第七章酶的应用
? 随着酶的工业化纪产的发展,酶已广泛地应用
于工业、农业、医药、环保及科研等领域。酶分
子修饰,酶和细胞固定化等酶工程技本的发展,
使酶的应用显示出更加广阔美好的前景。
第一节 酶在轻工、食品方面的应用
? 目的国内外最广泛使用的领域是在食品和轻工
业部门。国内外大规模工业主产的 α—淀粉酶、
糖化酶、蛋白酶、葡萄糖异构酶、果胶酶、脂肪
酶、纤维素酶、葡萄糖氧化酶等大部分都在轻工
和食品方面应用。
一、酶在食品工业方面的应用
? 食品工业是最早和最广泛应用酶的部门
之一。目前已有几十种酶成功地用于食品
工业。例如:葡萄糖、饴糖、果葡糖浆等
的生产,蛋白质品加工,果蔬加工,食品
保鲜以及改善食品的品质与风味等。
? 1 酶法生产葡萄糖
– 酶法生产葡萄糖是以淀粉为原材料,先经 α-淀粉酶液化成
糊精,再用糖化酶催化生成葡萄糖。淀粉酶是最早实现工
业生产的酶,也是迄今为止用途最广的酶。
制造葡萄糖时酸糖化法与酶糖化法的比较
? 淀粉糖化生产葡萄糖的工艺流程。
淀 粉 浆 ( 3 0 - 5 0 % )
液 化 液 ( D E, 1 2 - 1 8 )
糖 化 液 ( D E, 9 5 - 9 6 )
α - 淀 粉 酶 液 化
淀 粉 葡 萄 糖 苷 酶 糖 化
活 性 炭, 离 子 交 换 树 脂
结 晶
结 晶 葡 萄 糖 ( 收 率 3 0 % 以 上 )
浓 缩 固 化 或 喷 雾 干 燥
粉 状 葡 萄 糖 ( 收 率 1 0 0 % )
2,果葡糖浆的生产
? 果葡糖浆是由葡萄糖异构酶催化葡萄糖异构化生成
部分果糖而得到的葡萄糖与果糖的混合糖浆。
3,饴糖的生产
4,酶在蛋白质品加工方面的应用
5.酶在果蔬加工方面的应用
6.用酶改善食品的品质和风味
二,酶在轻工方面的应用
酶在轻工业方面的应用,概括起来主要有以下三
个方面:
( 1)原料处理
( 2)用酶生产各种产品
( 3)用酶增强产品的使用效果。
1.原料处理
许多轻工原料在应用或加工之前都需要经过
原料处理。用酶处理原料可以缩短原料处理时
间,提高处理效果,提高产品质量等。
( 1)发酵原料的处理
酵母或细菌等微生物进行酒精、酒类、甘油、
乳酸、氨基酸核苷酸等生产时,大多数以淀粉、纤
维素为主要原料。由于有些微生物本身缺乏淀粉酶
和纤维素酶系,因而无法直接利用这些原料。因此
必须经过原料处理,将原料转化为微生物可利用的
小分子物质。
( 2) 纺织原料的处理
在纺织工业中,为了增强纤维的强度和光滑性,
便于纺织,需要先行上浆。将淀粉用 α-淀粉酶处理
一段时间,使粘度达到一定程度就可用作上浆的浆
料。纺织品在漂白、印染之前,还须将附着在其上
的浆料除去,利用 α-淀粉酶使浆料水解,就可使浆
料褪尽,这称为退浆。有些纺织品上浆使用的是动
物胶作胶浆,可用蛋白酶使之退浆。
(3),造纸原料的制浆
造纸原料的纤维中含有大量木质素,它容易使
纸变为褐色,强度降低。通常使用碱性硫酸盐和二氯
化盐处理以除去木质素,这些化学药品的致癌性已被
证实,因而造成严重的环境污染。用木质素酶可以使
木质素水解,这样不但可以提高纸的质量,而且使环
境污染的程度大为减轻。
(4).生丝的脱胶处理
天然蚕丝的主要成分是不溶于水的有光泽的丝
蛋白。丝蛋白的表面有一层丝胶包裹着,在高级丝绸
的制作过程中,必须进行脱胶处理,即将表面上的丝
胶除去,以提高丝的质量。采用胰蛋白酶、木瓜蛋白
酶或微生物蛋白酶处理,可在比较温和的条件下催化
丝胶蛋白水解,进行生丝脱胶。
(5),羊毛的除垢
羊毛表面有鳞状物质,即一些蛋白质聚合体。
目前应用枯草杆菌蛋白酶处理后,可以消除鳞
状物质,而且还使毛料具有防缩水性,防止羊
毛起球,形成毛毡。处理后的毛料很柔软,易
于染色。
2,轻工产品制造方面的应用
(1)酶法生产 L-氨基酸
? L-型氨基酸是人体内蛋白质合成的原料,因而 L-
型氨基酸在医学和食品工业上有很重要的意义。
– 工业上已用固定化大肠杆菌菌体的天门冬氨酸酶将延胡索酸(反
丁烯二酸)氨基化生成 L-天门冬氨酸。以 L-天门冬氨酸为底物,
采用固定化假单胞菌菌体的天门冬氨酸脱羧酶,可连续生产 L-丙
氨酸。
– 用己内酰胺水解酶生产 L-赖氨酸:该法由 L--α-氨基 -ε-己内酰氨水
解酶与 α– 氨基 -ε-己内酰胺消旋酶联合作用,将 DL-α氨基- ε-
己内酰胺转化为L-赖氨酸。所用的原料 DL-α-氨基 -ε-己内酰胺
是由合成尼龙的副产品环己烯通过化学合成法得到的。原料中的
L- α-氨基- ε-己内酰胺,经L- α-氨基- ε-己内酰胺水解
酶作用后生成 L-赖氨酸。余下的 D- α-氨基- ε-己内酰胺在
消旋酶的作用下变成 DL-型,再把其中的 L-型水解为 L-赖氨酸。
如此重复进行,可把原料几乎都变成 L-赖氨酸。
– 用噻唑啉羧酸水解酶合成 L-半胱氨酸, 将化学合成的 DL-2-氨基噻
唑啉 -4-羧酸中的 L-2-氨基噻唑啉 -4-羧酸经噻唑啉羧酸水解酶作用
生成 L-半胱氨酸。余下的 D-2-氨基噻唑啉 -4-羧酸再经消旋酶作用
变成 DL-型。反复进行,不断生成 L-半胱氨酸。
(2)酶法生产核苷酸
? 核苷酸在食品和医药等方面有重要用途,可利
用多种酶进行生产。例如:用桔青酶或产黄青酶
产生的 5ˊ -磷酸二酯酶水解核糖核酸( RNA),
生产各种 5ˊ -核苷酸。用腺苷酸脱氨酶水解 AMP
生成肌苷酸( IMP)。用核苷磷酸化酶,可催化
肌苷进行磷酸化生成 5ˊ -肌苷酸,催化鸟苷生成
5ˊ -鸟苷酸等。用核苷酸磷酸化酶,催化 AMP生
成 ADP和 ATP等。
(3) 酶法生产有机酸
? 酶法合成有机酸也是结合有机化学合成与生化
合成的长处而构成的生产工艺,已经用于工业生
产的有苹果酸,酒石酸和长链脂肪酸等。此外乳
酸等也可用于酶法合成。
如:苹果酸的酶法合成
? L-苹果酸在食品工业为一优良的酸味剂,
在化工,印染,医药品生产上也有不少用
途,可用发酵法和酶法生产,工业上以富
马酸为原料,通过微生物富马酸酶合成的。 H C O O H
HH O O C
C O O H
C H 2
C H
C O O H
H 2 O
富 马 酸 酶
H O
富 马 酸
苹 果 酸
3.加酶增加产品的使用效果
? 在某些轻工产品中添加一定量的酶,可以显著
地增加产品的使用效果。
( 1) 加酶洗涤剂:
– 洗涤用的酶制剂需要满足下列条件:
( 1)碱性条件( pH 9-10)下能够有效洗涤;
( 2)表面活性剂( LAS,AOS)存在下,很少失活;
( 3)在荧光染料、漂白剂、香料等洗涤剂辅助成分存在下不失
活;
( 4)在洗涤温度下能有效地发挥作用。
– 衣服上有机污垢 15-40%以蛋白质与纤维结合的方式存
在,如果将酶加入洗衣粉中,用酶来分解污物上的蛋白
质、油脂及淀粉类物质,能有效地除去污垢,大大缩短
洗涤时间,防止衣物发黄变色,提高洗涤效果。
( 2)加酶牙膏,牙粉和漱口水:
将适当的酶添加到牙膏,牙粉或漱口水中,
可以利用酶的催化作用,增加洁齿效果,减少
牙垢并防止龋齿的发生。可添加到洁齿用品中
的酶有蛋白酶,淀粉酶,脂肪酶和右旋糖酐酶
等。其中右旋糖酐酶对预防龋齿有显著效果。
( 3) 加酶饲料:
酶应用于饲料,其作用一为补充畜禽内源酶的不
足。,有助于提高畜禽健康水平和生产性能。
另一作用为解除饲料中抗营养因子。所谓抗营
养因子,是指饲料中对养分起拮抗作用的一些
成分,
( 4)加酶护肤品
在各种护肤品及化妆品中添加超氧化物歧
化酶( SOD)、碱性磷酸酶、尿酸酶和弹
性蛋白酶等,可有效地提高护肤效果。因
溶菌酶可以水解细菌的细胞膜,除治疗以
外,还可以做润肤霜、洗发膏和洗面奶等。
NovoNordisk 公司生产与化妆品相关的制
品,含有可以清除皮肤表面死亡的细胞的
蛋白酶。另外为了清除皮肤表面的自由基,
使用抗衰老的超氧化物歧化酶也在计划之
中。
第二节 酶在医药方面的应用
– 随着对疾病发生的分子机制的深入了解,医
药用酶的应用范围越来越广泛。酶在医药领
域的应用主要是用于疾病的诊断、治疗和制
造药物。
一、疾病诊断方面的应用
? 疾病治疗效果的好坏,在很大程度上决定于
诊断的准确性。疾病诊断的方法很多,其中酶学
诊断发展迅速。由于酶催化的高效性和特异性,
酶学诊断方法具有可靠、简便又快捷的特点,在
临床诊断中已被广泛应用。酶学诊断方法包括两
个方面,一是根据体内原有酶活力的变化来诊断
某些疾病,二是利用酶来测定体内某些物质的含
量,从而诊断某些疾病。
1.根据体液内酶活力的变化诊断疾病
一般健康人体液内所含有的某些酶的量是恒定在某一
范围的。若出现某些疾病,则体液内的某种或某些
酶的活力将会发生相应的变化。故此,可以根据体
液内某些酶的活力变化情况,而诊断出某些疾病。
酶 疾病与酶活力变化
葡萄糖氧化酶 测定血糖含量,诊断糖尿病
胆碱脂酶 测定胆固醇含量,治疗皮肤病、支气管炎、气喘
尿酸酶 测定尿酸含量,治疗痛风
淀粉酶 胰脏疾病,肾脏疾病时升高;肝病时下降
胆碱酯酶 肝病时下降
酸性磷酸酶 前列腺癌、肝炎、红血球病变时,活力升高
碱性磷酸酶 佝偻病、软骨化病、骨瘤、甲状旁腺机能亢进时,活力升高;
软骨发育不全等,活力下降
谷丙转氨酶 肝炎等疾病、心肌梗塞等,活力升高
谷草转氨酶 肝病、心肌梗塞等,活力升高
胃蛋白酶 胃癌时,活力升高;十二指肠溃疡时,活力下降
磷酸葡糖变位酶 肝炎、癌症时、活力下降
醛缩酶 癌症、肝病心肌梗塞等,活力升高
葡萄糖醛缩酶 肾癌及膀胱癌,活力升高
碳酸酐酶 坏血病、贫血等,活力升高
乳酸脱氢酶 癌症、肝病、心肌梗塞、活力升高
2,用酶测定体液中某些物质的量诊断疾病
? 酶具有专一性强、催化效率高等特点,可以利用酶来
测定体液中某些物质的含量从而诊断某些疾病。例如:
利用葡萄糖氧化酶和过氧化氢酶的联合作用,检测血液
或尿液中葡萄糖的含量,从而作为糖尿病临床诊断的依
据,这两种酶都可以固定化后制成酶试纸或酶电极,可
十分方便的用于临床检测。
? 此外,酶标免疫测定在疾病诊断方面的应用也越来越广
泛。所谓酶标免疫测定,是先把酶与某种抗体或抗原结
合,制成酶标记的抗体或抗原。然后利用酶标抗体(或
酶标抗原)与待测定的抗原(或抗体)结合,再借助于
酶的催化特性进行定量测定,测出酶 -抗体 -抗原结合物中
的酶的含量,就可以计算出欲测定的抗体或抗原的含量。
通过抗体或抗原的量就可诊断某种疾病。
二、疾病治疗方面的应用
? 由于酶具有专一性和高效率的特点,所以
在医药方面使用的酶具有种类多,用量少,纯
度高的特点。
1.蛋白酶
蛋白水解酶是能够使蛋白质构造和功能发生变化的酶,它对于
细胞运动、组织的破坏和变形、激素的活化、受体和配基的
相互作用、感染、细胞增殖等过程都有影响。蛋白酶可用于
治疗多种疾病,是临床上使用最早、用途最广的药用酶之一。
目前临床上使用的蛋白酶大部分来自于动物和植物,如胰蛋
白酶、胃蛋白酶和菠萝蛋白酶等。
蛋白酶在医药领域的应用最初是在消化药上,用于治疗消化不良
和食欲不振。
2.溶菌酶
溶菌酶也是一种应用广泛的药用酶,具有抗菌、消炎、镇痛等
作用。用于治疗手术性出血、咯血、鼻出血,分解脓液,消
炎镇痛,治疗外伤性浮肿,增强放射线治疗的效果等。
3.超氧化物歧化酶
? 超氧化物歧化酶( SOD)催化超氧负离子
( O2ˉ)进行氧化还原反应,使机体免遭 O2ˉ的损
害。因此 SOD具有抗辐射作用,并对红斑狼疮、
皮炎、结肠炎及氧中毒等疾病有显著疗效。
4.L-天门冬酰胺酶
? L-天门冬酰胺酶是第一种用于治疗白血病的酶。
因为癌细胞生长时需要天冬酰氨。 L-天门冬酰胺
酶可以切断天冬酰胺的供给,因此对癌症,特别
是白血病的治疗有显著疗效。
三、在药物生产方面的应用
– 酶在药物制造方面的应用是利用酶的催
化作用将前体物质转变为药物。这方面的应
用日益增多。现已有不少药物包括一些贵重
药物都是由酶法生产的(表 9-14)。
1.青霉素酰化酶
R C
O
N H
N
S C H
C H 3
O C O O H
3
青 霉 素
青 霉 素 酰 化 酶
N H 2
N
S C H
C H 3
O C O O H
3
R C
O
O H
6 - A P A
2.β-酪氨酸酶
– β-酪氨酸酶可催化 L-酪氨酸或邻苯二酚生成二
羟苯丙氨酸( DOPA,多巴)。反应如下。多巴
(Dopa)是治疗帕金森氏 (Parkinson)综合症的一
种重要药物。
– 所谓帕金森氏综合症是 1817年英国医师
Parkinson所描述的一种大脑中枢神经系统发
生病变的老年性疾病。其主要症状为手指颤抖,
肌肉僵直,行动不便。病因是由于遗传原因或
人体代谢失调,不能由酪氨酸生成多巴或多巴
胺(一种神经传递介质)。
H O C H 2 C H C O O H
N H 2
H O C H 2 C H C O O H
N H 2
H O
酪 氨 酸
多 巴 ( D O P A )
[ O ]
酪 氨 酸 酶
H O
H O
邻 苯 二 酚
+ C H 3 C O C O O H + N H 3
酪 氨 酸 酶
丙 酮 酸
H O C H 2 C H C O O H
N H 2
H O
D O P A
3.核苷磷酸化酶
? 核苷中的核糖被阿拉伯糖取代可以形成阿糖苷。
阿糖苷具有抗癌和抗病毒的作用,是令人注目的药
物。其中阿糖腺苷疗效显著。阿糖腺苷(腺嘌呤阿
拉伯糖苷)可由嘌呤核苷磷酸化酶催化阿糖尿苷
(尿嘧啶阿拉伯糖苷)转化而成。
? 由阿糖尿苷生成阿糖腺苷的反应分两步完成。首先
阿糖尿苷在尿苷磷酸化酶的作用下生成阿拉伯糖 -1-
磷酸:
O
O H
CH O H 2
H O
N
N
O
O H
H 3 P O 4
尿 苷 磷 酸 化 酶
N
N
O H
OH
O
O P O 2 H 2
O H
H O H 2 C
H O
阿 糖 尿 苷
阿 拉 伯 糖 - 1 - 磷 酸
? 然后阿糖 -1-磷酸再在嘌呤核苷磷酸化酶的
作用下生成阿糖腺苷。
O
O P O 2 H 2
O H
H O
H O H 2 C
N
N
N H 2
N
N
H 3 P O 4
嘌 呤 核 苷 磷 酸 化 酶
O
O H
N
N
N H 2
N
N
H O H 2 C
H O
阿 拉 伯 糖 — 1 - 磷 酸
阿 糖 腺 苷
4.无色杆菌蛋白酶
人胰岛素与猪胰岛素只有在 B 链第 30位的氨
基酸不同。无色杆菌( Achromobacter lydicus)
蛋白酶可以特异性地催化胰岛素 B链羧基末端
(第 30位)上的氨基酸置换反应,由猪胰岛素
( Ala -30)转变为人胰岛素( Thr -30),以
增加疗效。具体过程为:在无色杆菌蛋白酶作
用下,猪胰岛素第 30位的丙氨酸被水解除去,
然后在同一酶的作用下使之与苏氨酸丁脂偶联。
然后用三氟乙酸( TFA)和苯甲醚除去丁醇,
即得到人胰岛素。
第三节 在分析检测方面的应用
? 利用酶催化作用的高度专一性对物质进行检测,已成
为物质分析检测的重要手段。
? 用酶进行物质分析检测的方法统称为酶法检测或酶法
分析。酶法检测是以酶的专一性为基础、以酶作用后
物质的变化为依据来进行的。故此,要进行酶法检测
必须具备两个基本条件:一是要有专一性高的酶,二
是对酶作用后的物质变化要有可靠的检测方法。
? 酶法检测一般包括两个步骤。第一步是酶反应。将酶
与样品接触,在适宜的条件下(包括温度,pH值、抑
制剂和激活剂浓度等)进行催化反应。第二步是测定
反应前后物质的变化情况,即测定底物的减少,产物
的增加或辅酶的变化等。
? 根据酶反应的不同,酶法检测可以分成单酶反应,多
酶偶连反应和酶标免疫反应等三类
1,单酶反应检测
利用单一种酶与底物反应,然后用各种方法测出
反应前后物质的变化情况,从而确定底物的量。
这是最简单的酶法检测技术。使用的酶可以是游
离酶,也可以是固定化酶或单酶电极等。现举例
说明如下:
( 1) L-谷氨酸脱羧酶
L-谷氨酸脱羧酶专一地催化 L-谷氨酸脱羧生成 γ-氨基丁酸和二
氧化碳,生成的二氧化碳可以用华勃氏呼吸仪或二氧化碳电
极等测定。该酶已经广泛地用于 L-谷氨酸的定量分析。可使
用的酶形式有游离酶和酶电极。
( 2) 脲酶
脲酶能专一地催化尿素水解生成氨和二氧化碳。通过气体检测
或者使用氨电极、二氧化碳电极等,测出氨或二氧化碳的量,
从而确定尿素的含量。
( 3) 葡萄糖氧化酶
根据葡萄糖氧化酶能专一地氧化葡萄糖这一特点,可利
用它进行葡萄糖的检测。葡萄糖氧化酶能够催化葡萄
糖的氧化反应生成葡萄糖酸和双氧水,反应中所消耗
氧的量或生成的葡萄糖酸的量都与葡萄糖有定量的关
系。用 pH电极、氧电极和 Pt( H2O2)电极等可以测
定酸的生成或氧的减少来确定葡萄糖的量。该酶已广
泛地用于食品、发酵工业和临床诊断等方面。
( 4) 胆固醇氧化酶
该酶催化胆固醇与氧反应生成胆固醇(胆甾烯酮)。通
过气体检测技术或者使用氧电极来测出氧的减少量,
就可以确定胆固醇的含量。
( 5) 虫荧光素酶
该酶可催化荧光素( LH2)与腺三磷( ATP)反
应,使 ATP水解生成 AMP和焦磷酸,放出的能
量转变为光。通过光度计或光量计测出光量,
就可以测出 ATP的量。可以将虫荧光素酶固定
在光导纤维上,并与光量计结合组成酶荧光传
感器,可以快速、简便灵敏地检测出 ATP。
? 单酶催化反应进行物质检测具有简便、快
捷、灵敏、准确的特点,是酶法检测中最
广泛采用的技术。固定化酶与能量转换器
密切结合组成的单酶电极,使酶法检测朝
连续化、自动化的方向发展。
2,酶偶联反应检测
多酶偶联反应检测是利用两种或两种以上酶的联合作
用,使底物通过两步或多步反应,转化为易于检测的
产物,从而测定被测物质的量。有些物质经过单酶催
化反应后,对物质变化情况进行检测时会受到其他物
质的干扰,表现为检测的灵敏度不高等现象,使检测
难于进行或检测结果的精确度不够。为此可采用两种
或两种以上的酶进行连续式或平行式的偶连反应,使
酶法检测易于进行并达到较理想的结果。利用多酶偶
联反应检测已有不少成功的例子。
① 萄糖氧化酶与过氧化物酶偶联
② β-半乳糖苷酶与葡萄糖氧化酶偶联
③ 己糖激酶与葡萄糖氧化酶偶联
3,酶标记免疫反应检测
– 酶标记免疫反应检测首先是将适宜的酶与
抗原或抗体结合在一起。若要测定样品中抗原
含量,就将酶与欲测定的对应抗体结合,制成
酶标抗体,反之,若要测定抗体,则需先制成
酶标抗原。然后将酶标抗体(或酶标抗原)与
样品液中待测抗原(或抗体),通过免疫反应
(或抗体)结合在一起,形成酶 -抗体 -抗原复
合物。通过测定复合物中酶的含量就可得出欲
测定的抗原或抗体的量。
– 常用于酶标免疫测定的酶有碱性磷酸酶和过
氧化氢酶等。
第四节 酶在生物工程中的应用
– 生物工程主要包括基因工程、细胞工程、酶
工程和发酵工程等 4个方面内容。
一、酶在除去细胞壁方面的应用
微生物细胞和植物细胞的表层部有细胞壁。
细胞壁对微生物和植物维持其细胞的形状和
结构起着重要作用,可保护细胞遭外界因素
的破坏。但在生物工程方面,很多时候都需
要除去细胞壁。例如:
(1)胞内物质的提取
(2)原生质体的制备:
? 根据不同纳脑的结构和细胞壁组分的不同,
除去细胞壁时所采用的酶也有所区别。现
分述如下
① 除去细菌细胞壁
② 除去酵母细胞壁
③ 除去霉菌细胞壁
④ 植物细胞壁的破除
二、酶在大分子切割方面的应用
– 生物工程经常与生物大分子打交道。在许
多情况下需要把大分子切割成较小的分子或
片断,以便在生物工程的有关领域使用。在
生物大分子的切割过程中往往要求在特定的
位点上进行,这就只能借助于具有专一性的
各种水解酶或其他酶类才能做到。
1,限制性核酸内切酶
2,DNA外切核酸酶
3,碱性磷酸酶
4,核酸酶 S1
三、酶在分子拼接方面的应用
? 许多酶都具有分子拼接能力,能将两个或多个
分子连接在一起而合成较大的分子。这些酶类
在生物体内是至关重要的,它们催化各种各样
的生物合成反应。
1,DNA连接酶
2,DNA聚合酶
DNA聚合酶的共同特点是:
(1)需要模板或引物。
(2)不能起始新的 DNA链的合成。
(3)催化脱氧核苷三磷酸加到 DNA链的 3’—OH末端。
(4)合成的方向是从 5’—末端至 3’—末端。
3,末端脱氧核苷酸转移酶
4,反转录酶
本章结束
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