第一节 氨基酸
重点内容:
1,氨基酸,20种 AA结构特点、缩写、
2,理化性质、分离方法等;
20Aimoacid
★ 氨基酸分类,( 1)极性、非极性;( 2)脂肪族、芳香族等。
★氨基酸的性质,1,两性解离性质:
2,等电点( pI)计算,
3,氨基酸的甲醛滴定法:
4,氨基酸的呈色反应,( 1) pro 黄色;其他 AA 紫色
5,紫外吸收性,λ= 280 nm (Tyr, Phe, Trp)
( 2)米伦氏反应,Tyr 黄色
(3) 坂口反应,Arg 红色
( 4)乙醛酸反应,Typ 鲜红色
6,氨基酸的分离分析:互不相溶的两相:固定相
流动相
( 1)滤纸层析:滤纸吸附水
有机溶剂
Kd = C A / C B Rf(值) = X / Y
( 2)离子交换层析:
( 3) HPLC:
( 4) 气相色谱:流动相为气体
第二节 蛋白质
重点内容
1、构型与构像
2,α-螺旋与 β-折叠
3、蛋白质的三级、四级结构与功能
4、蛋白质的理化性质与变性作用
5、蛋白质的别构作用
6、蛋白质的分离分析
★ 肽、肽键与肽平面(酰胺平面):
( 1)肽键(双缩脲反应) 具有部分双键性质 不能自由旋转
( 2)肽平面,6个原子固定在同一平面
二面角 (构象角):
φ角,绕 Cα N1键旋转的角度
ψ角,绕 Cα C2键旋转的角度
二、蛋白质的二级结构:
?-螺旋
★ α-螺旋形成的影响因素:
(二) β-折叠:
三、
四,蛋白质的变性作用:
( 5)紫外吸收增加
五、别构蛋白质与别构效应:
六、蛋白质的性质与分离分析:
1,蛋白质的酸碱性质(两性电离):
★ 蛋白质的电泳,+ -
1,醋酸纤维薄膜电泳
电泳条件,PH 8.6 缓冲液
2,利用 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量:
键,而巯基乙醇能打开二硫键。 SDS与蛋白质结合形成 SDS-蛋白质复合物,SDS阴离子遮盖
了蛋白质的表面电荷,而使其电泳取决于蛋白质的分子量大小。
★ 蛋白质的分离提纯,
★ 亲和层析:
★ 离子交换层析: