6,生物监测技术
崔兆杰
2004.6
6,生物监测技术
? 生物监测技术是用生物评价技术和方法对环境中某一生物系
统的质量和状况进行测定，它可以弥补理化监测不足，配合
物理化学监测，或者成为综合的环境监测手段
? 特点：
? 生物监测所反映的是自然的和综合的污染状况
? 生物可以选择性地富集某些污染物可以作为早期污染的报警器。
? 可以监测污染效应的发展动态
? 内容：
? 生物群落监测法
? 生物残毒监测
? 细菌学监测
? 急性毒性试验
? 致突变物监测
6.1 水体污染生物群落监测技术
?水体污染的生物群落监测即为水污染生态学
监测，主要是根据浮游生物在不同污染带中
出现的物种频率或相对数量或通过数学计算
所得出的简单指数值来作为水污染程度的指
标的监测方法
?污水生物体系法
?生物指数法 (BI)
?水生植物法
6.1.1 污水生物体系法
? 根据在污染水体中生物种类的存在与否，划分污水
生物体系，确定不同污染程度水体中的指示生物。
反之，根据水体中的指示生物的存在亦可确定水体
污染程度，又称柯克维茨 (Kolkwitz)和麦尔松
(Marsson)体系法
? 当一河流被污染后．在其下游相当长的流积内，水
体发牛一系列自净过程，一方面污染程度逐渐降低，
同时出现持有的指示生物
? 形成几个连续污染带：多污带,α — 中污带,β 中
污带和寡污带等四级
6.1.1 污水生物体系法
1,多污带
? 多污带也称多污水域，是多污水生物生存的地带
? 它多处在污水、废水入口处，其水高度浑浊，多呈
暗灰色，具有强烈的硫化氢臭味，并含有大量的有
机物
? 多污带生化需氧量很高，而溶解氧趋于零，其细菌
数量大、种类多，每升水中细菌数目达百万个以上，
甚至达数亿个
? 多污带指示生物有浮游球衣细茵、贝氏硫细菌、李
衣藻、颤蚯蚓、钟形虫等等。
6.1.1 污水生物体系法
2,中污带
(1)α — 中污带水质呈灰色，近于多污带，水体除还原作用
外．已出现氧化作用，如底泥中的硫化铁部分被氧化生
成氢氧化铁。蓝藻、绿藻等已有生成，原生动物的太阳
虫、吸管虫等已出现，且贝藻类等少数软体动物亦可在
此生存。此带的指示生物有大颤藻、小额藻、小球淡、
臂尾水软虫等等。
(2)β --中污带中氧化作用已占优势、绿色植物大量出现，
溶解氧增加，硅藻、绿藻等大量出现，细菌数量显著减
少，双鞭毛虫类、贝类、各种昆虫大量出现，已有色类。
此带的指示生物有水生束丝藻，变异直链硅藻、蚤状水
蚤、大型水蚤、帆口虫、巨环旋轮虫等等
6.1.1 污水生物体系法
3,寡污带
? 寡污带又称贫污带，此带已完成自净作用，有机物
已被氧化或矿化，溶解氧近饱和生物需氧量小于
3mg/L，浑浊度低，水细菌数量极少
? 寡污带生物学特征是有大量显化植物生存，各种昆
虫和鱼类种类较多
6.1.2 生物指数 (BI)法
1,培克法
? 培克 (Beck)于 1955年首先提出以生物指数来评价水体污染的程度
? 他按两栖大型无脊椎动物对有机污染的敏感和耐性分成两类，并规定在 环境条件相近似的河段，采集 — 定面的底栖动物，进行种类鉴定
6.1.2 生物指数 (BI)法
2,津田松苗法
? 津田松苗 (日 )从 60年代起多次对培克生物指数作了修改，他提出不限定
采集面积，出 4— 5人在一个点上采集 30min，尽量把河段各种大型底栖
动物采集完全，然后对所得生物样进行鉴定、分类，并采用与上述相同
方法计算
6.1.2 生物指数 (BI)法
3,多样性指数
?多样性指数的特点是定量反映群落结构的种
类、数量及群落中类种组成比例变化的信息
?应用多样性指数虽能定量地反映群落结构，
但不能反映个体生态学信息及各类生物的生
理特性，也不能反映由于水中营养盐类的变
化，可能引起的群落的改变等等
6.1.3 水生生物法
? 藻类对重金属浓缩、富集规律：
1．污染区植物体中重金属含量高于非污染区。
2．河口区植物体中重金属含量高于其他区。
3．河流、湖泊底质中重金属含量高，则植物体中的重金属
含量高。
4．不同类型水生植物对重金属的吸收积累能力为：沉水植
物＞飘浮、浮叶植物＞挺水植物
5．重金属在水生植物体中的含量：根部大于茎、叶部位
? 利用水生植物进行生物学评价时，需要首先确定评
价标准。然后布点，采样，进行监测，最后经统计
评价，划分水质等级
6.1.3 水生生物法
1,浮游藻类监测法
? 浮游藻类的监测主要是对硅藻种类比例统计
① 样品的前处理
? 一般样品要经浓缩，并经蒸馏水清洗，最后浓缩
至 5ml，然后吸取均匀混合样均匀覆盖一整片清洗
过的盖片，蒸发至干。经最后一次蒸发至干，将
盖片放在载片的中央 (样品面朝上 )，在 300一
500℃ 电热板上灼烧 (载片在下 )20一 45min。冷却
后即可封固
6.1.3 水生生物法
② 封片
? 先置一点封片胶 (Hyrax胶 )干清洗的载片上，将上述灼烷过
的盖片盖上 (样品面朝下 )，在 90℃ 左右加热去除溶剂，然
后降低温度，在封片胶不沸腾时，用两根火柴棒同时向两
边轻轻压挤盖片，让多余的胶溢出四周，使封注尽可能的
薄。冷却后，用单面刀片刮去溢出的胶 (刮下的胶不可再度
封注 )，即可进行镜检
③ 计数及计算
? 硅藻的分类计数在 10× l0倍 (至少在 900× )油镜下进行。通
常用测微尺按长条计数法分类计数至少 250个硅藻，用划
“正”的方法记录每种的个体数 n1,n2除以计数的硅藻总个
体数 Σn1，再乘 100％，即得每种硅藻的百分比。原水样每
毫升中任何一种硅藻的个体数等干原水样每毫升中硅藻总
数 (活细胞数加空壳数 )乘以该种硅藻百分比
6.1.3 水生生物法
2,浮游动物监测法
① 活体观察与记录
? 原生动物和轮虫的分类，应进行活体观察 (在现场
或回实验室 )并应作好记录
② 样品的浓缩
? 一般采用沉淀 — 倾泻法
③ 镜检计数及计算
? 浮游动物的计数采用 1ml计数框，计数方法同浮游
植物，结果为每毫升原水样中含原生动物个数
6.1.3 水生生物法
3,底栖动物监测法
① 监测的原则和方法
? 当见软体动物和水栖寡毛类可以鉴别到种，颤蚓类需要观察成熟的生殖
器官，故需要制片在显微镜下观察，由低倍到高倍，一般用甘油做透明 剂，鉴定完毕即可将标本放回原瓶，以便计数
? 水生昆虫除摇蚊科幼虫外，皆可在解剖镜下鉴定到届，在低倍镜下确定
目、科，高倍镜下对照资料鉴定到属，摇蚊科幼虫主要依据口器的结构 差异来定属、种
② 计数和结果表达
? 将每个采样站的底栖动物种类及其数量 (个体数 )进行准确、系统的统计。
用采泥器取样，推算出每平方米数量，包括每种的数量和总量
? 将每个采样站的底栖动物种类 (先列水生昆虫，再列软体动物、水栖寡毛
类及其它 )统计数量填人表
6.2 植物空气污染监测技术
? 空气是生物赖以生存的条件，当空气受到污染时，某些植物
就会有不同程度的反映。利用植物对空气污染的异常反映可
以监测空气污染的种类和含量，这就是植物空气污染监测
? 植物受空气污染物的伤害一般分为两类：受高浓度污染物的
侵袭时，短期内即在叶片上出现坏死伤斑，称为急性伤害；
长期与低浓度污染物接触时，因长期受阻、发育不良，出现
失绿早衰的现象称为慢性伤害
? 植物的抗性分类：
? 抗性强的植物
? 抗性中等的植物
? 敏感性植物
? 氟化物污染的指示植物
? 当氟的积累量超过一定限度的浓度时，就使叶子遭受伤
害，被伤害组织和正常组织之间的区带呈现明显的褐色
特征。在一般情况下，叶尖和叶边缘 (尤其是前叶边缘 )最
先受害，变成灰白色或褐色。在叶脉间也形成类似二氧
化硫伤害所出现的斑点
? 作为氯化物污染的指示植物有唐菖蒲、郁金香、葡萄、
雪松等，它们对氟化物都很敏感
? 氮氧化物和免化剂的指示植物
? 氯氧化物的指示植物有烟草、菠菜、豆类和番茄等
? 对光化烟雾敏感的植物有烟草、菠菜、大麦、燕麦、甜
菜、牵牛花、番茄、秋海棠、蔷薇等
6.2.2 植物群落监测法
? 在一定地段的自然环境条件下，由一定的植物种类
结合在一起，成为一个有规律的组合，每一个这样
的组合单位叫做一个植物群落，群落中的植物与植
物间、植物与环境间彼此依存、互相制约，存在着
复杂的相互关系
? 空气污染的情况下，植物群落中各种植物由于它们
对污染质敏感性的差异，其反应有着明显的不同。
因此、分析植物群落中各种植物的反应，利用植物
及其群落光合速率和呼吸速率的测定，可以估测该
地区的空气污染程度
6.2.2 植物群落监测法
1,测定仪器及原理
? 在植物进行光合作用时测得的光合作用是总
光合作用和呼吸 (暗呼吸和光呼吸 ]作用之差，
即净光合速率
? 植物光合速率和植物的呼吸速率现在常用红
外线气体分析仪或光合作用测定仪测定
6.2.2 植物群落监测法
① CO2定量系统
? 红外线 CO2分析仪
? 红外线气体分析仪的设计原理是由异原子组成的双原子
气体分子对红外光的吸收
? 红外线气体测定法分为升路法和闭路法
? 红外线 CO2测定仪有台式和便携式两类
? 除湿装置：干燥塔。
? 除尘过滤器：陶瓷过滤器、过滤嘴。
? 零气装置：零气指不含 CO2的气体，通常用纯 N气
钢瓶或碱石灰或碱石棉管作零气装置
6.2.2 植物群落监测法
② 同化箱系统
? 同化箱：
? 由活动支架和
透明薄膜套组
成其大小尺寸
按被测定植物
而有相应的变
化。
? 空气调节器
6.2.2 植物群落监测法
③ 气路系统
(1)各种规格的塑料管道 (以无色
透明或白色为宜 )。
(2)流量测定装置；电风速仪、转
子流量计。
(3)气体动力设备：气泵、鼓风机
④ 4．附属设备
(1 ) 光合测定车。
(2)电源装置，发电机组。
(3)测定生态因子的仪器：辐射仪 (或光量子仪 )，温度计，湿度计，土
壤水分测定仪。
(4)叶面积仪。
(5)精密天平 (感量,1／ 1000g)
6.2.2 植物群落监测法
2,草地和农田群落的测定
? 该法可直接用于低矮植物群落，如草地、农田群落
等的测定，也可用于测定森林乔木冠层。
? 植物群落的光台速率和呼吸速率可分别用单位时间
单位群落 (地 )面积内所有植物的光台速率和呼吸速
率来表示，单位为 μmol／ (m2·s)
? 为排除土壤呼吸对测定结果的干扰，可在同化箱覆
盖的地面裸地上铺上塑料布，以尽量减少上壤呼吸
过程中释放的 CO2。或者，测定土壤呼吸
6.2.2 植物群落监测法
① 测定
? 测定前，对红外线气体分析仪进行预热、标定，
并记录标定时的气压和温度。同时安装测定系统。
将选定佯地的植株罩于相应大小的同化箱内
? 测定时，首先调整零点。接通测定系统，并根据
测定需要调节同化箱内的有关环境因子。待仪器
读数稳定后，记录 CO2浓度数值和相应的同化箱
内的气体流量和温度、湿度，以及空气温度、湿
度,CO2浓度和光照强度
6.2.2 植物群落监测法
② 结果计算
a,作物群落净光合速率的计算
a) 其一时间段其一样本的净光合速率计算
6.2.2 植物群落监测法
b) 群落净光合速率的计算
6.2.2 植物群落监测法
b,群落呼吸速率的计算
a) 各时间段呼吸速率计算
6.2.2 植物群落监测法
b) 群落呼吸速率的计算
6.2.2 植物群落监测法
3,森林群落的测定
? 森林群落的光合速率常通过分别测定其乔木层、灌木层和草
本层的光合速率后求和而得到。相应地，它的呼吸速率是通
过分别测定其乔木层、灌木层和草本层的呼吸速率后求得
? 测定的点应尽可能分布在林内不同的高度和树干的不同方向
上，并且照顾到不同叶龄的叶片。先作好如下工作：
(1)样点的选择：在待测森林群落的每一样地内的每个种类选择健壮正
常立木若干。每株至少选五个样本 (即不同高度、主杆的不同方向、
不同发育阶段 )，每个样点可以用一片叶 (阔叶树 )或一个枝 (如针叶树
等 )来代表
(2)样地的描述：将样地的基本特征包括森林的名称，种类成分，生长
阶段等作比较详细的记录。
(3)测定时刻环境因子描述：每次测定需首先将环境因子包括光照强度、
日照时间温度、湿度、风速与风向等都记录在预制的表格中
6.2.2 植物群落监测法
① 1．森林群落的净光台速率的测定
? (1)将选定样点的样枝或样叶置于同化室 (箱 )内，用便携式或台式、单
或多通道红外 CO2测定仪测定各个样本同化箱出气口的 CO2浓度 (C2),
在每次测定前需首先测定空气中的 CO2浓度 (C1)
? (2)乔木层叶面积求算,测定森林群落的叶面积指数的通常做法是选择样
枝，通过叶面积和重量的相关性测定样枝的叶面积，从而估算整株和
整个乔木层的叶面积指数
? (3)乔木层的净光合速率的计算公式如下：
? (4)森林群落净光台速率的计算
6.2.2 植物群落监测法
② 森林群落呼吸速率的测定
? (1)灌草本层呼吸速率的测定：同草地和农田群落呼吸速率的测定。
? (2)乔木层呼吸速率的测定：白天在每次每样本光合速率测定完后，需
立即测定一次呼吸作用。白天呼吸速率的测定是在同化箱外罩一块黑
红布，目的是使测试样品脱离光源，而在晚上则无需布罩
? (3)群落呼吸速率的计算,利用各个时间段内的呼吸速率 Rj，可以计算群
落的平均呼吸速率 (R)
6.3 细菌检验监测技术
? 细菌总数法是细菌学检验法的一种主要方法。它是指 1mL水
样在营养琼脂培养基上，于 37℃ 经 24h培养后所生长的细菌
茵落的总数
? 细菌总数是检验一般水域污染的标志
6.3.1 细菌总数的监测技术
? 测定细菌总数的主要程序：
1,灭菌
(1)于热灭菌：将试管、平皿、吸管等玻璃仪器，装入于热灭菌箱中
160℃ 灭菌 2h
(2)高压蒸汽灭菌：稀释水、培养基、采样瓶等置于高压蒸汽灭菌中，
经 115℃ (10磅／ in2)高压蒸汽灭菌 20min。
(4)蒸汽灭菌：采用蒸汽灭菌器，在 100℃ 常压下，每次定时灭菌。
(5)火焰灭菌：此法灭菌时应用远火徐徐加热．然后再于火焰焰心灼烧
为妥
2．营养琼脂培养基的制备：称取 108蛋白胨,3g牛肉膏,5g
氯化钠及 10一 20g琼脂溶于 1000m1蒸馏水中，加热至琼脂
溶解，调节 PH为 7,4— 7,6过滤，分装于玻璃容器中，
经高压蒸汽灭菌 20min，贮于冷暗处备用
6.3.1 细菌总数的监测技术
3．试样培养
(1)取定量混合均匀的水样 (或稀释后水样 )注入灭菌平皿中，
倾入 15ml已融化并冷至 45℃ 左右的营养琼脂培养基，旋
摇平皿使其混合均匀。应做两份实验。
(2)待平皿上试样凝固后，将平皿倒置于恒温箱中 37℃ 培养
24h，然后进行菌落计数。
(3)用营养琼脂培养基同时进行空白对照实验
4,菌落计数：作平皿菌落计数时，可用眼观察，也可
用放大镜观察，求出 1ml水中的干均菌落数。进行
稀释水样计数时，应采用平皿内有 30一 300个苗落
的稀释度进行计算
6.3.2 大肠杆菌的监测技术
?大肠杆菌 (Eshllus coli)是指示粪便污染的重要
指示生物
?在大肠菌群系一群需氧又兼性厌氧的，在
37℃ 生长时能使乳糖发酵，在 24h内产酸产
气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。大肠苗群数指
每升水样中所含有的大肠菌群的数目
?大肠菌群检验方法有发酵法和滤膜法
6.3.2 大肠杆菌的监测技术
1,发酵法
? 这是根据大肠菌群使乳糖发酵产生酸和气的特性而
进行检验，如产破产气者，大肠菌群则为阳性
? 培养基的种类：
(1)乳精蛋白胨培养液；
(2)三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液；
(3)品红亚硫酸钠培养基 (供发酵用 )
(4)伊红美蓝培养基
6.3.2 大肠杆菌的监测技术
? 检验大肠菌群主要程序
? 初步发酵试验：初步发酵试验在灭菌操作条件下，取定量水样加入 3
倍浓缩乳糖蛋白陈培养液中，于 37℃ 恒温培养 24h
? 平板分离：经 24h培养后，将产破产气及只产酸的发酵管，分别接种
于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基上，再恒温培养 24h，然后
分别选择菌落
? 复发酵试验：上述涂片镜检茵落如为革兰氏阴性无芽脑杆菌，可进
一步挑取该菌落的另一部分接种于乳糖蛋白胨培养液中，于 37℃ 恒
温培养 24h，有产酸产气者，即证实有大肠茵群存在
? 大肠菌群计数：根据以上试验证实有大肠茵群存在的阳性管数，查
大肠苗群检数表，报告每升水样中大肠菌群数
6.3.2 大肠杆菌的监测技术
2,滤膜法
? 滤膜是采用一种微孔薄膜，按灭菌操作将水样注入
具有滤膜的过滤器中，经抽滤，细菌被截国在膜上，
后将滤膜贴于品红亚硫酸钠培养基上，进行恒温培
养 16— 18h，符合上法所述特征的菌落进行涂片，
革兰氏染色，镜检
? 凡属革兰氏染色阴性，无芽胞杆菌者，再接种于乳
糖蛋白胨培养 18h产酸产气者，判断为大肠菌群阳
性
? 1L水样中大肠菌群数等于滤膜上生长的大肠菌群落
总数乘以 3
6.4生物毒性试验监测技术
6.4.1 水生生物急性毒性试验
? 水生生物急性毒性试验 (acute toxicity test for
aquatic organism)是测定高浓度污染物在短时期 (一
船不超过几天 )内对水生生物所产生的急性毒性作用，
用以评价污染物毒性的实验方法
? 通过水生生物急性毒住试验可以确定半数存活浓度
(TLm)或半数致死浓度 (TL50)．并用来评价污染物的
毒性大小和性质。
? 还可粗略了解毒物引起生物体中毒的症状和特点，
以判断毒物的毒性强弱和水环境的污染程度，并为
制定在环境中的毒物最大容许浓度提供基本数据
6.4.1 水生生物急性毒性试验
1,试验生物的选择
? 常用的是小型水生生物，主要是鱼
? 为了避免受试生物个体差异过于悬殊，应选择种
属较纯，年龄、大小、体重差别不大．雌雄性别
各半的动物
2,试验容器及设备
? 饲养水槽
? 试验容器
? 恒温设备
6.4.1 水生生物急性毒性试验
3,实验方法
? 将受试鱼随机分组
? 试验前，受试动物要在实验室内饲养 7— 10d，以观察其活
动是否正常
? 试验期间，对照组动物的死亡串应低于 5％
? 急性毒性试验期间一般不喂食，从致毒开始就观察记录动物
中毒表现，生理、生化变化和死亡情况，并将观察结果在半
对数坐标纸上用内插法或外推法求出动物的 LC50,动物全部
死亡的最小浓度 (LC100)和动物全部存活的最大毒物浓度 (LC0)
即最大耐受浓度
? 急性毒性试验的结果同受试动物的种属和稀释水的水质等因
素有关
6.4.1 水生生物急性毒性试验
4,应用系数 (鱼类毒性试验 )
?根据急性毒性试验求得的半数致死浓度 (LC50)
或半数存括浓度 (TLm)，推算化学物质对鱼类
的安全浓度而采用的一种常数
6.4.2 水生生物亚急性毒性试验
? 水生生物亚急性毒性试验 (suhacute toxicity test for
aquatic ogansism)是测定低浓度污染物在较长时期
(一般不超过 3个月 )内对水生生物所产生的毒性作用，
用以评价污染物毒性的一种实验方法
? 进行亚急性毒性试验可以研究污染物对生物的作用
方式和致毒机理；通过这种试验可以利用生物对污
染物的反应预报污染物的慢性毒性,而试验的结果则
可以为制定水质标准提供依据
6.4.2 水生生物亚急性毒性试验
1,试验方法
? 细胞培养是测定污染物亚急性毒性的灵敏而可靠
的方法之一
? 组织病变是亚急性毒性常见的一种反应，也是亚
急性毒性试验的重要指标之一
? 污染物亚急性毒性作用可引起色类血相、呼吸代
谢和酶的活性等生理、生化的变化。对这些变化
的测定，可以反映毒物的亚急性毒性作用
6.4.2 水生生物亚急性毒性试验
2,有关指标
? 耗氧率
? 鳃盖活动频率或呼吸率
? 咳嗽频率
? 存在问题：
? 缺乏水生生物正常的生理、生化和行为的资料，因而难
以确定试验所观察到的变化是否在生物正常变幅以内
? 这种变化究竞是适应性的 (导致种群的维持或扩大 )，还是
破坏性的 (导致种群的毁灭 )，暂时还不能下结论
6.4.3 水生生物慢性毒性试验
? 水生生物慢性毒性试验 (chromic toxicity test for
aquatic or ganism)是测定低浓度污染物对水生生物
生活周期内的毒性作用，用以评价污染物毒性的实
验方法
1,试验方法
? 慢性毒性试验可在水生生物的生长、繁殖、卵的孵
化和幼体发育等生命活动的各个主要阶段进行。在
实验室条件下，一般要使用流水装置，以保持毒物
浓度恒定；还要保持生物良好的生活条件，如食物、
氧气,pH值等。所得到的存括率、生长率、产卵率
和孵化率等数据最后用统计方法处理
6.4.3 水生生物慢性毒性试验
2,有关指标
?体长
?体重
?骨胶原或核糖核酸 (RNA)和去氧核糖核酸
(DNA)之比
6.4.3 水生生物慢性毒性试验
3,试验周期
? 一次试验所需的时间同受试生物种类有关，如以鱼
类为试验对象，一般需一年左右,对于一些危害大的
累积性污染物如甲基汞、镐和铅等，慢性毒试验不
仅要包括一个生活周期，而且要延续三代
? 水生生物慢性毒性试验周期较长。为了缩短周期，
一是寻求性成熟时间短的生物作试验对象 ;二是探索
用短期毒性预报慢性毒性的可能性
6.4.3 水生生物慢性毒性试验
4,毒物最大容许浓度
?毒物最大容许浓度 (maximum allowable
concentration for taxicant)指在慢性毒性试验
中，毒物对受试生物无影响的最高浓度和有
影响的最低浓度之间的阈浓度
?在鱼类慢性毒性试验中，常采用受试鱼的生
产指数来测定化学物质的最大容许浓度
6.4.4 鱼类急性毒性试验操作
? 对鱼类进行急性毒理试验，最主要的是半致死浓
度试验 (median toleranco limit 缩写 MTL)
1,选择供试鱼
? 选用大马哈鱼，每尾体重在 0.15一 0.50g范围之内均可。
同一试验使用的鱼应取自同一条件，而且，鱼体的重量
也应大致相同
2,排水和稀释水的准备
? 所用排水装满采样瓶后封闭
? 用于稀释排水的水，采用不合可疑成分的 pH为 6,6--
7,4，硬度为 10--70mg/L的清净水
3,试验条件的选择
? 实验时间
? 实验水温
? 鱼数目
? 浓度选择
4,试验
? 进行试验的同时，还要另用稀释水做并列对照试验
? 试验进行之前和结束时，都要对稀释水的溶解氧和 pH等
进行测定
5.TLm值的计算与表示
6,注意事项
?大马哈鱼的饲养问题
?试验毒物问题
?试验操作中需特殊处理的污水
崔兆杰
2004.6
6,生物监测技术
? 生物监测技术是用生物评价技术和方法对环境中某一生物系
统的质量和状况进行测定，它可以弥补理化监测不足，配合
物理化学监测，或者成为综合的环境监测手段
? 特点：
? 生物监测所反映的是自然的和综合的污染状况
? 生物可以选择性地富集某些污染物可以作为早期污染的报警器。
? 可以监测污染效应的发展动态
? 内容：
? 生物群落监测法
? 生物残毒监测
? 细菌学监测
? 急性毒性试验
? 致突变物监测
6.1 水体污染生物群落监测技术
?水体污染的生物群落监测即为水污染生态学
监测，主要是根据浮游生物在不同污染带中
出现的物种频率或相对数量或通过数学计算
所得出的简单指数值来作为水污染程度的指
标的监测方法
?污水生物体系法
?生物指数法 (BI)
?水生植物法
6.1.1 污水生物体系法
? 根据在污染水体中生物种类的存在与否，划分污水
生物体系，确定不同污染程度水体中的指示生物。
反之，根据水体中的指示生物的存在亦可确定水体
污染程度，又称柯克维茨 (Kolkwitz)和麦尔松
(Marsson)体系法
? 当一河流被污染后．在其下游相当长的流积内，水
体发牛一系列自净过程，一方面污染程度逐渐降低，
同时出现持有的指示生物
? 形成几个连续污染带：多污带,α — 中污带,β 中
污带和寡污带等四级
6.1.1 污水生物体系法
1,多污带
? 多污带也称多污水域，是多污水生物生存的地带
? 它多处在污水、废水入口处，其水高度浑浊，多呈
暗灰色，具有强烈的硫化氢臭味，并含有大量的有
机物
? 多污带生化需氧量很高，而溶解氧趋于零，其细菌
数量大、种类多，每升水中细菌数目达百万个以上，
甚至达数亿个
? 多污带指示生物有浮游球衣细茵、贝氏硫细菌、李
衣藻、颤蚯蚓、钟形虫等等。
6.1.1 污水生物体系法
2,中污带
(1)α — 中污带水质呈灰色，近于多污带，水体除还原作用
外．已出现氧化作用，如底泥中的硫化铁部分被氧化生
成氢氧化铁。蓝藻、绿藻等已有生成，原生动物的太阳
虫、吸管虫等已出现，且贝藻类等少数软体动物亦可在
此生存。此带的指示生物有大颤藻、小额藻、小球淡、
臂尾水软虫等等。
(2)β --中污带中氧化作用已占优势、绿色植物大量出现，
溶解氧增加，硅藻、绿藻等大量出现，细菌数量显著减
少，双鞭毛虫类、贝类、各种昆虫大量出现，已有色类。
此带的指示生物有水生束丝藻，变异直链硅藻、蚤状水
蚤、大型水蚤、帆口虫、巨环旋轮虫等等
6.1.1 污水生物体系法
3,寡污带
? 寡污带又称贫污带，此带已完成自净作用，有机物
已被氧化或矿化，溶解氧近饱和生物需氧量小于
3mg/L，浑浊度低，水细菌数量极少
? 寡污带生物学特征是有大量显化植物生存，各种昆
虫和鱼类种类较多
6.1.2 生物指数 (BI)法
1,培克法
? 培克 (Beck)于 1955年首先提出以生物指数来评价水体污染的程度
? 他按两栖大型无脊椎动物对有机污染的敏感和耐性分成两类，并规定在 环境条件相近似的河段，采集 — 定面的底栖动物，进行种类鉴定
6.1.2 生物指数 (BI)法
2,津田松苗法
? 津田松苗 (日 )从 60年代起多次对培克生物指数作了修改，他提出不限定
采集面积，出 4— 5人在一个点上采集 30min，尽量把河段各种大型底栖
动物采集完全，然后对所得生物样进行鉴定、分类，并采用与上述相同
方法计算
6.1.2 生物指数 (BI)法
3,多样性指数
?多样性指数的特点是定量反映群落结构的种
类、数量及群落中类种组成比例变化的信息
?应用多样性指数虽能定量地反映群落结构，
但不能反映个体生态学信息及各类生物的生
理特性，也不能反映由于水中营养盐类的变
化，可能引起的群落的改变等等
6.1.3 水生生物法
? 藻类对重金属浓缩、富集规律：
1．污染区植物体中重金属含量高于非污染区。
2．河口区植物体中重金属含量高于其他区。
3．河流、湖泊底质中重金属含量高，则植物体中的重金属
含量高。
4．不同类型水生植物对重金属的吸收积累能力为：沉水植
物＞飘浮、浮叶植物＞挺水植物
5．重金属在水生植物体中的含量：根部大于茎、叶部位
? 利用水生植物进行生物学评价时，需要首先确定评
价标准。然后布点，采样，进行监测，最后经统计
评价，划分水质等级
6.1.3 水生生物法
1,浮游藻类监测法
? 浮游藻类的监测主要是对硅藻种类比例统计
① 样品的前处理
? 一般样品要经浓缩，并经蒸馏水清洗，最后浓缩
至 5ml，然后吸取均匀混合样均匀覆盖一整片清洗
过的盖片，蒸发至干。经最后一次蒸发至干，将
盖片放在载片的中央 (样品面朝上 )，在 300一
500℃ 电热板上灼烧 (载片在下 )20一 45min。冷却
后即可封固
6.1.3 水生生物法
② 封片
? 先置一点封片胶 (Hyrax胶 )干清洗的载片上，将上述灼烷过
的盖片盖上 (样品面朝下 )，在 90℃ 左右加热去除溶剂，然
后降低温度，在封片胶不沸腾时，用两根火柴棒同时向两
边轻轻压挤盖片，让多余的胶溢出四周，使封注尽可能的
薄。冷却后，用单面刀片刮去溢出的胶 (刮下的胶不可再度
封注 )，即可进行镜检
③ 计数及计算
? 硅藻的分类计数在 10× l0倍 (至少在 900× )油镜下进行。通
常用测微尺按长条计数法分类计数至少 250个硅藻，用划
“正”的方法记录每种的个体数 n1,n2除以计数的硅藻总个
体数 Σn1，再乘 100％，即得每种硅藻的百分比。原水样每
毫升中任何一种硅藻的个体数等干原水样每毫升中硅藻总
数 (活细胞数加空壳数 )乘以该种硅藻百分比
6.1.3 水生生物法
2,浮游动物监测法
① 活体观察与记录
? 原生动物和轮虫的分类，应进行活体观察 (在现场
或回实验室 )并应作好记录
② 样品的浓缩
? 一般采用沉淀 — 倾泻法
③ 镜检计数及计算
? 浮游动物的计数采用 1ml计数框，计数方法同浮游
植物，结果为每毫升原水样中含原生动物个数
6.1.3 水生生物法
3,底栖动物监测法
① 监测的原则和方法
? 当见软体动物和水栖寡毛类可以鉴别到种，颤蚓类需要观察成熟的生殖
器官，故需要制片在显微镜下观察，由低倍到高倍，一般用甘油做透明 剂，鉴定完毕即可将标本放回原瓶，以便计数
? 水生昆虫除摇蚊科幼虫外，皆可在解剖镜下鉴定到届，在低倍镜下确定
目、科，高倍镜下对照资料鉴定到属，摇蚊科幼虫主要依据口器的结构 差异来定属、种
② 计数和结果表达
? 将每个采样站的底栖动物种类及其数量 (个体数 )进行准确、系统的统计。
用采泥器取样，推算出每平方米数量，包括每种的数量和总量
? 将每个采样站的底栖动物种类 (先列水生昆虫，再列软体动物、水栖寡毛
类及其它 )统计数量填人表
6.2 植物空气污染监测技术
? 空气是生物赖以生存的条件，当空气受到污染时，某些植物
就会有不同程度的反映。利用植物对空气污染的异常反映可
以监测空气污染的种类和含量，这就是植物空气污染监测
? 植物受空气污染物的伤害一般分为两类：受高浓度污染物的
侵袭时，短期内即在叶片上出现坏死伤斑，称为急性伤害；
长期与低浓度污染物接触时，因长期受阻、发育不良，出现
失绿早衰的现象称为慢性伤害
? 植物的抗性分类：
? 抗性强的植物
? 抗性中等的植物
? 敏感性植物
? 氟化物污染的指示植物
? 当氟的积累量超过一定限度的浓度时，就使叶子遭受伤
害，被伤害组织和正常组织之间的区带呈现明显的褐色
特征。在一般情况下，叶尖和叶边缘 (尤其是前叶边缘 )最
先受害，变成灰白色或褐色。在叶脉间也形成类似二氧
化硫伤害所出现的斑点
? 作为氯化物污染的指示植物有唐菖蒲、郁金香、葡萄、
雪松等，它们对氟化物都很敏感
? 氮氧化物和免化剂的指示植物
? 氯氧化物的指示植物有烟草、菠菜、豆类和番茄等
? 对光化烟雾敏感的植物有烟草、菠菜、大麦、燕麦、甜
菜、牵牛花、番茄、秋海棠、蔷薇等
6.2.2 植物群落监测法
? 在一定地段的自然环境条件下，由一定的植物种类
结合在一起，成为一个有规律的组合，每一个这样
的组合单位叫做一个植物群落，群落中的植物与植
物间、植物与环境间彼此依存、互相制约，存在着
复杂的相互关系
? 空气污染的情况下，植物群落中各种植物由于它们
对污染质敏感性的差异，其反应有着明显的不同。
因此、分析植物群落中各种植物的反应，利用植物
及其群落光合速率和呼吸速率的测定，可以估测该
地区的空气污染程度
6.2.2 植物群落监测法
1,测定仪器及原理
? 在植物进行光合作用时测得的光合作用是总
光合作用和呼吸 (暗呼吸和光呼吸 ]作用之差，
即净光合速率
? 植物光合速率和植物的呼吸速率现在常用红
外线气体分析仪或光合作用测定仪测定
6.2.2 植物群落监测法
① CO2定量系统
? 红外线 CO2分析仪
? 红外线气体分析仪的设计原理是由异原子组成的双原子
气体分子对红外光的吸收
? 红外线气体测定法分为升路法和闭路法
? 红外线 CO2测定仪有台式和便携式两类
? 除湿装置：干燥塔。
? 除尘过滤器：陶瓷过滤器、过滤嘴。
? 零气装置：零气指不含 CO2的气体，通常用纯 N气
钢瓶或碱石灰或碱石棉管作零气装置
6.2.2 植物群落监测法
② 同化箱系统
? 同化箱：
? 由活动支架和
透明薄膜套组
成其大小尺寸
按被测定植物
而有相应的变
化。
? 空气调节器
6.2.2 植物群落监测法
③ 气路系统
(1)各种规格的塑料管道 (以无色
透明或白色为宜 )。
(2)流量测定装置；电风速仪、转
子流量计。
(3)气体动力设备：气泵、鼓风机
④ 4．附属设备
(1 ) 光合测定车。
(2)电源装置，发电机组。
(3)测定生态因子的仪器：辐射仪 (或光量子仪 )，温度计，湿度计，土
壤水分测定仪。
(4)叶面积仪。
(5)精密天平 (感量,1／ 1000g)
6.2.2 植物群落监测法
2,草地和农田群落的测定
? 该法可直接用于低矮植物群落，如草地、农田群落
等的测定，也可用于测定森林乔木冠层。
? 植物群落的光台速率和呼吸速率可分别用单位时间
单位群落 (地 )面积内所有植物的光台速率和呼吸速
率来表示，单位为 μmol／ (m2·s)
? 为排除土壤呼吸对测定结果的干扰，可在同化箱覆
盖的地面裸地上铺上塑料布，以尽量减少上壤呼吸
过程中释放的 CO2。或者，测定土壤呼吸
6.2.2 植物群落监测法
① 测定
? 测定前，对红外线气体分析仪进行预热、标定，
并记录标定时的气压和温度。同时安装测定系统。
将选定佯地的植株罩于相应大小的同化箱内
? 测定时，首先调整零点。接通测定系统，并根据
测定需要调节同化箱内的有关环境因子。待仪器
读数稳定后，记录 CO2浓度数值和相应的同化箱
内的气体流量和温度、湿度，以及空气温度、湿
度,CO2浓度和光照强度
6.2.2 植物群落监测法
② 结果计算
a,作物群落净光合速率的计算
a) 其一时间段其一样本的净光合速率计算
6.2.2 植物群落监测法
b) 群落净光合速率的计算
6.2.2 植物群落监测法
b,群落呼吸速率的计算
a) 各时间段呼吸速率计算
6.2.2 植物群落监测法
b) 群落呼吸速率的计算
6.2.2 植物群落监测法
3,森林群落的测定
? 森林群落的光合速率常通过分别测定其乔木层、灌木层和草
本层的光合速率后求和而得到。相应地，它的呼吸速率是通
过分别测定其乔木层、灌木层和草本层的呼吸速率后求得
? 测定的点应尽可能分布在林内不同的高度和树干的不同方向
上，并且照顾到不同叶龄的叶片。先作好如下工作：
(1)样点的选择：在待测森林群落的每一样地内的每个种类选择健壮正
常立木若干。每株至少选五个样本 (即不同高度、主杆的不同方向、
不同发育阶段 )，每个样点可以用一片叶 (阔叶树 )或一个枝 (如针叶树
等 )来代表
(2)样地的描述：将样地的基本特征包括森林的名称，种类成分，生长
阶段等作比较详细的记录。
(3)测定时刻环境因子描述：每次测定需首先将环境因子包括光照强度、
日照时间温度、湿度、风速与风向等都记录在预制的表格中
6.2.2 植物群落监测法
① 1．森林群落的净光台速率的测定
? (1)将选定样点的样枝或样叶置于同化室 (箱 )内，用便携式或台式、单
或多通道红外 CO2测定仪测定各个样本同化箱出气口的 CO2浓度 (C2),
在每次测定前需首先测定空气中的 CO2浓度 (C1)
? (2)乔木层叶面积求算,测定森林群落的叶面积指数的通常做法是选择样
枝，通过叶面积和重量的相关性测定样枝的叶面积，从而估算整株和
整个乔木层的叶面积指数
? (3)乔木层的净光合速率的计算公式如下：
? (4)森林群落净光台速率的计算
6.2.2 植物群落监测法
② 森林群落呼吸速率的测定
? (1)灌草本层呼吸速率的测定：同草地和农田群落呼吸速率的测定。
? (2)乔木层呼吸速率的测定：白天在每次每样本光合速率测定完后，需
立即测定一次呼吸作用。白天呼吸速率的测定是在同化箱外罩一块黑
红布，目的是使测试样品脱离光源，而在晚上则无需布罩
? (3)群落呼吸速率的计算,利用各个时间段内的呼吸速率 Rj，可以计算群
落的平均呼吸速率 (R)
6.3 细菌检验监测技术
? 细菌总数法是细菌学检验法的一种主要方法。它是指 1mL水
样在营养琼脂培养基上，于 37℃ 经 24h培养后所生长的细菌
茵落的总数
? 细菌总数是检验一般水域污染的标志
6.3.1 细菌总数的监测技术
? 测定细菌总数的主要程序：
1,灭菌
(1)于热灭菌：将试管、平皿、吸管等玻璃仪器，装入于热灭菌箱中
160℃ 灭菌 2h
(2)高压蒸汽灭菌：稀释水、培养基、采样瓶等置于高压蒸汽灭菌中，
经 115℃ (10磅／ in2)高压蒸汽灭菌 20min。
(4)蒸汽灭菌：采用蒸汽灭菌器，在 100℃ 常压下，每次定时灭菌。
(5)火焰灭菌：此法灭菌时应用远火徐徐加热．然后再于火焰焰心灼烧
为妥
2．营养琼脂培养基的制备：称取 108蛋白胨,3g牛肉膏,5g
氯化钠及 10一 20g琼脂溶于 1000m1蒸馏水中，加热至琼脂
溶解，调节 PH为 7,4— 7,6过滤，分装于玻璃容器中，
经高压蒸汽灭菌 20min，贮于冷暗处备用
6.3.1 细菌总数的监测技术
3．试样培养
(1)取定量混合均匀的水样 (或稀释后水样 )注入灭菌平皿中，
倾入 15ml已融化并冷至 45℃ 左右的营养琼脂培养基，旋
摇平皿使其混合均匀。应做两份实验。
(2)待平皿上试样凝固后，将平皿倒置于恒温箱中 37℃ 培养
24h，然后进行菌落计数。
(3)用营养琼脂培养基同时进行空白对照实验
4,菌落计数：作平皿菌落计数时，可用眼观察，也可
用放大镜观察，求出 1ml水中的干均菌落数。进行
稀释水样计数时，应采用平皿内有 30一 300个苗落
的稀释度进行计算
6.3.2 大肠杆菌的监测技术
?大肠杆菌 (Eshllus coli)是指示粪便污染的重要
指示生物
?在大肠菌群系一群需氧又兼性厌氧的，在
37℃ 生长时能使乳糖发酵，在 24h内产酸产
气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。大肠苗群数指
每升水样中所含有的大肠菌群的数目
?大肠菌群检验方法有发酵法和滤膜法
6.3.2 大肠杆菌的监测技术
1,发酵法
? 这是根据大肠菌群使乳糖发酵产生酸和气的特性而
进行检验，如产破产气者，大肠菌群则为阳性
? 培养基的种类：
(1)乳精蛋白胨培养液；
(2)三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液；
(3)品红亚硫酸钠培养基 (供发酵用 )
(4)伊红美蓝培养基
6.3.2 大肠杆菌的监测技术
? 检验大肠菌群主要程序
? 初步发酵试验：初步发酵试验在灭菌操作条件下，取定量水样加入 3
倍浓缩乳糖蛋白陈培养液中，于 37℃ 恒温培养 24h
? 平板分离：经 24h培养后，将产破产气及只产酸的发酵管，分别接种
于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基上，再恒温培养 24h，然后
分别选择菌落
? 复发酵试验：上述涂片镜检茵落如为革兰氏阴性无芽脑杆菌，可进
一步挑取该菌落的另一部分接种于乳糖蛋白胨培养液中，于 37℃ 恒
温培养 24h，有产酸产气者，即证实有大肠茵群存在
? 大肠菌群计数：根据以上试验证实有大肠茵群存在的阳性管数，查
大肠苗群检数表，报告每升水样中大肠菌群数
6.3.2 大肠杆菌的监测技术
2,滤膜法
? 滤膜是采用一种微孔薄膜，按灭菌操作将水样注入
具有滤膜的过滤器中，经抽滤，细菌被截国在膜上，
后将滤膜贴于品红亚硫酸钠培养基上，进行恒温培
养 16— 18h，符合上法所述特征的菌落进行涂片，
革兰氏染色，镜检
? 凡属革兰氏染色阴性，无芽胞杆菌者，再接种于乳
糖蛋白胨培养 18h产酸产气者，判断为大肠菌群阳
性
? 1L水样中大肠菌群数等于滤膜上生长的大肠菌群落
总数乘以 3
6.4生物毒性试验监测技术
6.4.1 水生生物急性毒性试验
? 水生生物急性毒性试验 (acute toxicity test for
aquatic organism)是测定高浓度污染物在短时期 (一
船不超过几天 )内对水生生物所产生的急性毒性作用，
用以评价污染物毒性的实验方法
? 通过水生生物急性毒住试验可以确定半数存活浓度
(TLm)或半数致死浓度 (TL50)．并用来评价污染物的
毒性大小和性质。
? 还可粗略了解毒物引起生物体中毒的症状和特点，
以判断毒物的毒性强弱和水环境的污染程度，并为
制定在环境中的毒物最大容许浓度提供基本数据
6.4.1 水生生物急性毒性试验
1,试验生物的选择
? 常用的是小型水生生物，主要是鱼
? 为了避免受试生物个体差异过于悬殊，应选择种
属较纯，年龄、大小、体重差别不大．雌雄性别
各半的动物
2,试验容器及设备
? 饲养水槽
? 试验容器
? 恒温设备
6.4.1 水生生物急性毒性试验
3,实验方法
? 将受试鱼随机分组
? 试验前，受试动物要在实验室内饲养 7— 10d，以观察其活
动是否正常
? 试验期间，对照组动物的死亡串应低于 5％
? 急性毒性试验期间一般不喂食，从致毒开始就观察记录动物
中毒表现，生理、生化变化和死亡情况，并将观察结果在半
对数坐标纸上用内插法或外推法求出动物的 LC50,动物全部
死亡的最小浓度 (LC100)和动物全部存活的最大毒物浓度 (LC0)
即最大耐受浓度
? 急性毒性试验的结果同受试动物的种属和稀释水的水质等因
素有关
6.4.1 水生生物急性毒性试验
4,应用系数 (鱼类毒性试验 )
?根据急性毒性试验求得的半数致死浓度 (LC50)
或半数存括浓度 (TLm)，推算化学物质对鱼类
的安全浓度而采用的一种常数
6.4.2 水生生物亚急性毒性试验
? 水生生物亚急性毒性试验 (suhacute toxicity test for
aquatic ogansism)是测定低浓度污染物在较长时期
(一般不超过 3个月 )内对水生生物所产生的毒性作用，
用以评价污染物毒性的一种实验方法
? 进行亚急性毒性试验可以研究污染物对生物的作用
方式和致毒机理；通过这种试验可以利用生物对污
染物的反应预报污染物的慢性毒性,而试验的结果则
可以为制定水质标准提供依据
6.4.2 水生生物亚急性毒性试验
1,试验方法
? 细胞培养是测定污染物亚急性毒性的灵敏而可靠
的方法之一
? 组织病变是亚急性毒性常见的一种反应，也是亚
急性毒性试验的重要指标之一
? 污染物亚急性毒性作用可引起色类血相、呼吸代
谢和酶的活性等生理、生化的变化。对这些变化
的测定，可以反映毒物的亚急性毒性作用
6.4.2 水生生物亚急性毒性试验
2,有关指标
? 耗氧率
? 鳃盖活动频率或呼吸率
? 咳嗽频率
? 存在问题：
? 缺乏水生生物正常的生理、生化和行为的资料，因而难
以确定试验所观察到的变化是否在生物正常变幅以内
? 这种变化究竞是适应性的 (导致种群的维持或扩大 )，还是
破坏性的 (导致种群的毁灭 )，暂时还不能下结论
6.4.3 水生生物慢性毒性试验
? 水生生物慢性毒性试验 (chromic toxicity test for
aquatic or ganism)是测定低浓度污染物对水生生物
生活周期内的毒性作用，用以评价污染物毒性的实
验方法
1,试验方法
? 慢性毒性试验可在水生生物的生长、繁殖、卵的孵
化和幼体发育等生命活动的各个主要阶段进行。在
实验室条件下，一般要使用流水装置，以保持毒物
浓度恒定；还要保持生物良好的生活条件，如食物、
氧气,pH值等。所得到的存括率、生长率、产卵率
和孵化率等数据最后用统计方法处理
6.4.3 水生生物慢性毒性试验
2,有关指标
?体长
?体重
?骨胶原或核糖核酸 (RNA)和去氧核糖核酸
(DNA)之比
6.4.3 水生生物慢性毒性试验
3,试验周期
? 一次试验所需的时间同受试生物种类有关，如以鱼
类为试验对象，一般需一年左右,对于一些危害大的
累积性污染物如甲基汞、镐和铅等，慢性毒试验不
仅要包括一个生活周期，而且要延续三代
? 水生生物慢性毒性试验周期较长。为了缩短周期，
一是寻求性成熟时间短的生物作试验对象 ;二是探索
用短期毒性预报慢性毒性的可能性
6.4.3 水生生物慢性毒性试验
4,毒物最大容许浓度
?毒物最大容许浓度 (maximum allowable
concentration for taxicant)指在慢性毒性试验
中，毒物对受试生物无影响的最高浓度和有
影响的最低浓度之间的阈浓度
?在鱼类慢性毒性试验中，常采用受试鱼的生
产指数来测定化学物质的最大容许浓度
6.4.4 鱼类急性毒性试验操作
? 对鱼类进行急性毒理试验，最主要的是半致死浓
度试验 (median toleranco limit 缩写 MTL)
1,选择供试鱼
? 选用大马哈鱼，每尾体重在 0.15一 0.50g范围之内均可。
同一试验使用的鱼应取自同一条件，而且，鱼体的重量
也应大致相同
2,排水和稀释水的准备
? 所用排水装满采样瓶后封闭
? 用于稀释排水的水，采用不合可疑成分的 pH为 6,6--
7,4，硬度为 10--70mg/L的清净水
3,试验条件的选择
? 实验时间
? 实验水温
? 鱼数目
? 浓度选择
4,试验
? 进行试验的同时，还要另用稀释水做并列对照试验
? 试验进行之前和结束时，都要对稀释水的溶解氧和 pH等
进行测定
5.TLm值的计算与表示
6,注意事项
?大马哈鱼的饲养问题
?试验毒物问题
?试验操作中需特殊处理的污水
