[实验三 ] 细菌普通染色
和革兰氏染色
清华大学微生物实验室,100084
?目的要求
?a,掌握细菌涂片标本的制备方法和普
通染色的步骤和关键点
?b,掌握革兰氏染色法的步骤和关键点
?c,识别细菌的革兰氏染色结果并画图
?d,学习无菌操作技术
? 材料用具
? 显微镜，擦镜纸，纱布
? 革兰氏染液
? 香柏油,自来水,95%酒精 ;
? 载玻片,插镜纸,接种环,镊子,酒精灯 ;
? 金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,未知
菌 12小时的液体培养液
? 大肠杆菌和酵母菌平板
实验步骤
? 1.涂片
? 左手持菌液试管,右手
持接种环在火焰中灼烧,
冷却后从试管中去菌液
一滴,在洁净载玻片上
做一涂膜 ;
? 从固体斜面或平板上取
菌时,用无菌接种环取
少量菌体,涂抹均匀于
玻片上预先滴有的一滴
自来水中 ;
实验步骤
? 2.干燥
? 在空气中自然干燥或在
火焰快速通过干燥 (与
热固定同步进行 ).
? 3.热固定
? 用镊子夹住涂片一端,
在火焰上连续通过几次 ;
以载玻片在手背上试感
觉不烫为宜,
实验步骤
? 4.染色
? 在固定的标本上加结晶
紫染液 1-2滴,染色 1min,
轻轻滴加水洗 ; 吸干,加
半滴水,盖上盖玻片,滴
上半滴镜油油镜检。
(到此实际上即为细菌
普通染色 )
? 揭去盖玻片,吸干水,滴
加 1-2滴革氏碘液媒染
1min,轻轻水洗,吸干。
实验步骤
? 滴加 95%乙醇溶液 (或
30%丙酮乙醇脱色 ),轻
轻摇动玻片至液滴无色,
不要过分脱色 (约 30秒 ),
立即轻轻滴加水洗 ;吸
干。
? 滴加蕃红染液复染 3min,
轻轻滴加水洗 ;
? 吸干载玻片背面及标本
周围水渍,滴上半滴水，
盖上盖玻片,油镜镜检 ;
实验步骤
? 5.镜检
? 注意标本中细菌的
形态,
大小,排列,和颜色,
? 革兰氏阳性菌为紫
色 ;
? 革兰氏阴性菌为红
色 ;
金黄色葡萄球菌 (24hrs)染色结果
金黄色葡萄球菌 (48hrs)染色结果
金黄色葡萄球菌 (72hrs)染色结果
大肠杆菌 (24hrs)染色结果
讨论
? 记录并描绘革兰氏染色结果,注意形状,
排列和颜色,看看与理论上是否相同 ;如
不同,分析原因 ;
? 分析影响革兰氏染色结果的因素 ;
? 酵母菌能进行染色吗?结果如何?为什么?
注意事项
? 干净的载玻片,合适取菌量,菌龄,热固定,
每一步水洗要彻底而且吸干,和酒精脱色
程度是实验成功的关键
? 禁止把染液倒入水池中,回收到废液桶中
实验三结束，准备实验四
? 肉汤蛋白胨培养基的配制（按实验指导 61页配方琼脂
为 2％）。 400ml/组置 500ml三角烧瓶中用封口膜封好
瓶口，用记号笔在瓶上标明培养基名称、组号（如周
次－座次,1－ 3－ 2）、配制时间，高压灭菌。
? 包平皿 10个 /包 /组、试管 4支 /包 /组,1ml枪头 2个 /包 /组、
5 ml枪头 1个 /包 /组、涂布器 1个 /包 /组，高压灭菌。
? 洗平皿 10个 /组。
? 说明：以上内容全班交叉进行。
Thank you!
和革兰氏染色
清华大学微生物实验室,100084
?目的要求
?a,掌握细菌涂片标本的制备方法和普
通染色的步骤和关键点
?b,掌握革兰氏染色法的步骤和关键点
?c,识别细菌的革兰氏染色结果并画图
?d,学习无菌操作技术
? 材料用具
? 显微镜，擦镜纸，纱布
? 革兰氏染液
? 香柏油,自来水,95%酒精 ;
? 载玻片,插镜纸,接种环,镊子,酒精灯 ;
? 金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,未知
菌 12小时的液体培养液
? 大肠杆菌和酵母菌平板
实验步骤
? 1.涂片
? 左手持菌液试管,右手
持接种环在火焰中灼烧,
冷却后从试管中去菌液
一滴,在洁净载玻片上
做一涂膜 ;
? 从固体斜面或平板上取
菌时,用无菌接种环取
少量菌体,涂抹均匀于
玻片上预先滴有的一滴
自来水中 ;
实验步骤
? 2.干燥
? 在空气中自然干燥或在
火焰快速通过干燥 (与
热固定同步进行 ).
? 3.热固定
? 用镊子夹住涂片一端,
在火焰上连续通过几次 ;
以载玻片在手背上试感
觉不烫为宜,
实验步骤
? 4.染色
? 在固定的标本上加结晶
紫染液 1-2滴,染色 1min,
轻轻滴加水洗 ; 吸干,加
半滴水,盖上盖玻片,滴
上半滴镜油油镜检。
(到此实际上即为细菌
普通染色 )
? 揭去盖玻片,吸干水,滴
加 1-2滴革氏碘液媒染
1min,轻轻水洗,吸干。
实验步骤
? 滴加 95%乙醇溶液 (或
30%丙酮乙醇脱色 ),轻
轻摇动玻片至液滴无色,
不要过分脱色 (约 30秒 ),
立即轻轻滴加水洗 ;吸
干。
? 滴加蕃红染液复染 3min,
轻轻滴加水洗 ;
? 吸干载玻片背面及标本
周围水渍,滴上半滴水，
盖上盖玻片,油镜镜检 ;
实验步骤
? 5.镜检
? 注意标本中细菌的
形态,
大小,排列,和颜色,
? 革兰氏阳性菌为紫
色 ;
? 革兰氏阴性菌为红
色 ;
金黄色葡萄球菌 (24hrs)染色结果
金黄色葡萄球菌 (48hrs)染色结果
金黄色葡萄球菌 (72hrs)染色结果
大肠杆菌 (24hrs)染色结果
讨论
? 记录并描绘革兰氏染色结果,注意形状,
排列和颜色,看看与理论上是否相同 ;如
不同,分析原因 ;
? 分析影响革兰氏染色结果的因素 ;
? 酵母菌能进行染色吗?结果如何?为什么?
注意事项
? 干净的载玻片,合适取菌量,菌龄,热固定,
每一步水洗要彻底而且吸干,和酒精脱色
程度是实验成功的关键
? 禁止把染液倒入水池中,回收到废液桶中
实验三结束，准备实验四
? 肉汤蛋白胨培养基的配制（按实验指导 61页配方琼脂
为 2％）。 400ml/组置 500ml三角烧瓶中用封口膜封好
瓶口，用记号笔在瓶上标明培养基名称、组号（如周
次－座次,1－ 3－ 2）、配制时间，高压灭菌。
? 包平皿 10个 /包 /组、试管 4支 /包 /组,1ml枪头 2个 /包 /组、
5 ml枪头 1个 /包 /组、涂布器 1个 /包 /组，高压灭菌。
? 洗平皿 10个 /组。
? 说明：以上内容全班交叉进行。
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