土壤蛋白酶测定（加勒斯江法）
1,分析意义
蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化。它们的水解产物是高等植物的氮源之一。土壤蛋白酶在剖面中的分布与蔗糖酶相似，酶活性随剖面深度而减弱。并与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
2,试验原理
蛋白酶能酶促蛋白物质水解成肽，肽进一步水解成氨基酸。
测定土壤蛋白酶常用的方法是比色法，根据蛋白酶酶促蛋白质产物－氨基酸与某些物质（如铜盐蓝色络合物或茚三酮等）生成带颜色络合物。依溶液颜色深浅程度与氨基酸含量的关系，求出氨基酸量，以表示蛋白酶活性。
3,试验步骤
取2g过1mm筛的风干土置于50mL容量瓶中，加入10mL 1％用pH7.4磷酸盐缓冲溶液配制的白明胶溶液和0.5mL甲苯（作为抑菌剂抑制微生物活动）；在30℃恒温箱中培养24h；培养结束后，将瓶中内容物过滤；取5mL滤液置于试管中，加入0.5mL 0.1N硫酸和3mL 20％硫酸钠以沉淀蛋白质，然后滤入50mL容量瓶，并加入1mL 2％茚三酮溶液；将混合物仔细摇荡，并在煮沸的水浴中加热10min；将获得的着色溶液用蒸馏水稀释定容至刻度线；最后在560nm处进行比色。
用干热灭菌的土壤和不含土壤的基质（如石英砂）作对照，方法如前所述，以除掉土壤原有的氨基酸引起的误差。换算成甘氨酸的量，根据用甘氨酸标液制取的标准曲线查知。
4,试剂配制
a,1%白明胶溶液（用pH7.4的磷酸盐缓冲液配制）；
b,甲苯；
c,磷酸盐缓冲液（pH7.4）；
d,0.1N H2SO4;
e,20％ Na2SO4；
f,2％茚三酮溶液：将2g茚三酮溶于100mL丙酮，然后将95mL该溶液与1mL CH3COOH和4mL水混合制成工作液（该工作液不稳定，只能在使用前配制）；
g,甘氨酸标准液：浓度为1mL含100μg甘氨酸的水溶液：0.1g甘氨酸溶解于1L蒸馏水中。再将该标液稀释10倍得10μg甘氨酸?1mL-1溶液的甘氨酸工作液。
标准曲线绘制：分别吸取0、1、3、5、7、9、11mL该工作液于50mL容量瓶中即获得甘氨酸浓度分别为0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2μg?mL-1的标准溶液梯度，然后加入1mL 2％茚三酮溶液。冲洗瓶颈后将混合物仔细摇荡，并在煮沸的水浴中加热10min。将获得的着色溶液用蒸馏水稀释至刻度。在560nm处进行比色，最后绘制标准曲线。
5,结果计算：
土壤蛋白酶的活性，以24h后1g土壤中甘氨酸的微克数表示。
甘氨酸（μg?g-1）－24小时后1g土壤中甘氨酸的微克数；
c－标准曲线上查得的甘氨酸浓度，μg?mL-1；
50－显色液体积，mL；
ts－分取倍数（这里是2＝10/5）；
m－土壤质量，g。
方法来源：曹承绵,张志明,周礼恺,几种土壤蛋白酶活性测定方法的比较,土壤通报,1982,13(2),39-40.
1,分析意义
蛋白酶参与土壤中存在的氨基酸、蛋白质以及其他含蛋白质氮的有机化合物的转化。它们的水解产物是高等植物的氮源之一。土壤蛋白酶在剖面中的分布与蔗糖酶相似，酶活性随剖面深度而减弱。并与土壤有机质含量、氮素及其他土壤性质有关。
2,试验原理
蛋白酶能酶促蛋白物质水解成肽，肽进一步水解成氨基酸。
测定土壤蛋白酶常用的方法是比色法，根据蛋白酶酶促蛋白质产物－氨基酸与某些物质（如铜盐蓝色络合物或茚三酮等）生成带颜色络合物。依溶液颜色深浅程度与氨基酸含量的关系，求出氨基酸量，以表示蛋白酶活性。
3,试验步骤
取2g过1mm筛的风干土置于50mL容量瓶中，加入10mL 1％用pH7.4磷酸盐缓冲溶液配制的白明胶溶液和0.5mL甲苯（作为抑菌剂抑制微生物活动）；在30℃恒温箱中培养24h；培养结束后，将瓶中内容物过滤；取5mL滤液置于试管中，加入0.5mL 0.1N硫酸和3mL 20％硫酸钠以沉淀蛋白质，然后滤入50mL容量瓶，并加入1mL 2％茚三酮溶液；将混合物仔细摇荡，并在煮沸的水浴中加热10min；将获得的着色溶液用蒸馏水稀释定容至刻度线；最后在560nm处进行比色。
用干热灭菌的土壤和不含土壤的基质（如石英砂）作对照，方法如前所述，以除掉土壤原有的氨基酸引起的误差。换算成甘氨酸的量，根据用甘氨酸标液制取的标准曲线查知。
4,试剂配制
a,1%白明胶溶液（用pH7.4的磷酸盐缓冲液配制）；
b,甲苯；
c,磷酸盐缓冲液（pH7.4）；
d,0.1N H2SO4;
e,20％ Na2SO4；
f,2％茚三酮溶液：将2g茚三酮溶于100mL丙酮，然后将95mL该溶液与1mL CH3COOH和4mL水混合制成工作液（该工作液不稳定，只能在使用前配制）；
g,甘氨酸标准液：浓度为1mL含100μg甘氨酸的水溶液：0.1g甘氨酸溶解于1L蒸馏水中。再将该标液稀释10倍得10μg甘氨酸?1mL-1溶液的甘氨酸工作液。
标准曲线绘制：分别吸取0、1、3、5、7、9、11mL该工作液于50mL容量瓶中即获得甘氨酸浓度分别为0、0.2、0.6、1.0、1.4、1.8、2.2μg?mL-1的标准溶液梯度，然后加入1mL 2％茚三酮溶液。冲洗瓶颈后将混合物仔细摇荡，并在煮沸的水浴中加热10min。将获得的着色溶液用蒸馏水稀释至刻度。在560nm处进行比色，最后绘制标准曲线。
5,结果计算：
土壤蛋白酶的活性，以24h后1g土壤中甘氨酸的微克数表示。
甘氨酸（μg?g-1）－24小时后1g土壤中甘氨酸的微克数；
c－标准曲线上查得的甘氨酸浓度，μg?mL-1；
50－显色液体积，mL；
ts－分取倍数（这里是2＝10/5）；
m－土壤质量，g。
方法来源：曹承绵,张志明,周礼恺,几种土壤蛋白酶活性测定方法的比较,土壤通报,1982,13(2),39-40.
