13、课程实验大纲 一、总体要求 本教学大纲是根据生物工程系生物化学教研室苟小军、徐文俊老师编写的《生物化学实验》实验教材而编写的。该教学大纲是为适应高校教学改革的发展，并结合我系申报重点教改专业——生物化学专业的建设与发展的需要而编著的。它既涵盖普通高等院校基础生物化学实验主要教学内容；又能适应我系各专业生物化学本、专科实验教学改革与发展需要。 本、专科生物化学实验与其理论教学同步行课，但作为专业基础课独立考核。按照我系现有各专业教学大纲规定，本、专科学生的生物化学实验授课学时分别为80学时（2个学期）和50学时（1学期），原则上本科学生的实验全部涵盖专科学生实验教学内容。同时无论本、专科学生实验均需涉及糖、脂肪、蛋白质、酶、维生素、核酸、物质代谢等生物化学基础实验内容。一般实验为4学时，个别实验需8～12学时。对于这些实验的开设，实验任课教师可根据实验室现有条件、学生的不同培养层次、按照教学大纲拟定的实验授课学时综合分析，确定其中的实验内容。 为使学生上好生物化学实验课，对学生实验提出如下要求： （一）生物化学实验室规则 1．学生在实验前必需结合相关的生物化学理论知识认真预习实验内容。进入实验室后每个学生都应该自觉遵守实验室规则，自觉维护课堂秩序，不迟到，不早退，保持室内安静，不大声谈笑。 2．在实验过程中自觉遵守课堂纪律，严格按照操作规程进行操作，要求独立完成的实验要学会独立操作；与同学合作完成的实验要做好分工、配合、协调工作。 3．实验数据和现象应随时记录在实验本上（不能随意记在纸片上！）。实验结束后，实验记录必须送实验指导教师审阅后才能填写实验报告或离开实验室，实验报告一般于下次实验时由学习委员收齐后交实验指导教师批阅。 4．学生在实验过程中要精心爱护各种仪器、设备。实验所需的一般仪器按规定借领、归还。完成实验后应将器皿清洗干净后倒置放在实验柜中并排列整齐。如有器皿损坏或遗失需说明原因，进行登记、并经指导教师签名后方可补领，并按规定进行赔偿。 5．对于精密贵重仪器在每次使用后应登记使用者姓名并记录仪器设备的使用情况。要要随时保持仪器设备的清洁。如发生故障，应立即停止使用并报告实验指导教师。 6．在实验操作中，要注意节约，根据实际需要量取用实验试剂、实验材料等消耗物品。 7．使用公用的仪器、药品时，用后应立即放回原处。不能用个人的吸管量取公用的试剂，取出的多余药品不得倾入原试剂瓶内。特别注意公用试剂瓶的瓶塞要随开随盖，不得张冠李戴。 8．保存在冰箱或冷冻室中的物品都应加盖并注明保存者的姓名，班级、日期和内容物。 9．实验环境和实验仪器的清洁整齐是搞好实验的重要条件。在实验过程中要随时保持实验桌台面、实验室地面、水槽及室内的整洁。含有强酸、强碱的废液应按指导教师的要求倒入规定的废液缸中。书包及与实验无关的物品需放在规定的地方。 10．不得将含有易燃溶剂的实验容器接近火焰。实验室内严禁吸烟！洒精灯应随用随关，必须严格做到：火着人在，人走火灭。乙醇，丙酮，乙醚等易燃物品不能直接加热，并远离火源放置。漏电的实验设备使用。注意安全。离开实验室前应注意检查水源、电源、火源、门窗是否关好。实验中严禁用口吸取（或皮肤接触）有毒的药品和试剂。凡发生烟雾、产生有毒气体和不良气体的实验必须在通风橱中进行。通风橱应紧闭，非必要时不开。 11．每次实验后，由学生轮流值日，做值日的学生既要负责当日实验室的卫生，还应配合指导教师做好实验室的安全及相应的服务性工作。 12．学生对实验的内容和安排不合理的地方可提出改进的意见。对实验中的一切反常现象应进行讨论，并大胆地提出自己的看法和设想，书写在实验报告上，做到生动，活泼，主动地学习。 （二）实验记录： 实验课前应认真预习，将实验名称，目的和要求，实验内容，操作方法和步骤等简单扼要地写在记录本上。 实验中观察到的现象，结果和数据，即时地直接记录在记录本上，绝对不允许用单张纸作记录或草稿。原始记录必须准却，简练，详细，清楚。 记录时，应做到正确记录实验结果，切忌夹杂主观因素。在实验条件下观察到的现象，应如实仔细地记录下来。在定量实验中观测的数据，如称量物的重量，滴定管的读数，光电比色计或分光光度计的读数等，都应设计一定的表格准确记下正确的读数，并根据仪器的精确度准确记录有效数字。实验记录上的每一个数字，都是反映每一次的测量结果，所以，重复观测时即使数据完全相同也应如实记录下来。总之，实验的每个结果都应正确无遗漏地做好记录。 实验中使用仪器的类型、编号以及试剂的规格、化学式、分子量、准确的浓度等，都应记录清楚，以便总结实验时进行核对和作为查找成败原因的参考依据。 如果发现记录的结果有怀疑、遗漏、丢失等，都必须重做实验。因为，将不可靠性的结果当做正确的记录，在实际工作中可能造成难于估计的损失。所以，在学习期间就应一丝不苟，努力培养严谨的科学作风。 （三）实验报告 实验结束后，应及时整理和总结实验结果，写出实验报告。按照实验内容可分为定性和定量实验两大类，下面分别列举这两类实验报告的格式，仅供参考。 1．关于定性实验报告 实验（编号） （实验名称） 一．目的和要求 二．内容 三．原理 四．操作方法 五．结果与讨论 六．试剂和仪器 一般每次实验课做数个定性实验，实验报告中的实验名称和目的要求应该是针对这次实验课的全部而必须达到的目的和要求。在写实验报告时，可以按照实验内容分别写原理，操作方法、结果与讨论等。原理部分应简述基本原理。操作方法（或步骤）可以采用工艺流程图的方式或自行设计的表格来表示。某些实验的操作方法可以和结果与讲座部分合并，自行设计各种表 格综合书写。结果与讨论包括实验结果及观察现象的小结，对实验课遇到的问题和思考题进行探讨以及对实验的改进意见等。 2．关于定量实验报告 实验（编号）（实验名称） 一．目的和要求 二．原理 三．试剂配制及仪器 四．操作方法 五．实验结果 六．讨论 通常每次实验课只做一个定量实验，在实验报告中，目的和要求、原理以及操作方法部分应简单扼要的叙述，但是对于实验条件（试剂配制及仪器）和操作的关键环节必须写清楚。对于实验结果部分，应根据实验课的要求将一定条件下获得的实验结果和数据进行整理，归纳，分析和对比，并尽量总结成各种图表，如原始数据及其处理的表格，标准曲线图以及比较实验组与对照实验组实验结果的图表等。另外，还应针对实验结果进行必要的说明和分析。讨论部分可以包括：关于实验方法（或操作技术）和有关实验的一些问题，如实验的正常结果和异常现象以及思考题进行讨论；对于实验设计的认识，体会和建议；对实验的改进意见等。 二、主要参考书籍 为了使实验教学大纲科学而严谨，在实验教学大纲编写中，主要参考和借鉴以下参考书目，在此对下述所列参考书目的编著者及其出版社一并表示衷心的感谢。 1. 北师大生物系生物化学教研室编写的·生物化学实验·北京：高等教育出版社 2. 刘粤梅、朱怀荣主编·生物化学实验教程·北京：人民卫生出版社 3. 王秀奇等主编的·基础生物化学实验·北京：高等教育出版社 三、生物化学实验学生使用仪器清单（一小组）*  * 个别实验临时补发的仪器未列入上表中。 四、知识范围及要求 （本部分内容参见附表，每一个实验填写一张表格。） 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：001 实验项目 名称 淀粉与糖元的制备、多糖的性质实验 该实验学时数 4  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．掌握实验室提取糖元，制备淀粉的原理和方法。 2．掌握高速组织捣碎机，普通离心机，水循环式真空泵，恒温水浴锅的正确使用方法。 3．掌握淀粉与糖元在分子结构上的差异性，从而导致在理化性质上的差异性。  实验 内容 1．淀粉与糖元的制备 1.1 肝糖元的提取： 本实验的教学难点是糖元的制备，因为本实验制备的淀粉与糖元是下一个实验的实验材料，通常从动物肝脏中提取到的糖元是相当有限的，因此糖元的制备操作非常重要。在其制备过程中要求做到：一 实验所用的动物肝脏必须新鲜；二 实验操作要求迅速，准确；三 在操作过程中肝组织中的蛋白质必须沉淀完全，糖元的醇析过程中所加入乙醇的量必须充分，确保糖元充分析出。这样才能保障提取到的糖元质量纯净且量又足够。 1．2 马铃薯淀粉的制备 2．多糖的性质实验： 淀粉与糖元在其理化性质上的差异性以及两者性质差异的比较实验验证原理是本实验的教学重点。淀粉及糖元的水解反应是否彻底是验证两者性质相似性的关键实验操作，也是本实验的教学难点，在实验过程中必须向学生强调这一点。 多糖水解产物的鉴定反应实验——斐林试剂检测法。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   高速组织捣碎机 此项不填 台 1   4孔数显电水浴锅 此项不填 台 6   普通台式离心机 此项不填 台 6   水循环式真空泵 此项不填 台 1   解剖白瓷盘 此项不填 只 6   剪刀 此项不填 把 6   电冰箱 此项不填      此项不填      此项不填    实验消耗材料 品 名 单位 数量 说明   新鲜动物肝脏 kg 0.25 刚宰杀的动物肝脏   马铃薯 kg 1    95%乙醇 ml 600    10%三氯乙酸 ml 300    20%硫酸 ml 100    10%碳酸氢纳 ml 200    斐林试剂 ml 100    稀碘液 ml 100                                                         注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：002 实验项目 名称 3,5 – 二硝基水杨酸比色法定糖法 该实验学时数 4  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 掌握3,5 – 二硝基水杨酸比色法定糖的原理及方法。 2．用3,5 – 二硝基水杨酸定糖法测定山芋粉中总糖及还原糖的原理及方法。 3．熟悉721型光电比色计的原理及使用方法。 4．按统计学原理，掌握回归方程的计算方法及标准曲线绘制方法。  实验 内容 1．葡萄糖标准曲线的制定 1.1 3,5 – 二硝基水杨酸比色法定糖法原理 3,5 – 二硝基水杨酸在强碱溶液中与还原糖在沸水浴中共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定范围内，还原糖的量和反应液的颜色强度呈比例关系，利用比色法可测知样品的含糖量。该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。 1．2 721型光电比色计的原理及使用操作。 1．3 回归方程的计算及标准曲线绘制。 2． 样品的定糖检测 2．1 山竽粉自身还原糖的提取与测定。 2．2 山竽粉总糖提取、水解与测定。 3． 计算山竽法总糖及还原糖的的百分含量。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   4孔数显电水浴锅 此项不填 台 6   台称 此项不填 台 6   7200型分光光度计 此项不填 台 6   滴定台、滴定管夹 此项不填 台 12   碱式滴定管（50ml） 此项不填 只 12   移液管架 此项不填 套 12   移液管（1ml、2ml） 此项不填 套 各12   25ml血糖管 此项不填 支 100   1cm配7200分光光度仪比色皿 此项不填 支 24  每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   山竽粉 kg 0.50    3,5 – 二硝基水杨酸试剂 ml 250    0.2％葡萄糖标准液 ml 200    6 mol／L 盐酸溶液 ml 200    20%硫酸 ml 100    10％氢氧化钠溶液 ml 600    稀碘液 ml 100     ml                                                          注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：003 实验项目 名称 中性脂肪的组成及鉴定实验 该实验学时数 4  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 掌握中性脂肪的组成； 2. 掌握脂肪的皂化作用原理； 3．掌握甘油及脂肪酸鉴定的方法和原理。  实验 内容 1．脂肪的皂化反应： 在碱或脂肪酶的作用下易被水解。实验用NaOH加热水解时，其产物为能溶于水的脂肪酸钠盐。 2．肥皂的分离： 在皂化液中慢慢加入固体NaCl至饱和为止，肥皂就会浮到溶液表面析出。 3．甘油的分离与鉴定实验： 甘油与脱水剂（如：KHSO4 ，P2O5，CaCl2,或无水Na2SO4）共热，或单独加热至4500C以上时，则脱水生成丙烯醛。丙烯醛有刺激性，特臭，可供鉴定。丙烯醛还可将银离子还原成金属银。 4．脂肪酸的分离和鉴定实验： 当用无机酸酸化皂化液的过程中，难溶于水的高级脂肪酸被分离析出。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   4孔数显电水浴锅 此项不填 台 6    此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   动物脂肪 kg 0.25    10% HCl 溶液 ml 250    3 mol/L NaOH 溶液 ml 250    0.5 mol/L NaOH—C2H5OH溶液 ml 600    95% C2H5OH溶液 ml 600    浓NH4OH ml 200    5% AgNO3 溶液； ml 100    固体KHSO4 g 100                                                         注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：004 实验项目 名称 大豆蛋白的提取 该实验学时数 4  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．了解大豆蛋白的组成 2．掌握大豆蛋白各组份的提取的原理和方法，为后续蛋白质实验提供原材料。 3. 学习计算蛋白质收率的方法。  实验 内容 1．榨油工业的副产品——豆粕中含有丰富的蛋白质，依其性质的不同，可分为水溶蛋白，盐溶蛋白，碱溶蛋白，醇溶蛋白。将豆粕依次用上述溶剂提取，并用有机溶剂沉淀，可制得各部分蛋白质的干粉 2．各类大豆蛋白的提取 2．1 水溶性大豆蛋白的提取； 2．2 用10%氯化钠进行盐溶性蛋白提取； 2．3 用 0.2％的氢氧化钠进行碱溶性蛋白提取； 2．4 用75％的乙醇进行醇溶性蛋白提取。 3．丙酮洗涤、抽滤、干燥、称量计算出以上提取到的各类大豆蛋白粗品的百分含量。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   高速组织捣碎机 此项不填 台 1   水循环式真空泵 此项不填 台 1   普通台式离心机 此项不填 台 6   台称 此项不填 台 6   电冰箱 此项不填 台 1   数显酸度计 此项不填 台 2    此项不填      此项不填      此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   溶胀的大豆 kg 1    10 % NaCl 溶液 ml 1000    0.2 % NaOH 溶液 ml 1000    75% C2H5OH溶液 ml 1000    冷丙酮 ml 2500    6mol／L HCI ml 240    pH6.86及pH9.00缓冲溶液 ml 100 校酸度计用   直径90mm滤纸片 张 100                                                         注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：005 实验项目 名称 蛋白质及氨基酸的呈色反应实验 该实验学时数 3  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 学习几种常用的鉴定蛋白质与氨基酸的方法及其原理。 2．学习和了解一些鉴定氨基酸的特殊颜色反应及其原理。 3．掌握区分糖，脂类和蛋白质的简便方法（颜色反应，溶解度，燃烧后的气味及灰分等）。  实验 内容 1．双缩脲反应：验证蛋白质分子肽键的显色反应； 2．黄化反应：验证蛋白质分子是否含有苯基（－C6H5）的显色反应； 3．茚三酮（苯并戊三酮）反应：用于测定除脯氨酸和羟脯氨酸外，所有的氨基酸都能与其产生的显色反应； 4．坂口反应（Sakaguchi反应）：验证精氨酸是唯一能与a-萘酚在碱性次氯酸钠溶液中发生显色反应的氨基酸，用于精氨酸定性、定量测定。 5．乙醛酸反应（Adamkiewice-Hopkins-Cole）：验证色氨酸是唯一能乙醛酸在浓硫酸脱水作用下发生显色反应的氨基酸，用于色氨酸定性、定量测定。 6．醋酸铅反应及亚硝基铁氰化钠反应：验证测定蛋白质分子中含硫的胱氨酸和半胱氨酸的显色反应。 7．偶氮反应（Ehrlich）：偶氮合物与酚环或咪唑结合产生有色物质。验证蛋白质分子的中酪氨酸和组氨酸能否发生这一反应。 8．米伦试剂反应：在组成蛋白质的氨基酸中，只有酪氨酸为一羟苯衍生物。验证是否含有酪氨酸的蛋白质均能呈现出此反应。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   电吹风机 此项不填 台 2   电冰箱 此项不填 台 1   喉头喷雾器 此项不填 只 2    此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   1%及5%鸡蛋清溶液 ml 500、200    0.1% 茚三酮-乙醇溶液 ml 100    尿素 g 100    1% 的CuSO4溶液 ml 120    10% 、20% NaOH溶液 ml 各300    0.5% 的苯酚溶液 ml 300    浓HNO3、、浓硫酸（A.R.）、浓醋酸 ml 各300    0.3% 精氨酸、组氨酸、半胱氨酸 ml 各60    5% 的亚硝基铁氰化钠溶液 ml 300    次溴酸钠溶液 ml 300    Ehrlish氏重氮试剂 ml 120    1% 的a-萘酚溶液 ml 120    2 % 白明胶溶液 ml 300    灯用乙醇 ml 600                     注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 *即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：006 实验项目 名称 蛋白质的沉淀反应实验 该实验学时数 3  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．通过实验掌握影响蛋白质胶体分子稳定因素的成因。 2．掌握蛋白质可逆沉淀反应与不可逆沉淀反应的反应原理（蛋白质的盐析作用原理，蛋白质的醇析作用原理，有机酸和无机酸沉淀蛋白质原理，蛋白质的加热变性原理。） 3．掌握临床常规定性检验尿蛋白的原理及方法。  实验 内容 1．蛋白质的可逆沉淀反应： 1．1 蛋白质的盐析作用实验；（含蛋白质的透析实验） 1．2 中性有机溶剂沉淀蛋白质实验； 2．蛋白质的不可逆沉淀反应： 2．1 重金属离子沉淀蛋白质；（含蛋白质的透析实验） 2．2 有机酸沉淀蛋白质； 2．3 无机酸沉淀蛋白质； 2．4 生物碱沉淀蛋白质； 2．5 加热沉淀蛋白质； 3．尿蛋白的定性检测实验。 4．蛋白质的透析实验（比较可逆与不可逆沉淀反应沉淀物的透析结果）  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   电冰箱 此项不填 台 1    此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   1%及5%鸡蛋清溶液 ml 500、200    饱和硫酸铵溶液和饱和NaCl溶液 ml 各300    固体硫酸铵和NaCl粉末 g 各200    饱和的CuSO4、1% CuSO4溶液 ml 各200    10% 、20% NaOH溶液 ml 各300    0.1% 、 1% 、2%、 10% HAc溶液 ml 300    浓HNO3、、浓硫酸（A.R.）、36%浓HCl ml 各300    0.5% 、20% 磺基水杨酸溶液 ml 各200    2% AgNO3溶液 ml 300    0.5% Pb(Ac)2溶液 ml 300    10% 的三氯乙酸溶液 ml 200    5% 的鞣酸溶液 ml 300    饱和的苦味酸溶液 ml 300    pH蛋白试纸 ml 600    透析袋 m 2               注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：007 实验项目 名称 氨基酸的分离鉴定——纸层析法 该实验学时数 8  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 2 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．掌握蛋白质水解反应的原理及操作方法； 2．掌握分配层析及氨基酸纸上层析法原理； 3．掌握氨基酸纸上层析法的操作技术(包括点样、平衡、展层、显色、鉴定及定量)； 4．掌握氨基酸极性与Rf值大小的关系，以及Rf值测定方法。  实验 内容 1．蛋白质未知样品水解： 2．蛋白质水解待测样品液制备： 3．氨基酸双向纸上层析： 3．1 滤纸的选择与前处理； 3．2 点样 3．3 展层 3．4 显色 3．5 氨基酸Rf值测定及样品蛋白所含氨基酸的种类； 4．氨基酸单向环型纸上层析 4．1 滤纸的选择与前处理； 4．2 点样 4．3 展层 4．4 显色 4．5 氨基酸Rf值测定及样品蛋白所含氨基酸的种类。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   电热鼓风恒温箱 此项不填 台 1   台式离心机 此项不填 台 6   四孔水浴锅 此项不填 台 6   玻璃钟罩（高×直径：40cm×30cm，具磨口塞，底边与玻璃板亦应密合不漏气） 此项不填 只 12   12cm、20cm培养皿 此项不填 只 各12   橡皮手套 此项不填 双 12   玻璃喷雾器 此项不填 只 6   点样架 此项不填 支 12   针、线、米尺 此项不填 付 12  每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   5mmol／L氨基酸混合液（8～10种） ml 50    正丁醇（需重蒸，沸程：116~120℃） ml 2000    80％甲酸 g 1000    12％氨水 ml 500    95％乙醇 ml 500    0.1％茚三酮丙酮溶液 ml 100    吲哚醌显色剂 ml 300    底色褪色剂 ml 300    新华1号滤纸 张 4                             ml 600     m 2               注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：008 实验项目 名称 人体血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳 该实验学时数 6  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 掌握人体血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳的原理及电泳的操作装置组成。 2. 掌握通过血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳测定人体血清蛋白组成成份的操作方法。 3．掌握人体血清蛋白的基本组成成份以及A/G值测定的医学临床意义。  实验 内容 1．仪器和薄膜的准备： 1．1 醋酸纤维素薄膜的润湿和选择； 1．2 制作“滤纸桥”； 1．3 平衡； 2．血清点样： 3．电泳： 4．染色： 5．实验结果的定性分析： 6．实验结果的定量分析： 采用洗脱法测定血清蛋白质各组分的OD值，计算总OD值，再计算血清蛋白各组份的相对百分含量，推断血清是否为正常人血清。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   电泳仪（配两电泳槽） 此项不填 台 1   毛细吸管（作血清点样用） 此项不填 台 6   四孔水浴锅 此项不填 台 6   7200分光光度仪 此项不填 台 6   比色皿 此项不填 只 24   2ml刻度移液管 此项不填 支 12   厚型载玻片(血清点样用) 此项不填 张 24   染色及漂洗缸（用直径20cm培养皿代替） 此项不填 只 5   油性记号笔 此项不填 支 6  每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   巴比妥-巴比妥钠缓冲溶液（pH=8.6 ,离子强度 I=0.06） ml 5000 可反复用   10B的氨基黑染色液 ml 250 可反复用   95%乙醇:冰醋酸:蒸馏水=4:1:5漂洗液 ml 1000    0.4 mol/L 的NaOH 溶液 ml 600    健康人体全血清 ml 15    醋酸纤维素薄膜: 2cm x 8cm 张 60    普通滤纸条（3×10cm2） 张 150    镜头纸（5×7cm2） 张 150                                                         注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：009 实验项目 名称 双缩脲法测定蛋白质含量 该实验学时数 3  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 掌握双缩脲法定量测定蛋白质含量的原理和方法。 2. 熟练掌握7200型分光光度计的基本结构及其正确的操作使用方法。 3．掌握蛋白质标准曲线的制作方法，并通过回归方程测定未知蛋白含量。  实验 内容 1．用双缩脲反应测定标准牛血清蛋白标准曲线。 用分光光度仪在550毫微米的波长下测定标准血清蛋白液各对应浓度下的OD值，按统计学方法，最终确定回归方程；通过回归方程，计算待测蛋白质含量。 2．准确称量，配制未知蛋白样品待测液（mg/ml）， 3．在坐标纸上画出双缩脲反应测定标准牛血清蛋白标准曲线，测定未知蛋白浓度。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   7200分光光度仪 此项不填 台 6   比色皿 此项不填 只 24   2ml刻度移液管 此项不填 支 24   移液管架 此项不填 只 6   25ml容量瓶 此项不填 只 12   电子天平 此项不填 台 2   称量瓶 此项不填 只 12   油性记号笔 此项不填 支 6    此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   标准牛血清蛋白溶液（5mg/ml） ml 200    0.03mol/L pH7.8的磷酸缓冲液 ml 600    Folin试剂甲（俗称碱性铜试剂）      Folin试剂乙      自制大豆蛋白粉，每份150～200mg 份 12    普通滤纸条（3×10cm2） 张 150    镜头纸（5×7cm2） 张 150                                                               注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：010 实验项目 名称 Folin 酚法测定蛋白质含量 该实验学时数 3  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 掌握Folin 酚法定量测定蛋白质含量的原理和方法，了解Folin 酚试剂组成及配制方法； 2. 熟练掌握7200型分光光度计的基本结构及其正确的操作使用方法； 3．熟练掌握蛋白质标准曲线的制作方法，并通过回归方程测定未知蛋白含量。  实验 内容 1．用Folin 酚法定量测定标准牛血清蛋白标准曲线： 用分光光度仪在A650nm处测定标准血清蛋白液各对应浓度下的OD值，按统计学方法，最终确定回归方程；通过回归方程，计算待测蛋白质含量； 2．准确称量，配制未知蛋白样品待测液（200～300ug/ml）25ml； 3．画出Folin 酚法定量测定标准牛血清蛋白标准曲线，测定未知蛋白浓度。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   7200分光光度仪 此项不填 台 6   比色皿 此项不填 只 24   2ml刻度移液管 此项不填 支 30   移液管架 此项不填 只 6   25ml容量瓶 此项不填 只 12   电子天平 此项不填 台 2   称量瓶 此项不填 只 12   油性记号笔 此项不填 支 6   四孔恒温水浴锅 此项不填 台 6  每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   标准牛血清蛋白溶液（200ug/ml） ml 200    自制大豆蛋白粉，每份5～10mg 份 12    0.03mol/L pH7.8的磷酸缓冲液 ml 500    Folin试剂甲（俗称碱性铜试剂） ml 200    Folin试剂乙 ml 800    普通滤纸条（3×10cm2） 张 150    镜头纸（5×7cm2） 张 150                                                               注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：011 实验项目 名称 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量 该实验学时数 3  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质含量的原理和方法，了解考马斯亮蓝染色组成及配制方法； 2. 熟练掌握7200型分光光度计的基本结构及其正确的操作使用方法； 3．熟练掌握蛋白质标准曲线的制作方法，并通过回归方程测定未知蛋白含量。  实验 内容 1．用考马斯亮蓝染色法定量测定标准牛血清蛋白标准曲线： 用分光光度仪在A595nm处测定标准血清蛋白液各对应浓度下的OD值，按统计学方法，最终确定回归方程；通过回归方程，计算未知蛋白质含量； 2．准确称量，配制未知蛋白样品待测液（100ug/ml 左右）25ml； 3．画出考马斯亮蓝染色法定量测定标准牛血清蛋白标准曲线，测定未知蛋白浓度。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   7200分光光度仪 此项不填 台 6   比色皿 此项不填 只 24   2ml刻度移液管 此项不填 支 30   移液管架 此项不填 只 6   25ml容量瓶 此项不填 只 12   电子天平 此项不填 台 2   称量瓶 此项不填 只 12   油性记号笔 此项不填 支 6   四孔恒温水浴锅 此项不填 台 6  每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   标准牛血清蛋白溶液（100ug/ml） ml 200    自制大豆蛋白粉，每份3～5mg 份 12    考马斯亮蓝G-250 ml 800    普通滤纸条（3×10cm2） 张 150    镜头纸（5×7cm2） 张 150                 份 12                                                         注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：012 实验项目 名称 紫外吸收法测定蛋白质含量 该实验学时数 3  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．掌握几种紫外吸收法测定蛋白质含量的原理； 2．学习紫外分光光度计的使用方法； 3．比较多种测定蛋白质含量的方法，阐述各自特点。  实验 内容 1.准确称量，配制未知蛋白样品待测液（1mg/ml）25ml 2．标准曲线法测定蛋白质含量 2.1标准曲线的绘制: 选用光程为1cm的石英比色杯，在280nm波长处分别测定各管溶液的A280值。按统计学方法，计算出回归方程，并以A280值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线 2.2 未知蛋白样品测定: 使未知蛋白浓度约为1mg／ml，按上述方法在280nm波长处测定光吸收值，代入回归方程或并从标准曲线上查出待测蛋白质的浓度。 3．其他方法测定蛋白质含量 将待测蛋白质溶液适当稀释，在波长260nm和280nm处分别测出A值，然后利用 280nm及260nm下的吸收差求出蛋白质的浓度。 计算公式： 蛋白质浓度（mg／ml）= 1.45A280 － 0.74 A260 式中A280和A260分别是蛋白质溶液在280nm和260nm波长下测得的光吸收值。 画出考马斯亮蓝染色法定量测定标准牛血清蛋白标准曲线，测定未知蛋白浓度。 4．比较两种紫外法测定蛋白质含量的差异。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   751紫外分光光度仪 此项不填 台 2   光程为1cm的石英比色杯（仪器本身配置） 此项不填 只 4   2ml刻度移液管 此项不填 支 12   移液管架 此项不填 只 6   25ml容量瓶 此项不填 只 12   电子天平 此项不填 台 2   称量瓶 此项不填 只 12   油性记号笔 此项不填 支 6    此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   标准牛血清蛋白溶液（1mg/ml） ml 200    自制大豆蛋白粉，每份浓度约为1mg／ml 份 12    普通滤纸条（3×10cm2） ml 150    镜头纸（5×7cm2） 张 150                                                                                 注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：013 实验项目 名称 离子交换柱层析法分离氨基酸 该实验学时数 4  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．掌握阳离子交换树脂柱层析分离氨基酸的基本原理； 2．掌握离子交换柱层析的基本结构装置以及操作方法； 3．掌握洗脱曲线的制作方法并能通过样品与标准氨基酸洗脱曲线峰值确定样品氨基酸的组成成份。  实验 内容 1．混合氨基酸样品分离与洗脱曲线制定 1．1层析柱的准备：将强酸型阳离子交换树脂用氢氧化钠处理成Na+型②后洗至中性，搅拌 一小时后装成一个直径1cm，高16～18 cm的层析柱。 1．2柱层析的基本操作：交换柱的平衡 上样 洗脱 部分收集器定时、定量收集洗脱液。 1．3氨基酸的鉴定与洗脱曲线制定： 向各管收集液中加1ml水合茚三酮显色剂并混匀，在沸水浴中准确加热15分钟后冷却至室温，再加1.5ml的50％乙醇溶液。放置10分钟。以收集液第2管为空白，测定A570nm波长的光吸收值。以光吸收值为纵坐标，以洗脱体积为横坐标绘制洗脱曲线 2．标准氨基酸洗脱曲线制定（按上述操作进行） 3．通过混合氨基酸与标准氨基酸洗脱曲线的对应峰值，确定混合氨基酸的组成成分。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   7200分光光度仪 此项不填 台 6   光程为1cm的比色杯 此项不填 只 24   四孔数显水浴锅 此项不填 台 6   铁架台及铁夹 此项不填 套 6   500ml恒压洗脱容器 此项不填 只 6   恒流蠕动泵 此项不填 台 6   自动部分收集仪 此项不填 台 6   20 cm × lcm层析管 此项不填 支 6   移液管及移液管架 此项不填 付 6  每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸均配制成2 mg／ml的0.1 mo1／ml盐酸溶液。 ml 30    上述氨基酸的混合液：将上述天冬氨酸、赖氨酸和组氨酸溶液按1:2.5:10的比例混合 ml 20    100～200目，苯乙烯磺酸钠型树脂（柱料）      2 mo1／L盐酸溶液（树脂的活化用） ml 1000    2 mol / L氢氧化钠溶液（树脂的活化用） ml 1000    柠檬酸-氢氧化钠-盐酸缓冲液（pH5.8） ml 2000 洗脱液   显色剂 2g水合茚三酮      普通滤纸条（3×10cm2） 张 150    镜头纸（5×7cm2） 张 150                                                   注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：014 实验项目 名称 酶的特性验证 该实验学时数 4  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 掌握唾液淀粉酶的正确提取方法； 2．掌握酶作用专一性实验的验证原理及其实验操作方法； 3. 掌握温度、pH、激活剂与抑制剂对酶促反应活力的影响机理及实验验证原理。  实验 内容 1. 唾液淀粉酶的正确提取操作； 2. 酶作用专一性验证实验操作：通过唾液淀粉酶与蔗糖酶对淀粉和蔗糖的催化水解反应，测定其水解反应所产生还原糖，来证实酶作用专一性； 3．温度对酶促反应的影响实验：通过测定淀粉酶在冰水浴、37oC恒温水浴、沸水浴中催化淀粉水解反应的快慢程度，验证温度对酶促反应的影响； 4．pH对酶促反应的影响实验：通过测定淀粉酶在四种不同pH缓冲溶液中催化淀粉水解反应的快慢程度，验证pH对酶促反应的影响； 5．激活剂与抑制剂对酶促反应的影响实验：通过测定淀粉酶在NaCl、CuSO4、Na2SO4三种盐溶液中催化淀粉水解反应的快慢程度，验证激活剂与抑制剂对酶促反应的影响，确定Na+、Cl-、Cu2+、SO42- 四种离子哪种离子是该酶的激活剂，哪种离子是抑制剂。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   四孔数显水浴锅（作37oC及沸水浴） 此项不填 台 6   冰盐浴（用塑料盒作容器） 此项不填 只 6   冰箱（制冰及保存酶） 此项不填 台 1   高速台式离心机（提取蔗糖酶） 此项不填 台 1    此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   活性酵母粉（用于提取蔗糖酶） g 50    碘化钾－碘溶液 ml 180    含0.3% MaCl的新配制的0.2% 淀粉溶液 ml 180    含0.3% MaCl的新配制的0.5% 淀粉溶液 ml 180    含0.3% MaCl的新配制的1% 淀粉溶液 ml 180    pH＝5.0～8.0的四种磷酸缓冲溶液 ml 各180    1% NaCl溶液 ml 180    1% CuSO4 溶液 ml 180    1% Na2SO4 溶液 ml 180                                                         注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：015 实验项目 名称 小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 该实验学时数 4  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．掌握小麦萌发前后淀粉酶活力的变化规律； 2．掌握小麦萌发前后淀粉酶提取原理及方法； 3．掌握测定淀粉酶活力的方法。  实验 内容 1. 根据小麦萌发前后淀粉酶活力的变化规律，让学生准备实验材料： 提前3～4天对休眠小麦进行萌发：麦粒浸泡2～3小时后，用干净湿润细砂或湿润的纱布掩埋或包裹麦粒，在25～28oC温度下进行萌发，每隔12h换水一次，休眠麦粒只在实验前3～4h浸泡即可； 2. 小麦萌发前后淀粉酶提取方法； 3．小麦萌发前后淀粉酶活力测定：淀粉酶能使淀粉分解为麦芽糖。 2 (C6H10O5) n +nH2O nCl2H22O11 麦芽糖有还原性，能使3,5-二硝基水杨酸还原成棕色的3—氨基5—硝基水杨酸。后者可用分光光度计法测定。 4．小麦萌发前后淀粉酶活力计算 根据溶液的浓度与光吸收值成正比的关系，即：A标准/A未知 = C标准/C未知，则C（酶液管中麦芽糖的浓度）= A未知 × C标准/A 标准。 式中：C为浓度；A为光吸收值。 本实验规定：25℃时3分钟内水解淀粉释放１mg麦芽糖所需的酶量为1个酶活力单位。则15粒种子或15株幼苗的总活力单位= C酶×n酶×V酶 式中：C酶为酶液中麦芽糖的浓度；n酶为酶液稀释倍数；V酶为提取酶液的总体积。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   四孔数显水浴锅（作37oC及沸水浴） 此项不填 台 6   培养皿（小麦萌发用） 此项不填 只 12   台式离心机（提取淀粉酶用） 此项不填 台 2   秒表（控制酶活反应时间用） 此项不填 只 12   25ml 血糖管 此项不填 支 48   2ml刻度移液管 此项不填 支 48   7200型分光光度仪 此项不填 台 6    此项不填      此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   休眠小麦种子 g 100    1mg / ml 标准麦芽糖溶液 ml 180    pH6.9，0.02 mol／L磷酸缓冲液 ml 500    含有0.0067 mol／L MaCl的1% 淀粉溶液 ml 180    1％ 3,5－二硝基水杨酸试剂 ml 240    1％氯化钠溶液 ml 500    海砂 g 5                                                                     注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：016 实验项目 名称 蔗糖酶的分离提纯 该实验学时数 12  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 2 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．掌握蔗糖酶提取的原理及方法； 2．掌握有机溶剂分级沉淀法分离提纯蔗糖酶的原理和操作方法； 3．掌握离子交换柱层析法分离提纯蔗糖酶的原理和操作方法； 4．掌握蔗糖酶活力测定、比活测定的原理和方法。  实验 内容 1. 葡萄糖标准曲线和牛血清蛋白标准曲线的制作： 采用3,5二硝基水杨酸显色法测定葡萄糖标准曲线，确定回归方程。 采用Folin—酚法测定牛血清蛋白标准曲线，确定回归方程。 2. 蔗糖酶的分离提纯： 2．1 蔗糖酶粗品的制备； 2．2 乙醇分级和透析法分离纯化蔗糖酶； 2．3 DEAE—纤维素柱层析法分离纯化蔗糖酶。 3．蔗糖酶活力及蛋白浓度的测定： 3．1 蔗糖酶活力的规定： 在本实验条件下，每3min释放lmg还原糖所需的酶量定义为一个活力单位。 3．2 蔗糖酶活力测定：分别取上述各阶段提取的酶配制制成适宜的酶稀释液，用此酶液催化蔗糖水解，再采用3,5二硝基水杨酸显色法测定水解生成的还原糖的量，计算出各阶段提取的酶活大小。 蔗糖酶活力单位　＝　葡萄糖毫克数 × 9 × 酶的稀释倍数 3．3 酶蛋白浓度及比活的测定：用Folin—酚法测定各阶段提取纯化到的酶蛋白质浓度，计算出各阶段提取纯化的酶比活的大小。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   台式离心机（提取蔗糖酶用） 此项不填 台 6   7200型分光光度仪 此项不填 只 6   25ml 血糖管 此项不填 支 132   2ml刻度移液管 此项不填 只 64   四孔数显水浴锅（作37oC及沸水浴） 此项不填 台 6   柱层析装置、梯度洗脱装置、部分收集器 此项不填 套 12   秒表（控制酶活反应时间用） 此项不填 只 12   水循环式真空泵及抽滤装置 此项不填 套 2   冰箱（保存酶液和制冰） 此项不填 台 1  每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   活性干酵母粉 g 500    2mg / ml 标准葡萄糖溶液 ml 180    标准牛血清蛋白溶液（200ug/ml） ml 200    5％的蔗糖溶液 ml 200    含0.30mol／L NaCl的0.005mol／L，pH6.0的磷酸钠缓冲液 ml 600    3,5二硝基水杨酸试剂 ml 600    0.03mol／L，pH7.8的磷酸钠缓冲液 ml 600    Folin试剂甲（俗称碱性铜试剂） ml 200    Folin试剂乙 ml 800    DEAE—纤维素 g 600    0.5mol／L和1mol／L的NaOH溶液 ml 500    0.5mol／L的HCl ml 500    20％的醋酸 ml 500    95％乙醇 ml 1000    透析袋 m 2    甲苯 ml 200               注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：017 实验项目 名称 维生素A、B1、B2的定性检测反应 该实验学时数 4  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．掌握维生素A的定性检测原理及其检测操作方法。 2．掌握维生素B1的定性鉴定反应实验原理和实验操作方法 3．掌握荧光法定性测定维生素B2的实验原理及其操作方法。  实验 内容 1. 维生素A的定性检测： 在氯仿溶液中，维生素A与三氯化锑生成不稳定的蓝色化合物的反应称为Carr-price 反应。此呈色反应常用作维生素A的定性鉴定，并已发展成维生素A的定量测定法。 2. 维生素B1的定性检测： 2．1 重氮苯磺酸反应法测定维生素B1 在有碳酸氢钠存在的情况下，硫胺素能与重氮苯磺酸作用产生红色。 2．2 荧光反应法测定维生素B1 硫胺素经轻微氧化作用后，即生成黄色而带有蓝色荧光胱氨硫胺素（硫色素，硫胺荧）。溶于异丁醇中的胱氨硫胺素显示深蓝色荧光，在紫外光下更为显著。此反应非常灵敏，可以测定0.01微克维生素B1 。 3．维生素B2的定性检测： 维生素B2的水溶液或乙醇溶液为黄色，并具有很强的荧光。这种荧光在强酸和强碱中易被破坏。维生素B2可被亚硫酸盐还原成无色的二氢化物，失去荧光。二氢化物在空气中易重新被氧化，恢复其荧光。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   紫外仪 此项不填 台 6   小台称 此项不填 台 6   试管干燥器 此项不填 台 2   2ml,1ml 刻度移液管 此项不填 支 各12    此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   鱼肝油 ml 120    醋酸酐 ml 180    精馏氯仿 ml 300    三氯化锑-氯仿饱和溶液 ml 180    新米糠 g 100    0.05 mol/L 硫酸溶液 ml 500    0.2% 硫胺素溶液 ml 240    1% 铁氰化钾溶液 ml 180    30% 氢氧化钠溶液 ml 180    异丁醇 g 240    重氮试剂 ml 120    碳酸氢钠碱性溶液 ml 300    核黄素溶液（30微克/毫升） ml 240    2.5%亚硫酸氢钠溶液（用2% 的碳酸钠溶液作溶剂） ml 240                           注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：018 实验项目 名称 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 该实验学时数 4  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．了解酵母核糖核酸的组分； 2．掌握酵母核糖核酸的提取原理及操作方法； 3．掌握核糖核酸各组分鉴定的原理与方法。 4．通过提取酵母RNA为后续RNA定量测定实验提供实验材料。  实验 内容 1. 酵母核糖核酸的提取操作： 酵母核酸中核糖核酸（RNA）含量较多。RNA可溶解于碱性溶液中，在碱性提取液中加入酸性乙醇溶液可以使解聚的核糖核酸（RNA）沉淀，由此即可得到RNA的粗制品。 2. 核糖核酸各组分鉴定操作方法： 核糖核酸（RNA）分子中含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加入硫酸煮沸可使其水解，从RNA的水解液中可以测出上述各组分的存在。 2．1 嘌呤碱的鉴定：用硝酸银沉淀法检测。 2．2 核糖的鉴定：用地衣酚显色法测定。 2．3 磷酸根鉴定：用定磷试剂检测。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   四孔电热恒温水浴锅 此项不填 台 6   小台称 此项不填 台 6   离心机、 此项不填 台 6   水循环式真空泵、布氏漏斗、抽滤瓶 此项不填 套 2    此项不填      此项不填      此项不填      此项不填      此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   0.04mol/L的NaOH溶液 ml 1000    酸性乙醇溶液：（将0.3ml浓HCl加入到30ml乙醇溶液中） ml 500    95%乙醇 ml 1000    乙醚 ml 500    1.5mol/L H2SO4溶液 g 240    浓氨水 ml 120    0.1mol/L AgNO3 溶液 ml 120    FeCl3-浓HCl溶液 ml 120    苔黑酚乙醇溶液 ml 60    酵母粉 g 180    定磷试剂 ml 120    定磷试剂1：17%硫酸溶液 ml 50    定磷试剂2：2.5%钼酸铵溶液 ml 50    定磷试剂3：10%的抗坏血酸溶液 ml 50                           注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：019 实验项目 名称 猪脾DNA的提取及含量测定 该实验学时数 6  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 掌握用浓盐法从动物组织提取核酸的原理 2．掌握从动物组织中提取DNA的操作步骤及操作技能。 2. 通过提取DNA，为后续DNA定量测定实验材料。  实验 内容 1. 新鲜（或冰冻）猪脾低温预处理操作： 在冰盐浴中，将制得的猪脾匀浆进行SCC液处理，除去血水，抑制DNA酶活。 2． 络合金属离子、抑制DNA酶活性： 将所得沉淀悬于5倍体积的pH8.0 0.15mol/L NaCl-0.1mol/L Na2EDTA溶液中。边搅拌边慢慢滴加5% SDS，直至SDS最终浓度达1%为止。 3． DNA的溶解与RNA分离： 加入固体氯化钠使其最终浓度达1mol/L，继续搅60min，以确保氯化钠全溶。 4. 蛋白质的变性沉淀与DNA的分离： 加入同体积氯仿-异戊醇，激烈振荡20min，4000r/min离心20min，上层水相取出后倒入烧杯，以同体积氯仿-异戊醇重复去蛋白，直至界面处不再出现蛋白质凝胶为止。 5．DNA钠盐的析出： 取出水相于烧杯中，逐渐加入2倍体积95%乙醇，玻棒搅动，DNA纤维绕于玻棒上后挤干，用70%乙醇洗DNA纤维2次，再用95%乙醇洗一次，取出并挤干，制得DNA钠盐的粗制品。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   解剖刀 此项不填 把 6   小台称 此项不填 台 6   水平转子离心机（大容量） 此项不填 台 6   冰盐浴（用塑料盆作容器） 此项不填 只 6   冰箱 此项不填 台 1   高速组织捣碎机 此项不填 台 1   水循环式真空泵、布氏漏斗、抽滤瓶 此项不填 台 1    此项不填      此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   20×SSC 母液 ml 1000    NaCl-Na2EDTA溶液 ml 800    95%乙醇 ml 1000    5% SDS （5g SDS溶于100ml 45%乙醇） ml 800    氯仿-异戊醇混合溶液：氯仿:异戊醇=24:1（体积比） ml 2000    粗盐（制冰盐浴用） g 1000                                                                           注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：020 实验项目 名称 地衣酚定糖法定量测定酵母RNA的含量 该实验学时数 3  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 掌握地衣酚定糖法测定RNA的原理和方法，了解其试剂组成及配制方法； 2. 熟练掌握7200型分光光度计的基本结构及其正确的操作使用方法； 3．熟练掌握RNA标准曲线的制作方法，并通过回归方程计算未知RNA含量。  实验 内容 1．用地衣酚定糖法定量测定标准RNA，绘制标准曲线： 用分光光度仪在A670nm处测定标准RNA液各对应浓度下的OD值，按统计学方法，最终确定回归方程；通过回归方程，计算待测RNA含量； 2．准确称量，配制未知RNA样品待测液（100～200ug/ml）25ml； 3．画出地衣酚定糖法测定标准RNA的标准曲线； 4．用地衣酚定糖法定量测定未知RNA 的OD值，代入回归方程，计算酵母RNA的百分含量。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   7200分光光度仪 此项不填 台 6   比色皿 此项不填 只 24   2ml刻度移液管 此项不填 支 30   移液管架 此项不填 只 6   25ml容量瓶 此项不填 只 12   电子天平 此项不填 台 2   称量瓶 此项不填 只 12   油性记号笔 此项不填 支 6   四孔恒温水浴锅 此项不填 台 6  每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   标准RNA溶液（100ug/ml） ml 250    自制酵母RNA，每份5～10mg 份 12    地衣酚—铜离子试剂 ml 500    0.05 mol／L NaOH溶液 ml 1000    普通滤纸条（3×10cm2） 张 250    镜头纸（5×7cm2） 张 250                                                                     注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：021 实验项目 名称 二苯胺显色法定量测定猪脾DNA含量 该实验学时数 3  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1. 掌握二苯胺显色法定量测定猪脾DNA含量的原理和方法，了解其试剂组成及配制方法； 2. 熟练掌握7200型分光光度计的基本结构及其正确的操作使用方法； 3．熟练掌握DNA标准曲线的制作方法，并通过回归方程计算猪脾DNA含量。  实验 内容 1．用二苯胺显色法定量测定标准小牛胸腺DNA钠盐不同浓度下对应的OD值，绘制标准曲线：按统计学方法，最终确定回归方程； 2．准确称量，配制未知DNA样品待测液（100～200ug/ml）25ml； 3．画出二苯胺显色法测定标准小牛胸腺DNA钠盐的标准曲线； 4．用二苯胺显色法定量测定猪脾DNA的OD值，代入回归方程，计算猪脾DNA的百分含量。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   7200分光光度仪 此项不填 台 6   比色皿 此项不填 只 24   2ml刻度移液管 此项不填 支 30   移液管架 此项不填 只 6   25ml容量瓶 此项不填 只 12   电子天平 此项不填 台 2   称量瓶 此项不填 只 12   油性记号笔 此项不填 支 6   四孔恒温水浴锅 此项不填 台 6  每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   小牛胸腺DNA钠盐溶液（200ug/ml） ml 250    自制猪脾DNA，每份10～20mg 份 12    二苯胺试剂 ml 1000    0.01 mol／L NaOH溶液 ml 1000    普通滤纸条（3×10cm2） 张 250    镜头纸（5×7cm2） 张 250                                                                     注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。 附表： 课程名称： 生物化学实验 实验编号：021 实验项目 名称 肌糖元的酵解作用 该实验学时数 4  所属课程 此项目不填 适用专业 此项目不填  实验类型 （1、基础，2、专业基础，3、专业） 2 每组人数 此项目不填  实验性质 （1、验证型，2、综合型，3、设计型） 1 同时实验组数 此项目不填  实验 目的 要求 1．掌握测定糖酵解作用的实验原理和操作方法。 2．了解糖酵解作用在糖代谢过程作用中的地位及生理意义。  实验 内容 1．处死动物和制备肌肉糜： 研究机体的新陈代谢首先要注意使所测得结果尽量符合机体的真实情况。杀死动物的方法对于获得真实情况有着直接关系； 将动物（鼠和兔）杀死后，放血，立即割取背部肌肉，在低温条件下用剪刀尽量把肌肉剪碎即成肌肉糜，低温保存备用。 2．肌肉糜的糖酵解： 肌糖元的酵解作用，即肌糖元在缺氧的条件下，经过一系列的酶促反应最后转变成乳酸的过程。肌肉组织中的糖元首先与磷酸化合而分解，经过己糖磷酸脂，丙糖磷酸脂，丙酮酸等一系列中间产物，最后生成乳酸的过程。 3．肌肉糜的糖酵解产物-乳酸的鉴定： 糖元或淀粉的酵解作用，可由乳酸的生成来观测。在除去蛋白质与糖后，乳酸可以与硫酸共热变成乙醛，后者与对羟基联苯试剂反应产生紫红色物质，根据颜色的显现而加以鉴定。  每组 实验 所需 仪器 设备 名 称 规格型号 单位 数量   学生常规生化实验器皿* 此项不填 套 12   四孔恒温水浴锅 此项不填 台 6   解剖刀、剪刀、镊子 此项不填 套 6   白瓷盘 此项不填 只 6   5、2、1、0.5ml 刻度移液管 此项不填 支 各6   移液管架 此项不填 付 6   电冰箱 此项不填 台 1   冰水浴（塑料盆） 此项不填 只 6   0#或1#橡皮塞 此项不填 只 60    此项不填    每组 实验 消耗 材料 品 名 单位 数量 说明   实验动物——大白鼠或家兔； 只 6或1    15% 偏磷酸溶液 ml 240    1/15 mol/L磷酸缓冲溶液（pH 7.4） ml 240    0.5% 糖元溶液（或0.5% 淀粉溶液） ml 240    液体石腊 ml 240    饱和硫酸酮溶液 ml 240    98% 浓硫酸 ml 240    1.5%对羟基联苯试剂 ml 240    氢氧化钙粉末 g 120                                                   注意：该表格中的实验仪器设备和实验消耗材料作为今后购买实验设备和耗材的参考， 本表中未出现的项目将不能在学校实验设备经费和实验维持费中报销。 * 即首次实验发给每小组学生，要求学生自行管理的实验器皿。详见学生器皿清单。