土壤脲酶活性测定（NH4+释放量法）
脲酶是酰胺水解酶的一种，在自然界中分布广泛，植物、动物和微生物细胞中均含有此酶。土壤中的脲酶主要来源于微生物和植物。脲酶催化尿素的水解反应：
在反应过程中，氨基甲酸盐是中间产物。脲酶还能够催化羟基脲、二羟基脲、半卡巴脲等化合物的水解。脲酶含有镍，分子量在151，000 Da～480，00 Da之间。能够抑制脲酶活性的化合物有含硼化合物、尿素衍生物、甲醛、原子量大于50的重金属的盐、含氟化合物、醌和多元酚、抗代谢剂、杂环硫醇等。
1,试验原理
通过对新鲜土壤与尿素溶液在37℃培养2h后测定氨释放量，估计脲酶的活性 (Tabatabai,1994)。
2,试验仪器
50mL容量瓶；培养箱或恒温水浴；蒸馏定氮仪。
3,试验试剂（所用试剂均为分析纯）
a,甲苯（C6H5CH3）;
b,缓冲液：三（羟甲基）氨基甲烷[c（C2H8O3N3）=0.05mol·L-1,pH9.0]：称取6.1g三（羟甲基）氨基甲烷（Tris (hydroxymethyl) aminomethane）溶入700mL蒸馏水中，用c（H2SO4）=0.2mol·L-1的硫酸溶液调pH至9.0，再用蒸馏水定容至1000mL;
c,尿素溶液{c[CO(NH2)2]=0.2 mol·L-1}：称取1.2g尿素溶入约80mL缓冲液中，后用该缓冲液定容至100mL。尿素溶液要当天配制，并在4℃下保存备用；
d,氯化钾硫酸银混合溶液[c（KCl）＝2.5mol·L-1]－[ρ（Ag2SO4）=100mg·L-1]：先将100mg Ag2SO4溶于700mL蒸馏水中，再加入188g的KCl（分析纯）使之溶解，在定容至1000mL；
e,氧化镁（MgO）：于高温电炉中，将氧化镁在600℃-700℃温度下灼烧2h，再放置于干燥器中冷却，贮于瓶中；
f,混合指示剂：溶解0.099g的溴甲酚绿和0.066g甲基红于100mL的乙醇（95％纯度）中；
g,硼酸指示剂溶液[ρ（H3BO3）=20g·L-1]：溶解20g硼酸于950mL的热蒸馏水中，冷却，加入20mL的混合指示剂，充分混匀后，小心滴加氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.1mol·L-1],直至溶液呈红紫色（pH约4.5），稀释成1L；
h,硫酸标准溶液[c（1/2H2SO4）=0.005mol·L-1]。
4,试验步骤
将5.00g新鲜土样（<2mm）放置于50mL容量瓶中，加入0.2mL甲苯（试剂a）和9mL缓冲溶液（试剂b），轻摇混匀后加入1.0mL尿素溶液（试剂c），再次轻摇混匀并塞上瓶塞。在37℃下培养2h。然后加入约35mL的KCl-Ag2SO4溶液（试剂d），轻摇容量瓶几秒钟后，放置至室温（约5min），用KCl-Ag2SO4溶液定容，摇匀。同时要仪同样步骤做空白，只是培养2h后先加35mL的KCl-Ag2SO4溶液，然后加入1.0mL尿素溶液。
蒸馏法测氨：取土壤悬浮液20mL至蒸馏瓶中，加入0.2g的MgO，用硼酸指示溶液吸收，蒸馏液的体积约为30mL。用c（1/2H2SO4）＝0.005 mol·L-1的H2SO4标准溶液滴定。
5,结果计算
式中：ω（N）－单位时间内氨态氮的释放量，mg·kg-1h-1；
c－1/2H2SO4标准溶液的浓度，mol·L-1；
V－H2SO4标准溶液的体积，mL；
ts－分取系数，2.5；
14－氮的摩尔质量，mg·mmol-1；
2－培养时间，2h；
m－样品质量，g；
k－水分系数。
6,注意：
a,与其他缓冲液（如磷酸盐缓冲液）相比，三（羟甲基）氨基甲烷缓冲液优点在于它能够有效地防止铵的固定。在配制该缓冲液时必须用硫酸而不是盐酸来调pH，因为后者能够促进脲酶的活性；
b,在配制KCl-Ag2SO4溶液时，应将KCl溶于溶解后的Ag2SO4溶液中，因为Ag2SO4在KCl溶液中不溶。加入KCl-Ag2SO4混合溶液后脲酶的活性停止，因此该悬浮液在测定氨之前可以放置2h。
方法来源：鲁如坤,土壤农业化学分析方法,北京,中国农业科技出版社,2000.
脲酶是酰胺水解酶的一种，在自然界中分布广泛，植物、动物和微生物细胞中均含有此酶。土壤中的脲酶主要来源于微生物和植物。脲酶催化尿素的水解反应：
在反应过程中，氨基甲酸盐是中间产物。脲酶还能够催化羟基脲、二羟基脲、半卡巴脲等化合物的水解。脲酶含有镍，分子量在151，000 Da～480，00 Da之间。能够抑制脲酶活性的化合物有含硼化合物、尿素衍生物、甲醛、原子量大于50的重金属的盐、含氟化合物、醌和多元酚、抗代谢剂、杂环硫醇等。
1,试验原理
通过对新鲜土壤与尿素溶液在37℃培养2h后测定氨释放量，估计脲酶的活性 (Tabatabai,1994)。
2,试验仪器
50mL容量瓶；培养箱或恒温水浴；蒸馏定氮仪。
3,试验试剂（所用试剂均为分析纯）
a,甲苯（C6H5CH3）;
b,缓冲液：三（羟甲基）氨基甲烷[c（C2H8O3N3）=0.05mol·L-1,pH9.0]：称取6.1g三（羟甲基）氨基甲烷（Tris (hydroxymethyl) aminomethane）溶入700mL蒸馏水中，用c（H2SO4）=0.2mol·L-1的硫酸溶液调pH至9.0，再用蒸馏水定容至1000mL;
c,尿素溶液{c[CO(NH2)2]=0.2 mol·L-1}：称取1.2g尿素溶入约80mL缓冲液中，后用该缓冲液定容至100mL。尿素溶液要当天配制，并在4℃下保存备用；
d,氯化钾硫酸银混合溶液[c（KCl）＝2.5mol·L-1]－[ρ（Ag2SO4）=100mg·L-1]：先将100mg Ag2SO4溶于700mL蒸馏水中，再加入188g的KCl（分析纯）使之溶解，在定容至1000mL；
e,氧化镁（MgO）：于高温电炉中，将氧化镁在600℃-700℃温度下灼烧2h，再放置于干燥器中冷却，贮于瓶中；
f,混合指示剂：溶解0.099g的溴甲酚绿和0.066g甲基红于100mL的乙醇（95％纯度）中；
g,硼酸指示剂溶液[ρ（H3BO3）=20g·L-1]：溶解20g硼酸于950mL的热蒸馏水中，冷却，加入20mL的混合指示剂，充分混匀后，小心滴加氢氧化钠溶液[c(NaOH)=0.1mol·L-1],直至溶液呈红紫色（pH约4.5），稀释成1L；
h,硫酸标准溶液[c（1/2H2SO4）=0.005mol·L-1]。
4,试验步骤
将5.00g新鲜土样（<2mm）放置于50mL容量瓶中，加入0.2mL甲苯（试剂a）和9mL缓冲溶液（试剂b），轻摇混匀后加入1.0mL尿素溶液（试剂c），再次轻摇混匀并塞上瓶塞。在37℃下培养2h。然后加入约35mL的KCl-Ag2SO4溶液（试剂d），轻摇容量瓶几秒钟后，放置至室温（约5min），用KCl-Ag2SO4溶液定容，摇匀。同时要仪同样步骤做空白，只是培养2h后先加35mL的KCl-Ag2SO4溶液，然后加入1.0mL尿素溶液。
蒸馏法测氨：取土壤悬浮液20mL至蒸馏瓶中，加入0.2g的MgO，用硼酸指示溶液吸收，蒸馏液的体积约为30mL。用c（1/2H2SO4）＝0.005 mol·L-1的H2SO4标准溶液滴定。
5,结果计算
式中：ω（N）－单位时间内氨态氮的释放量，mg·kg-1h-1；
c－1/2H2SO4标准溶液的浓度，mol·L-1；
V－H2SO4标准溶液的体积，mL；
ts－分取系数，2.5；
14－氮的摩尔质量，mg·mmol-1；
2－培养时间，2h；
m－样品质量，g；
k－水分系数。
6,注意：
a,与其他缓冲液（如磷酸盐缓冲液）相比，三（羟甲基）氨基甲烷缓冲液优点在于它能够有效地防止铵的固定。在配制该缓冲液时必须用硫酸而不是盐酸来调pH，因为后者能够促进脲酶的活性；
b,在配制KCl-Ag2SO4溶液时，应将KCl溶于溶解后的Ag2SO4溶液中，因为Ag2SO4在KCl溶液中不溶。加入KCl-Ag2SO4混合溶液后脲酶的活性停止，因此该悬浮液在测定氨之前可以放置2h。
方法来源：鲁如坤,土壤农业化学分析方法,北京,中国农业科技出版社,2000.
