郑州牧业工程高等专科学校 畜牧工程系繁殖教研室 波尔羊人工授精技术规范 一、波尔羊进行人工授精的意义 1、使公羊的配种能力提高20倍以上，充分利用波尔种公羊 2、用波尔羊改良本地山羊采用人工授精，能够克服公母羊体重悬殊问题 3、防止通过交配传播疾病 4、便于母羊同期发情和集中供精 二、人工授精设备清单 （一）采精用品 1、假阴道部件：假阴道外壳、内胎（每个外壳三条）、集精杯（每个外壳备用两个）、橡胶塞、医用气伐、固定皮圈、保护套 2、安装假阴道用品：瓷盘、温度计、石蜡油（或凡士林）、毛巾、75%乙醇棉球、漏斗、玻璃棒、镊子 3、羊采精架 （二）稀释液配制用品 1、主要用品：三角锥瓶（250毫升、4个）、定性滤纸、玻璃漏斗、玻璃棒、量筒（100毫升）、试管架、漏斗架、精液稀释粉（100毫升） 2、辅助用品：电炉（500瓦）、注射器（一次性、10毫升）、蒸馏水（500毫升，3瓶）、洗瓶（1个）、石棉网、消毒柜 （三）精液保存用品 冰箱（保存精液或制冰块）、广口保温杯、塑料袋、稀释液、试管（刻度、10毫升）、标签纸、移液管、500毫升烧杯、温度计 （四）精液品质检查用品 显微镜（100-400倍）、显微镜保温板、载玻片、盖玻片、0.5%龙胆紫 （五）输精用品 输精器（10只）、胶头（10个）、酒精棉球、开膣器或羊用内窥镜、输精架或采精架 三、稀释液的配制 （一）稀释液配用品的清洗与消毒：所有玻璃用品应用洗涤剂洗净后，用清水反复冲洗，避免有洗涤剂残留。用蒸馏水冲洗三次后，涳干水分后，放入消毒柜中干燥。自然放凉后使用。 （二）稀释精液低温保存用稀释液（用前各种玻璃用品用蒸馏水冲洗，并放在消毒柜中干燥） 1、基础配制： （1）先将稀释粉（100毫升用）三角锥瓶中，加入100毫升水中，用玻璃棒搅拌，充分溶解 （2）将定性滤纸对折两次，折成锥形，放入漏斗中，并将其放置在三角锥瓶上，将溶解后的稀释液沿玻璃棒倒入漏斗中过滤 （3）将石棉网放在电炉上，然后将锥形瓶放在石棉网上，将稀释液加热至沸腾，立即取下 （4）稀释液放冷后，加入双抗（青霉素、链霉素），充分溶解，并静置20分钟以上 2、稀释液配制： （1）用吸管从中层吸取基础液，冲洗刻度试管并弃去，重复三次。之后从中层取基础液加入刻度试管至8毫升处。 （2）将新鲜鸡蛋擦干净，用75%的酒精消毒表面，待干燥后，打开鸡蛋分离出蛋清，将卵黄置于消毒纸巾上，倾斜纸巾使其滚动，将卵黄表面的蛋清吸干，用吸管轻轻挑破卵黄膜，吸取卵黄液加入刻度试管中，使总液体容量为10毫升。用吸管反复吸吐使卵黄液与基础液混匀，贴上标签备用。 3、剩余的基础液贴上标签备用：用于冲洗假阴道和输精器械 四、采精 （一）安装假阴道： 1、将假阴道各部件充分洗涤干净，用蒸馏水冲洗后，放在有余热的消毒柜中干燥，内胎应用夹子夹好县挂在消毒柜内，安装前将瓷盘用酒精消毒。逐件检查各部件是否有破损、漏水、针眼。 2、将内胎光面向里，向外翻到外壳上，并使其周正 3、用医用75%乙醇棉球消毒内胎内壁、翻边及集精杯 4、待乙醇干燥后，将集精杯安装在假阴道上，用纱布套和固定皮圈固定 5、在内胎与夹壁间注入50-55℃热水，约占其体积1/2，并左右平行摇动 6、用基础液冲洗内胎内壁及集精杯 7、用消毒的玻璃棒醮取少量凡士林或石蜡油，从外口向内均匀涂布，涂布深度为假阴道长度的1/2 8、加塞、气伐，充气至压力适当（假阴道外口的内胎呈Y型，温度插入时感到有一定阻力） 9、用温度计测量假阴道内的温度2分钟。合适的温度为38-40℃，如不合适，再注入适当温度的热水 10、用毛巾将安装好的假阴道包好，以使保温备用 （二）采精 1、安装好假阴道并使其内部温度适当 2、将发情旺盛的母羊保定在采精架内 3、一切准备就绪后，再将公羊赶至采精场并避免公羊靠近母羊，等待约1分钟左右 4、采精员手持假阴道蹲在右侧一旁 5、当公羊跳爬母羊臀部后，立即用左手掌扶住包皮导引公羊阴茎，右手将假阴道固定在母羊臀部右侧，使公羊阴茎伸入假阴道内，公羊向上一冲，说明已经射精。待公羊跳下，立即放掉假阴道内空气，并垂直放置。 6、取出集精杯，使假阴道内的精液全部进入集精杯中 五、精液稀释 1、用吸管将精液移入用基础液冲洗过的刻度试管中，与放稀释液的刻度试管一起放在500毫升33℃水浴中（500毫升烧杯）预温5分钟 2、计算稀释后精液容量：一般稀释比例为1:3，如0.7毫升的原精液稀释后体积为0.7×4=2.8毫升 3、用吸管将稀释液沿试管壁，缓慢加入精液中，轻轻摇动混匀后，加塞密封 六、精液保存 1、将盛放稀释后精液的刻度试管放在500毫升33℃的水浴中，然后再放入2-5℃冰箱中，约40分钟降温至2-5℃后。继续在冰箱中的水浴中保存直到使用。精液保存时间可达72小时。在使用中，保存时间超过24小时，应对精子活力进行检查，以便确定精液处理过程是否有问题和精液能否继续使用 2、如果供电不正常或冰箱控温不可靠，可将装稀释过的精液的试管用4层纱布包裹，装入自制的小塑料袋中，然后放入加有碎冰块的广口保温杯中保存。经常检查保温杯中的冰块，及时将溶化的冰水倒掉，添加新的冰块。 七、输精 1、每天用试情公羊检查母羊群两次，上下午各一次，公羊用试情布兜住腹部，避免发生自然交配 2、如果母羊接受公羊跳爬，证明已经发情，应在发现发情后6-12小时内第一次配种，12-18小时后第二次配种。经产羊应于发现发情后6-12小时第一次配种，间隔12-16小时后第二次配种。初配羊应于发现发情后12小时第一次配种，间隔12小时第二次配种。 3、将母羊保定在采精架或专用保定架内，外阴部及肛门用0.3%的高锰酸钾冲洗后，用灭菌纸巾擦干 4、将开膣器或内窥镜内外用酒精擦拭；用酒精消毒输精器外部，并用稀释液冲洗内管备用 5、待酒精完全挥发后，在内窥镜或开膣器外部涂上石蜡油；用输精器吸取稀释后的精液0.05-0.15毫升 6、由两位助手抓住母羊后腿，使其离地。操作人员左手分开母羊阴门，将内窥镜插入至阴道底部，打开光源；右手持输精器，找到子宫颈管外口（子宫外口颜色较暗），将输精器前端伸入子宫颈管内1-2厘米，将精液输入，记录输精情况 八、妊娠诊断 1、根据输精情况记录，于配种后第19-22天观察母羊是否返情，如果返情应安排补配。如未返情可基本确定为妊娠 2、用妊娠诊断仪于配种后20天后检测以确定母羊是否受孕 八、配种情况分析 1、检查母羊受孕情况，评估配种技术水平，总结经验 2、根据记录查找未受配母羊，并分析未配原因，及时处理 请阮校回国后带回的药品： 各种激素最好为新西兰或澳大利亚产，其它国产也行 FSH（FSH-P）促卵泡素 LH（根据情况，也可不用） PG（前列腺素F2α） CIDR（山羊同期发情用孕酮阴道栓） 需要量：以下数据仅供参考，具体购买数量敬请自定 1、FSH约20只供体羊用量（200-300毫克） 2、LH（如果有买10只羊用量）根据推荐需要量购买 3、PG 150只羊用量：约为300毫克或略多 4、CIDR （150个或200个） 重点药品：CIDR（阴道栓） PG 如有可能请带些胚胎移植中国内更好的或不易买到的小件器械 请记录相关药品的购买地址（包括联系人，E-mail等）、邮购方法及联系方法 法国专家到郑时间：11月7日左右，在郑停留时间12到16天 注：CIDR 读法seide