高效、低毒、低残留杀虫剂吡虫啉分析方法介绍王金玲 （031361005）
（华中农业大学理学院 湖北武汉，430070）
摘要：本文主要讨论吡虫啉原药及中间体的各种仪器分析方法以及在水稻、蔬菜、水果、烟草、土壤中的残留代谢仪器分析研究：高效液相色谱法（HPLC），气相色谱法（GC），极谱分析法等方法。
关键词：吡虫啉 仪器分析 残留代谢 高效液相色谱 气相色谱 极谱
吡虫啉是吡啶类高效杀虫剂，选择性抑制昆虫神经系统中的乙酰胆碱脂酶受体,阻断中枢神经的正常传导，使昆虫神经麻痹后死亡。吡虫啉具有高效、低毒、广谱、内吸及保护天敌的作用，并且对蚜虫、飞虱、叶蝉等刺吸式口器害虫有特效。
吡虫啉的原药为白色结晶，纯品为无色晶体。熔点143.8℃（变态1），136.8℃（变态2），蒸汽压为2×10-9hpa（20）
其化学名为1-（6-氯-3-吡啶甲基）-N-硝基亚咪唑烷-2-基胺，结构式为：
由于吡虫啉的化学结构中，含有苯环等不饱和键，因此，在紫外光区有较强的吸收，故可以用配有紫外检测器的HPLC进行检测。
同时，由于吡虫啉的化学结构中含有氯原子，而且熔点较低，可以用含有电子捕获检测器的气相色谱进行检测。
另外，吡虫啉的化学结构中的硝基等不饱和键可以被还原，因此，可以用电化学方法进行检测。
以下对文献报道的多种仪器方法进行简单介绍。
1、HPLC方法
1.1、对原药含量进行研究曾唏等[1-2]；张志兰等[3]；牟兰等[4]；郑巍等[5]；对吡虫啉原药及中间体进行高效液相色谱检测，色谱条件基本相同，大多为：紫外波长为270nm，流动相强极性，为甲醇与水的混合体系。
在这些方法中，将吡虫啉和其中间体在同一检测系统中的检测方法简要介绍如下，以供参考。
1.1.1、实验部分
a、主要仪器与试剂
Shimadzu LC-6A高效液相色谱仪、SPD-6AV紫外-可见检测器吡虫啉、2-氯-5-甲基吡啶、2-氯-5-氯甲基吡啶标准品（含量99.%）；甲醇（AR）
b、色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS2 4.0mm×300mm,id 10um；流动相：甲醇：水=48：52(V／V)；检测波长270nm；流速1mL/min，柱温为室温；进样量10uL。
1.1.2、结果与讨论
a、分析条件选择
为寻找一种适于同时测定三个化合物的波长，将三个化合物用流动相配成适当浓度，用萦外可见分光光度计扫描，测得三个化合物最大吸收波长分别为：吡虫啉269.4nm，2-氯-5-甲基吡啶270.4nm,2-氯-5-氯甲基吡啶269.4 nm，选择270 nm作为检测波长。
流动相比例为甲醇：水为48：52(V/V)，流速为1.0mL／min，柱温为室温时，成分与其它杂质均得到很好分离；吡虫啉、2-氯-5-甲基吡啶及2-氯-5-氯甲基吡啶保留时间分别为〔4.6、9.4和10.6min〕。
b、标准曲线
准确称取吡虫啉、2-氯-5-甲基吡啶及2-氯-5-氯甲基吡啶标准品50mg左右，先用少量甲醇溶解，再用流动相定容于25mL容量瓶，配成混合标准溶液。分别吸取此液l.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于25mL容量瓶中，用流动相配成系列标准溶液。进样阀进样10uL。在选定的的实验条件下测定相应峰面积。以峰面积对浓度作工作曲线。结果表明：在标准系列浓度范围内、浓度与峰面积有良好的线性关系，各组分的回归方程见表1,
表1 各组分的回归方程及相关系数
组 分 回归方程 相关系数
吡虫啉 Y=-0.00519+0.48132X 0.9998
2-氯-5-甲基吡啶 Y=-0.00568+2.32882X 0.9994
2-氯-5-氯甲基吡啶 Y=-0.01409+2.11282X 0.9998
c、回收率及精密度实验准确称取吡虫啉、2-氯-5-甲基吡啶及2-氯-5-氯甲基吡啶样品各50mg左右，先用少量甲醇溶解，再用流动相定容于25mL容量瓶，配成混合样品；准确移取1.0mL混合样品溶液，分别加入1.0、2.0、3.0mL的上述混合标准溶液。用流动相定容于25mL容量瓶。按上述色谱条件进行回收率测定，结果见表2。分别准确移取1.0mL上述样品溶液，用流动相定容于25mL容量瓶，在同样条件下进行精密度试验。结果见表3。
表2 各组分的回收率
组分 平均回收率
吡虫啉 100.4
2-氯-5-甲基吡啶 99.7
2-氯-5-氯甲基吡啶 99.6
表3 精密度实验结果组分 标准偏差 变异系数
吡虫啉 0.01 1.5
2-氯-5-甲基吡啶 0.02 1.1
2-氯-5-氯甲基吡啶 0.02 1.0
1.2、残留代谢研究吴俐勤等[6]对水稻稻杆、水稻田中吡虫啉的残留动态进行研究；赵莉等[7]对萝卜、土壤中吡虫啉的残留动态进行研究；戴华等[8]对土壤、水中吡虫啉的残留动态进行研究；曹爱华等对烟草和土壤中吡虫啉的残留动态进行研究[9]；扬红等对烟草中吡虫啉的残留动态进行研究[10]；陈道文等对蔬菜中吡虫啉的残留动态进行研究[11]；张金林等对苹果中吡虫啉的残留动态进行研究[12]；对样品中吡虫啉的提取方法有液液萃取，液固萃取，固相微萃取，索氏提取等；对萃取液的净化方法有自制硅胶柱、SPE柱（固相微萃取柱）等。至于检测方法与上述原药测定方法基本相同。所以，在此仅选择几种典型的提取与净化方法予以介绍。
1.2.1、萃取：
(1)、稻杆中的提取
a、甲醇振荡法：称取稻杆10.0g于250mL具塞三角瓶中，加人1mol/L盐酸3mL和100mL甲醇摇匀，浸泡2-3h后机械振荡1h，过滤入500mL分液漏斗，余下部分再加80mL甲醇振荡1h，过滤。过滤液中加人100mL5％NaCl水溶液、100mL石油醚，振摇后静置分层。下层水相放人另一分液漏斗，石油醚用5％NaCl50mL反萃取一次，弃去石油醚液，合并水溶液，加人 40，40，20mL二氯甲烷萃取，二氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，过滤入500mL平底烧瓶，滤液在旋转蒸发器上降压浓缩至干，待SPE—C18柱净化。
b、二氯甲烷振荡法：称取稻杆10．0g于250mL具塞三角瓶中，先后加人1mol/L 盐酸3mL 和100mL二氯甲烷摇匀，浸泡2~3h后振荡1h，二氯甲烷液经无水硫酸钠脱水，过滤入250mL平底烧瓶中。剩余残渣再用80mL二氯甲烷振荡1h，无水硫酸钠脱水过滤。滤液在旋转蒸发器上降压浓缩至干，待SPE—C18柱净化。
(2)、土壤中的提取
a、振荡法：称取土壤20.0g于250mL具塞三角瓶中，以后提取与1.2.1.1处理相同。
B、索氏提取法：
称取土壤20.0g于纸套筒中，纸套筒置于加有40mL甲醇的铝筒中，并一起装在索氏提取仪上(密封)。170℃下提取1h，淋洗30min，冷却后取下铝筒，用10mL甲醇将铝筒中的提取液转人平底烧瓶，于旋转蒸发器上降压浓缩近干，并用甲醇定容，0.45μm滤膜过滤。待液相色谱测定。
1.2.2、净化：
取SPE—C18柱，用10mL甲醇预淋脱活，顶干；再用20ml无离子水淋洗，顶干。样品用10mL石油醚和乙酸乙酯混合液(85：15V／V)分3次转人柱内，淋洗液弃去。再用石油醚和乙酸乙酯混合液(30：70，V／V)15mL淋洗，收集淋洗液，浓缩至干，用甲醇定容。待液相色谱测定。
2、GC方法王静等[13]用气相色谱对吡虫啉原药进行测定。
2.1、实验部分：
2.1.1、仪器及试剂:
日立163型气相色谱仪，氢火焰(FID)检测器。色谱柱为内径5毫米、长l米的玻璃柱，固定相为10％OV-101，固定液涂于80-100目Chromosorb W AW DMCS担体上形成。
甲苯,化学纯。
2.1.2、色谱条件灵敏度103，衰减32，空气：1kg／cm2，氢气：0.9kg／cm2，载气(N2)；31mL/min，检测器和气化室温度均为200℃，程序升温：初始温度60℃，最终温度125℃，升温速率10℃／min。
2.1.3、样品制备
取反应液水溶液处理后调节pH至9—10，用甲苯萃取，萃取液直接进样。
2.1.4、结果（略）
3、电化学方法郑修文等用极谱吸附波对吡虫啉进行测定[14]。邱瑾等[15]对吡虫啉的光降解产物用毛细管电泳进行分析研究；
极谱吸附波方法：
实验部分
3.1.1、仪器和试剂
JP-303型示波极谱仪(四川成都仪器厂)。三电极系统：滴汞工作电极、饱和甘汞参比电极、铂丝辅助电极；岛津LC-10A高效液相色谱。
吡虫啉标准溶液：准确称取0.1000g吡虫啉(95.40％)，用100mL甲醇溶解后再用0.01mol/LNH3-0.2moL/LNH4Cl(pH＝8．0)的底液定容至1L。
实验用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
3.1.2、实验方法
吸上述配制好的吡虫啉溶液20．00mL，加入0．2％的溴代十六烷基三甲胺4mL，再用上述底液定容至200mL，在-0.7~ -1.2V电位区间内，作单扫描极谱图，记录极谱波。
3.2、结果与讨论
3.2.1、底液的选择
比较0.0100g／L的吡虫啉分别在克拉克—鲁布斯、HAc—NaAc、NH3—NH4Cl、伯瑞坦-罗比森缓冲溶液中的峰电流，发现在4种缓冲溶液中均能产生极谱峰．随着pH值的增高,峰电流增大．峰电位负移，这有利于电极反应进行，也说明了电极过程有氢离子参加反应，但随着pH值的升高，溶液的稳定性下降。在NH3—NH4Cl中生成最灵敏并且稳定的极谱峰(如图1所示)，故用pH＝8.0的NH3—NH4Cl 缓冲溶液为底液。在此条件下，发现氧波无干扰．故无须除氧。
3.2.2、体系稳定性
配制0.00100g／L的吡虫啉试液，15min后测定其峰电流，与放置24h后的峰电流比较，其变化〈1％。说明吡虫啉还原峰在pH＝8.0的NH3—NH4Cl中的稳定性好。
3.2.3、扫描速度、静止时间和起始电位与峰电流的关系
配制0.0100mg/L的吡虫啉试液，当Ea在-0.7~-1.2V范围内变化时,Ip变化平缓，实验选择Ep为-0.95V，用LSV对4.00×10-5mol/V的吡虫啉进行了实验。峰电流随着扫描速度的增大而增加，ip与v1/2呈线性关系(r=0.9629)。说明该电流同时具有吸附性和扩散性。
3.2.4、温度系数试验
在上述实验条件下，当溶液的温度在0-9℃之间；温度系数为0．57％／℃，9-15℃之间温度系数为-0.83％／℃；15-30℃之间温度系数为-1.4％／℃。温度系数变负为典型的吸附波特性。本文选择实验温度为11±0.2℃。
3.2.5、波高与浓度关系
在选用底液条件下，吡虫啉在1.2×10-4mol/L-5.0×10-6mol/L范围内与峰高有良好的线性关系，线性方程为Iy=4731X+2546(r=0.9941)，标准误差S＝2.300×103nA。当浓度大于1.2×10-4mol/L时，校准曲线向浓度轴弯曲，表现吸附波的特性。
3.2.6、精密度的测定
运用本法做6次平行实验，测定结果分别为91.7％、90.7％、92.1％、92.1％、91.5％、91.5%；相对标准偏差为1.38％，本方法的重现性良好。
通过上述文献报道，可以了解到：虽然关于吡虫啉的检测方法较多，各种仪器方法的检测限，灵敏度各不相同，样品处理方法也有不同的变化，但高效液相色谱在日常检测工作中应用较为广泛，目前报道的关于吡虫啉的高效液相色谱检测方法已经较为成熟，可以为以后的研究工作提高借鉴。
通过对不同的仪器方法进行比较，可以发现，在一个仪器方法的建立工程中，无论是仪器实验条件，还是方法中关于样品的提取、净化，首先要根据关于目标化合物的残留检测限的要求，结合化合物的化学结构和物理化学性质，选择合适的灵敏度较高的仪器进行试验。例如：如果化合物的结构中含有共轭(键，则可以考虑使用配有紫外检测器的HPLC；如果化合物有荧光吸收，或衍生后有荧光吸收，则可以选择配有荧光检测器的HPLC进行试验；如果化合物容易汽化，性质稳定，含有N,P元素，则可以选择配有氮磷检测器的气相色谱进行检测；如果该化合物含有氯原子，则可以选择配有ECD的气相色谱进行试验。当然，也可根据检测限的要求，选择液-质联用或气-质联用。
参考文献
[1] 曾唏，牟兰，吡虫啉及其中间体的高效液相色谱同时测定，分析仪器，2001，（2）：20-24
[2] 曾唏，马培舰，曾松，吡虫啉的高效液相色谱分析，农药，36（8）：18-19
[3]张志兰，朱庆珍，咪唑烷的高效液相色谱分析，江苏农药，2000，（3）：17-18
[4] 牟兰，曾唏，曾松，高效液相色谱法同时测定吡虫啉中间体，分析实验室，19（5）：62-64
[5] 郑巍等，吡虫啉原药的高效液相色谱分析，农药，36（12）：18-19
[6] 吴俐勤，吴声敢，高效液相色谱测定吡虫啉的残留研究，现代科学仪器，2003，1：52-55
[7]赵莉，姜中涛，吡虫啉在土壤、萝卜中的残留分析方法，农业科学与管理，2003，24（8）：14-16
[8] 戴华等，稻谷中吡虫啉农药残留量的固相萃取高效液相色谱测定，分析测试学报，2002，21（1）：70-72
[9] 曹爱华等，烟草及土壤中吡虫啉的残留分析方法研究，中国烟草科学，2001，（4）：45-48
[10] 扬红等，吡虫啉在烟草中的残留动态研究，南京农业大学学报，1999，22（3）：80-82
[11] 陈道文等，吡虫啉在蔬菜上的残留及动态研究，农药，37（4）：22-22
[12] 张金林，石健，吡虫啉在苹果上残留动态研究，农业环境保护，1997，16（6）：247-251
[13] 王静，周国春，气相色谱单柱快速分析吡虫啉中间体，农药，36（11）：28-29
[14] 郑修文，杨明敏，吡虫啉极谱吸附波的研究及应用，分析化学研究简报，2000，28（4）：439-442
[15] 邱瑾等，吡虫啉光降解产物中阴离子的毛细管电泳分析，环境化学，1998，17（5）：504-507
（华中农业大学理学院 湖北武汉，430070）
摘要：本文主要讨论吡虫啉原药及中间体的各种仪器分析方法以及在水稻、蔬菜、水果、烟草、土壤中的残留代谢仪器分析研究：高效液相色谱法（HPLC），气相色谱法（GC），极谱分析法等方法。
关键词：吡虫啉 仪器分析 残留代谢 高效液相色谱 气相色谱 极谱
吡虫啉是吡啶类高效杀虫剂，选择性抑制昆虫神经系统中的乙酰胆碱脂酶受体,阻断中枢神经的正常传导，使昆虫神经麻痹后死亡。吡虫啉具有高效、低毒、广谱、内吸及保护天敌的作用，并且对蚜虫、飞虱、叶蝉等刺吸式口器害虫有特效。
吡虫啉的原药为白色结晶，纯品为无色晶体。熔点143.8℃（变态1），136.8℃（变态2），蒸汽压为2×10-9hpa（20）
其化学名为1-（6-氯-3-吡啶甲基）-N-硝基亚咪唑烷-2-基胺，结构式为：
由于吡虫啉的化学结构中，含有苯环等不饱和键，因此，在紫外光区有较强的吸收，故可以用配有紫外检测器的HPLC进行检测。
同时，由于吡虫啉的化学结构中含有氯原子，而且熔点较低，可以用含有电子捕获检测器的气相色谱进行检测。
另外，吡虫啉的化学结构中的硝基等不饱和键可以被还原，因此，可以用电化学方法进行检测。
以下对文献报道的多种仪器方法进行简单介绍。
1、HPLC方法
1.1、对原药含量进行研究曾唏等[1-2]；张志兰等[3]；牟兰等[4]；郑巍等[5]；对吡虫啉原药及中间体进行高效液相色谱检测，色谱条件基本相同，大多为：紫外波长为270nm，流动相强极性，为甲醇与水的混合体系。
在这些方法中，将吡虫啉和其中间体在同一检测系统中的检测方法简要介绍如下，以供参考。
1.1.1、实验部分
a、主要仪器与试剂
Shimadzu LC-6A高效液相色谱仪、SPD-6AV紫外-可见检测器吡虫啉、2-氯-5-甲基吡啶、2-氯-5-氯甲基吡啶标准品（含量99.%）；甲醇（AR）
b、色谱条件
色谱柱：Hypersil ODS2 4.0mm×300mm,id 10um；流动相：甲醇：水=48：52(V／V)；检测波长270nm；流速1mL/min，柱温为室温；进样量10uL。
1.1.2、结果与讨论
a、分析条件选择
为寻找一种适于同时测定三个化合物的波长，将三个化合物用流动相配成适当浓度，用萦外可见分光光度计扫描，测得三个化合物最大吸收波长分别为：吡虫啉269.4nm，2-氯-5-甲基吡啶270.4nm,2-氯-5-氯甲基吡啶269.4 nm，选择270 nm作为检测波长。
流动相比例为甲醇：水为48：52(V/V)，流速为1.0mL／min，柱温为室温时，成分与其它杂质均得到很好分离；吡虫啉、2-氯-5-甲基吡啶及2-氯-5-氯甲基吡啶保留时间分别为〔4.6、9.4和10.6min〕。
b、标准曲线
准确称取吡虫啉、2-氯-5-甲基吡啶及2-氯-5-氯甲基吡啶标准品50mg左右，先用少量甲醇溶解，再用流动相定容于25mL容量瓶，配成混合标准溶液。分别吸取此液l.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于25mL容量瓶中，用流动相配成系列标准溶液。进样阀进样10uL。在选定的的实验条件下测定相应峰面积。以峰面积对浓度作工作曲线。结果表明：在标准系列浓度范围内、浓度与峰面积有良好的线性关系，各组分的回归方程见表1,
表1 各组分的回归方程及相关系数
组 分 回归方程 相关系数
吡虫啉 Y=-0.00519+0.48132X 0.9998
2-氯-5-甲基吡啶 Y=-0.00568+2.32882X 0.9994
2-氯-5-氯甲基吡啶 Y=-0.01409+2.11282X 0.9998
c、回收率及精密度实验准确称取吡虫啉、2-氯-5-甲基吡啶及2-氯-5-氯甲基吡啶样品各50mg左右，先用少量甲醇溶解，再用流动相定容于25mL容量瓶，配成混合样品；准确移取1.0mL混合样品溶液，分别加入1.0、2.0、3.0mL的上述混合标准溶液。用流动相定容于25mL容量瓶。按上述色谱条件进行回收率测定，结果见表2。分别准确移取1.0mL上述样品溶液，用流动相定容于25mL容量瓶，在同样条件下进行精密度试验。结果见表3。
表2 各组分的回收率
组分 平均回收率
吡虫啉 100.4
2-氯-5-甲基吡啶 99.7
2-氯-5-氯甲基吡啶 99.6
表3 精密度实验结果组分 标准偏差 变异系数
吡虫啉 0.01 1.5
2-氯-5-甲基吡啶 0.02 1.1
2-氯-5-氯甲基吡啶 0.02 1.0
1.2、残留代谢研究吴俐勤等[6]对水稻稻杆、水稻田中吡虫啉的残留动态进行研究；赵莉等[7]对萝卜、土壤中吡虫啉的残留动态进行研究；戴华等[8]对土壤、水中吡虫啉的残留动态进行研究；曹爱华等对烟草和土壤中吡虫啉的残留动态进行研究[9]；扬红等对烟草中吡虫啉的残留动态进行研究[10]；陈道文等对蔬菜中吡虫啉的残留动态进行研究[11]；张金林等对苹果中吡虫啉的残留动态进行研究[12]；对样品中吡虫啉的提取方法有液液萃取，液固萃取，固相微萃取，索氏提取等；对萃取液的净化方法有自制硅胶柱、SPE柱（固相微萃取柱）等。至于检测方法与上述原药测定方法基本相同。所以，在此仅选择几种典型的提取与净化方法予以介绍。
1.2.1、萃取：
(1)、稻杆中的提取
a、甲醇振荡法：称取稻杆10.0g于250mL具塞三角瓶中，加人1mol/L盐酸3mL和100mL甲醇摇匀，浸泡2-3h后机械振荡1h，过滤入500mL分液漏斗，余下部分再加80mL甲醇振荡1h，过滤。过滤液中加人100mL5％NaCl水溶液、100mL石油醚，振摇后静置分层。下层水相放人另一分液漏斗，石油醚用5％NaCl50mL反萃取一次，弃去石油醚液，合并水溶液，加人 40，40，20mL二氯甲烷萃取，二氯甲烷液用无水硫酸钠脱水，过滤入500mL平底烧瓶，滤液在旋转蒸发器上降压浓缩至干，待SPE—C18柱净化。
b、二氯甲烷振荡法：称取稻杆10．0g于250mL具塞三角瓶中，先后加人1mol/L 盐酸3mL 和100mL二氯甲烷摇匀，浸泡2~3h后振荡1h，二氯甲烷液经无水硫酸钠脱水，过滤入250mL平底烧瓶中。剩余残渣再用80mL二氯甲烷振荡1h，无水硫酸钠脱水过滤。滤液在旋转蒸发器上降压浓缩至干，待SPE—C18柱净化。
(2)、土壤中的提取
a、振荡法：称取土壤20.0g于250mL具塞三角瓶中，以后提取与1.2.1.1处理相同。
B、索氏提取法：
称取土壤20.0g于纸套筒中，纸套筒置于加有40mL甲醇的铝筒中，并一起装在索氏提取仪上(密封)。170℃下提取1h，淋洗30min，冷却后取下铝筒，用10mL甲醇将铝筒中的提取液转人平底烧瓶，于旋转蒸发器上降压浓缩近干，并用甲醇定容，0.45μm滤膜过滤。待液相色谱测定。
1.2.2、净化：
取SPE—C18柱，用10mL甲醇预淋脱活，顶干；再用20ml无离子水淋洗，顶干。样品用10mL石油醚和乙酸乙酯混合液(85：15V／V)分3次转人柱内，淋洗液弃去。再用石油醚和乙酸乙酯混合液(30：70，V／V)15mL淋洗，收集淋洗液，浓缩至干，用甲醇定容。待液相色谱测定。
2、GC方法王静等[13]用气相色谱对吡虫啉原药进行测定。
2.1、实验部分：
2.1.1、仪器及试剂:
日立163型气相色谱仪，氢火焰(FID)检测器。色谱柱为内径5毫米、长l米的玻璃柱，固定相为10％OV-101，固定液涂于80-100目Chromosorb W AW DMCS担体上形成。
甲苯,化学纯。
2.1.2、色谱条件灵敏度103，衰减32，空气：1kg／cm2，氢气：0.9kg／cm2，载气(N2)；31mL/min，检测器和气化室温度均为200℃，程序升温：初始温度60℃，最终温度125℃，升温速率10℃／min。
2.1.3、样品制备
取反应液水溶液处理后调节pH至9—10，用甲苯萃取，萃取液直接进样。
2.1.4、结果（略）
3、电化学方法郑修文等用极谱吸附波对吡虫啉进行测定[14]。邱瑾等[15]对吡虫啉的光降解产物用毛细管电泳进行分析研究；
极谱吸附波方法：
实验部分
3.1.1、仪器和试剂
JP-303型示波极谱仪(四川成都仪器厂)。三电极系统：滴汞工作电极、饱和甘汞参比电极、铂丝辅助电极；岛津LC-10A高效液相色谱。
吡虫啉标准溶液：准确称取0.1000g吡虫啉(95.40％)，用100mL甲醇溶解后再用0.01mol/LNH3-0.2moL/LNH4Cl(pH＝8．0)的底液定容至1L。
实验用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
3.1.2、实验方法
吸上述配制好的吡虫啉溶液20．00mL，加入0．2％的溴代十六烷基三甲胺4mL，再用上述底液定容至200mL，在-0.7~ -1.2V电位区间内，作单扫描极谱图，记录极谱波。
3.2、结果与讨论
3.2.1、底液的选择
比较0.0100g／L的吡虫啉分别在克拉克—鲁布斯、HAc—NaAc、NH3—NH4Cl、伯瑞坦-罗比森缓冲溶液中的峰电流，发现在4种缓冲溶液中均能产生极谱峰．随着pH值的增高,峰电流增大．峰电位负移，这有利于电极反应进行，也说明了电极过程有氢离子参加反应，但随着pH值的升高，溶液的稳定性下降。在NH3—NH4Cl中生成最灵敏并且稳定的极谱峰(如图1所示)，故用pH＝8.0的NH3—NH4Cl 缓冲溶液为底液。在此条件下，发现氧波无干扰．故无须除氧。
3.2.2、体系稳定性
配制0.00100g／L的吡虫啉试液，15min后测定其峰电流，与放置24h后的峰电流比较，其变化〈1％。说明吡虫啉还原峰在pH＝8.0的NH3—NH4Cl中的稳定性好。
3.2.3、扫描速度、静止时间和起始电位与峰电流的关系
配制0.0100mg/L的吡虫啉试液，当Ea在-0.7~-1.2V范围内变化时,Ip变化平缓，实验选择Ep为-0.95V，用LSV对4.00×10-5mol/V的吡虫啉进行了实验。峰电流随着扫描速度的增大而增加，ip与v1/2呈线性关系(r=0.9629)。说明该电流同时具有吸附性和扩散性。
3.2.4、温度系数试验
在上述实验条件下，当溶液的温度在0-9℃之间；温度系数为0．57％／℃，9-15℃之间温度系数为-0.83％／℃；15-30℃之间温度系数为-1.4％／℃。温度系数变负为典型的吸附波特性。本文选择实验温度为11±0.2℃。
3.2.5、波高与浓度关系
在选用底液条件下，吡虫啉在1.2×10-4mol/L-5.0×10-6mol/L范围内与峰高有良好的线性关系，线性方程为Iy=4731X+2546(r=0.9941)，标准误差S＝2.300×103nA。当浓度大于1.2×10-4mol/L时，校准曲线向浓度轴弯曲，表现吸附波的特性。
3.2.6、精密度的测定
运用本法做6次平行实验，测定结果分别为91.7％、90.7％、92.1％、92.1％、91.5％、91.5%；相对标准偏差为1.38％，本方法的重现性良好。
通过上述文献报道，可以了解到：虽然关于吡虫啉的检测方法较多，各种仪器方法的检测限，灵敏度各不相同，样品处理方法也有不同的变化，但高效液相色谱在日常检测工作中应用较为广泛，目前报道的关于吡虫啉的高效液相色谱检测方法已经较为成熟，可以为以后的研究工作提高借鉴。
通过对不同的仪器方法进行比较，可以发现，在一个仪器方法的建立工程中，无论是仪器实验条件，还是方法中关于样品的提取、净化，首先要根据关于目标化合物的残留检测限的要求，结合化合物的化学结构和物理化学性质，选择合适的灵敏度较高的仪器进行试验。例如：如果化合物的结构中含有共轭(键，则可以考虑使用配有紫外检测器的HPLC；如果化合物有荧光吸收，或衍生后有荧光吸收，则可以选择配有荧光检测器的HPLC进行试验；如果化合物容易汽化，性质稳定，含有N,P元素，则可以选择配有氮磷检测器的气相色谱进行检测；如果该化合物含有氯原子，则可以选择配有ECD的气相色谱进行试验。当然，也可根据检测限的要求，选择液-质联用或气-质联用。
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