^B ? |yy￥cμ
I
?é ì
^B ? |yy￥cμ
1978 M Collins? Hohn?
üy
M ? ?
üy
pHC79
6400 bp
Tc
r
r
λ fragment
fragment
cos
ori
Ap
r
r
PstI
BamHI
SalI
λ-DNA cos?
?é ìˉ?0￥
?
?é ìˉ?0￥
+
y ??￥8
+
y ??￥8
cos site - carrying plasmid
1.8 kb￥λ-DNA ?
+ pBR322 ?
?
?
S?1 31 - 45 kb
S?1
I
?é ìD
` ) ì
I
?é ìD
` ) ì
I
?é ì
cosmid
I
?é ì
I
?é ì8￥+?
I
?é ì8￥+?
?^ λ-DNA *"é?8?
iúr ?
s8%
?^ *"é?8?
iúr ?
s8%
v
45 kb O X
H ?
μB?￥vlS?
v
O X
H ?
μB?￥vlS?
?^é ì *"
s8%?1?ˉ?
?^é ì *"
s8%?1?ˉ?
×F?TeL ?ê ?^
×F?TeL ?ê ?^
? ?8 =
?
3
s8%
? ?8 =
?
3
s8%
I
?é ìD
` ) ì
I
?é ìD
` ) ì
` ) ì
phagemid or phasmid
` ) ì
` ) ì8￥+?
` ) ì8￥+?
` ) ì
^B ? |yy￥cμ? y
` )8
?
aˉ?0
` ) ì
^B ? |yy￥cμ? y
` )8
?
aˉ?0
[#é ìˉ?0 a X
Hê? aS:y￥+
y ??￥8
[#é ìˉ?0 a X
Hê? aS:y￥+
y ??￥8
?^ M13-DNA *"8?
iúr ?
s8%
?^ *"8?
iúr ?
s8%
1è?￥ M13mp"
1v?
10 kb
1è?￥ "
1v?
?^é ì *"
s8%?1?ˉ?
?^é ì *"
s8%?1?ˉ?
×F?TeL ?ê ?^
×F?TeL ?ê ?^
YV X
H
? y DNA ?¤]?é￥?B? y DNA
YV X
H
? y ?¤]?é￥?B? y
I
?é ìD
` ) ì
I
?é ìD
` ) ì
` ) ì
phagemid or phasmid
` ) ì
×1￥
` ) ì8 pUC118 / 119
×1￥
` ) ì8
pUC118 pUC18 + M13W? u IG
pUC118 pUC18 M13W? u
pUC119 pUC19 + M13W? u IG
pUC119 pUC19 M13W? u
500 ? J
? J
3200 bp
MCS
lacZ’
’
lacI
ori
Ap
r
r
M13-MG
pUC118 / 119
V
U M13￡ù
` )8 DNA
V
U ￡ù
` )8
I
?é ìD
` ) ì
I
?é ìD
` ) ì
` ) ì
phagemid or phasmid
` ) ì
×1￥
` ) ì8 pBluescript 8?
c8
×1￥
` ) ì8 8?
c8
pBluescript = pUC + f1-ori + P
T3
+ P
T7
2958 bp
MCS
lacZ’
’
P
T7
ori
Ap
r
r
f1-ori
pBluescript P
T3
` )8 ?0 P
T3
? P
T7
<??
` )8 ?0 ? <??
÷y￥
c
÷y￥
c
4 | ?￥? y DNA×Fs0
4 | ?￥? y ×Fs0
` )8 RNA
?
?￥i
` )8
?
?￥i
/? V
LC?÷y
/? V
LC?÷y
￥8?
c
|/ ? ?88
|/ ? ?88
| ? a?t a±t￥ ?yF?
saa31 X
H
??
| ? a?t a±t￥ ?yF?
saa31 X
H
??
.à
$ kb ￥DNA ?
N
H I
?é ì?
` ) ì8￥
.à
$ ?
N
H I
?é ì?
` ) ì8￥
9ùù? ?
?@31 b
9ùù? ?
?@31 b
|% )¤?y0? ) ? ?8
￥ˉ? u as ￥ u a×
|% )¤?y0? ) ? ?8
￥ˉ? u as ￥ u a×
? uDé ìF
B ' V? ? ?88 b?v ?
￥?
? uDé ìF
B ' V? ? ?88 b?v ?
￥?
÷ DNA X
H ?t ? ?88
aL??×F |/ ? ?8
÷ X
H ?t ? ?88
aL??×F |/ ? ?8
? ?^? ? ? ?8 *"
s8%?×?￥ˉ?iL. b
? ?^? ? ? ?8 *"
s8%?×?￥ˉ?iL. b
" -è¨￥ |/ ? ?88 ?
" -è¨￥ |/ ? ?88 ?
% ) |/ ? ?8
BAC
% ) |/ ? ?8
? |/ ? ?8
YAC
? |/ ? ?8
|/ ? ?88
|/ ? ?88
% ) |/ ? ?8
Bacterial Artificial Chromosomes BAC
% ) |/ ? ?8
% ) |/ ? ?8Yè
^ v?? )?y0 Fé ì￥$
% ) |/ ? ?8Yè
^ v?? )?y0 é ì￥$
y￥
S? 50 - 300 kb-W
y￥
S? kb-W
ò? ??￥ pBACs v?? )
s8 )o ????B J
ò? ??￥ v?? )
s8 )o ????B J
pBACs?1
a¨?
?1
a¨?
X
Hv?y[
gene cluster2
X
Hv?y[
2
y?±tyó o
y?±tyó o
|/ ? ?88
|/ ? ?88
? |/ ? ?8
Yeast Artificial Chromosomes YAC
? |/ ? ?8
YAC8?cμ/
íq
8?cμ/
íq
? ? ?8￥
ì?
? ? ?8￥
ì?
? |/ ? ?8￥y
? |/ ? ?8￥y
pYAC4
CEN4
EcoRI
URA3
TEL
BamHI
TEL
ori
Ap
r
r
TRP1
ARS1
? ? ?8￥ˉ?0
? ? ?8￥ˉ?0
? ? ?8￥?? ì?
? ? ?8￥?? ì?
? "d￥ê4S:
? "d￥ê4S:
v?? )￥ˉ?0
v?? )￥ˉ?0
v?? )￥ê4S:
v?? )￥ê4S:
YAC8￥
1 350 - 400 kb
|/ ? ?88
|/ ? ?88
? |/ ? ?8
Yeast Artificial Chromosomes YAC
? |/ ? ?8
? |/ ? ?8￥
P¨
? |/ ? ?8￥
P¨
pYAC4
CEN
EcoRI
URA
TEL
BamHI
I
TEL
ori
Ap
r
r
TRP
ARS
EcoRIEcoRI
EcoRI
BamHI
?¤
?¤
?? )
?? )
×F? ? ?8
×F? ? ?8
C ¨?yM￥
s8 )%
¨?yM￥
s8 )%
3 ×F DNA/
?
?3￥'Hq
×F /
?
?3￥'Hq
ò?yy?
s8￥+?
ò?yy?
s8￥+?
L
iè¨￥yy?
s8
L
iè¨￥yy?
s8
s8%? !￥Hq
s8%? !￥Hq
s8%? !￥Hq
s8%? !￥Hq
K?? ?J?
K?? ?J?
? M
?? = M
?? ?J
recB
-
recC
-
hsdR
-
? M
?? = M
?? ?J
×F?? ?J?
×F?? ?J?
¨?y ?9úrVr￥
s8%
recA
-
¨?y ?9úrVr￥
s8%
μ?ú￥?r
q
μ?ú￥?r
q
μD8ê4S:o?￥V?
μD8ê4S:o?￥V?
? ?7
3 ?J?
? ?7
3 ?J?
]?×F% ) ? ?ê ?
3tó "?
]?×F% ) ? ?ê ?
3tó "?
ò?yy?
s8￥+?
ò?yy?
s8￥+?
v?? )
v?? )
L. ? b#8
s8"d?!
3éá
? ?!e
?×F0×?
L. ? b#8
s8"d?!
3éá
? ?!e
?×F0×?
a¨??÷ DNA￥ ?9? X
H ae?
3ty￥úrV
r ayó o￥y
^ DNA×F
L?yy?￥?1
s
8 )
a¨??÷ ￥ ?9? X
H ae?
3ty￥úrV
r ayó o￥y
^ ×F
L?yy?￥?1
s
8 )
á2ˉ a? ?N ￥ =y
í
á2ˉ a? ?N ￥ =y
í
ò?yy?
s8￥+?
ò?yy?
s8￥+?
j¤? )
j¤? )
L. ? b#?aés
??r ?
3éá
? ?
!e??á =y
í
L. ? b#?aés
??r ?
3éá
? ?
!e??á =y
í
a¨?e?
3ty￥ X
H aVr[#×F?a t￥
μrs
?
a¨?e?
3ty￥ X
H aVr[#×F?a t￥
μrs
?
L. 4×?8
s8"d 4?!
L. 4×?8
s8"d 4?!
ò?yy?
s8￥+?
ò?yy?
s8￥+?
y
? )
y
? )
F
3
í￥?1
3á?s0L.M?TeL?á =y
í
F
3
í￥?1
3á?s0L.M?TeL?á =y
í
?1¨? F
3
í
3á )é￥?
?1¨? F
3
í
3á )é￥?
L.?×?
3éM?
¤
L.?×?
3éM?
¤
ò?yy?
s8￥+?
ò?yy?
s8￥+?
? )
? )
μ??
3t￥+?L. ? b#
3éá
? ?!
e??÷yVr"d? ?L.×?
μ??
3t￥+?L. ? b#
3éá
? ?!
e??÷yVr"d? ?L.×?
a¨??÷ DNA￥ ?9 a X
H[#??
3ty￥úr
Vr ayó o￥y a??
3tyVr? e￥ù?
^
DNA×F
L?yy?×1￥???
s8 )
a¨??÷ ￥ ?9 a X
H[#??
3ty￥úr
Vr ayó o￥y a??
3tyVr? e￥ù?
^
×F
L?yy?×1￥???
s8 )
=÷??aát? ?N Oc
ú
=÷??aát? ?N Oc
ú
ò?yy?
s8￥+?
ò?yy?
s8￥+?
? %
E?
? %
E?
μ??
3t￥+??÷yVr
úN2M?
y ?!?'? ÷L.×?
μ??
3t￥+??÷yVr
úN2M?
y ?!?'? ÷L.×?
a¨???
3ty￥úrVr
a¨???
3ty￥úrVr
DNA×F?T"d 4? ?
×F?T"d 4? ?
ò?yy?
s8￥+?
ò?yy?
s8￥+?
??t%
?S?
?
x×% CHO
??t%
?S?
?
x×%
D |￥ T?1"ís0×FVr"dr ? μ?
a
￥??
e"d
D |￥ T?1"ís0×FVr"dr ? μ?
a
￥??
e"d
a¨? ? ??t? |￥yVr? eù? ay0t
￥
3á
^ DNA×F
L?yy?￥?1 ??t
s8
a¨? ? ??t? |￥yVr? eù? ay0t
￥
3á
^ ×F
L?yy?￥?1 ??t
s8
% ?!Hq N Y
3é?
¤
% ?!Hq N Y
3é?
¤
ò?yy?
s8￥+?
ò?yy?
s8￥+?
±t%
E 2·? a?=
±t%
E 2·? a?=
jTt￥ü6il×vy±t%^?s?%
?!e? O?'? ÷ μ;?T¨
jTt￥ü6il×vy±t%^?s?%
?!e? O?'? ÷ μ;?T¨
a¨?ú?±tyVr? e￥ù? ay0t￥
3á
jTt ?é￥?
a¨?ú?±tyVr? e￥ù? ay0t￥
3á
jTt ?é￥?
L.?TN
?
L.?TN
?
L
iè¨￥yy?
s8
L
iè¨￥yy?
s8
v?? )
v?? )
¨?¤
sé ì C600 aW3110 aHB101 aJM83 a
JM101
Ap
s
aTc
s
aCm
s
¨?¤
s λ-DNA LE392 aED8654
¨?¤
sé ì
¨?¤
s
? )
? )
??t% CHO
??t%
8?
8?
à??
à??
| 课件名称： | 华东理工大学：基因工程 |
| 课件分类： | 生物 |
| 课件类型： | 电子教案 |
| 文件大小： | 3.05MB |
| 下载次数： | 2 |
| 评论次数： | 2 |
| 用户评分： | 7.5 |
