第五篇
水产饵料生物
的培养
(增殖)
第一章
水产饵料生物的
室内培养
藻类培养方法简介
藻类, 特别是单细胞藻类的营养丰富, 含有动物和人生长发育所必
需的营养物质 。 自上世纪四十年代以来, 各国学者都试图用藻类这一资
源解决人类食物和动物饵料的缺乏问题 。 另一方面, 藻类可直接或间接
的作为鱼类及其他水生动物的饵料, 因此, 藻类培养对水产养殖具有更
大意义 。
关于藻类培养, 还有其他意义, 如利用培养固氮蓝藻解决稻田氮素
肥料;或从一些藻类提取药物;或研究藻类生理, 以及用于太空食品等
。 在渔业利用方面, 藻类培养主要是解决水产动物饵料 。 目前, 有关海
水藻类的培养较多, 我国在海水养 殖方面, 已大规模展开了某些浮游植
物的培养, 如扁藻 ( Platymonas spp), 中肋骨条藻 ( Skeletonema
costatum), 三角褐指藻 ( Phaeodactylum tricornutum), 盐藻 (
Dunaliella spp.), 新月菱形藻 ( Nitzschia clostertum), 牟氏角毛藻 (
Chaetoceros muelleri) 及球等鞭金藻 ( Isochrysis galbana) 等, 已解决贝
类人工养殖的早期幼体饵料问题 。 在淡水养殖方面, 我国只进行了螺旋
藻, 鱼腥藻, 小球藻, 栅列藻等的培养 。
今后, 随着养殖事业的发展, 对一些新品种的养殖以及解决某些品种
幼鱼的饵料, 必然涉及到藻类的培养 。 因此, 有必要了解藻类培养的基
础知识 。 先仅就藻类, 主要是单细胞藻类的一般培养方法及有关理论加
以简述 。
藻类的生
长模式
单细胞藻类在
培养过程中,
生长繁殖的速
度,出现一定
的起伏,这种
生长模式可划
分为六个时期
藻类的培养方式
藻类的培养方式, 以藻类培养的目的要求而各种各样 。 但可分为密闭式
培养和开放式培养两大类 。
1,密闭式培养:密闭式培养的目的是不使外界杂藻, 菌类及其他有机体
混入培养物中 。 将培养液密封在与外界完全隔离的透明容器中, 由此通气,
搅拌, 输送培养液及调节水温和取样等设备, 也都要与外界隔离 。 培养容器
多为管状, 也有池状, 用有机玻璃或透明的聚乙烯所料做成水平管道, 直立
或斜立在地上, 暴露阳光或人工光照下 。 这种培养方式, 成本高, 好控制,
产量亦稳定 。
2,开放式培养:将藻类培养于敞开的容器 ( 如水泥池, 管道, 木盆等 )
中 。 方法设备较简便, 可进行小量或大面积的培养 。 该法培养物中易发生敌
害生物污染, 但成本低, 使用较普遍, 也是今后藻类培养所应采取的方式 。
开放式可分如下几种类型,
⑴ 开放循环培养:其特点式培养液借助循环水泵而不断循环流动 。 培养
物能循环, 就可省却搅拌工作 。
⑵ 开放非循环培养:其特点是培养液不循环流动, 而定时由小管通入 CO2
和空气到培养液中;同时也起搅拌作用 。 此法在大面积培养中使用较普遍 。
优点是设备简单, 无需动力, 水泵及大量的 CO2及通气设备 。
⑶半开放循环培养:半开放培养是指培养容器或池、槽等场所虽仍敞开
,但有些部分密闭,或用塑料布覆盖。这种培养方式,利用管道,依靠动力
,使培养液流动和通入含二氧化碳的空气。该方式设备复杂,但效果较好。
培养液的配制及举例
在实验条件下培养微型藻类有多种培养基配方 。 这些配方大多数是早
先发表过的配方的修改方, 有些则从分析天然生境的水而得到, 有些是从
生态角度考虑的 。 发展藻类培养的营养配方时的主要考虑的问题是,
a,盐的总浓度:大多是取决于有机体的生态来源 。
b,主要离子组分的组成及浓度:他们是钾, 镁, 钠, 钙, 硫酸盐和磷
酸盐 。
c,氮源:硝酸盐, 氨和尿素常用作配方中的氮源, 根据造中的性能和
pH的最适点而定 。 藻类的生长主要依赖氮的可利用性 。 大多数微型藻干物
中含有 7~ 9% 的氮 。 因此在 1升培养液中生产 10g细胞就至少需要 500~
600mgL-1KNO3。
d,碳源:无机碳通常是用含 1~ 5% CO2的空气来供应的, 碳的另一种
供应办法是用碳酸氢盐 。 选用何种办法主要是根据藻类生长的 pH最适点而
定 。
e,pH,通常用偏酸的 pH值来避免钙镁和其它微量元素发生沉淀 。
f,微量元素:培养基中的微量元素通常是用早已证明有效浓度的混合
溶液来提供的 ( 浓度在 μ gl-1级范围 ) 。 然而, 这些微量元素的组分对藻类
生长是否必须却不能总能显示 。 为增加微量元素的稳定性, 常用柠檬酸盐
和 EDTA作为螯合剂 。
维生素:许多藻类要求有硫胺素和维生素 B12的供应。
以下是几种很有用的培养液配方
1,单细胞绿藻 ( 栅列藻 ) 培养液
水生 4号
( NH4) 2SO4 0.200g
Ca(H2PO4)2·H2O+2( CaSO4·H2O) 0.030g
MgSO4·7H2O 0.080g
NaHCO3 0.100g
KCL 0.025g
FeCL3( 1% ) 0.150mL
土壤浸出液 0.500mL
水 1000mL
水生 6号
NH2CONH2 0.133g
H2PO4 0.033mL
MgSO4·7H2O 0.100g
NaHCO3 0.100g
KCL 0.033g
FeSO4( 1% 水溶液 ) 0.200mL
Cacl2 0.050mL
土壤浸出液 0.500mL
水 1000mL
水生四号培养液中, 藻类呈深绿色, 生长繁殖速率较低 。 水生 6号培养液中, 藻类呈草
绿色, 色素不够正常, 但生长繁殖迅速 。
土壤浸出液是用田园土壤按水与图 2:1的比例, 搅匀浸泡后的上层清液, 用前煮一小时
后镜检, 发现污染生物, 应再加温消毒后使用 。
2,浮游硅藻培养液
水生硅 1( mg/l)
硝酸氨 120 硫酸镁 70
磷酸氢二钾 40 磷酸二氢钾 80
氯化钙 20 氯化钠 10
硅酸钠 100 柠檬酸铁 5
土壤浸出液 20 硫酸锰 2
水 1000mL pH 7.0
水生硅 2( mg/l)
尿素 150 氯化钾 30
过磷酸钙 50 硅酸钙 100
硫酸镁 50 碳酸氢钠 3
硫酸锰 3 土壤浸出液 4mL
EDTA- 铁 1mL 水 1000mL
水生硅 2号是用化肥尿素过磷酸钙为氮磷来源,适于大量培养硅
藻时选用,生长适温为 20~ 30℃ ;光强为 2,000~ 5,000米烛光。
3,朱氏 10号培养液:适用于培养硅藻, 蓝绿藻等 。
H2O 1000mL
Ca(NO3)2 0.04 g
K2HPO4 0.01 g
MgSO4·7H2O 0.025 g
Na2CO3 0.02 g
Na2SiO3 0.025 g
FeCL3 0.008 g
使用时按 1/2,1/4,1/10稀释使用 。
4,f/2培养液
硝酸钠 ( NaNo3) 75 mg
磷酸二氢钠 ( NaH2PO4) 4.4 mg
f/2微量元素溶液 1mL
f/2维生素溶液 1mL
海水 1000mL
本配方时应与目前生产上使用的各种伪造的培养,但用于
硅藻培养时,应再加 50mgNa2SiO3。
附 I,f/2微量元素溶液配方,
硫酸锌 ( ZnSO4·4H2O) 23mg
硫酸铜 ( CuSO4·5H2O) 10mg
氯化锰 ( MnCl2·4H2O) 178mg
柠檬酸铁 ( FeC6H5O7·5H2O) 3.9g
钼酸钠 ( NaMoO4·5H2O) 7.3mg
乙二铵四乙酸钠 ( Na2EDTA) 4.35g
六水氯化钴 ( CoCl2·6H2O) 12mg
纯水 1000mL
附 II,f/2微量元素溶液配方,
维生素 B12 0.5mg
维生素 H( 生物素 ) 0.5mg
维生素 B1 100mg
纯水 1000mL
四, 藻种的分离培养
为了要进行某种藻类的科学研究活大量培养, 有必要把某种藻类与其他生物
分离 。 分离培养藻种, 可分为两大类, 一为单种培养, 即藻类虽只有一种, 但还
混杂细菌 。 另一为纯培养, 即不仅藻类只有一种, 亦无其它任何生物 。 纯培养比
较困难, 一般的分离培养往往只能做到单种培养 。
决定培养哪一种藻类, 主要根据培养的目的要求, 及某一种类的生物学特征
。 藻类的分离主要有以下几种常用方法 。
1,离心法:将混合液用离心机离心, 水中不同藻体及细菌就以不同的速度下
沉, 因此得以分开 。 这样将不同时间下从导管底的藻体取出, 经镜检选定某种藻
类最多的沉积物, 再加清水, 继续离心, 如此反复就可得到比较单纯的藻体, 在
接种相应培养液中培养 。 该法可消除细菌, 并增加纯粹分离的可能性, 至少可作
为藻种平板培养的准备工作 。 另外, 在水液中藻体含量较少时, 可用此法集中藻
体 。 但此法不能做到使不同藻类完全分离 。
2,稀释法:该法源于中野治房 ( 1933) 的方法 。 用已消毒试管 5只, 在第一
管盛蒸馏水 10mL,第 2~ 5管都装 5mL,用高压蒸汽消毒, 待冷却后, 第 1管用滴管
滴入混合藻液 1~ 2滴, 充分振荡, 使均匀稀释 。 次用消毒吸管, 从第 1管中吸取
5mL滴入第二管中如前振荡, 使均匀稀释 。 以后依次同样滴入第 3~ 5管, 并都充分
均匀稀释 。 然后把五个已盛又消毒的琼胶培养基培养皿, 加热使之溶解, 待冷却
而尚未凝固时, 分别滴入五个试管的藻液各一滴, 用力振荡, 使藻液充分混乳培
养基中 。 待冷凝后, 把五个培养皿放在受着漫射光窗口, 一直到出现藻群时为止
。 在 20℃ 左右时, 约 10天即出现藻群 。 用消过毒的白金丝取些藻群, 进行琼胶固
体培养基的不通气培养 。 此过程反复多次, 直至得到完全分离的纯藻种群为止 。
此法稀释要使用较多容器分组培养,比较麻烦,但较易成功。
3,微吸管法:将水样在载玻片上滴成绿豆粒大小的一些水滴,
这样可使每个水滴中有很少生物而便于分离;在解剖镜下用微吸管
( 口径小至 0.008~ 0.16mm,圆口, 可自行拉制 ) 。 将要分离的藻
体吸出, 用蒸馏水或平衡矿物质溶液冲洗数次, 然后主导成有培养
基的小培养皿中培养, 待生长旺盛后, 再扩大培养 。 此法较适用于
能运动的藻类 。
4,趋向反应法:利用藻类的特殊趋向性 ( 如向光, 向地等 )
不同而分离藻体 。 此过程反复几次就可得到一定纯度的藻体 。 分离
效果较好, 只是不能应用于不运动的藻体 。
5,平板分离法:在培养液中加入战培养液 1.5% 的琼胶, 加溶
解后, 注入培养皿中, 加盖后用 15磅压力 121℃ 灭菌 20分钟, 即制
成胶质培养基 ( 也可用硅酸胶和明胶制备 ) 。 在琼胶培养基放在
40℃ 以下的水浴锅内, 开改用吸管注入混合藻液, 摇匀, 使之分散
在培养基平面上 。 之后, 可放在恒温箱内, 用荧光灯照射, 使藻群
生长 。 再经镜检, 反复此法不断提纯, 即可分离出较纯的藻种 。
6.固氮蓝藻分离培养法:将一小片藻丝群接种到培养基上,
几天后再用灭菌白金丝挑取生出的新藻丝接种到平板培养基上。这
样经几次分离接种就得到较纯的藻种。
五, 藻种的选择, 接种和保存
1,藻种的选择,
虽然藻类种类较多, 但其中仅少数经过人工培养 。 应该研究
在室外培养其他藻种的可能性和他们生产的潜力, 所选择的生
物种应具有下列特征,
⑴ 生长迅速;
⑵ 对极端的温度和辐射条件的耐性范围大;
⑶ 蛋白质, 脂类和糖类含量高, 或有选择地积累一种特殊的
代谢产物 ( 如甘油 ) ;
⑷ 无毒性, 且易于收获 。
根据系统的要求和特殊的方法, 还可有其他要求 。
2,接种,
再分离到单纯藻群后,就可接种到培养液中进行培养,进而
移养扩大培养。接种方法有液体接种和干藻接种。前者是将藻
液直接加入培养液中进行搅拌,加入的藻种分量视水温而定,
水温较低( 10℃ 以内)时,多加;约占培养液总量的 30~ 40%
左右,水温适宜时( 25~ 30℃ 左右),可加 5~ 8%左右。后者
是用干藻的藻体接种,接种量为 0.1~ 0.2%。
3,藻种的保存,
一旦藻种分离得到, 就要保存好以便在一定的时间内供接
种用 。 为此, 要将藻种消毒, 避免其他来源的污染 。 给以适
当的光照和温度 。 在液体培养中, 为了快速增殖, 可用
5400lx。 再得到良好生长后 ( 1~ 2周 ), 培养液移到更低的
光照条件 ( 540~ 1100lx), 以求缓慢生长及储藏 。 藻类在琼
脂培养基上接种后的藻种, 先给予 2700lx光照 6~ 7天, 直到
得到良好生长, 然后移到 540~ 800lx光强的地方 。 大多数藻
类保存在室温下 ( 15~ 20℃ ) 即可, 少数造中存活需较高温
度 。
藻种接代一致的频率视物种及贮存条件而不同,单胞藻及
丝状不运动的物种可以每六个月到十二个月移种一次,有鞭
毛的物种移种次数要更频繁些。某些藻种曾成功地做到了在
液氮下长期保存。
六、管理及采收方法
藻类培养的管理包括培养基养料的补给, 光照及温度调节, CO2的补
给, 搅拌, 防污等 。 在培养过程中, 补给的养料, 要选择肥效速, 并
有持久性, 来源较广, 价格低廉的种类 。 一般都以有机肥料为补肥 。
光照, 温度的调节视种类及季节而定 。 室内照光一般都采用白炽
电灯和荧光管 。 温度调节一般采用室内用白炽灯照射培养物或用温室
,安装电热管等升温, 室外冬季升温较困难, 主要采用玻璃棚;用冷
水管道降温, 或经通风遮阳降温 。
CO2的补给一般通过空气压缩机或橡皮管将含 5% CO2的空气通过培
养物中 。
搅拌使藻类培养不可少的一道工序 。 搅拌可使培养物均匀分布,
水温均匀, 利于藻类生长 。 搅拌的方法一般为人力搅拌, 风力搅拌,
空气搅拌和磁力搅拌 。 此外还有循环流动法 。
防污在藻类培养中很重要,对杂藻及细菌的防治主要采用石灰、
漂白粉、硫酸铜等试剂。用 1~ 0.5ppmCuSO4防值杂藻的效果较好。当
有浮游动物污染时,可施用化学试剂、杀虫剂等杀灭,如硫酸铜 1~
2ppm可杀灭轮虫、纤毛虫;漂白粉 4ppm对各种虫类均有效;食盐 9‰,
可杀灭轮虫;碘液 5‰,再稀释到十万分之一,可杀灭纤毛虫。
培养物的采收的时间要适当, 主要根据其密度大小决定 。 采
收的方法有,
1,物理浓缩,
⑴ 离心法:国外使用最普遍 。 它利用离心力来把藻体与水液
分离, 是藻体下沉达到浓缩目的 。 主要工具是离心机 。
⑵ 重力沉降法:利用重力使培养物下沉而得到浓缩物 。 使用
的工具是沉淀器 。
⑶ 遮光法和降温法:对趋光性强的藻类, 如衣藻等进行遮蔽
光线, 使培养物下沉而得到浓缩物 。 低温使藻类也有下沉现象
2,化学浓缩法,
用沉淀剂如明矾, 石灰等, 使培养物下沉, 而得到浓缩物 。
明矾 0.3~ 0.4‰, 将之研碎, 加入培养物中搅拌, 半小时培养
物大部分下沉, 在 6~ 12小时后, 全部下沉 。 石灰一般是将其 1
斤溶在 100~ 200斤水中, 制得饱和石灰水, 其用量是 6% 。 但
该两法沉淀的藻浓缩物的灰分较多 。
此外,较大体积的种类,如丝状体、非浮游性的藻类等可用
过滤法采收。采收后的藻浓缩物即可经干燥加工成饲料或其他
原料。
七, 分析技术
1,细胞计数 — 显微镜法
培养物中的个体数测定, 是按照个体计数方法, 测定和估计培养物单位容
积中的个体数 。 计数方法同浮游植物定量的方法 ( 见前章 ) 。 此外, 也可以
采用血球计数法 。
2,分光光度计法,
培养物的藻类密度也可用分光光度计测定 。 当藻类密度较低时, 光径中的
细胞数与测量到的光密度有一简单的几何关系 。 在藻类密度不大时, 光密度
大, 细胞数目就多, 即可用测得的光密度值表示细胞数目 。
3,干重测定
测定干重的增加量是生产估测方法中的一个最直接的方法, 其步骤如下,
⑴ 取样 — 从藻体培养液中取出有代表性的一小部分体积的藻液 。 取样时
在以下三点上要特别注意,a,将培养物搅拌均匀 b,快速吸取样品以免沉积 c
,足够多的样品
⑵ 分离 — 取出样品后, 用过滤膜过滤或用离心法把藻体与介质分开 。 细
胞必须洗过以除去盐分和其它污物, 通常是用稀释的培养液或缓冲液 。 海洋
藻类不能用蒸馏水洗, 以免质壁分离和细胞胀破 。
⑶ 干燥 — 选择对特定有机体最适的烘干温度 。 a,避免过热 b,有好的重
复性 c,对同一样品增烘 1小时后, 称得统一重量 。
⑷ 测定结果的表示法所得干重测定值要以单位培养液体积的干重表示。
室外的培养池则用单位照光面积的干重来表示。
表 5-1 一些已大量培养利
用藻类的生态适应性
浮游动物集约化培养简介
浮游动物主要包括原生动物, 轮虫, 鳃足类, 桡足类, 糠虾和浮游幼虫
等 。 是鱼类的天然饵料, 尤其是水产重要经济动物的重要饵料 。 浮游动物的
培养与藻类培养一样, 具有重要的意义 。 下面简述现在水产养殖生产上常用
的浮游动物集约化培养的方法 。
一, 浮游动物培养所需要的一般条件
对培养浮游动物影响较大的因素有饲养用水的水质, 水温, 盐度, pH、
含氧量, 光照条件, 饵料的种类和数量, 容器的大小等, 现分述如下,
㈠ 培养用水:培养用水可用海水, 湖泊或池沼里的水, 或者保存 2~ 3周
的住家井水或自来水 。 在用自来水时, 每升水中要加入 5~ 8毫克的硫代硫酸
钠以除去水中的氯 。 饲养时, 为防止由于细菌繁殖而造成的水质恶变, 最好
是添加青霉素或链霉素之类的抗生素 。 但抗生素的效果只在 36小时之内 。 因
此, 如果在 10~ 12℃ 以下培养, 并且注意水的交换, 可不添加抗生素 。
㈡ 水温和盐度:在一定范围内, 温度越高其摄食速度, 生长速度也越高
。 饲养水温应与该种动物栖息场所的水温相适应 。 为了提高生长速度或繁殖
速度, 应考虑栖息现场的水温变动幅度, 应接近其上限 。 对饲养用水的盐度
问题研究较少, 怎样影响浮游动物尚无充分了解 。
㈢ pH和含氧量:培养用水的 pH值一般都保持 7.0~ 8.5。含氧量都希望达
到接近饱和的条件。如桡足类克氏纺锤镖水蚤 Acartia clausi在高密度( 380个
/ L) 下饲养时,如果含氧量低于 3.2 mg/L,就将全部死亡 。
㈣ 光照:饲养浮游动物的光照条将俄中各样, 其效
果无明显差异, 但必须避免直射日光 。
㈤ 饵料:现在常用的饵料有五大类,
① 培养的硅藻类和植物性鞭毛虫类 。
② 培养的轮虫类, 枝角类和桡足类等 。
③ 卤虫无节幼体 。
④ 酵母, 小麦粉, 大豆粉, 酱油粕, 海藻粉末以及相
应配方的配合饵料等人工饵料 。
⑤ 用网采集的天然浮游动物 。
㈥ 饲养容器:一般以水槽、指管或土池培养浮游动
物主要采用静水方式培养。
二, 淡水枝角类及蒙古裸腹蚤的培养方法
1,淡水枝角类, 枝角类的培养易于掌握, 但大量培养时需注意如下
几点,
⑴ 班塔法 ( Banta),
培养液为肥泥 1kg,马粪 ( 一周之久 ) 170 g,过滤池水 10 L。 将上述
培养液放在 15~ 18℃ 处, 过 3~ 4d,用细筛绢过滤;然后用过滤池水适当冲
稀 ( 1:2~ 4), 便可使用 。 培养液要常更换, 以确保饵料充分供给 。 这种
培养液培养的枝角类常红色, 并产卵较多, 是一种良好的培养液 。
⑵ 用绿藻培养枝角类法:单细胞绿藻, 小球藻和栅藻等是枝角类的天
然饵料, 可直接用于培养枝角类, 以免投饵的麻烦 。 这种单细胞培养液配
制如下,
每立方米水中放硝酸铵 3.5~ 35g; 过磷酸盐 6.6~ 26.4g
为确保藻类的不断繁殖, 需经常追加这两种无机盐类 。
⑶ 土池培养法:土池 1 m深, 注入 50cm深的水, 加入混合堆肥液汁,
促使单细胞藻类和细菌大量繁殖, 然后移入 溞, 裸腹 溞 等, 在温度 20~
25℃ 时, 3~ 4 d后即可大量繁殖 。 一般在良好环境下, 可产 800 g/m3。
培养期间要注意观察水温、水质、浮游植物等,更应观察水蚤是否怀
卵、卵形及卵数,有无冬卵,体色及消化道情况等。溞的颜色应为淡黄色
,略带红色或淡绿色;肠道应为绿色或深褐色;卵应为圆形、暗色,数量
在 10~ 20个以上。如果水藻体色很淡,肠呈蓝绿或黑色,卵数少,椭圆且
浅绿,并出现大批雄溞或动乱的,同时种群中幼体数小于成体数;这都是
培养情况恶化的象征,应抓紧采取措施或重新培养。
2,蒙古裸腹溞, 是从内陆盐水中采得,现已成功驯化于海
水中正常生长繁殖。其大量培养方法与淡水枝角类的相似,
但用水是海水,盐度 30-32左右,温度 25℃ 左右,适当光照。
用小球藻或微绿球藻加酵母投喂。小球藻要适当扩种培养,
以便满足大量培养蒙古裸腹溞的需要。可用水泥池培养大
量培养小球藻,培养用水要消毒,施肥等,要给以一定的
光照。最大培养密度可达 7000~1000 /L,生产量可达
70g/m3?d。
三, 轮虫的培养方法
目前,用于水产动物育苗生产上室内工厂化培养的轮虫
主要是褶皱臂尾轮虫轮虫,可以用培养的小球藻、扁藻、
衣藻等为饵料培养。特别是臂尾轮虫培养简单,水温保持
20~ 25℃,适宜 pH值为 7~ 8,投喂小球藻时,投喂量为
105~ 106个细胞/毫升。也可投喂酵母培养轮虫。将 800
mL 马粪和 1000 mL水很合在一起,煮沸约 1 h,待冷却后
过滤,并以二倍冷沸水冲稀,也可用之培养轮虫。
(一 ) 轮虫种的分离与保种
目前使用的种轮虫最初都是从天然水体中分离出来的, 这
些轮虫品系一般都经过长期研究和实际使用证明具有优良的品
质, 因而生产所用的种轮虫一般不需自己分离, 可从有关 科
研, 教学单位获得 。 轮虫种的分离并不困难, 需要时可以自己
进行分离 。 在温暖的季节 (水温 15℃ 以上 ),海边的小水体, 小
水塘特别是盐度较低的水体如盐碱滩上暂时性的小水洼中 常
有轮虫生活, 用浮游生物网捞取浮游生物样, 在解剖镜下用吸
管可比较容易地将轮虫吸出 。
轮虫一般采用保存冬卵的方式进行保种。在秋冬季冬卵往
往大量出现于轮虫培养池,从池底的沉淀物中可收集到大量的
轮虫卵。由于将轮虫卵与池底污泥分离开来比较困难,可直接
将含有轮虫卵的底泥放入冰柜保存。需要时,将这种底泥从冰
柜中取出,加入盐度为 15— 25的海水,待轮虫冬卵孵化后,用
筛绢滤出轮虫,再转移到培养水体中培养。
( 二 ) 轮虫的集约化培养
所谓轮虫的集约化培养是指在室内进行轮虫的高密度培养
。 在这种培养方式下, 培养条件一般能得到较好的控制, 轮
虫的生产比较稳定 。 其生产流程与微藻的培养相似, 也可按
规模的大小分为种级培养, 扩大培养和大量培养等 。
1.培养容器
室内培养轮虫对容器并没有严格的要求, 因培养规模不同
可选不同大小的容器 。 种级培养一般使用各种规格的三角烧
瓶, 细口瓶, 玻璃缸等, 扩大培养通常使用玻璃钢捅, 大量
培养则以水泥池最为常用 。 这些容器在位用前都需要用有效
氯或高锰酸钾进行化学消毒, 小型培养容器也可进行高温消
毒 。
2.培养用水
育苗厂进行轮虫的大量培养一般采用砂滤水,种级培养可
采用消毒水,以减少原生动物的污染。
3.培养条件和管理
( 1) 盐度 褶皱臂尾轮虫的适应盐度范围很广, 在盐度为 1— 250的水中均能生活, 比
较喜好盐度较低的海水, 最适盐度范围因品系不同而不同 。 生产上最好控制盐度在 15— 25
( 2) 温度 有报道说褶皱臂尾轮虫在水温 5℃ 一 40℃ 均能繁殖, 但绝大多数的研究和
实践都证明培养褶皱臂尾轮虫的最适水温为 25℃ 一 28℃ 。
( 3) 饵料 轮虫培养常用的饵料主要是微藻和酵母 。
微藻是培养轮虫的首选饵料, 常用微藻主要包括小球藻, 新月菱形藻, 三角褐指藻
,微绿球藻, 球等鞭金藻, 纤细角毛藻, 扁藻等 。 投喂次数和投喂密度并没有严格的要求
,既可一日投喂多次, 保持培养水体具有相对较低的饵料密度, 又可一次性投喂高密度的
微藻饵料, 然后较长时间不再投喂 。 实际操作中, 可以先将微藻培养起来, 然后直接将轮
虫接种到微藻培养物中 。 一般直接向密度为 500一 700万个/ mL的微绿球藻, 200一 250万个
/ mL的纤细角刺藻, 200一 250万个/ mL的球等鞭金簇中接种轮虫是没有问题的 。 用微藻喂
养轮虫时应注意以下几点,① 应选用处于指数生长期的微藻, 老化的藻种不利于轮虫的生
长甚至致毒; ② 直接向高密度微藻中接冲轮虫时要保证轮虫种内没有原生动 物, 因为在
微藻饵料丰富的条件下, 原生动物繁殖迅速, 不仅浪费饵料, 而且抑制轮虫的生长; ② 对
轮虫培养水体给予一定的光照, 微藻的生长可利用培养液中的代谢废物, 改善水质 。
虽然微藻是轮虫最理想的饵料,但由于轮虫的大量培养需要的饵料很多,通过培养
微藻来繁殖轮虫往往不能满足生产的需要,必须寻找低成本的替代饵料。酵母是迄今较好
的替代饵料,主要包括面包酵母、啤酒酵母、海洋酵酵母等,其中以面包酵母最易获得,
出而应用最广。所用的面包酵母一般是从酵母厂或食品厂购得,一般用鲜酵母,也可用干
酵母。鲜酵母通常放在冰柜保存。投喂前先在少量水中将冰冻的酵母块融化,充分搅拌制
成酵母悬液,然后施入培养轮虫的水体。酵母的投喂量一般按照 l g/ 100万个轮虫 ·d,分
2— 4次投喂。
4,充气 除在小型玻璃瓶内进行轮虫种级培养外, 轮虫的培养一般需要充气,
特别是用面包酵母培养轮虫时 — 定量的充气是必不可少的 。 充气的作用一是补充氧气,
二是防止饵料下沉 。 但是轮虫不是一种喜欢剧烈震荡的生物, 培养过程中应把气量调
小, 只要轮虫不出缺氧而漂浮在水面就可以了 。 日常管理中要经常检查充气系统, 及
时纠正过大或过小的充气 。
5.水质管理 由于轮虫的耐污能力很强, 很多培养轮虫自接种至收获不换水
,这在用微藻作饵料时并不会产生严重的问题 。 但由于投喂藻液的稀释作用, 很难作
到高密度培养 。 只有通过换水不断补充新藻液才能培养出高密度的轮虫, 减少水体的
占用 。 当用面包酵母培养轮虫时, 残饵会败坏水质, 必须进行换水 。 可用网箱滤出要
换的培养用水, 然后补充预先调温的过滤海水 。 一般每日换水一次, 换水量为 50% 。
除换水外, 如果池底很脏, 还需要进行清底, 用虹吸管将池底沉淀的污物吸出即可 。
为减少轮虫的损失, 吸底时可将吸出的水和污物接入一容器, 沉淀后再将上层 的轮
虫滤出, 放回原来的培养池 。 换水和清底都只能部分地改善水质, 如果发现大量的原
生动物繁殖起来, 需要对轮虫的培养水体进行彻底的改变, 此时要对轮虫倒池 。 方法
是用筛绢将池内的轮虫全部收集起来, 并以过滤海水冲洗数遍, 然后转移到另一备好
海水的培养池内 。
6.轮虫生长的检查 轮虫的培养需要经常用解剖镜检查, 生长良好的个体肥
大, 肠胃饱满, 游动活泼 。 轮虫成体带夏卵的比例和数目是判断生良好坏的重要标准
,如果多数成体带有夏卵 (一般 3— 4个, 少的 1— 2个, 多的 10一 15个 ),则说明生长较
好 。 如果轮虫死壳多, 身体上附着污物, 沉底, 不活泼, 不带卵或带冬卵, 雄体山现
等都是生长不良的表现 。
轮虫密度的检查可用肉眼估计,但用镜检精确计数较为科学。于培养池各部位
分别取一定体积的水样 (1mL即可 ),加碘液杀死轮虫,然后在解剖镜下计数水样中轮
虫的个数,并由此计算出培养池中轮虫的密度。
(三 )轮虫的营养强化
轮虫是目前海水鱼类育苗中最重要的开口饵料, 其所含的营养成分对鱼类的生
长速度, 抗病力及成活率等均有重要影响 。 在各种营养成分中, 以 ω3系列不饱和脂
肪酸持别是二十碳五烯酸 ( EPA) 和二十二碳六烯酸 (DHA)的缺乏造成的危害最为严重
。 因轮虫体内的的 EPA/ DHA主要是从其摄食的饵料中获取的, 而海洋微藻中 EPA/ DHA
的含量通常都比较高, 完全用海洋微藻培养的轮虫 — 般并不缺乏这些营养成分 。 然而
,现在生产上进行大规模轮虫培养时, 微藻供应量往往不能满足需要, 轮虫的饵料主
要是面包酵母, 而用面包酵母生产的轮虫严重缺乏 EPA/ DHA,在使用前必须进行营养
强化 。 强化轮虫 EPA/ DHA的方式主要有两种方法,
1.用富含 EPA/ DHA的海洋微藻强化轮虫
将酵母轮虫用海洋微藻进行再次培养, 但应选用 ω 一 3系列不饱和脂肪酸 (特别
EPA和 DHA)含量丰富的藻种如三角褐指藻, 新月菱形藻, 纤细角毛藻, 球等鞭金藻,
小球藻, 微绿球藻等 。 综合考虑季节, 培养的难易程度等因素, 以小球藻和微绿球藻
较好 。
(1)强化培养一般在玻璃钢桶内进行, 也可在小型的水泥池内进行 。 用高锰酸钾
或有效氯对强化容器消毒后, 加入高含量的藻液 (小球藻, 微绿球藻的密度应在 700万
/ mL;
(2)用筛绢将要强化的酵母轮虫收集起来, 用干净海水冲洗数遍, 除去其中可能
混有的原生动物, 以免与轮虫争夺微藻饵料 。
(3)将要强化培养的轮虫转移到强化容器进行强化培养。轮虫的密度以 400一 500
个/ mL效果较好,强化过程中需不间断充气,控温在 25℃ 一 28℃ 。强化时间为 24— 48
h,时间太短效果较差。在强化过程中,如发现微藻被轮虫食尽,应把轮虫滤出,并
换藻液继续进行强化培养。
2.用强化剂强化轮虫
以强化轮虫 EPA/ DHA为目的的强化剂种类很多, 一般是从
鱼油, 乌贼油等海洋动物中提取的 。 这类强化剂含有多种不
饱和脂肪酸和维生素, 是经乳化制成的乳浊液, 使用时比较
容易与水混合 。 强化剂的品牌很多, 不同型号的强化剂所含
的成分不完全相同, 使用时应根据其使用说明操作, 这里以
比利时的 INVE公司 Super selco为例将强化步骤简介如下,
(1)准备强化缸, 通常采用玻璃钢捅, 最好是具锥形底的
琉璃钢桶 。 用高锰酸钾或有效氯消毒后, 加入 25℃ 的过滤海
水 。 布入充气管, 采用大气泡充气, 不要使用气石 。
(2)用筛绢网将要强化的轮虫收集起来, 冲洗后转移到强
化缸中, 轮虫密度为 300一 500个/ mL。
(3)按 50g/ l强化水体的量称取强化剂, 加少量水用组织
捣碎机, 搅拌机等混匀后倒入强化缸, 强化 3— 4小时后, 依
法再加等量的强化剂继续强化 3— 4 h。
(4)强化完备后,用筛绢网滤出轮虫,用海水充分洗涤,
除去多余的强化剂,以减少对育苗水体的污染。
四, 原生动物的培养,
原生动物的培养方法较多, 如有用植物液溶解在水中
供细菌繁殖生长过程中利用, 这时溶液混浊, 纤毛虫就可
繁殖起来 。 具体方法为,
杂草 50克, 自来水 1000mL,煮沸 2 h,放置 1昼夜后过
滤, 以滤液为培养液, 用显微镜从野外污水中吸选纤毛虫
,接种于培养液, 在 20℃ 下培养一周, 能繁生大量纤毛虫

淡水鞭毛虫类 Polytoma的培养液配方为:在一升蒸馏
水中加胨 2 g,动物胶 150 g,醋酸钠 2克、磷酸二氢钾
0.25g,硫酸镁 0.25g。
五、卤虫
常见的一种为盐卤虫 Artemia salina,分布于沿海及内陆的咸水湖泊, 西北地区特别
丰富, 有待开发利用 。 卤虫分布甚广, 在海边的盐场, 内陆咸水湖泊均有生活 。 常见到的
多是雌性个体, 通常以孤雌生殖的方式来繁殖后代;只有在环境不良时才出现雄性个体,
行有性繁殖, 产生休眠卵, 渡过恶劣的环境;有些种群只行孤雌生殖, 终年见不到有雄性
个体的出现;然而, 在另一些种群, 则一遇不良的环境条件, 即见大量的雄虫 。 卤虫的适
应力很强, 生长迅速, 加上卵易保存, 并可在人工控制条件下培养作活饵料, 广为利用,
深受养殖工作者的欢迎, 但价格很高 。 如 2001年价格高达 60多万元 /t。
卤虫无节幼体是水产动物培育初期的优良饵料。它在水产养殖业的应用日趋广泛,地
位也日趋重要。一般的卤虫休眠卵依其产地不同,其孵化率和饵料价值各异。目前,我国
的卤虫应用主要是利用其无节幼体作为甲壳类、鱼类育苗的饵料,随着虫卵需求量的增大
,价格上涨,购买虫卵已成为鱼类、甲壳类育苗场成本估算的主要项目之一。投喂无节幼
体时,应先用自来水或海水洗净后再使用,目的在去除去卤虫孵化过程中产生的大量甘油
和孵化水中很有的细菌、有害物质等,避免污染育苗他。此外,为了尽量使用具有较高能
量的无节幼体,应使用刚刚孵化的无节幼虫。未用完的无节幼虫应在低温 (0℃ ~5℃ )保存
,以减少能量消耗。卤虫成体亦可作为水产养殖动物的饵料,这在天然卤虫比较丰富的地
区 (如河北、山东等盐田较多的沿海地区 )已大量用于海水动物的人工育苗。卤虫成虫的加
工在国外已有尝试,如泰国将卤虫制成虾酱,供人们食用。由于卤虫蛋白质含量丰富,是
鱼类和甲壳类的良好饵料,且饲养容易,天然资源量很大,有望取代鱼粉成为水产养殖业
最重要的蛋白质源。 把卵放入海水或相当于海水的盐水(适宜盐度为 30~ 40,可用 1L淡水
中加 40~ 50 g粗制盐制得),在 25~ 30℃ 下孵化约 1.5d,即得卤虫无节幼体,孵化率在新
鲜的好卵可达 70%以上。孵化时要通气,不断搅拌,孵化出来的无节幼体具有趋光性,可
以在有光照明下使之聚集在水槽一侧,用吸量管吸收。孵化后 1~ 2d以内就可把卤虫无节
幼体用于鱼苗的饵料。也可作为浮游动物的饵料。
(一 ) 卤虫冬卵的生物学特征
卤虫冬卵的外层为一厚的卵壳,卵壳内为处于原肠期的胚胎
。卵壳分为三层。外层是卵外壳,呈土黄至咖啡等不同深度的
颜色,这一层具有物理和机械的保护功能;中间一层称为外皮
层,有筛分作用,可阻止大于二氧化碳 (CO2)分子的分子通过;
最内一层是胚表皮,为一透明而有弹性的膜。 卵壳内为胚胎,
一般处于滞育期。这种状态的卤虫卵处于暂时的发育停止状态
,对环境的忍耐力很强,耐干燥、低温,对较高的温度也不敏
感。当含水量低于 10%时可一直保持这种滞育状态,当含水量
高于 10%且又处丁有氧的环境中时,胚胎便开始代谢活动。干
燥的卤虫卵受温度的影响不大,置于 -273℃ 一 60℃ 并本影响其
孵化率,短时间放置在 60℃ 一 90 ℃ 对孵化率也无影响。虫卵完
全吸水后对温度则有明显的反应,当温度低于 18℃ 或高于 40℃
时就可使胚胎致死,在 -18℃ 一 4C及 32℃ 一 40℃ 时不使胚胎致
死,但可停止胚胎的活动,这种停止是可逆的,但长时间放置
会降低虫卵的孵化率。
(二)卤虫卵的收获与简单加工
目前, 卤虫养殖尚没有大规模开展起来, 水产养殖中所
用的卤虫卵绝大多数是从天然水域中捞取的 。 收获卤虫卵的
方法非常简单 。 一胶采用 150μm孔径的筛绢缝制而成的小网在
盐田, 盐湖的岸边捞取 。 因卤虫卵浮力大, 浮于水面, 易随
风在水面漂移, 因而水体的下风处卤虫卵比较集中, 是捕捞
卤虫的理想去处 。 另外, 卤虫产地往往是大风天气较多的地
区, 常有很多虫卵披风浪吹到岸上, 这些虫卵与尘土混合在
一起, 除非用卤水浮选, 平时很难对其进行分离 。 在出现较
大的降雨时, 雨水能将这些卤虫卵从岸上冲到临近的高盐水
体中, 因此雨后是捕捞卤虫卵的良好时机 。 由于降水引起盐
度下降, 容易使卤虫卵吸水甚至孵化, 雨后不仅要抓紧时间
捕捞, 而且要及时对所捕获的卤虫卵进行脱水等加工处理 。
卤虫卵用筛绢网从天然水域捞取后,往往含有很多的水
分、泥沙、腐烂有机质等杂质,贮存之前需要进行加工,卤
虫卵的加工程序一般包括下列步骤,
(1)用饱和盐水进行分离:这一步操作是利用卤虫卵能浮于饱和
盐水的特性, 沉淀除去虫卵中较重的杂质 。 为增加分离效果, 可辅
以少量充气 。
(2)用饱和卤水冲淋筛分:此步操作旨在除去