放射免疫分析
Radioimmunoassay
一、原理,
Ag + Ab AgAb + Ag
+
* Ag
* AgAb + * Ag
* Ag和 Ab量恒定
竞争结合
+
+
+
+
6 —
8 X100=75%
X100=50%
X100=25%
X100=12.5%
8 —
4
— 8 2
8 —
1
结论
? * AgAb复合物的量取决于 Ag的量
? Ag量越大,* AgAb量越少
? Ag量越小,* AgAb量越大
? 测量 * AgAb量或测量多余 * Ag量可推算出
Ag量
二、测量步骤
? 恒量的 * Ag,Ab加入反应管中
? 加入待测样品、或标准品（已知浓度）
? 37℃ 或 4 ℃ 温育
? 加入分离剂分离结合及游离部分
? 测定以总放射性为分母，测定 * AgAb 为分
子，计算结合 %，以结合率为纵坐标，浓
度为坐标，制作标准曲线
? 待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度
0 2 4 8 16 32 64 128
80
7
0
6
0
5
0
40
30
20
10
结
合%
浓 度
三、放免分析基本条件
? 标准品
? 标记抗原
? 特异抗体
? 分离剂 —— 分离结合与游离部分
分离剂要求
? 快速而完全分离
? 操作简便、来源容易、价格便宜
? 不受血清、外界条件及其它试剂的干扰
? 适用于任何容积的反应液
? 非特异结合率小
常用液相分离技术
? 双抗体法
?特点,
分离完全，非特异结合小，环境影响小，效价
高，但成本高
? 沉淀法 聚乙二醇（ w=6000）
?特点,
快速，价廉，来源方便，受环境影响大
常用液相分离技术（续）
? 吸附法 吸附游离部分，适用于分离小分子
游离抗原。活性炭、纤维素粉末
?特点
快速、简便、准确性差
? 盐析法 饱和硫酸胺、硫酸钠
? 固相分离技术，按材料不同，可分为试管
法、颗粒法、小盘法、纸片法
四、放免分析的优点
? 灵敏度高
? 特异性强
? 精确度高
? 用血量少
? 体外测量
单位换算
?1 g=1000mg
?1mg=1000μg
?1μg=1000ng
?1ng=1000pg
非放射性体外分析技术
非同位素标记的条件
? 灵敏度
? 结合特性
? 均一性
? 稳定性
? 环境因素的不敏感性
? 临床应用
? 安全性
? 应用性
非放射性体外分析技术
? 酶免疫分析
? 发光免疫分析
?化学发光免疫分析
?酶放大化学发光免疫分析
?电化学放光免疫分析
? 荧光免疫分析
?时间分辨荧光免疫分析或解离增强镧系荧光免疫分析
?BCPDA强荧光螯合物的时间分辨荧光免疫分析
?酶促放荧光免疫分析
?微粒子酶荧光免疫分析
?荧光偏振免疫分析
? 金属离子免疫分析
Radioimmunoassay
一、原理,
Ag + Ab AgAb + Ag
+
* Ag
* AgAb + * Ag
* Ag和 Ab量恒定
竞争结合
+
+
+
+
6 —
8 X100=75%
X100=50%
X100=25%
X100=12.5%
8 —
4
— 8 2
8 —
1
结论
? * AgAb复合物的量取决于 Ag的量
? Ag量越大,* AgAb量越少
? Ag量越小,* AgAb量越大
? 测量 * AgAb量或测量多余 * Ag量可推算出
Ag量
二、测量步骤
? 恒量的 * Ag,Ab加入反应管中
? 加入待测样品、或标准品（已知浓度）
? 37℃ 或 4 ℃ 温育
? 加入分离剂分离结合及游离部分
? 测定以总放射性为分母，测定 * AgAb 为分
子，计算结合 %，以结合率为纵坐标，浓
度为坐标，制作标准曲线
? 待测样品的结合率从标准曲线上求出浓度
0 2 4 8 16 32 64 128
80
7
0
6
0
5
0
40
30
20
10
结
合%
浓 度
三、放免分析基本条件
? 标准品
? 标记抗原
? 特异抗体
? 分离剂 —— 分离结合与游离部分
分离剂要求
? 快速而完全分离
? 操作简便、来源容易、价格便宜
? 不受血清、外界条件及其它试剂的干扰
? 适用于任何容积的反应液
? 非特异结合率小
常用液相分离技术
? 双抗体法
?特点,
分离完全，非特异结合小，环境影响小，效价
高，但成本高
? 沉淀法 聚乙二醇（ w=6000）
?特点,
快速，价廉，来源方便，受环境影响大
常用液相分离技术（续）
? 吸附法 吸附游离部分，适用于分离小分子
游离抗原。活性炭、纤维素粉末
?特点
快速、简便、准确性差
? 盐析法 饱和硫酸胺、硫酸钠
? 固相分离技术，按材料不同，可分为试管
法、颗粒法、小盘法、纸片法
四、放免分析的优点
? 灵敏度高
? 特异性强
? 精确度高
? 用血量少
? 体外测量
单位换算
?1 g=1000mg
?1mg=1000μg
?1μg=1000ng
?1ng=1000pg
非放射性体外分析技术
非同位素标记的条件
? 灵敏度
? 结合特性
? 均一性
? 稳定性
? 环境因素的不敏感性
? 临床应用
? 安全性
? 应用性
非放射性体外分析技术
? 酶免疫分析
? 发光免疫分析
?化学发光免疫分析
?酶放大化学发光免疫分析
?电化学放光免疫分析
? 荧光免疫分析
?时间分辨荧光免疫分析或解离增强镧系荧光免疫分析
?BCPDA强荧光螯合物的时间分辨荧光免疫分析
?酶促放荧光免疫分析
?微粒子酶荧光免疫分析
?荧光偏振免疫分析
? 金属离子免疫分析
