3t/
?<?? [?
3t/
?<?? [?
yy?
?ê ?yvD fòZ
?ê ?yvD
yy?
5
2
3
4
1
6
7
8
9
×F DNA/
?Dyy?￥'à Q
/
?Dyy?￥'à Q
×F DNA/
?Dyy?￥'e ?
/
?Dyy?￥'e ?
×F DNA/
?
?3￥'Hq
/
?
?3￥'Hq
×F DNA/
?￥?TV?
/
?￥?TV?
"￥y￥ X
HDyó o￥y
"￥y￥ X
HDyó o￥y
?÷y v?? )?￥Vr
?÷y v?? )?￥Vr
?÷y ? )?￥Vr
?÷y ? )?￥Vr
?÷y ??t%?￥Vr
?÷y ??t%?￥Vr
?÷yVrát￥s ?B?
?÷yVrát￥s ?B?
5 "￥y￥ X
HDyó o￥y
"￥y￥ X
HDyó o￥y
C PCRE
E
B cDNAE
E
A T 6E
T 6E
D ?D??E
?D??E
E yó o￥y
yó o￥y
5 "￥y￥ X
HDyó o￥y
"￥y￥ X
HDyó o￥y
yy? DNA×F/
? ?v¨o￥ -4Hq
^V
3t8yF
?s ? X
H "￥y "￥y ¤-a ?? Vr? e??
3tD? ?y ?úrVr"d y μü6N′￥yy? )
%| "￥y 8?é ?A1￥2? ??
e ?a
{í
% =?
3t8￥L.? ? |8yí
b
B? ?
a "￥y￥ X
H^
{s1
v ? B ?
^y??
￥
3t?8￥yó o'|
3 t8￥ ?yFs
X
H ?ay
??
a￥ ?ê ?VyFó o? Gcμ "￥y￥×F X
H
6
B ?
^ ?¨ PCR ?9/
?
.à?D??E8?°¤?? "￥y ?
a|- X
HVr b
yy? ×F/
? ?v¨o￥ -4Hq
^V
3t8yF
?s ? X
H "￥y "￥y ¤-a ?? Vr? e??
3tD? ?y ?úrVr"d y μü6N′￥yy? )
%| "￥y 8?é ?A1￥2? ??
e ?a
{í
% =?
3t8￥L.? ? |8yí
b
B? ?
a "￥y￥ X
H^
{s1
v ? B ?
^y??
￥
3t?8￥yó o'|
3 t8￥ ?yFs
X
H ?ay
??
a￥ ?ê ?VyFó o? Gcμ "￥y￥×F X
H
6
B ?
^ ?¨ ?9/
?
.à?D??E8?°¤?? "￥y ?
a|- X
HVr b
A T 6E
T 6E
5 "￥y￥ X
HDyó o￥y
"￥y￥ X
HDyó o￥y
T 6E X
H "￥y￥'^
{
T 6E X
H "￥y￥'^
{
T 6E?T￥?é
T 6E?T￥?é
T 6E X
H "￥y￥ K?
T 6E X
H "￥y￥ K?
T 6E X
H "￥y￥'^
{
T 6E X
H "￥y￥'^
{
? X
H8%￥ ?yF DNA
?
?aYV y
?μr￥ ?ê??V
ù X
H?s ?cμ "￥y￥ "￥
×F0é7¤ "￥y b T 6E
a
¨?e?% ) "￥y￥ X
Hs ?
? X
H8%￥ ?yF
?
?aYV y
?μr￥ ?ê??V
ù X
H?s ?cμ "￥y￥ "￥
×F0 é7¤ "￥y b T 6E
a
¨?e?% ) "￥y￥ X
Hs ?
T 6E X
H "￥y￥'^
{
T 6E X
H "￥y￥'^
{
? ?8 DNA￥ M
? ?8 ￥ M
?
2o) ? ?
é (Bvl V e üh
?
2o) ? ?
é (Bvl V e üh
?
? M ?
é? (BT?
L? ?¤?μ V ?
P "￥y 7
?
? M ?
é? (BT?
L? ?¤?μ V ?
P "￥y 7
vl? V e
vl? V e
?s
? M ?
é V ecμT?
"￥y??
?s
? M ?
é V ecμT?
"￥y??
D8 ?¤
D8 ?¤
?T?0?¨ )
?eê?EK??
? M m ?E ?ê5ê4 J X
H
?T?0?¨ )
?eê?EK??
? M m ?E ?ê5ê4 J X
H
8 ?T?0?¨yát? ?_ ?E ?ê5ê4Vr?8
8 ?T?0?¨yát? ?_ ?E ?ê5ê4Vr?8
?T?0?¨ )
?eê?EK??
? M m ?E ?ê5ê4v?? )T
1
?T?0?¨ )
?eê?EK??
? M m ?E ?ê5ê4v?? )T
1
?
s8%
?
s8%
s8% ?T?0?¨yát? ?_? E ?ê5ê4 ?
P "￥yVr
s8% ?T?0?¨yát? ?_? E ?ê5ê4 ?
P "￥yVr
￥
s8%
￥
s8%
?êcμ "￥y￥ "￥×F0
?êcμ "￥y￥ "￥×F0
)
?eê?E ayát? ?_?E
?ê ?￥y ?
)
?eê?E ayát? ?_?E
?ê ?￥y ?
T 6E?T￥?é
T 6E?T￥?é
P¨?B?éZE￥ -4Hq
^ "￥y￥
? Mm ?X? b
?TX? "￥y
￥
? M g V¨?
?) ? ? ?8 DNA
?aD8 ó¤?" V[ ￡ "￥y￥???V74ú
×F0? "￥×F0￥C ?
q
P¨?B?éZE￥ -4Hq
^ "￥y￥
? Mm ?X? b
?TX? "￥y
￥
? M g V¨?
?) ? ? ?8
?aD8 ó¤?" V[ ￡ "￥y￥???V74ú
×F0? "￥×F0 ￥C ?
q
P¨+??K?? = M
? M 7 ? ?8 DNA
P¨+??K?? = M
? M 7 ? ?8
T 6E?T￥?é
T 6E?T￥?é
è ?X? "￥yê? 1.8 kb￥ SalI
?
?| ? ?8 DNA¨ SalI M 7 j
? `?è￡s ?¨? ? M/M??
1.6 - 2.0 kbvl u× =￥ `? vVN
`? v?í
l DNA ?
?aD8é
? ó¤
è ?X? "￥yê? ￥
?
?| ? ?8 M 7 j
? `?è￡s ?¨? ? M/M??
vl u× =￥ `? vVN
`? v?í
l ?
?aD8é
? ó¤
?¤ -| DNA ?
é?s)s ?
?¤ -| ?
é?s)s ?
2.0 kb
1.6 kb
1.8 kb
T 6E?T￥?é
T 6E?T￥?é
ò μE
r?E
?E
? μ? `?E
·3E
ò μE
r?E
?E
? μ? `?E
·3E
`? DNA ?
í
l/
?
`? ?
í
l/
?
T 6E X
H "￥y￥ K?
T 6E X
H "￥y￥ K?
yT
?v31
3 "￥y￥ ??
M
yT
?v31
3 "￥y￥ ??
M
? ?¤￥Klé￥ "￥y
? ?¤￥Klé￥ "￥y
? ?" ???
3t "￥y￥ =c02
? ?" ???
3t "￥y￥ =c02
B cDNAE
E
5 "￥y￥ X
HDyó o￥y
"￥y￥ X
HDyó o￥y
cDNAE X
H "￥y￥'^
{
E X
H "￥y￥'^
{
cDNAEs ? "￥y￥'??
Es ? "￥y￥'??
cDNAEE X
H "￥y￥ K?
EE X
H "￥y￥ K?
cDNAE X
H "￥y￥'^
{
E X
H "￥y￥'^
{
mDNA
DDNA?B y￥??
?B y￥??
5‘ppp’5
5‘ppp’5
G G AAAAAAAAAAAAAAOH 3’
5‘ppp’5
5‘ppp’5
G G AAAAAAAAAAAAAAOH 3’
TTTTTTTTTTTTTTp 5’
5‘ppp’5
5‘ppp’5
G G AAAAAAAAAAAAAAOH 3’
TTTTTTTTTTTTTTp 5’
cDNA?B y
?B y
?t
?t
|
|
I
c
?
I
c
? dNTPs
DDNA?= y￥??
?= y￥??
òm
òmNaOH
1
&??E ¤￥
? y cDNA 5’
?μ+a ?
>
1
&??E ¤￥
? y
?μ+a ?
>
AAAAAAAAAAAAAA
5‘ppp’5
5‘ppp’5
G G AAAAAAAAAAAAAAOH 3’
TTTTTTTTTTTTTTp 5’
TTTTTTTTTTTTTTp 5’
TTTTTTTTTTTTTTp 5’
AAAAAAAAAAAAAAOH 3’
TTTTTTTTTTTTTT
OH 3’
Klenow dNTPs
S1
DDNA?= y￥??
?= y￥??
DNApol dNTPsRNaesH
?D??E ¤￥
? y cDNA 5’
9?μ+a ?
>
?D??E ¤￥
? y
9?μ+a ?
>
5‘ppp’5
5‘ppp’5
G G AAAAAAAAAAAAAAOH 3’
TTTTTTTTTTTTTTp 5’
AAAAAAAAAAAAAAp 5’
5’
S1
AAAATTTOH 3’
AAAATTT
TTTTTTTTTTTTTTp 5’
5’
TTTTTTTTTTTTTTOH 3’
AAAAAAAAAAAAAA 5’
5’
TTTTTTTTTTTTTT 3’
3’
T4-DNA ligase
DDNA?= y￥??
?= y￥??
dCTPTdT
????E ¤￥
? y cDNA ?
=??￥ 5’
?
????E ¤￥
? y ?
=??￥
?
5‘ppp’5
5‘ppp’5
G G AAAAAOH 3’
TTTTTp 5’3‘ HO
5‘ppp’5
5‘ppp’5
G G AAAAACCCCCCCOH 3’
AAAAACCCCCCC
3‘ HOCCCCCCC TTTTTp 5’
3‘ HOCCCCCCC TTTTTp 5’
3‘ HOCCCCCCC TTTTTp 5’
5‘ pGGGGGGG
3‘ HOCCCCCCC TTTTTp 5’
5‘ pGGGGGGG AAAAAOH 3’
NaOH
|
|
Klenow dNTPs
cDNAE X
H "￥y￥'^
{
E X
H "￥y￥'^
{
? y D DNA￥ X
H
? y D ￥ X
H
? y üh￥ cDNAYè V[
P¨/
??ZE X
H ?8?
? y üh￥ Yè V[
P¨/
??ZE X
H ?8?
üh
°¤D8 ?¤?? ?￥ ?
íEí
l
üh
°¤D8 ?¤ ?? ?￥ ?
íEí
l
üh
sY¤]
táKz
^ AT]
tá?"×F
üh
sY¤]
tá Kz
^ ]
tá?"×F
s0 VYVF ￡ ?M?? S1?
?
?) ?í
l? ? ?
s0 VYVF ￡ ?M?? ?
?
?) ?í
l? ? ?
F
|y¤h? ?
? M g[L? ? ?
í
l
F
|y¤h? ?
? M g [L? ? ?
í
l
cDNAEs ? "￥y￥'??
Es ? "￥y￥'??
?!s ???
?!s ???
4 |%9 mRNA??9 cDNA|- ?? X
H ?a
1ù??
a￥ ?ê
m
s? "￥×F0
?ê
H ?
P¨￥
^ J 85?¨ )
?eê?E
?ê ?
P¨￥
^Vr?85?¨ )
?
?f?E ?ê
?!s ???
a¨? mRNAs0
?
￥ "￥y￥ X
H
? |O?
íy a? ?
íy a `óy0 VIIIy?
4 |%9 ??9 |- ?? X
H ?a
1ù??
a￥ ?ê
m
s? "￥×F0
?ê
H ?
P¨￥
^ J 85?¨ )
?eê?E
?ê ?
P¨￥
^Vr?85?¨ )
?
?f?E ?ê
?!s ???
a¨? s0
?
￥ "￥y￥ X
H
? |O?
íy a? ?
íy a `óy0 y?
cDNAEs ? "￥y￥'??
Es ? "￥y￥'??
+ss ???
+ss ???
4 |%9 mRNA j? `?è￡s ?í
l "S
mRNA?N??
? y cDNA ?aé? X
H
+ss ????
a¨? mRNA~ ú￥ "￥y X
H
?ó￡?ay?
4 |%9 j? `?è￡s ?í
l "S
?N??
? y ?aé? X
H
+ss ????
a¨? ~ ú￥ "￥y X
H
?ó￡?ay?
cDNAEs ? "￥y￥'??
Es ? "￥y￥'??
μss ???
μss ???
?¨
F% mRNA? ?￥μss ? X
Hμs mRNA
?
?￥ cDNAy7?????
a¨?s ? X
H?y
è ? ?è￥v
? FR3T3?8?%?μt?y
^? ?
1?Vr￥3
?hy? ?- aZ V
c b ?
^1s ? X
H?t?yé7ù?
3tD? ?
?¨
F% ? ?￥μss ? X
Hμs
?
?￥ y7?????
a¨?s ? X
H?y
è ? ?è￥v
? ?8?%?μt?y
^? ?
1?Vr￥3
?hy? ?- aZ V
c b ?
^1s ? X
H?t?yé7ù?
3tD? ?
μss ???
μss ???
?hy? ?￥ FR3T3%
?hy? ?￥ %
?è￥ FR3T3%
?è￥ %
9 mRNA
9
9 mRNA
9
cDNA
? y cDNA
? y
? y cDNA
? y
4 | mRNA
4 |
?? cDNA
??
???= y
???= y
X
H
X
H
4 | mRNA
4 |
N? ó
N? ó
?
?
eê?
eê?
hyo?Vr￥y
cDNA X
H
hyo?Vr￥y
X
H
cDNAE X
H "￥y￥ K?
E X
H "￥y￥ K?
id
?μ￥ mRNAs0? μ polyA2
id
?μ￥ s0? μ 2
% )e?
3t￥ mRNA?
? ù?
% )e?
3t￥ ?
? ù?
mRNA %?c
??a 1
ù?
%?c
??a 1
ù?
s ?B? ? 4
s ?B? ? 4
?K? X
H?aéI
?y
?K? X
H?aéI
?y
C PCRE
E
5 "￥y￥ X
HDyó o￥y
"￥y￥ X
HDyó o￥y
PCR
Polymerase Chain ReactionE??1
?
?
E??1
?
?
yQ? PCR ?9/
?
^B?úr y
?￥8? DNA
???
yQ? ?9/
?
^B?úr y
?￥8?
???
P¨ PCRE X
H "￥y￥ -4Hq
^ X?? ?9 "￥
P¨ E X
H "￥y￥ -4Hq
^ X?? ?9 "￥
y DNA ?
§￥?
? ??
?D??
?Q?A
y ?
§￥?
? ??
?D??
?Q?A
3￥
??t
3￥
??t
PCRE?_ ?9 "￥y￥'e ?
E?_ ?9 "￥y￥'e ?
5‘
5‘
"￥y
"￥y
5‘
M?
M?
F ￡
F ￡
5‘
5‘
?t
?t
|
|
5‘
5‘
?t
?t
?
?
5‘
5‘
5‘
5‘
F ￡
F ￡
M?
M?
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
5‘
| ?t
| ?t
?t
?t
?
?
F ￡
F ￡
M?
M?
?t
?t
|
|
?t
?t
?
?
1
2
3
? Taq DNA
?
? ?9￥ PCRát? 3’
9
^?{μ
B?d eG ??￥la7 O??a+?9
^ Ay1
Taq DNA
?
? dATP μa5
?? b???la￥
i X
H
H' V[? | TdT
F]
á￥ZED8 ó¤
9 V[
P¨
ê￥ T8 X
H
?
? ?9￥ át?
9
^?{μ
B?d eG ??￥la7 O??a+?9
^
?
? μa5
?? b???la￥
i X
H
H' V[? |
F]
á￥ZED8 ó¤
9 V[
P¨
ê￥ 8 X
H
PCR X
H "￥y￥'??
X
H "￥y￥'??
5’
5’
A
A
T
T5’
5’
PCR ?9át
?9át
T 8
8
T7 lacZ MCS ori Ap
r
r
D ?D??E
?D??E
5 "￥y￥ X
HDyó o￥y
"￥y￥ X
HDyó o￥y
?D??E￥'^
{
?D??E￥'^
{
?D??￥?í?T
?D??￥?í?T
DNA?D??￥¨o
?D??￥¨o
?D??E￥'^
{
?D??E￥'^
{
?y??
?y??
?D?? "￥y￥ -4Hq
^y￥ DNA?
X?μ ??^
{
?D?? "￥y￥ -4Hq
^y￥ ?
X?μ ??^
{
l ?
T¤E
l ?
T¤E
?|
?|
? "￥y ??
sY?? 12-15aé￥? y DNAl ?
? "￥y ??
sY?? aé￥? y l ?
T4-DNA ?¤
? ?¤
?¤
? ?¤
X
H ??
a￥8
X
H ??
a￥8
?D??E￥'^
{
?D??E￥'^
{
?y??
?y??
??üéE
??üéE
?|
?|
? "￥y
Ho? y ??
sY?? 12-15aé￥? y
DNAl ?
[# 20-30aé￥? y DNA? ?
? "￥y
Ho? y ??
sY?? aé￥? y
l ?
[# aé￥? y ? ?
T4-DNA ?¤
? ?¤
?¤
? ?¤
X
H ??
a￥8
X
H ??
a￥8
Klenow
?
?
?
?
?D??E￥'^
{
?D??E￥'^
{
?y??
?y??
v ?
?\E
v ?
?\E
?|
?|
? "￥y￥ ??
sY?? 40-50aé￥? y DNA ?
? "￥y￥ ??
sY?? aé￥? y ?
T4-DNA ?¤
? ?¤
?¤
? ?¤
X
H ??
a￥8
X
H ??
a￥8
Klenow
?
?
?
?
?D??E￥'^
{
?D??E￥'^
{
?y??
?y??
? ??ZEòμ ?@ ?D?? DNA￥? ?
?
l
qü
?ú????D??￥z-?v ?'?ú v ?
?\E?
? "￥y
H
ù ??D??￥z -M?l?'???v ?
?D??￥
l
q ? è ?
?
?B??8￥át
l
q1 95%
5?? 50?aé￥ DNA? yv ?
￥9
l
qoμ 7.7%
? ??ZEòμ ?@ ?D?? ￥? ?
?
l
qü
?ú????D??￥z-?v ?'?ú v ?
?\E?
? "￥y
H
ù ??D??￥z -M?l?'???v ?
?D??￥
l
q ? è ?
?
?B??8￥át
l
q1
5?? ?aé￥ ? yv ?
￥9
l
qoμ
?D??E￥'^
{
?D??E￥'^
{
??*
?
???
??*
?
???
t f ?/aao?? "￥yI
?át￥?s?
?
t f ?/aao?? "￥yI
?át￥?s?
?
?
7y?
??N
H31 VX?￥?
??
w?1
?
7y?
??N
H31 VX?￥?
??
w?1
I
?￥ DNA?
?a??? ?ê? T 6E cDNAE¤?
I
?￥ ?
?a??? ?ê? T 6E E¤?
￥×F0K?¤cμ "￥y￥ "￥×F0
￥×F0K?¤cμ "￥y￥ "￥×F0
??v
??
??μei
á
?0# ??
￥
!9
H
??v
??
??μ ei
á
?0 # ??
￥
!9
H
A? I
n/
ù5
A? I
n/
ù5
3t8ei
á
?0￥ ê1???"
?
3t8ei
á
?0￥ ê1? ??"
?
?? μ@￥éYè 17-20??
?-W
?? μ@￥éYè ??
?-W
? =???C V ?￥o? u×
? =???C V ?￥o? u×
?D??E￥'^
{
?D??E￥'^
{
??*
?
???
??*
?
???
??￥?
??
??￥?
??
Cys Met Asp Glu Met Lys Arg Asn Ile
?μ V ?￥ DNA?
?μ V ?￥ ?
TGTATGGACGAAATGAAAAGAAACATA
TGTATGGACGAAATGAAAAGAAACATA
C T GATG G G T T
C T GATG G G T
C
CGA
CGG
CGT
CGC
!9￥ei??
!9￥ei??
TGTATGGACGAIATGA
TGTATGGACGAIATGA
TGTATGGATGAIATGA
TGTATGGATGAIATGA
TGCATGGACGAIATGA
TGCATGGACGAIATGA
TGCATGGATGAIATGA
TGCATGGATGAIATGA
A
G
N?? V[? Iò?
3t8￥ EST
? oé? `_?ei?
!9
N?? V[? Iò?
3t8￥
? oé? `_?ei?
!9
expressed sequence tag
?D??￥?í?T
?D??￥?í?T
?D?? DNA￥
Lé
^?v?
1 p|? ?
??8B?
?¤
?
?¤B??8ü
^B??ìQ? ? v 1 a
s ? a
ê? as ? a ? 1?v?T?í b
VQ? ?
?? DNA?D??μ
?= E a
? ?
E ae
?A ? E 8?TV ??μAM???%M??
??
T b -??TN
?'
X ' a?Q??Wt￥s ?
??eL DNA??Nü
^? %Me
?A ? Ee ?
!9￥
?D?? ￥
Lé
^?v?
1 p|? ?
??8B?
?¤
?
?¤B??8ü
^B??ìQ? ? v 1 a
s ? a
ê? as ? a ? 1 ?v?T?í b
VQ? ?
?? ?D??μ
?= E a
? ?
E ae
?A ? E 8?TV??μ AM?? ? %M??
??
T b -??TN
?'
X ' a?Q??Wt￥s ?
??eL ??Nü
^? %Me
?A ? E e ?
!9￥
?D??￥?í?T
?D??￥?í?T
O
H
G
H
HH
HO
CH
2
ODMT
POMe
N
CH
Me
Me
CH
Me
Me
O
H
G
H
HH
HO
CH
2
ODMT
POMe
N
CH
Me
Me
CH
Me
Me
H
O
H
G
H
HH
HO
CH
2
ODMT
POMe
O
H
A
H
HH
HO
CH
2
O
O
H
G
H
HH
HO
CH
2
ODMT
POMe
O
H
A
H
HH
HO
CH
2
O
O
O
H
G
H
HH
HO
CH
2
ODMT
POMe
O
H
A
H
HH
HO
CH
2
O
O
O
H
A
H
HH
HO
CH
2
HO
DMT =J ?&J
=J ?&J
ê?
ê?
?
?
? |}
? |}
j eè
j eè
?¤D
?¤D
DNA?D??￥¨o
?D??￥¨o
??? ?y
??? ?y
?
e?/y
?
e?/y
!9??y
!9??y
?!? a?t a¤h
?!? a?t a¤h
?
3é
í
db]?
íy a 7e ty aO?
íy a? ?
í
?
3é
í
db]?
íy a 7e ty aO?
íy a? ?
í
?F??8 ·
?e4y a U
?ey?
?F??8 ·
?e4y a U
?ey?
y?
y?
E yó o￥y
yó o￥y
5 "￥y￥ X
HDyó o￥y
"￥y￥ X
HDyó o￥y
yó o￥'à Q
yó o￥'à Q
yó o￥y??
yó o￥y??
yFó o×F X
H￥ ??
yFó o×F X
H￥ ??
yó o￥'à Q
yó o￥'à Q
y oDyó o
y oDyó o
y o
gene pool
y o
+?
3t8 ?yF￥"?
? ?i
+?
3t8 ?yF￥"?
? ?i
yó o
gene library or gene bank
yó o
V+?
3t?8?s ?￥ ??y?ty[ X
H￥?
T
V+?
3t?8?s ?￥ ??y?ty[ X
H￥?
T
yFó o
cμ ??y
yFó o
cμ ??y
i
|yy b? yZE￥?]yó os1
i
|yy b? yZE￥?]yó os1
cDNAó o
cμ ???aéI
?￥2y
ó o
cμ ???aéI
?￥2y
yó o￥'à Q
yó o￥'à Q
yó oy￥'^
{
yó oy￥'^
{
¨ T 6EyyFó o?
?1 ? ?8 DNA
¨ T 6EyyFó o ?
?1 ? ?8
¨ cDNAEy cDNAó o?
?1 mRNA
Ey ó o ?
?1
ús?￥
3t8??]F??% ?]
H
￥ mRNA
ús?￥
3t8??]F??% ?]
H
￥
? ??]
'y￥Vr ??]yN]?
3t8￥ cDNAó o
? ??]
'y￥Vr ??]yN]?
3t8￥ ó o
B??μF?%￥?? ?éF? cDNAó o ?
?F? cDNA
B??μF?%￥?? ?éF? ó o ?
?F?
ó o? b?A ? cDNAó o￥?
ùl?yFó o
ó o? b?A ? ó o￥?
ùl?yFó o
yó o￥'à Q
yó o￥'à Q
yó o￥?!?
yó o￥?!?
yó o￥?!?
^· y￥ yó o? ?Byi ￥à
yó o￥ ?!?
^· y￥yó o? ?Byi ￥à
q
?Dyó oK?
?c X
H
? N-W￥1" V¨/
TV
U
q
?Dyó oK?
?c X
H
? -W￥1" V¨/
TV
U
N = ln ( 1 – P ) / ln ( 1 – f )
? 1 ?By$ X
H
i ?yó o?￥à
q
? 1 ?By$ X
H
i ?yó o?￥à
q
G X
H ?
￥ ü (vl
3tyF￥vl
G X
H ?
￥ ü (vl
3tyF￥vl
è ? |￥? 8 DNA9é1 2.9 x 10
9
bpyó o? X
H ?
è ? |￥? 8 9é1 yó o? X
H ?
￥ ü (vl1 15 kb5yB??!?1 0.9￥yó oà
31
￥ ü (vl1 5yB??!?1 ￥yó oà
31
45￡? X
H 7??!?4ú? 0.9999
Hyó oà
31 180
￡? X
H 7??!?4ú?
Hyó oà
31
￡? X
H
￡? X
H
yó o￥'à Q
yó o￥'à Q
yó o￥é
S
yó o￥é
S
"
D V ?ú￥?!??B? ? X￥yó o? !/
Hq
"
D V ?ú￥ ?!?? B? ?X￥yó o? !/
Hq
×F X
H￥9
??RVv [h ^ ?êyT￥a ?
×F X
H￥9
??RVv [h ^ ?êyT￥a ?
8￥
Kzv?y￥é E
?y$s? X
H
8￥
Kzv?y￥é E
?y$s? X
H
X
HD X
H-WA?i @é￥×? u× [ ? X
H ??
X
HD X
H-WA?i @é￥×? u× [ ? X
H ??
X
H ?
^?V8s0
???/
X
H ?
^?V8s0
???/
×F X
H ?×? i a ?9 a ?ê
×F X
H ?×? i a ?9 a ?ê
yó o￥y??
yó o￥y??
yF DNA￥?!
yF ￥?!
1
KvK1 ￡y X
HV??￥???¨?yF
1
KvK1 ￡y X
HV??￥???¨?yF
ó oy￥ DNA s ?B??T??D
E
?V￥
b?!￥
ó oy￥ s ?B??T??D
E
?V￥
b?!￥
DNAs0
vü Mé) ?a" ??cμ??5
￥ DNA ?
s0
vü Mé) ?a" ??cμ??5
￥ ?
￥1
qü ?×F
q??!?9ü ú
￥1
qü ?×F
q??!?9ü ú
A A
A A
¨è?ZE?!￥ ? ?8
¨è?ZE?!￥ ? ?8
DNA￥éB? 100 kbP·
￥éB?
?T5|%%? ? μ? `
?T5|%%? ? μ? `
?? ?a? ?cμ SDS a?
?? ?a? ?cμ
a
? K aRNase￥?
A?? ? V¤ 1000 kbvl￥ DNA ?
a
? ￥?
A?? ? V¤ vl￥ ?
yó o￥y??
yó o￥y??
yF DNA￥ Mé
yF ￥ Mé
¨?yFó oy￥ DNA ?
￥ MéB??¨?
2o) ??
¨?yFó oy￥ ?
￥ MéB??¨ ?
2o) ? ?
K?? = M
??s
? M
?ZE "￥
^
K?? = M
? ?s
? M
?ZE "￥
^
?B ￡ DNA ?
-Wi ?s×? u
?B ￡ ?
-Wi ?s×? u
?= ￡ DNA ?
vl (B
?= ￡ ?
vl (B
?
2o) ?a￥ DNA ?
? üh
3F
|y¤h
?
2o) ? a￥ ?
? üh
3F
|y¤h
?s
? MEB?ê¨
1a
MY?
￥K?? = M
? ?
?s
? ME B?ê¨
1a
MY?
￥K?? = M
? ?
Sau3AI MboI??" DNA
?3 ?
￥vl V e
?3 ?
￥vl V e
?¤ -
?) ?￥ DNA ?
A?? 8￥
é?s)
?¤ -
?) ?￥ ?
A?? 8￥
é?s)
s ?[ '?M?￥ DNA ?
? ?1B8
s ?[ '?M?￥ ?
? ?1B8
yó o￥y??
yó o￥y??
8?
s8￥ê4
8?
s8￥ê4
?a
ê×F X
H￥
?
¨?yFó oy￥8Yèê
?v￥
?a
ê×F X
H￥
?
¨? yFó o y￥8Yèê
?v￥
λ-DNA I
?é ì ?v?yF
??±t? | ?3
P¨ YAC BAC8
I
?é ì ?v?yF
??±t? | ?3
P¨ 8
λ-DNA
?? 'v
???
3t￥ mRNAl? 10 kbyN¨? cDNAó oy￥8
?? 'v
???
3t￥ l? yN¨? ó o y￥8
Yèêé ì
Yèêé ì
?+?8￥Kv
?/
?+?8￥Kv
?/
é ì
é ì
I
?é ì
I
?é ì
15 kb
25 kb
45 kb
BAC 300 kb
YAC 400 kb
¨?yó oy￥
s85? 8
P¨v?? )? )
¨?yó oy￥
s85? 8
P¨v?? )? )
yó o￥y??
yó o￥y??
Vyó o? ?ê "￥y
Vyó o? ?ê "￥y
v?yFó oB??
?
E￡
.à
?￡?×F X
HF? b"
v?yFó oB??
?
E￡
.à
?￡?×F X
HF? b"
Bt μ+
y? ?￥?aéI
? y
? F0?y a2??a
Bt μ+
y? ?￥?aéI
? y
? F0?y a2??a
I
?y? V[?¨+
y￥?ê 4 ?ê??
? F0? ?êE a
I
?y? V[?¨+
y￥?ê4 ?ê??
? F0? ?êE a
?
??/
??°¤ ?ê? B?￥yFó o ?ê (3
}
?
??/
? ?°¤ ?ê?B?￥yFó o ?ê (3
}
?T??
?T??
yó o￥y??
yó o￥y??
Vyó o? ?ê "￥y
Vyó o? ?ê "￥y
á" ?e
1-10￡
á" ?e
￡
?
?
?
|
?
|
?
e
?
e
?
e
?
e
"￥×F X
H
"￥×F X
H
yó o￥y??
yó o￥y??
yó oy￥/
??ù5
yó oy￥/
??ù5
yFó o￥yV??K?? ×
j￥ù5
^
yFó o￥yV??K?? ×
j￥ù5
^
?ì?÷ % / " ?
-W￥ ?¤
?ì?÷ % / " ?
-W￥ ?¤
1
E
?
? f ?￥?
3 V? |/
n
@￥F?
1
E
?
? f ?￥?
3 V? |/
n
@￥F?
|? ?¤￥ DNA ?
? 8￥
s)s ?
|? ?¤￥ ?
? 8￥
s)s ?
¨a?
??
?" ? DNA ?
￥
?v
¨a?
??
?" ? ?
￥
?v
¨ TdT
? DNA ?
￥
9?]
á
? ?
￥
9?]
á
yFó o×F X
H￥ ??
yFó o×F X
H￥ ??
v?yó o
? |￥yó o￥y /
?
i?
Es ? 4 ?TB? YACyó o￥? ? ?
9?1??y
F￥
E [
HB?ü ?Vyó o?? ??B
DNA?
b ?7yó o￥ X
H?
^
??
A?|
?μ￥ X
H ?
?B?^? ? ? ?8 DNA
?VC￥?
¨? b?[yT
￥yT
V ?ùv?yFó o￥y
??yó o￥a ù
?T
v?yó o
? |￥yó o￥y /
?
i?
Es ? 4 ?TB? yó o￥? ? ?
9?1??y
F￥
E [
HB?ü ?Vyó o?? ??B
?
b ?7yó o￥ X
H?
^
??
A?|
?μ￥ X
H ?
?B?^? ? ? ?8
?VC￥?
¨? b?[yT
￥yT
V ?ùv?yFó o￥y
??yó o￥a ù
yFó o×F X
H￥ ??
yFó o×F X
H￥ ??
|?B￥ YAC X
H? ? DNA ?
¨K?? = M
?s? (
1
￡3? ?? ?
S:]ê
í
?a ¨ Sau3AI MboI|
S:￥ DNA ?
?3?
T
?
d ?? `?è￡
? 10? YAC X
H< ]B ve
?? ? X
H￥+?? DNA·?m ?
è 7s·?m ? ??C ??
? X
H DNA￥·?m ?
μ?sM]￥5
? YAC ?
üμoM×?￥ V ???
^?
? YAC X
H￥ DNA ?
X
H ? ?8
^ ?
B ￥
|?B￥ X
H? ? ?
¨K?? = M
?s? (
1
￡3? ?? ?
S:]ê
í
?a ¨ |
S:￥ ?
?3?
T
?
d ?? `?è￡
? ? X
H< ]B ve
?? ? X
H￥+?? ·?m ?
è 7s·?m ? ??C ??
? X
H ￥·?m ?
μ?sM]￥5
? ?
üμoM×?￥ V ???
^?
? X
H￥ ?
X
H ? ?8
^ ?
B ￥
? M ?
S:E
? M ?
S:E
? M ?
S:E
? M ?
S:E
HH HH
SSSS
SS SSS
S S SSS
SS
SS S
?B X
H·?m ?
?B X
H·?m ?
E X
H·?m ?
E X
H·?m ?
8 DNA
8
X
H DNA
X
H
yFó o×F X
H￥ ??
yFó o×F X
H￥ ??
| ?? YAC X
H%?
iˉ?=
Ez
??
20??]?
￥ ? ?
^
?￥
¨ 20??
??ê?
BB 20z YAC X
H
?T
? X
H]
H]B???C? ?Q?5
?
? X
Hμ V ?
^Mo×?￥ b ?|? ?2T:1 “ ”
7|?2T:1 “ ” V b 1
?BfVK? ?
? YAC
X
H￥ ?
¨?
| ?? X
H%?
iˉ?=
Ez
??
??]?
￥ ? ?
^
?￥
??
??ê?
BB z X
H
?T
? X
H]
H]B???C? ?Q?5
?
? X
Hμ V ?
^Mo×?￥ b ?|? ?2T:1
7|?2T:1 V b 1
?BfVK? ?
?
X
H￥ ?
¨?
?? ó??E
?? ó??E
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10
11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
ABC
A B C
DEF
D E F
G
01 02 03 04 05 06 07 08 09 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
D
A
B
C
E
F
G
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1 1
1
1
1
1
1
1
1
1
1 1
1
1
1
1
1
1
01 04 12 06 13 14 02 14 07 19 11 15 05 08 16 03 10 09 20 18
D
A
B
C
E
F
G
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1 1
1
1
1
1
1
1
1
1
11
1
1
1
1
1
1
F
C
A
D
G
E
B
yFó o×F X
H￥ ??
yFó o×F X
H￥ ??
Vyó o? ? |B? X
HT1 ? ?8< ￥ ?|-
?
sYe X
He X
H ?
0.5 - 2.0 kbS? =
sY[
?e X
H DNA ?
1??]Byó o
? ? X
H?￥? ? DNA ?
A?D ? X
H
?c￥ DNA ?
?
í B
?a [ ? X
H ?
￥
?
1?é??=?<
°àL? ? ?8 DNA￥
?
Vyó o? ? |B? X
HT1 ? ?8< ￥ ?|-
?
sYe X
He X
H ?
S? =
sY[
?e X
H ?
1??]Byó o
? ? X
H?￥? ? ?
A?D ? X
H
?c￥ ?
?
í B
?a [ ? X
H ?
￥
?
1?é??=?<
°àL? ? ?8 ￥
?
? ?8< E
chromosome walking
? ?8< E
? ?8< E
chromosome walking
? ?8< E
< ￥ ? X
H ?
< ￥ ? X
H ?
e X
H ???
e X
H ???
?S:
?S:
?B
}?
?B
}?
? X
H
? X
H
? X
H
? X
H
?=
}?
?=
}?
?=
}?
?=
}?
? ?8< E
chromosome walking
? ?8< E
< ￥ ? X
H ?
< ￥ ? X
H ?
| 课件名称： | 华东理工大学：基因工程 |
| 课件分类： | 生物 |
| 课件类型： | 电子教案 |
| 文件大小： | 3.05MB |
| 下载次数： | 2 |
| 评论次数： | 2 |
| 用户评分： | 7.5 |
