其它毒性试验
? 皮肤给药毒性试验
? 皮肤给药的急性毒性试验
? 皮肤给药的长期毒性试验
? 皮肤刺激试验
? 皮肤过敏试验
? 光敏试验
其它毒性试验
? 腔道用药毒性试验
? 眼刺激试验
? 滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验
? 滴鼻剂和吸入剂刺激试验
? 直肠、阴道用药急性毒性试验
? 直肠、阴道用药刺激试验
其它毒性试验
? 药物依赖性试验
? 身体依赖性试验
? 自然戒断试验
? 替代试验
? 催促试验
? 诱导试验
? 精神依赖性试验
皮肤给药急性毒性试验
? 目的, 观察短期接触受试物后皮肤的毒性反应
? 动物, 家兔, 豚鼠或大鼠, ♀♂ 各半, 家兔体
重２ kg,豚鼠 300g,大鼠 200g左右,给药前 24h将
动物背部脊柱两侧毛脱掉,去毛范围约相当于
体表面积的 10%左右,(家兔约 150cm2左右,豚
鼠, 大鼠约 40cm2左右 ）
? 药物：膏剂, 液体或粉末 。 粉末需用赋形剂
（ 如羊毛脂, 凡士林等 ） 混匀, 以保证受试物
与皮肤有良好的接触
皮肤给药急性毒性试验
? 剂量,3个, 组距 0.65－ 0.85。 家兔每组４只,
豚鼠或大鼠每组 10只并设赋形剂或空白对照组
? 方法：将受试物均匀涂敷于脱毛区, 破损皮肤
则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物 。 24h后
去除, 每日观察, 连续 7-14天 。 观察动物体重,
皮肤, 毛发, 眼睛和粘膜的变化, 呼吸, 循环,
中枢神经系统, 四肢活动等变化 。 若有死亡则
进行尸检, 当有肉眼可见病变, 则需进行病检
? 判断：试验结果与对照组比较判断
皮肤给药的长期毒性试验
? 目的：观察经皮渗透产生的异常反应和可逆程
度, 找到靶器官
? 动物：家兔 (2kg,6只 /组 ),豚鼠 (300g,10只 /组 )
或大鼠 (200g,10只 /组 ),♀♂ 各半 。 给药前
24h动物背部脊柱两侧脱毛, 面积同急毒
? 受试物：同急性毒性试验
? 剂量：３个, 要求同大鼠口服长毒试验, 并设
赋形剂或空白对照组, 若用受试物剂量超过有
效浓度 20倍以上, 仍未见动物有不良反应或死
亡时, 则只须设一个高剂量组
皮肤给药的长期毒性试验
? 方法：将受试物均匀涂敷,每日一次, 每次至
少接触６ h,临床用药疗程的３倍以上时间连
续给药 。 若出现毒性反应, 部分动物应于停药
后继续观察１ -２周, 以确定毒性反应可逆程
度
? 检测指标：除每日观察皮肤, 临床变化及皮肤
病理学检查外, 其血液学, 血液生化指标和病
理学检查项目同大鼠长期毒性试验要求
? 判断：实验结果应写明安全剂量、中毒剂量、
中毒表现、中毒靶器官及中毒的可逆程度等
皮肤刺激试验
? 目的：观察刺激反应情况
? 动物：首选家兔 (2kg左右 ),其次为豚鼠 (300g
左右 )。 药前 24h脱毛, 家兔每侧脱约 50cm2，
豚鼠每侧脱约 20cm2
? 受试物：同急性毒性试验
? 方法,≥３只家兔或５只豚鼠, 在受试物区,
对照区和破损皮肤区 （ 脱毛后 ）, 一次或多次
将受试物１ ml或 1 g涂于受试物区, 赋形剂则
涂于对照区 。 24h后去除 。 观察 1,24,48和
72h涂抹部位有无红斑和水肿等, 变化的恢复
情况和时间
皮肤刺激试验
? 多次给药则每日涂抹一次, 连续一周, 其余均
与一次给受试物的方法和要求一致
? 结果评价：每只动物试验结果进行刺激反应评
分，计算出平均分值进行刺激强度评价
皮肤刺激反应评分
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
刺激反应 分值
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
红斑,
无红斑 0
勉强可见 1
中度红斑 2
严重红斑 3
紫红色红斑并有焦痂形成 4
水肿,
无水肿 0
勉强可见 1
皮肤隆起轮廓清楚 2
水肿隆起约 1mm并范围扩大 4
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
皮肤刺激强度评价
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
强度 分值
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
无刺激性 <0.5
轻度刺激性 <2.0
中度刺激性 <6.0
强度刺激性 >6.0
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
皮肤过敏试验
? 目的, 观察免疫系统反应在皮肤上的表现
? 动物：豚鼠 ♀♂ 各半 (250-300g)。 给药前 24h背
部两侧脱毛, 脱毛区每侧约 3x 3 cm2
? 受试物：若受试物是膏剂或液体, 直接试验 。
若为固体粉末, 则用水或赋形剂 （ 如羊毛脂,
凡士林, 橄榄油等 ） 混匀以保证受试物与皮肤
良好接触
? 阳性致敏物,2,4-二硝基氯代苯配成 1%的致敏
浓度和 0.1%的激发浓度
皮肤过敏试验
? 方法：分受试物组, 空白对照组, 阳性对照组,
每组 10只 （ ♀♂ 各半 ）
? 1,致敏接触：将受试物 0.1-0.2ml(ｇ )涂在左侧脱毛
区, 持续 6h。 第７天和第 14天, 同法各重复一次
? 2,激发接触：末次致敏后 14天, 将受试物 0.1-0.2ml
(ｇ )涂于右侧脱毛区, 阳性对照用 0.1%2,4—二硝基
氯代苯, ６ h后去除, 即刻观察, 然后于 24,48、
72h再次观察过敏反应情况
? 结果评价：试验结果按皮肤反应评分标准评分
后, 根据试验组与对照组豚鼠皮肤反应的差别,
按表判断受试物对皮肤过敏反应性质
? 可用致敏率 (红斑或水肿的动物例数 /受试动物
总数 )判断致敏强度
皮肤过敏反应评分标准
皮肤反应 分值
红斑形成：
无红斑 ０
轻度红斑 １
中度红斑 ２
重度红斑 ３
水肿性红斑 ４
水肿形成：
无水肿 ０
轻度水肿 １
中度水肿 ２
重度水肿 ３
致敏率分类
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
致敏率 （ %） 反应强度
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
０－ 10 弱致敏性
20－ 30 轻度致敏性
40－ 60 中度致敏性
70－ 80 高度致敏性
90－ 100 极度致敏性
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
光敏试验
? 有些受试物皮肤涂抹后遇光照可引起光
敏反应
? 若其化学结构或某些组成 （ 包括药物和赋形
剂 ） 文献报导有光敏作用者应作光敏试验
? 其化学结构和已知光敏剂相似者也应做光敏
试验
皮肤给药毒性试验有关问题
? 赋形剂对照组的设立很重要，不能忽略赋形剂
对照，更要重视赋形剂的选择，其各种指标、
规格等均应符合药用规格方能用
? 若用于各种受损皮肤时，急毒、长毒等毒性试
验也宜以模拟破损皮肤进行
? 高剂量的设计应符合制剂工艺要求，宜以剂型
允许配制浓度和允许给药容量为宜。不能将外
用药厚厚地涂在皮肤上，以增加剂量是不妥的
眼刺激试验
? 目的：观察眼睛接触受试物后产生的刺激反应
? 动物：家兔 ≥４只, 体重 2－ 3kg
? 受试物：液体或膏剂均可直接滴入或涂敷
? 剂量：用原液或原膏剂, 不必稀释, 每只眼睛
滴入 0.1ml或涂敷 0.1g以内
? 方法：滴入或涂敷于动物一侧眼结膜囊内, 另
一侧作为空白 （ 或赋形剂 ） 对照 。 给药后使眼
睛被动闭合 5－ 10分 。 记录给药后 6,24,48、
72h至 7天眼的局部反应情况
眼刺激试验
? 临床用药超过一周的受试物要进行多次给药刺
激试验, 连续给药一周以上
? 结果评价：将每只动物的眼角膜、虹膜和结膜
的刺激反应的分值相加，即是一只受试动物眼
刺激反应的总积分。把每个受试动物的刺激反
应积分的总和除以动物数，就是该受试物对眼
刺激性的最后分值，以此判定受试物刺激程度
眼刺激试验 --角膜评分
无混浊 ０
散在或弥漫性混浊, 虹膜清晰可见 1
半透明区易分辨, 虹膜模糊不清 2
出现灰白色半透明区, 虹膜细节不清,
瞳孔大小勉强看清 3
角膜不透明, 由于混浊, 虹膜无法辨认 4
眼刺激试验 --虹膜评分
正常 ０
皱褶明显加深, 充血, 肿胀,
角膜周围轻度充血, 瞳孔
对光仍有反应 １
出血, 肉眼可见坏死, 对光无
反应 （ 或出现其中一种反应 ） ２
眼刺激试验 --结膜评分
Ａ,充血 （ 指睑结膜, 球结膜部位 ）
血管正常 ０
血管充血呈鲜红色 １
血管充血呈深红色, 血管不易分辨 ２
弥漫性充血呈紫红色 ３
Ｂ,水肿
无水肿 ０
轻微水肿 （ 包括瞬膜 ） １
明显水肿, 伴有部分眼睑外翻 ２
水肿至眼睑近半闭合 ３
水肿至眼睑超半闭合 ４
Ｃ,分泌物
无分泌物 ０
少量分泌物 １
分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着 ２
分泌物使整个眼区潮湿或粘着 ３
眼刺激性评价标准
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
刺激程度 积 分
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
无刺激性 ０－３
轻度刺激性 ４－８
中度刺激性 ９－１２
强度刺激性 １３－１６
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验
? 目的：观察一次滴入或吸入后所产生的毒性反
应和死亡情况
? 动物：大鼠, 豚鼠或家兔 。 ♀♂ 各半, 大鼠,
豚鼠体重在 250-300g,家兔在 2.5kg左右
? 爱试物：液体或粉末剂
? 剂量：３个剂量, 组距 0.65-0.85为宜 。 设赋形
剂或空白对照组 。 若大剂量组 （ 超过临床预计
用量的 50倍以上 ） 未出现死亡情况时, 则只须
设一个高剂量组
滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验
? 方法：大鼠或豚鼠每组 10只, 家兔每组４只,
♀♂ 各半 。 滴入或吸入药后, 至少接触４小时,
给药后即刻观察及 7-14天观察动物全身状况,
体重, 呼吸, 循环, 中枢神经系统, 四肢活动
等变化, 若出现死亡则病检
? 结果判断：试验结果与对照组比较。如能测出
LD50值则按急性毒性试验要求计算
滴鼻剂和吸入剂刺激试验
? 目的：观察滴入或吸入后产生的刺激反应
? 动物：同上述急性毒性试验
? 受试物：液体或粉末剂
? 分组：给药组, 赋形剂组及空白对照组, 每组
家兔３只, 或大鼠或豚鼠５只
? 方法：将药滴入或喷雾于动物 。 和粘膜接触至
少４ h。 于 24h处死动物, 观察有无充血, 红肿
等现象 。 若有变化则需进行病检
? 多次给药则每天滴入或吸入一次,连续７天, 于
末次给药 24h后处死动物
? 结果判断：试验结果与对照组比较进行判断
直肠、阴道用药急毒试验
? 目的：观察直肠或阴道一次接触受试物后, 由
吸敷所产生的毒性反应和死亡情况
? 受试物：栓剂, 液体或膏剂 。
? 剂量：３个, 组距 0.65-0.85,须设赋形剂或空
白对照组
? 方法：家兔每组４只, 大鼠每组 10只 。 将受试
物置入 ≥４ h。 即刻观察 7-14天, 观察全身状况,
体重, 呼吸, 循环, 中枢神经系统, 四肢活动
等变化 。 若出现死亡时应做病检
? 结果判断：与对照组比较判断。必要时算 LD50
直肠、阴道用药刺激试验
? 目的：观察直肠, 阴道的刺激反应
? 动物：同上述急性毒性试验
? 受试物：栓剂, 液体或膏剂
? 分组：给药组, 赋形剂组和空白对照组 。 每组
家兔４只, 大鼠６只
? 方法：受试物置入 ≥４ h,24h后处死动物 。 取
出局部直肠或阴道组织 。 观察有无充血, 红肿
等现象, 若有变化需进行病检
直肠、阴道用药刺激试验
? 多次给受试物则一般每日一次, 连续７
天, 于末次给药后 24h处死动物并观察
? 结果判断：试验结果与对照组比较判断
? 腔道用药毒性试验要特别注意既要符合
剂型要求，又要考虑腔道可给容量
身体依赖性试验 --自然戒断试验
? 连续给药后突然停药, 观察戒断症状, 与同类
的代表药作对比, 判断受试药的依赖性潜力
? 动物：小, 大鼠和猴 。 小鼠体重 20-24g,每组
≥20只, 大鼠体重 180-220g,每组 ≥10只,猴体重
3-5kg,每组 3～ 5只, ♂♀ 各半
? 剂量,2～ 3,须设赋形剂对照和阳性药对照
(吗啡, 苯巴比妥或巴比妥 )。 低剂量用 ACD；
高剂量组依赖性潜力低的药物应选用接近毒性
反应的剂量, 毒性低的药物选用 MTD。 药物
可采用恒量或剂量递增的方式给予
身体依赖性试验 --自然戒断试验
? 给药途径,1～ 2种给药途径, 必须有一种与临
床用药途径相同
? 给药期限：镇痛药在小、大鼠需给药 30天，猴
需给药 90天；镇静催眠药在小、大鼠需给药
60～ 90天，猴需给药 180天。每天上下午各一
次
身体依赖性试验 --自然戒断试验
? 观察指标：镇痛药在停药前 24h及停药后 48h内
每隔 4h观察记录外观体征和行为活动, 植物神
经系统机能变化, 并称重 。 镇静催眠药在停药
前一天及停药后的 1至 2周内每天观察动物的外
观体征和行为活动及自发惊厥发生率
? 外观体征和行为活动包括：应激性, 神情过敏
(猴 ),饮食, 睡眠, 自发运动活动, 攻击性,
警觉程度, 神经反射, 竖尾, 震颤, 惊厥, 呼
吸, 体温, 体重
? 植物神经系统机能变化：腹泻, 流涎, 流泪,
恶心, 呕吐, 瞳孔大小
身体依赖性试验 --自然戒断试验
? 资料记录及整理：
? ① 动物应写明种属, 性别, 生产合格证号,
记录体重, 实验室温度及湿度
? ② 受试物应写明生产批号, 配制方法
? ③ 戒断症状用记分法统计, 对检测指标和体
重, 惊厥发生率等应设计合理的图表显示 。
实验结果进行统计处理
身体依赖性试验 --替代试验
? 给予动物代表药 (如吗啡, 巴比妥或苯巴比妥 )
产生身体依赖性后, 停止给药, 替之以受试药,
观察记录动物是否发生戒断症状及发作程度
? 动物：参照, 自然戒断试验,
? 剂量：参照, 自然戒断试验,
? 给 药 途 径, 腹 腔 注 射, 灌 胃 或, 药掺
食, (drug admixed food,DAF)法给予代表药使
产生身体依赖性, 然后停止给代表药, 以同样
给药方式给予不同剂量的受试药,观察及记录
替代期间动物的戒断行为和体重变化
身体依赖性试验 --替代试验
? 镇痛药的观察期为停止吗啡前 24h和停药
后 48h内, 每 4h观察一次；镇静催眠药的
观察为停止代表药前一天和停药后的 1～
2周内, 每天观察一次
? 采用 1～ 2种给药途径, 必须有一种与临
床用药途径相同
? 观察指标：参照, 自然戒断试验,
? 资料记录与整理：参照“自然戒断试验”
身体依赖性试验 --催促试验
? 短时期内给予动物大剂量受试药, 然后注射受
体对抗剂, 观察和记录是否出现戒断症状及其
程度 。 此法只适用于有竟争性受体对抗剂的阿
片类药物
? 动物：参照, 自然戒断试验,
? 剂量：除低剂量组一般采用临床剂量的 1至 2倍
外, 余同, 自然戒断试验,
? 给药途径：猴的实验应采用与临床给药途径相
同；大, 小鼠的实验选用二种给药途径, 其中
必须有一种与临床用药途径相同
身体依赖性试验 --催促试验
? 给药期限：猴连续给药 30～ 60天, 上, 下午各
一次, 大, 小鼠连续给药 3～ 5天
? 停药后给予阿片受体对抗剂, 常用钠洛酮, 亦
可用环丙羟丙吗啡 。 观察给受体对抗剂后 1～
2h内动物出现的戒断症状及体重变化
? 观察指标：参照, 自然戒断试验, 。 小鼠适应
观察记录跳跃次数
? 资料记录及整理：参照, 自然戒断试验,
身体依赖性试验 --诱导试验
? 应用各种诱发惊厥的方法如听源性发作和戊四
唑惊厥, 对镇静催眠药产生身体依赖性的动物,
在断药期间阈下刺激强度就可出现反跳性兴奋,
诱发惊厥
? 动物：只有大, 小鼠 。 应预先挑选对各种阈下
刺激无惊厥反应鼠
? 剂量：参照, 自然戒断试验,, 阳性代表药为
苯巴比妥或巴比妥
身体依赖性试验 --诱导试验
? 给药途径：二种, 有一种同临床途径
? 给药期限,30天, 每天二次, 上, 下午各一次
? 观察指标：听源性发作实验在停药后的一周内
每天记录发作率和体重；戊四唑实验在停药
24h后记录一次发作率和体重
? 资料记录及整理：参照, 自然戒断试验,
精神依赖性试验
? 采用, 自身给药, 测定 iv药物对动物的强化效
应
? 动物,200～ 250g的健康大鼠, ♂♀ 各半
? 剂量,1～ 2个剂量组, 加上一个阳性药对照组
(阿片类 --盐酸吗啡, 镇静催眠 --苯巴比妥钠或
戊巴比妥钠 ),每组 10只动物 。
? 方法：戊巴比妥钠麻醉下行颈外静脉插管术,
将插管一端固定于血管内, 另一端与恒速泵及
药液输入系统相连 。 术后第二天开始对大鼠进
行自身给药训练, 直至动物建立自身给药 (踏
板 )行为
精神依赖性试验
? 观察指标：包括形成自身给药行为的潜伏期,
每个实验期内大鼠的自身给药次数, 行为变化,
自身给药行为随药物浓度变动的变化程度, 消
退反应, 与其它药物的相互替代等
? 资料记录及整理：参照“自然戒断试验”
? 皮肤给药毒性试验
? 皮肤给药的急性毒性试验
? 皮肤给药的长期毒性试验
? 皮肤刺激试验
? 皮肤过敏试验
? 光敏试验
其它毒性试验
? 腔道用药毒性试验
? 眼刺激试验
? 滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验
? 滴鼻剂和吸入剂刺激试验
? 直肠、阴道用药急性毒性试验
? 直肠、阴道用药刺激试验
其它毒性试验
? 药物依赖性试验
? 身体依赖性试验
? 自然戒断试验
? 替代试验
? 催促试验
? 诱导试验
? 精神依赖性试验
皮肤给药急性毒性试验
? 目的, 观察短期接触受试物后皮肤的毒性反应
? 动物, 家兔, 豚鼠或大鼠, ♀♂ 各半, 家兔体
重２ kg,豚鼠 300g,大鼠 200g左右,给药前 24h将
动物背部脊柱两侧毛脱掉,去毛范围约相当于
体表面积的 10%左右,(家兔约 150cm2左右,豚
鼠, 大鼠约 40cm2左右 ）
? 药物：膏剂, 液体或粉末 。 粉末需用赋形剂
（ 如羊毛脂, 凡士林等 ） 混匀, 以保证受试物
与皮肤有良好的接触
皮肤给药急性毒性试验
? 剂量,3个, 组距 0.65－ 0.85。 家兔每组４只,
豚鼠或大鼠每组 10只并设赋形剂或空白对照组
? 方法：将受试物均匀涂敷于脱毛区, 破损皮肤
则在脱毛区划破皮肤后再涂敷受试物 。 24h后
去除, 每日观察, 连续 7-14天 。 观察动物体重,
皮肤, 毛发, 眼睛和粘膜的变化, 呼吸, 循环,
中枢神经系统, 四肢活动等变化 。 若有死亡则
进行尸检, 当有肉眼可见病变, 则需进行病检
? 判断：试验结果与对照组比较判断
皮肤给药的长期毒性试验
? 目的：观察经皮渗透产生的异常反应和可逆程
度, 找到靶器官
? 动物：家兔 (2kg,6只 /组 ),豚鼠 (300g,10只 /组 )
或大鼠 (200g,10只 /组 ),♀♂ 各半 。 给药前
24h动物背部脊柱两侧脱毛, 面积同急毒
? 受试物：同急性毒性试验
? 剂量：３个, 要求同大鼠口服长毒试验, 并设
赋形剂或空白对照组, 若用受试物剂量超过有
效浓度 20倍以上, 仍未见动物有不良反应或死
亡时, 则只须设一个高剂量组
皮肤给药的长期毒性试验
? 方法：将受试物均匀涂敷,每日一次, 每次至
少接触６ h,临床用药疗程的３倍以上时间连
续给药 。 若出现毒性反应, 部分动物应于停药
后继续观察１ -２周, 以确定毒性反应可逆程
度
? 检测指标：除每日观察皮肤, 临床变化及皮肤
病理学检查外, 其血液学, 血液生化指标和病
理学检查项目同大鼠长期毒性试验要求
? 判断：实验结果应写明安全剂量、中毒剂量、
中毒表现、中毒靶器官及中毒的可逆程度等
皮肤刺激试验
? 目的：观察刺激反应情况
? 动物：首选家兔 (2kg左右 ),其次为豚鼠 (300g
左右 )。 药前 24h脱毛, 家兔每侧脱约 50cm2，
豚鼠每侧脱约 20cm2
? 受试物：同急性毒性试验
? 方法,≥３只家兔或５只豚鼠, 在受试物区,
对照区和破损皮肤区 （ 脱毛后 ）, 一次或多次
将受试物１ ml或 1 g涂于受试物区, 赋形剂则
涂于对照区 。 24h后去除 。 观察 1,24,48和
72h涂抹部位有无红斑和水肿等, 变化的恢复
情况和时间
皮肤刺激试验
? 多次给药则每日涂抹一次, 连续一周, 其余均
与一次给受试物的方法和要求一致
? 结果评价：每只动物试验结果进行刺激反应评
分，计算出平均分值进行刺激强度评价
皮肤刺激反应评分
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
刺激反应 分值
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
红斑,
无红斑 0
勉强可见 1
中度红斑 2
严重红斑 3
紫红色红斑并有焦痂形成 4
水肿,
无水肿 0
勉强可见 1
皮肤隆起轮廓清楚 2
水肿隆起约 1mm并范围扩大 4
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皮肤刺激强度评价
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
强度 分值
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
无刺激性 <0.5
轻度刺激性 <2.0
中度刺激性 <6.0
强度刺激性 >6.0
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皮肤过敏试验
? 目的, 观察免疫系统反应在皮肤上的表现
? 动物：豚鼠 ♀♂ 各半 (250-300g)。 给药前 24h背
部两侧脱毛, 脱毛区每侧约 3x 3 cm2
? 受试物：若受试物是膏剂或液体, 直接试验 。
若为固体粉末, 则用水或赋形剂 （ 如羊毛脂,
凡士林, 橄榄油等 ） 混匀以保证受试物与皮肤
良好接触
? 阳性致敏物,2,4-二硝基氯代苯配成 1%的致敏
浓度和 0.1%的激发浓度
皮肤过敏试验
? 方法：分受试物组, 空白对照组, 阳性对照组,
每组 10只 （ ♀♂ 各半 ）
? 1,致敏接触：将受试物 0.1-0.2ml(ｇ )涂在左侧脱毛
区, 持续 6h。 第７天和第 14天, 同法各重复一次
? 2,激发接触：末次致敏后 14天, 将受试物 0.1-0.2ml
(ｇ )涂于右侧脱毛区, 阳性对照用 0.1%2,4—二硝基
氯代苯, ６ h后去除, 即刻观察, 然后于 24,48、
72h再次观察过敏反应情况
? 结果评价：试验结果按皮肤反应评分标准评分
后, 根据试验组与对照组豚鼠皮肤反应的差别,
按表判断受试物对皮肤过敏反应性质
? 可用致敏率 (红斑或水肿的动物例数 /受试动物
总数 )判断致敏强度
皮肤过敏反应评分标准
皮肤反应 分值
红斑形成：
无红斑 ０
轻度红斑 １
中度红斑 ２
重度红斑 ３
水肿性红斑 ４
水肿形成：
无水肿 ０
轻度水肿 １
中度水肿 ２
重度水肿 ３
致敏率分类
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
致敏率 （ %） 反应强度
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
０－ 10 弱致敏性
20－ 30 轻度致敏性
40－ 60 中度致敏性
70－ 80 高度致敏性
90－ 100 极度致敏性
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
光敏试验
? 有些受试物皮肤涂抹后遇光照可引起光
敏反应
? 若其化学结构或某些组成 （ 包括药物和赋形
剂 ） 文献报导有光敏作用者应作光敏试验
? 其化学结构和已知光敏剂相似者也应做光敏
试验
皮肤给药毒性试验有关问题
? 赋形剂对照组的设立很重要，不能忽略赋形剂
对照，更要重视赋形剂的选择，其各种指标、
规格等均应符合药用规格方能用
? 若用于各种受损皮肤时，急毒、长毒等毒性试
验也宜以模拟破损皮肤进行
? 高剂量的设计应符合制剂工艺要求，宜以剂型
允许配制浓度和允许给药容量为宜。不能将外
用药厚厚地涂在皮肤上，以增加剂量是不妥的
眼刺激试验
? 目的：观察眼睛接触受试物后产生的刺激反应
? 动物：家兔 ≥４只, 体重 2－ 3kg
? 受试物：液体或膏剂均可直接滴入或涂敷
? 剂量：用原液或原膏剂, 不必稀释, 每只眼睛
滴入 0.1ml或涂敷 0.1g以内
? 方法：滴入或涂敷于动物一侧眼结膜囊内, 另
一侧作为空白 （ 或赋形剂 ） 对照 。 给药后使眼
睛被动闭合 5－ 10分 。 记录给药后 6,24,48、
72h至 7天眼的局部反应情况
眼刺激试验
? 临床用药超过一周的受试物要进行多次给药刺
激试验, 连续给药一周以上
? 结果评价：将每只动物的眼角膜、虹膜和结膜
的刺激反应的分值相加，即是一只受试动物眼
刺激反应的总积分。把每个受试动物的刺激反
应积分的总和除以动物数，就是该受试物对眼
刺激性的最后分值，以此判定受试物刺激程度
眼刺激试验 --角膜评分
无混浊 ０
散在或弥漫性混浊, 虹膜清晰可见 1
半透明区易分辨, 虹膜模糊不清 2
出现灰白色半透明区, 虹膜细节不清,
瞳孔大小勉强看清 3
角膜不透明, 由于混浊, 虹膜无法辨认 4
眼刺激试验 --虹膜评分
正常 ０
皱褶明显加深, 充血, 肿胀,
角膜周围轻度充血, 瞳孔
对光仍有反应 １
出血, 肉眼可见坏死, 对光无
反应 （ 或出现其中一种反应 ） ２
眼刺激试验 --结膜评分
Ａ,充血 （ 指睑结膜, 球结膜部位 ）
血管正常 ０
血管充血呈鲜红色 １
血管充血呈深红色, 血管不易分辨 ２
弥漫性充血呈紫红色 ３
Ｂ,水肿
无水肿 ０
轻微水肿 （ 包括瞬膜 ） １
明显水肿, 伴有部分眼睑外翻 ２
水肿至眼睑近半闭合 ３
水肿至眼睑超半闭合 ４
Ｃ,分泌物
无分泌物 ０
少量分泌物 １
分泌物使眼睑和睫毛潮湿或粘着 ２
分泌物使整个眼区潮湿或粘着 ３
眼刺激性评价标准
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刺激程度 积 分
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无刺激性 ０－３
轻度刺激性 ４－８
中度刺激性 ９－１２
强度刺激性 １３－１６
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滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验
? 目的：观察一次滴入或吸入后所产生的毒性反
应和死亡情况
? 动物：大鼠, 豚鼠或家兔 。 ♀♂ 各半, 大鼠,
豚鼠体重在 250-300g,家兔在 2.5kg左右
? 爱试物：液体或粉末剂
? 剂量：３个剂量, 组距 0.65-0.85为宜 。 设赋形
剂或空白对照组 。 若大剂量组 （ 超过临床预计
用量的 50倍以上 ） 未出现死亡情况时, 则只须
设一个高剂量组
滴鼻剂和吸入剂急性毒性试验
? 方法：大鼠或豚鼠每组 10只, 家兔每组４只,
♀♂ 各半 。 滴入或吸入药后, 至少接触４小时,
给药后即刻观察及 7-14天观察动物全身状况,
体重, 呼吸, 循环, 中枢神经系统, 四肢活动
等变化, 若出现死亡则病检
? 结果判断：试验结果与对照组比较。如能测出
LD50值则按急性毒性试验要求计算
滴鼻剂和吸入剂刺激试验
? 目的：观察滴入或吸入后产生的刺激反应
? 动物：同上述急性毒性试验
? 受试物：液体或粉末剂
? 分组：给药组, 赋形剂组及空白对照组, 每组
家兔３只, 或大鼠或豚鼠５只
? 方法：将药滴入或喷雾于动物 。 和粘膜接触至
少４ h。 于 24h处死动物, 观察有无充血, 红肿
等现象 。 若有变化则需进行病检
? 多次给药则每天滴入或吸入一次,连续７天, 于
末次给药 24h后处死动物
? 结果判断：试验结果与对照组比较进行判断
直肠、阴道用药急毒试验
? 目的：观察直肠或阴道一次接触受试物后, 由
吸敷所产生的毒性反应和死亡情况
? 受试物：栓剂, 液体或膏剂 。
? 剂量：３个, 组距 0.65-0.85,须设赋形剂或空
白对照组
? 方法：家兔每组４只, 大鼠每组 10只 。 将受试
物置入 ≥４ h。 即刻观察 7-14天, 观察全身状况,
体重, 呼吸, 循环, 中枢神经系统, 四肢活动
等变化 。 若出现死亡时应做病检
? 结果判断：与对照组比较判断。必要时算 LD50
直肠、阴道用药刺激试验
? 目的：观察直肠, 阴道的刺激反应
? 动物：同上述急性毒性试验
? 受试物：栓剂, 液体或膏剂
? 分组：给药组, 赋形剂组和空白对照组 。 每组
家兔４只, 大鼠６只
? 方法：受试物置入 ≥４ h,24h后处死动物 。 取
出局部直肠或阴道组织 。 观察有无充血, 红肿
等现象, 若有变化需进行病检
直肠、阴道用药刺激试验
? 多次给受试物则一般每日一次, 连续７
天, 于末次给药后 24h处死动物并观察
? 结果判断：试验结果与对照组比较判断
? 腔道用药毒性试验要特别注意既要符合
剂型要求，又要考虑腔道可给容量
身体依赖性试验 --自然戒断试验
? 连续给药后突然停药, 观察戒断症状, 与同类
的代表药作对比, 判断受试药的依赖性潜力
? 动物：小, 大鼠和猴 。 小鼠体重 20-24g,每组
≥20只, 大鼠体重 180-220g,每组 ≥10只,猴体重
3-5kg,每组 3～ 5只, ♂♀ 各半
? 剂量,2～ 3,须设赋形剂对照和阳性药对照
(吗啡, 苯巴比妥或巴比妥 )。 低剂量用 ACD；
高剂量组依赖性潜力低的药物应选用接近毒性
反应的剂量, 毒性低的药物选用 MTD。 药物
可采用恒量或剂量递增的方式给予
身体依赖性试验 --自然戒断试验
? 给药途径,1～ 2种给药途径, 必须有一种与临
床用药途径相同
? 给药期限：镇痛药在小、大鼠需给药 30天，猴
需给药 90天；镇静催眠药在小、大鼠需给药
60～ 90天，猴需给药 180天。每天上下午各一
次
身体依赖性试验 --自然戒断试验
? 观察指标：镇痛药在停药前 24h及停药后 48h内
每隔 4h观察记录外观体征和行为活动, 植物神
经系统机能变化, 并称重 。 镇静催眠药在停药
前一天及停药后的 1至 2周内每天观察动物的外
观体征和行为活动及自发惊厥发生率
? 外观体征和行为活动包括：应激性, 神情过敏
(猴 ),饮食, 睡眠, 自发运动活动, 攻击性,
警觉程度, 神经反射, 竖尾, 震颤, 惊厥, 呼
吸, 体温, 体重
? 植物神经系统机能变化：腹泻, 流涎, 流泪,
恶心, 呕吐, 瞳孔大小
身体依赖性试验 --自然戒断试验
? 资料记录及整理：
? ① 动物应写明种属, 性别, 生产合格证号,
记录体重, 实验室温度及湿度
? ② 受试物应写明生产批号, 配制方法
? ③ 戒断症状用记分法统计, 对检测指标和体
重, 惊厥发生率等应设计合理的图表显示 。
实验结果进行统计处理
身体依赖性试验 --替代试验
? 给予动物代表药 (如吗啡, 巴比妥或苯巴比妥 )
产生身体依赖性后, 停止给药, 替之以受试药,
观察记录动物是否发生戒断症状及发作程度
? 动物：参照, 自然戒断试验,
? 剂量：参照, 自然戒断试验,
? 给 药 途 径, 腹 腔 注 射, 灌 胃 或, 药掺
食, (drug admixed food,DAF)法给予代表药使
产生身体依赖性, 然后停止给代表药, 以同样
给药方式给予不同剂量的受试药,观察及记录
替代期间动物的戒断行为和体重变化
身体依赖性试验 --替代试验
? 镇痛药的观察期为停止吗啡前 24h和停药
后 48h内, 每 4h观察一次；镇静催眠药的
观察为停止代表药前一天和停药后的 1～
2周内, 每天观察一次
? 采用 1～ 2种给药途径, 必须有一种与临
床用药途径相同
? 观察指标：参照, 自然戒断试验,
? 资料记录与整理：参照“自然戒断试验”
身体依赖性试验 --催促试验
? 短时期内给予动物大剂量受试药, 然后注射受
体对抗剂, 观察和记录是否出现戒断症状及其
程度 。 此法只适用于有竟争性受体对抗剂的阿
片类药物
? 动物：参照, 自然戒断试验,
? 剂量：除低剂量组一般采用临床剂量的 1至 2倍
外, 余同, 自然戒断试验,
? 给药途径：猴的实验应采用与临床给药途径相
同；大, 小鼠的实验选用二种给药途径, 其中
必须有一种与临床用药途径相同
身体依赖性试验 --催促试验
? 给药期限：猴连续给药 30～ 60天, 上, 下午各
一次, 大, 小鼠连续给药 3～ 5天
? 停药后给予阿片受体对抗剂, 常用钠洛酮, 亦
可用环丙羟丙吗啡 。 观察给受体对抗剂后 1～
2h内动物出现的戒断症状及体重变化
? 观察指标：参照, 自然戒断试验, 。 小鼠适应
观察记录跳跃次数
? 资料记录及整理：参照, 自然戒断试验,
身体依赖性试验 --诱导试验
? 应用各种诱发惊厥的方法如听源性发作和戊四
唑惊厥, 对镇静催眠药产生身体依赖性的动物,
在断药期间阈下刺激强度就可出现反跳性兴奋,
诱发惊厥
? 动物：只有大, 小鼠 。 应预先挑选对各种阈下
刺激无惊厥反应鼠
? 剂量：参照, 自然戒断试验,, 阳性代表药为
苯巴比妥或巴比妥
身体依赖性试验 --诱导试验
? 给药途径：二种, 有一种同临床途径
? 给药期限,30天, 每天二次, 上, 下午各一次
? 观察指标：听源性发作实验在停药后的一周内
每天记录发作率和体重；戊四唑实验在停药
24h后记录一次发作率和体重
? 资料记录及整理：参照, 自然戒断试验,
精神依赖性试验
? 采用, 自身给药, 测定 iv药物对动物的强化效
应
? 动物,200～ 250g的健康大鼠, ♂♀ 各半
? 剂量,1～ 2个剂量组, 加上一个阳性药对照组
(阿片类 --盐酸吗啡, 镇静催眠 --苯巴比妥钠或
戊巴比妥钠 ),每组 10只动物 。
? 方法：戊巴比妥钠麻醉下行颈外静脉插管术,
将插管一端固定于血管内, 另一端与恒速泵及
药液输入系统相连 。 术后第二天开始对大鼠进
行自身给药训练, 直至动物建立自身给药 (踏
板 )行为
精神依赖性试验
? 观察指标：包括形成自身给药行为的潜伏期,
每个实验期内大鼠的自身给药次数, 行为变化,
自身给药行为随药物浓度变动的变化程度, 消
退反应, 与其它药物的相互替代等
? 资料记录及整理：参照“自然戒断试验”
