第十四章 血清学反应
? 血清学反应,抗原抗体在体外结合的反应，因
实施反应的某些重要因素是含抗体的动物血清，
故名血清学反应。
? 血清学反应具有严格的特异性和较高的敏感性，
因此可用抗原或抗体的已知一方检测未知的另
一方，作为传染病的辅助诊断和微生物的鉴定。
一、凝集反应
1、直接凝集反应：
细菌、红细胞等颗粒性 Ag与相应 Ig混合以后，
在电解质参与下，经过一定时间 Ag颗粒相
互凝集形成肉眼可见凝集块。
? 参与凝集反应的 Ag称凝集原,Ig称凝集素。
? 平板法和试管法
2、间接凝集反应
? 先将可溶性 Ag或 Ig吸附于一种与免疫无关
的有一定大小的颗粒载体表面制成固相 Ag
或 Ig，再与相应的待检 Ig或 Ag结合产生的
反应。
分为两类：
间接血球凝集反应（ HA）
间接血球凝集抑制反（ HI）
? 间接血球凝集反应（ HA）
＋
＋
阳性
? 间接血球凝集抑制反（ HI）
＋
＋
阳性 阴性
二、沉淀反应
? 胶体状态的可溶性 Ag（如细菌和寄生虫的浸出液、
组织浸出液、培养滤液、动物血清等）与相应 Ig
混合后，经一定时间，形成肉眼可见的沉淀物。
? 临床上常用于诊断炭疽、梅素、鼠疫、猪丹毒、
气肿疽等传染病。
? 沉淀反应分为以下三种：
实验管：
4mm小管 已知 Ig 层叠未知 Ag 交界面白色沉淀
环
对照管：
4mm小管 已知 Ig 层叠生理盐水 交界面无沉淀环
1,环状沉淀反应（ Ascoli反应）
2、絮状沉淀反应：
? 将 Ag和相应在试管内或凹玻片上混匀，经
过一定时间性，出现肉可见絮状或颗粒状
不溶性沉淀物为阳性。
? 如诊断梅毒的康氏反应，及用标准类毒素
测定抗毒素血清效价的絮状试验等。
3、琼脂扩散试验
? 单相琼扩：将已知（ 1,10稀释），加入等量
的 1%琼脂（ 56℃ ）管（或平板）中，凝固
后，于其上（打孔）加待检 Ag（孔中），置
37℃ 湿合感作,2-3h后可见白色沉淀带。
? 双相琼扩,1%琼脂凝胶制成平板后，在上面
按设计图形打孔，在孔内分别加 Ag和 Ig，放
密闭湿盒中，将使之双相扩散而形成沉淀带。
单相琼扩 双相琼扩
含已知 Ig琼脂 被检血清（ Ig）
待检 Ag 已知 Ag
三、补体结合反应
? 溶菌反应：
某些细菌（霍乱
弧菌）与相应的抗
体混合以后，如有
补体参加，则细菌
发生溶解的反应，
称溶菌反应。
? 溶血反应：
红细胞与相应的
抗体（溶血素）混
合以后，如有补体
以参加，则红细胞
发生溶解的反应，
称溶血反应。
补体的特点
1、补体是酶类物质，但均以无活性的前体形
式存在于血清中
2、动物血清中尤其以豚鼠血清含量最高，故
多用豚鼠的新鲜血清作为补体的来源
3、补体性质不稳定，易失活，经 56度 30分
处理即灭活
4,补体本身没有特异性能与任
何一组抗原抗体复合物相结
合，一但结合后不再游离。
5、补体不与单独的抗原或单独
的抗体相结合。
补体结合反应的概念
?补体结合反应（简称补反 CFT）：
是指在补体参加下，以绵羊红细
胞（ Ag）和抗绵羊溶血素（ Ig）作为
指示系统的抗原抗体反应。
补体结合反应的原理
补反包括两个系统五种成分：
? 一是被检系统（溶菌系）中的
已知 Ag、待检 Ig及仅供一组
Ag-Ig系统反应的定量补体。
? 二是指示系统（溶血系）中的
红细胞和溶血素。
? 首先是溶菌系统的抗原与抗体复合物与
补体相互混合后产生的反应。
? 其次为了测知溶菌系统中补体是否被利
用，再加入溶血系（绵红细胞和抗绵溶
血素）作为指示系统，以观察因补体游
离所产生的溶血情况。
? 如果反应的结果是不溶血为诊断阳性，
发生了溶血为诊断阴性。
操作与结果
? 操练时，分两步进行：
将待检系统的 Ag,Ig与补体三种成加入试管
内，于 37度水浴作用 30分钟，然后加入指示
系统，于 37℃ 水浴作用 30分钟，观察结果。
? 结果观察：
不溶血为诊断阳性，发生溶血为阴性
四、中和实验
? 病毒或毒素与相应 Ig以一定比例混合后，
经过一定时间，病毒丧失对易感动物的致
病性，或消除毒素在试管内的溶血现象，
谓之中和反应。
? 该试验既可在体外进行，也可在体内进行，
可利用小动物、鸡胚、活细胞等作试验。
操作如下：
五、免疫荧光法
? 荧光素,如异硫氰酸荧光素（ FITC）、丽
丝胺罗丹明 B（ RB200）等受紫外线照射
后可发荧光（ FITC 为绿色,RB200为玫
瑰红色）。
? 荧光 Ig,将荧光素（染料）连接在提纯的
Ig分子上，这种用荧光素标记的 Ig。
免疫荧光法反应原理
? 荧光素与 Ig分子结合后，并不改变
其与相应 Ag结合的特性，当用这种
荧光 Ig对受检标本染色后，在荧光
显微镜下观察，可见暗视野中闪烁
荧光的细菌等，根据这种现象便能
对标本中相应 Ag进行鉴定和定位 。
免疫荧光技术示意图
? 被检 Ag + 荧光 Ig 荧光复合物
? 被检 Ag + 标准 Ig + 荧光抗 Ig 荧光复合物
? 被检 Ag+标准 Ig+补体 +荧光 抗补体 +补体 荧光复合物
六、免疫酶技术
免疫酶技术分类
? 免疫酶组化,
直接法 间接法
? 酶联免疫吸附试验（ ELISA ）,
检测 Ag的双 Ig夹心法
检测 Ig的间接法
? 血清学反应,抗原抗体在体外结合的反应，因
实施反应的某些重要因素是含抗体的动物血清，
故名血清学反应。
? 血清学反应具有严格的特异性和较高的敏感性，
因此可用抗原或抗体的已知一方检测未知的另
一方，作为传染病的辅助诊断和微生物的鉴定。
一、凝集反应
1、直接凝集反应：
细菌、红细胞等颗粒性 Ag与相应 Ig混合以后，
在电解质参与下，经过一定时间 Ag颗粒相
互凝集形成肉眼可见凝集块。
? 参与凝集反应的 Ag称凝集原,Ig称凝集素。
? 平板法和试管法
2、间接凝集反应
? 先将可溶性 Ag或 Ig吸附于一种与免疫无关
的有一定大小的颗粒载体表面制成固相 Ag
或 Ig，再与相应的待检 Ig或 Ag结合产生的
反应。
分为两类：
间接血球凝集反应（ HA）
间接血球凝集抑制反（ HI）
? 间接血球凝集反应（ HA）
＋
＋
阳性
? 间接血球凝集抑制反（ HI）
＋
＋
阳性 阴性
二、沉淀反应
? 胶体状态的可溶性 Ag（如细菌和寄生虫的浸出液、
组织浸出液、培养滤液、动物血清等）与相应 Ig
混合后，经一定时间，形成肉眼可见的沉淀物。
? 临床上常用于诊断炭疽、梅素、鼠疫、猪丹毒、
气肿疽等传染病。
? 沉淀反应分为以下三种：
实验管：
4mm小管 已知 Ig 层叠未知 Ag 交界面白色沉淀
环
对照管：
4mm小管 已知 Ig 层叠生理盐水 交界面无沉淀环
1,环状沉淀反应（ Ascoli反应）
2、絮状沉淀反应：
? 将 Ag和相应在试管内或凹玻片上混匀，经
过一定时间性，出现肉可见絮状或颗粒状
不溶性沉淀物为阳性。
? 如诊断梅毒的康氏反应，及用标准类毒素
测定抗毒素血清效价的絮状试验等。
3、琼脂扩散试验
? 单相琼扩：将已知（ 1,10稀释），加入等量
的 1%琼脂（ 56℃ ）管（或平板）中，凝固
后，于其上（打孔）加待检 Ag（孔中），置
37℃ 湿合感作,2-3h后可见白色沉淀带。
? 双相琼扩,1%琼脂凝胶制成平板后，在上面
按设计图形打孔，在孔内分别加 Ag和 Ig，放
密闭湿盒中，将使之双相扩散而形成沉淀带。
单相琼扩 双相琼扩
含已知 Ig琼脂 被检血清（ Ig）
待检 Ag 已知 Ag
三、补体结合反应
? 溶菌反应：
某些细菌（霍乱
弧菌）与相应的抗
体混合以后，如有
补体参加，则细菌
发生溶解的反应，
称溶菌反应。
? 溶血反应：
红细胞与相应的
抗体（溶血素）混
合以后，如有补体
以参加，则红细胞
发生溶解的反应，
称溶血反应。
补体的特点
1、补体是酶类物质，但均以无活性的前体形
式存在于血清中
2、动物血清中尤其以豚鼠血清含量最高，故
多用豚鼠的新鲜血清作为补体的来源
3、补体性质不稳定，易失活，经 56度 30分
处理即灭活
4,补体本身没有特异性能与任
何一组抗原抗体复合物相结
合，一但结合后不再游离。
5、补体不与单独的抗原或单独
的抗体相结合。
补体结合反应的概念
?补体结合反应（简称补反 CFT）：
是指在补体参加下，以绵羊红细
胞（ Ag）和抗绵羊溶血素（ Ig）作为
指示系统的抗原抗体反应。
补体结合反应的原理
补反包括两个系统五种成分：
? 一是被检系统（溶菌系）中的
已知 Ag、待检 Ig及仅供一组
Ag-Ig系统反应的定量补体。
? 二是指示系统（溶血系）中的
红细胞和溶血素。
? 首先是溶菌系统的抗原与抗体复合物与
补体相互混合后产生的反应。
? 其次为了测知溶菌系统中补体是否被利
用，再加入溶血系（绵红细胞和抗绵溶
血素）作为指示系统，以观察因补体游
离所产生的溶血情况。
? 如果反应的结果是不溶血为诊断阳性，
发生了溶血为诊断阴性。
操作与结果
? 操练时，分两步进行：
将待检系统的 Ag,Ig与补体三种成加入试管
内，于 37度水浴作用 30分钟，然后加入指示
系统，于 37℃ 水浴作用 30分钟，观察结果。
? 结果观察：
不溶血为诊断阳性，发生溶血为阴性
四、中和实验
? 病毒或毒素与相应 Ig以一定比例混合后，
经过一定时间，病毒丧失对易感动物的致
病性，或消除毒素在试管内的溶血现象，
谓之中和反应。
? 该试验既可在体外进行，也可在体内进行，
可利用小动物、鸡胚、活细胞等作试验。
操作如下：
五、免疫荧光法
? 荧光素,如异硫氰酸荧光素（ FITC）、丽
丝胺罗丹明 B（ RB200）等受紫外线照射
后可发荧光（ FITC 为绿色,RB200为玫
瑰红色）。
? 荧光 Ig,将荧光素（染料）连接在提纯的
Ig分子上，这种用荧光素标记的 Ig。
免疫荧光法反应原理
? 荧光素与 Ig分子结合后，并不改变
其与相应 Ag结合的特性，当用这种
荧光 Ig对受检标本染色后，在荧光
显微镜下观察，可见暗视野中闪烁
荧光的细菌等，根据这种现象便能
对标本中相应 Ag进行鉴定和定位 。
免疫荧光技术示意图
? 被检 Ag + 荧光 Ig 荧光复合物
? 被检 Ag + 标准 Ig + 荧光抗 Ig 荧光复合物
? 被检 Ag+标准 Ig+补体 +荧光 抗补体 +补体 荧光复合物
六、免疫酶技术
免疫酶技术分类
? 免疫酶组化,
直接法 间接法
? 酶联免疫吸附试验（ ELISA ）,
检测 Ag的双 Ig夹心法
检测 Ig的间接法
