三、定量分析饲料中汞的定量分析方法主要有冷原子吸收分光光度法和双硫腙比色法两种。 ㈠ 冷原子吸收分光光度法1、原理 样品经硫酸硝酸消化，使汞转变成离子状态，在强酸性溶液中以氯化亚锡（SnCl2）将汞离子还原成元素汞，以氮气或干燥清洁空气作载体将汞吹出，于253.7nm波长处进行原子吸收测定，与标准系列比较定量。2、特点 具有较高的灵敏度，干扰少和操作简便等特点，是国家标准法，适合于汞含量低于1mg/kg的饲料样品测定。 ㈡ 双硫腙比色法双硫腙比色法是经典法，干扰因素多，需分离或掩蔽干扰离子，操作较繁，需严格操作才能得到满意结果，适用于测定含汞量高于1mg/kg的饲料样品。1、原理 样品经消化后，汞离子在酸性溶液中与双硫腙作用生成橙色色络合物，经氯仿萃取后，于490nm波长下与标准系列比色定量。 2、仪器与器皿 消化装置，分光光度计，电炉，125ml分液漏斗。 3、试剂 ⑴ 硝酸。 ⑵ 硫酸。 ⑶ 氨水。 ⑷ 三氯甲烷：不应含有氧化物。 ⑸ 1N硫酸 量取5ml硫酸，缓缓倒入150ml水中，冷后加水至180ml. ⑹ 5%liusuan 量取5ml硫酸，缓缓倒入90ml水中，冷后加水至98ml。 ⑺ 麝香草酚蓝指示剂 0.1%乙醇溶液。 ⑻ 20%盐酸羟胺溶液 ⑼ 0.05%三氯甲烷溶液为双硫腙溶液：保存于冰箱中。 ⑽ 双硫腙使用液：吸取1.0ml0.05%双硫腙三氯甲烷溶液，加三氯甲烷至10ml，混匀。用1cm比色皿，以三氯甲烷作参比，于波长510nm下测吸光度，用下式算出配制100ml双硫腙使用液（７０％透光率）所需0.05%双硫腙三氯甲烷溶液的ml数（Ｖ）。 Ｖ＝10×= 然后取Ｖml0.05%双硫腙三氯甲烷溶液用三氯甲烷稀释至100ml。 ⑾ 汞标准溶液 精确称取0.1354g经干燥过的二氯化汞，加1N硫酸溶解后，移入100ml容量瓶中，并水稀释至刻度。此溶液每1ml相当于1mg汞。 ⑿ 汞标准使用液 吸取1.0ml汞标准溶液，置于100ml容量瓶中,加1N硫酸稀释至刻度。此溶液每毫升相当于10(g。再吸取此液5.0ml于50ml容量瓶中,加1N硫酸稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1(g。 ４、操作方法 ⑴ 将消化液在电炉上煮沸10min，除去二氧化氮等，放冷。向消化液及试剂空白加5%高锰酸钾溶液至溶液呈紫色，然后再加、1ml20%盐酸羟胺溶液使紫色褪去，加2滴麝香草酚蓝指示剂，用氨水调节pH，使橙红色变为橙黄色（pH1-2）。定量移入分液漏斗中。 ⑵ 吸取汞标准使用液0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0ml（相当于0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0(g铅），分别置于125ml分液漏斗中，各加10 ml5%硫酸，加水至40ml，混匀。再各加1ml20%盐酸羟胺，放置20min。%硝酸溶液至20ml。 ⑶ 于样品、试剂空白和标准液的分液漏斗中加5.0ml双硫腙使用液，剧烈振摇2分钟，静置分层后，三氯甲烷层经脱脂棉滤入1cm比色杯中，以三氯甲烷作参比，于波长490nm测吸光度，以标准管吸光度减去零管吸光度，绘制工作曲线。根据样品和试剂空白的吸光度，在工作曲线上求出其含量。 5、结果计算 汞（mg/Kg）= 式中：A1——样品消化液中汞的含量，ug； A0——试剂空白液中汞的含量，(g； m——样品质量，g； 第五节 砷的分析 一、概述砷是一种广泛存在于自然界的类金属元素。多以重金属的砷化合物和硫砷化合物的形式混存于金属矿石中。自然界中的砷多为五价，而污染环境的砷多为三价的无机化合物。虽然元素砷的毒性极低，而其化合物绝大部分具有很强的毒性，一般认为无机砷的毒性大于有机砷，无机砷中三价砷的毒性又远大于五价砷，尤以三氧化二砷毒性最大。 常见的无机砷化合物有三氧化二砷（习称砒霜或信石）、砷酸钠、亚砷酸钠、砷酸铅等，主要用于冶金、玻璃、木材防腐、医药、驱虫、饲料添加剂等；有机砷化合物主要有甲基硫砷（苏化911）、稻脚青（甲基砷酸锌）、稻宁（甲基砷酸钙）、田安（甲基砷酸铁铵）、退菌特等，主要用于农田杀虫剂。 ㈠ 砷中毒的病因1、砷化合物用于畜禽的药浴、驱虫或饲料添加剂时用量过大或使用不当。2、误食以含砷农药处理过的种子、喷洒过含砷农药的农作物或饮用被砷化物污染的饮水。3、误食含砷的灭鼠毒饵。4、摄入或饮用被含砷农药厂、硫酸厂、氮肥厂及金属冶炼厂等排出的工业三废污染的作物和饮水。 ㈡ 砷毒性及其机理 砷及其化合物可以通过呼吸道、消化道及皮肤进入机体。吸收后的砷化物首先聚于肝脏，然后分布到各个组织中；慢性中毒时，主要各积聚于骨骼、皮肤和角质组织。 砷化物主要通过和体内酶蛋白的分子结构中的—SH结合，使酶失去活性而产生毒性作用。其中以丙酮酸氧化酶最敏感。因而干扰正常代谢，导致细胞死亡。首先影响神经细胞，导致周围神经炎。 砷还可以直接损害毛细血管和血管舒缩中枢，引起毛细血管扩张，血管通透性增加。 急性中毒先出现消化道症状：流涎、口腔粘膜肿胀溃疡等、呕吐、呕吐物有蒜臭味、腹泻、腹痛、粪便混有血液和粘膜脱落物，继面出现神经症状，最后因循环衰竭而死亡。 慢性中毒主要表现为消化道症状、局部脱毛、后期精神沉郁、皮肤感觉减退。 ㈢ 饲料中砷的卫生标准 由于砷化合物毒性较大，不但危害动物，而且还会影响到人的健康。因此，国家对饲料中的砷含量作了强制性规定。 鱼粉≤10mg/kg；石粉≤2mg/kg；磷酸盐≤10mg/kg；鸡配合饲料，猪配合、混合饲料≤2mg/kg。 二、样品处理 有消化法或灰化法两种。 1、灰化法 灰化法时要加氧化镁或硝酸镁作助灰化剂。具体操作如下： 5.0g样品加1g氧化镁、10ml15%硝酸镁溶液混匀，浸泡4小时，于水浴上蒸干，用小火炭化至无烟后转入高温炉内，550℃灼烧3~4小时。冷却后加水5ml湿润，水浴蒸干。550℃灼烧2小时，冷却后再加5ml水湿润，加10ml6N盐酸，转入容量瓶中，坩埚先用6N盐酸再用水各洗三次，每次5ml，并入容量瓶中，定容至50ml。 2、消化法 5~10g样品加10~15ml硝酸—高氯酸（4：1）混合液，小心加热待作用缓和后，放冷，慢慢加入5~10ml硫酸，再加热，当瓶中液体开始变棕色时，不断沿壁慢慢加入硝酸—高氯酸混合液至有机质完全分解，加大火力至产生白烟，放冷，加水20ml除去残余硝酸及氮氧化物。如此处理两次，放冷，转入50或100ml容量瓶中，用水定容备用。 三、定量分析 砷的测定方法有二乙基二硫代氨基甲酸银法（银盐法）、砷斑法、示波极谱法和原子吸收分光光度法。目前简单而常用的方法是银盐法和砷斑法。二乙基二硫代氨基甲酸银法中又分锌粒还原比色法和测砷器发生比色法。砷斑法是半定量方法，可测定痕量砷。 ㈠ 砷斑法 是半定量方法，可测定痕量砷。 1、原理：样品经消化后，在酸性条件下，以碘化钾、氯化亚锡将五价砷还原成三价砷，然后与锌粒和酸反应产生的新生态氢作用生成砷化氢，再与溴化汞试纸生成黄色至橙色的色斑，与标准砷斑比较进行定量。HS气体有类似反应，可用醋酸铅除去干扰。 2、仪器与器皿 ⑴ 测砷管 全长18cm，自管口向下至14cm一段的内径约为6。5mm，自此以下逐渐变细，末端内径约为1—3mm，近末端1cm处有一孔，直径2mm。上部较粗部分装入乙酸铅棉花，长约6cm，距离管口至少3cm。管口为圆形平管口，上面磨平，平面两侧各有一钩，为固定玻璃帽用。 ⑵ 玻璃帽 下面磨平，与侧管口相配。中央有圆孔，孔径为6。5mm，上面有弯月形凹槽以便能用橡皮圈与测砷管的小钩固定和易于取走玻璃帽。玻璃帽与测砷管之间夹一溴化滤纸。 ⑶ 100ml锥形瓶。 ⑷ 橡皮塞。 3、试剂 ⑴ 5%溴化汞—乙醇溶液。 ⑵ 6N盐酸。 ⑶ 硝酸。 ⑷ 10%乙酸铅溶液。 ⑸ 硫酸。 ⑹ 硝酸-高氯酸混合液（4：1）。 ⑺ 氧化镁。 ⑻ 盐酸。 ⑼ 20%氢氧化钠溶液。 ⑽ 无砷锌粒。 ⑾ 硝酸镁及硝酸镁溶液：称取15g硝酸镁[Mg（NO3）2·6H2O]溶于100ml水中。 ⑿ 15%碘化钾溶液；贮存于棕色瓶中。 ⒀ 氯化亚锡溶液：称取40g氯化亚锡（SnCl2。2H2O），加盐酸溶解并稀释至100ml，加入数颗金属锡粒。 ⒁ 溴化汞试纸：将剪成直径2cm的圆形滤纸片，在5%溴 化汞乙醇溶液上浸渍1小时，保存于冰箱中，临用前置暗处阴干备用。 ⒂ 乙酸铅棉：用10%乙酸铅溶液浸透脱脂棉后，压除多余溶液，并使用权疏松，在100以下干燥后，贮存于玻璃瓶中。 ⒃ 砷标准溶液：精确称取0。1320g已在105干燥2小时的三氧化二砷于250ml烧杯中，加5ml20%氢氧化钠溶液，溶解后加25ml10%硫酸，移入1000ml容量瓶中，加刚煮沸并冷却的水至刻度，贮于棕色瓶中。此溶液相当于0。1mg/ml。 ⒄ 砷标准使用液：吸取1.0ml砷标准溶液于100ml容量瓶中，加1ml10%硫酸，加水稀释至刻度。此液每ml相当于1ug砷。 ⒅ 10%硫酸溶液：量取5.7ml硫酸于80ml水中，冷却后加水至100ml。 4、操作方法 ⑴ 吸取20ml消化后样品液（2g）及同量试剂空白液于测砷瓶中，加5ml15%碘化钾溶液、5滴酸性氯化亚锡溶液和5ml盐酸，再加适当水至35ml。 ⑵ 吸取砷标准使用液0.0、0.5、1.0、2.0ml（相当于0、0.5、1.0、2.0(g砷），分别置于测砷瓶中，加5ml15%碘化钾溶液，5滴酸性氯化亚锡溶液和5ml盐酸，再加适当水至35ml。 ⑶ 于样品、试剂空白和标准液的测砷管中各加3g锌粒。立即塞上预先装有乙酸铅和溴化汞试纸的测砷管，于25℃放置1h。取出样品、空白的溴化汞试纸与标准砷斑比较。 5、结果计算 汞（mg/Kg）=÷ 式中：A1——测定用样品消化液中砷的含量，ug； A0——试剂空白液中汞的含量，(g； m——样品质量，g； V1——样品消化液总体积，ml； V2——测定用样品消化液体积，ml。 ㈡ 二乙基二硫代氨基甲酸银法（银盐法） 1、原理：样品经消化后，经KI、氯化亚锡将五价还原为三价砷，然后与锌和酸反应生成的新生态氢作用生成砷化氢（AsH3），砷化氢再与二乙基二硫代氨基甲酸银（AgDDC）作用，生成红色胶态银，与标准系列比较定量。 反应所生成的酸需中和掉，才有利于反应的进行，常用的碱有吡啶、三乙醇胺、三乙胺、麻黄碱、 马钱子碱等，其中以吡啶的效果最好，但吡啶的毒性大，且其臭难闻，故常用三乙醇胺。 硫化氢、锑化氢也能与AgDDC作用而干扰测定，需预先除去。硫化氢可用醋酸铅棉花吸收；锑的干扰可通过加入足量的KI 和氯化亚锡将锑还原成元素状态，从而防止其生成锑化氢干扰测定。 该法为国家标准法，但灵敏度不高。