12 生物技术 ——
现代生命科学的革命
12.1 生物技术定义, 主要内容和发展概况
12.2 基因工程
12.3 蛋白质工程, 发酵工程和细胞工程简介
12.4 分子诊断和基因治疗
12.5 克隆羊技术
12.6 生物芯片技术
12.7 生物技术的安全性和社会伦理问题
? 生物科学成为当今世界自然科学的热点和重
点,主要由于两方面的原因:
( 1)二十世纪后叶,分子生物学领域一系列突破
性成就,使生命科学在自然科学中的地位发生了
革命性的变化;
( 2)建立在实验室研究基础上的生物技术的发展
为人类带来了巨大的利益和财富。
? 生物技术将是未来经济发展的新动力
第一次技术革命 工业革命 解放人的双手
第二次技术革命 信息技术 扩展人的大脑
第三次技术革命 生物技术 改造生命本身
?生物技术的显著特点
高技术(精细和密集的复杂技术)
高投入(尤其是前期科研投入高)
高利润
?1982年, 国际合作与发展组织的定义为:生物技术
是应用自然科学及工程学的原理, 依靠微生物, 动
物, 植物体作为反应器将物料进行加工以提供产品
为社会服务的技术 。
? 美国政府技术顾问委员会 (OAT) 的定义是:应用生
物或来自生物体的物质制造或改进一种商品的技术,
其还包括改良有重要经济价值的植物与动物和利用
微生物改良环境的技术 。
? 该定义强调了生物技术的商品属性 。 克隆羊, 多莉,
12.1 生物技术定义、主要内容和发展概况
? 生物技术的定义
? 基因工程、细胞工程、发酵工程、蛋白质(酶)工程
此外还有 基因诊断与基因治疗技术、克隆动物技术、
生物芯片技术、生物材料技术、生物能源技术、利用
生物降解环境中有毒有害化合物的技术
? 直接相关联的学科,分子生物学、微生物学、生物化
学、遗传学、细胞生物学、化学工程学、医药学等。
? 对人类和社会生活各方面影响最大的生物技术领域:
农业生物技术、医药生物技术、环境生物技术、海洋
生物技术
? 生物技术的主要内容
? 基因工程是指在微观领
域 ( 分子水平 ) 中, 根
据分子生物学和遗传学
原理, 设计并实施一项
把一个生物体中有用的
目的 DNA(遗传信息 )转入
另一个生物体中, 使后
者获得新的需要的遗传
性状或表达所需要的产
物, 最终实现该技术的
商业价值 。
12.2 基因工程
基因工程与建筑工程
? 稀少珍贵的蛋白质药物
?1982年, 美国食品与药物管理局批准了首例基
因工程产品 — 人胰岛素投放市场 —— 它标志了
基因工程产品正式进入到商业化阶段 。
? 人生长激素, 表皮生长因子, 肿瘤坏死因子,
a-干扰素, 纤维素酶, 抗血友病因子, 红细胞
生成素, 尿激酶原, 白细胞介素 -2,集落刺激
因子, 乙肝疫苗等等
? 畜牧业中的应用
? 动物疫苗, 生长激素等
? 例,从转基因羊的羊奶
中提取出治疗心脏病的
药物 tPA
? 种植业中的应用
? 用携带外源基因的农杆菌 Ti质粒转化植物原生质体,
使外源 DNA与植物染色体 DNA整合, 通过原生质体的
培养分化成愈伤组织, 最后发育成具有新性状的完
整植株 — 转基因植物
? 种植业中的应用
? 抗化学除草剂基因
? 转基因西红柿
? 固氮酶基因
? 人类 DNA
? ……
? 环境保护等等
?, 后基因组时代, 将是, 蛋白质组学时代,,
即从对基因信息的研究转向对蛋白质信息的研
究, 包括研究蛋白质结构, 功能与应用及蛋白
质相互关系和作用 。
? 蛋白质工程就是在对蛋白质的化学, 晶体学,
动力学等结构与功能认识的基础上, 对蛋白质
人工改造与合成, 最终获得商业化的产品 。
12.3 蛋白质工程、发酵工程和细胞工程简介
? 蛋白质工程
? 蛋白质工程的主要步骤通常包括:
( 1) 从生物体中分离纯化目的蛋白;
( 2) 测定其氨基酸序列;
( 3) 借助核磁共振和 X射线晶体衍射等手段, 尽可能地了解蛋
白质的二维重组和三维晶体结构 ;
? 蛋白质工程
( 4) 设计各种处理条件, 了解
蛋白质的结构变化, 包括折叠与
去折叠等对其活性与功能的影响;
( 5) 设计编码该蛋白的基因改
造方案, 如点突变;
( 6) 分离, 纯化新蛋白, 功能
检测后投入实际使用 。
? 现代发酵工程主要指利用微
生物, 包括利用 DNA重组技术
改造的微生物在全自动发酵
罐或生物反应器中生产某种
商品的技术 。
? 现代发酵工程是生物代谢,
微生物生长动力学, 大型发
酵罐或生物反应器研制, 化
工原理等密切结合和应用的
结果 。
? 发酵工程
? 一般发酵工程包括以下基本步骤:
( 1) 菌种选育;
( 2) 细胞大规模培养即发酵过程;
( 3) 生产活性的诱导;
( 4) 菌体及产物的收获
? 发酵工程
? 发酵工程的产品范围非常广泛 。
从食品, 药品, 精细化工产品到许多工业用原
料等等生物可降解塑料 PHB等
? 细胞工程是指通过细胞水平上的筛选或改造,
获得有商业价值的细胞株或细胞系, 再通过规
模培养, 获得特殊商品的技术与过程 。
? 细胞工程包括动物细胞工程和植物细胞工程,
它们分别以动物细胞和植物细胞为主要生产对
象, 以细胞培养为主要过程和内容 。
? 细胞工程
? 动物细胞培养
? 细胞工程
? 单细胞藻类培养
? 细胞工程
? 一些单细胞低等植物
如单细胞藻类的大规
模培养成为细胞工程
的重要组成部分
? 获得蛋白质资源, 营
养食品, 精细化工产
品等等
? 高等植物细胞培养
? 细胞工程
? 高等植物细胞具有全能性 。 从高等植物的幼胚,
根, 茎, 叶, 花和果实等不同器官的组织中分离
的单个细胞, 经过特殊培养形成愈伤组织, 并可
进一步诱导生成完整的植株 。
? 细胞融合, 细胞重组, 杂交瘤技术
? 细胞工程
? 细胞融合是将不同种类的两种细胞经过特殊处理
后放在一起, 在某些促融因子作用下发生融合,
形成杂种细胞 。
? 细胞重组是把不同种类的细
胞的部件重新组合装配, 包
括核的移植, 叶绿体移植,
核糖体重建及线粒体装配等 。
? 杂交瘤技术是通过细胞融合
产生特异杂交瘤细胞 。
12.4 分子诊断和基因治疗
? 分子诊断
? 利用 PCR技术或
PCR与分子杂交
标记相结合, 可
以快速准确地检
测出病原性物质 。
? 分子诊断
? 遗传性疾病的诊断
羊水和胎盘绒毛膜检测
? 分子诊断
? 例:镰状红细胞贫血症的检测
? 一种常染色体退化遗传病
? 引起原因:基因的点突变,
? 丢失了可被 MstII或 Cvnl切
开的一个限制性内切酶位点 。
正常:三条带
患病:一条带
子女 1:正常
子女 2:患病
子女 3:携带者
? 例:特异性互补寡核苷酸法检测镰状红细胞贫血症
( 1) 提取 DNA,热处理成为单链 DNA;
( 2) 以单链 DNA为模板, 仅对可能发生突变的核苷酸区域设计引
物进行 PCR扩增后转移到滤膜上, 热变性成单链;
( 3) 分别用两种特异性互补寡核苷酸分子探针 ( ASO) 杂交 。
? 基因治疗
? 基因治疗即利用基因工程技术治疗人类遗传性疾病 。
? 正常的人类基因可以克隆并引入遗传病患者的体细
胞, 以替代, 修复或纠正有缺陷的基因 。
? 通常使用一种 反转录病毒 作为基因治疗的转移系统,
重组载体可以感染人的组织和细胞, 但不自我复制 。
? 例:重症综合性免疫缺乏症 ( SCID)
1990年,转基因 T淋巴细胞
注射到人体骨髓组织中治疗
SCID
12.5 克隆羊技术
? 1997年 2月 23日 苏格兰 Roslin研究所
Wilmut和 Campbell, Nature,杂志:
世界首例来源于哺乳动物体细胞的克隆羊“多
莉”问世
? 核移植,就是利用一个动物的体细胞的细胞核
(供体核)来取代受精或未受精卵中的细胞核,
形成一个重建的“合子”。
? 克隆原意是无性繁殖系。克隆动物就是不经过
生殖细胞的受精过程而直接由体细胞获得新的
动物个体,这个新个体是原核供体动物的拷贝。
?277次乳腺细胞核
移植实验;
? 获得 29个发育为 8
细胞的, 胚, ;
?13头代孕母亲;
?1996年 7月 5日,
羊羔 6LL3,被命
名为, 多莉, 。
? ( 1) 既然绵羊的体细胞可以被成功地克隆成一个
新的个体, 是否意味着人类也可以克隆自己呢?
? ( 2) 是否应该允许进行克隆人的实验?
12.6 生物芯片技术
? 生物芯片又称 DNA芯片或基因芯片, 它们是 DNA杂交
探针技术与半导体工业技术相结合的结晶 。 该技术
系指将大量探针分子固定于支持物上后与带荧光标
记的 DNA样品分子进行杂交, 通过检测每个探针分子
的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信
息 。
?1996年底, 美国 Affymetrix 结合照相平板印刷,
计算机, 半导体, 寡核苷酸合成, 荧光标记, 核酸
探针分子杂交和激光共聚扫描等高新技术, 研制创
造了世界第一块 DNA芯片 。
? 生物芯片技术的一般原理
A,用于微阵列芯片制作的点样仪 。 ; B,封装在卡盒中的微阵
列芯片 ; C,用于微阵列芯片荧光标记检测的激光共聚焦扫
描器; D,微阵列芯片的局部放大; E,微阵列芯片上固定
DNA探针的示意图 。 图中蓝色的 DNA链是预先固定在芯片表面
的捕获探针, 红色的 DNA链是与捕获探针互补的靶 DNA分子 。
?DNA芯片可用于大规模筛查基因突变所引起的疾病;
? 分析基因组及发现新基因等具有很大的优势;
DNA芯片技术用于基因组分析时, 具有样品用量小, 信息
量大, 分析方法简易快速, 自动化程度高等多项优点, 特别
适合于寻找新基因, 基因表达检测, 突变检测, 基因组多态
性分析和基因文库作图以及杂交测序等方面 。
? 医学, 化学, 新药开发, 司法鉴定, 农业技术和食
品技术领域也具有广泛的应用;
? 生物芯片技术的主要应用
?1998年底, 美国科学促进会将基因芯片技术列为
1998年度自然科学领域十大进展之一 。 一些科学家
把基因芯片称为, 可以随身携带的微型实验室, 。
12.7 生物技术的安全性和社会伦理问题
? 基因一旦被改动, 一方面可能引起
生物体内一系列未知的结构与功能
的变化;另一方面, 转基因操作对
生物体的影响会通过遗传传递 。
? 转基因技术的安全性问题
? 外源基因引入后, 是否会影响其他重要的调节基因, 甚至会
激活原癌基因?
? 转基因技术的广泛应用是否会导致难以消灭的新病原物出现?
? 是否会造成生态学灾难?
? 人类摄食大量转基因食品是否会影响人类及其后代的健康?
? 克隆人的伦理问题
? 在克隆阶段, 如果有关胚胎发育的基因重新编排或启动不完
全, 对新生儿可能产生什么严重后果呢?
? 兄弟, 姐妹, 父母, 子女?
? 器官克隆和干细胞培养和分化器官, 用于医学和临床治疗?
? 个人基因信息的隐私权问题
?人类基因信息利用的伦理, 法律和社会影响计划, 称之为 ELSI
项目:
( 1) 在应用和解释基因信息时的隐私权和公正性;
( 2) 基因信息由实验室研究向实际医疗应用的转化;
( 3) 人类基因组计划参与者相互协调和成果发布;
( 4) 公众与专业教育
? 基因治疗的应用问题
? 一个人有权决定另一个人的基因结构或未来命运吗?
? 万一这种基因操作失败了或者造成了将来才能发现的不可挽
回的缺陷和后果, 谁承当责任呢?
? 是否可以通过基因治疗操作来增加运动员的身高或短跑速度,
? 这与运动员服用兴奋剂有什么本质区别?
? 生物技术引发的其它问题
? 生物技术费用高, 在自身健康上的贫富差距?
? 涉及人类自身发展的重要生物技术的垄断?
? 生物武器?
? ……
生物技术是“应用生物或来自生物体的物质制造或改进一种商品的
技术,其还包括改良有重要经济价值的植物与动物和利用微生物改良
环境的技术”,通常包括基因工程、细胞工程,发酵工程和蛋白质
(酶)工程 4个方面内容。高技术、高投入、高利润是生物技术的显著
特点。
以重组 DNA操作为核心技术的过程被称为基因工程。基因工程
的发展带动和促进了蛋白质工程、发酵工程和细胞工程的发展,它们
相互补充和相互渗透,形成了生物技术的上游与下游的关系。
分子诊断是利用分子生物学的手段如 PCR、限制性酶切、克隆、
核酸杂交等对多种疾病、特别是对遗传性疾病作出早期诊断的技术。
利用基因工程技术来治疗人类遗传性疾病称为基因治疗。
克隆动物是不经过生殖细胞的受精过程而直接由体细胞获得
新的动物个体。生物芯片又称 DNA芯片或基因芯片,它们是 DNA杂交探
针技术与半导体工业技术相结合的结晶。
转基因技术的安全性问题、克隆人的伦理问题、个人基因信
息的隐私权问题、等等都是当今人类面临的由生物技术引发的新问题。
本章摘要