长期毒性试验
? 目的意义
? 基本内容和要求
? 有关问题
目的意义
? 毒性剂量
? 安全范围
? 毒性反应, 性质、程度、量毒关系、产生
时间，达峰时间,持续时间及反复产生毒
性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性
? 毒性反应靶器官
? 毒性反应是否可逆
基本内容和要求 ---- 动物
? 二种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬 (Ⅰ
类药 Beagle犬，其它杂种犬 ),必要时用猴
? 动物应写明供应单位及邮编，品系及生产合格
证号 (杂种犬例外 )
? 大鼠 6-8周龄，体重差异不超过平均体重的 20％。
3个月以上可选 5-6周龄大鼠
? Beagle犬 4-12月龄，杂种犬龄＜ 5年
? ♂♀各半
基本内容和要求 ---- 饲养管理
? 饲料写明供应单位，自配应提供配方及成分含
量的检测报告
? 动物室温度、湿度、光照和通风条件应达标
? 笼养大鼠每笼 ≤5只，♂♀分开，有条件时单笼
饲养,实验前适应 ≥1周,食量每天记录，体重每
周称一次。
? 犬宜单笼饲养，定量喂食,Beagle犬实验前至
少训养 1-2周，标准饲料喂养。杂种犬要预先检
疫、驱虫，实验前至少训养 1月
基本内容和要求 ---- 受试药
? 写明药名、批号、来源、规格、纯度、理化特
性、保存条件及配制方法。
? 溶媒或其他赋形剂注明规格、来源、纯度、批
号
? 应符合临床试用质量标准，最好和药效、一般
药理、急性毒性、药代动力学研究用药有相同
质量标准
基本内容和要求 ---- 给药途径
? 与临床给药途径一致
? 混入饲料或饮水中灌服时
? 保证受试药分布均匀
? 在配制饲料或溶于饮水后仍旧稳定
? 计量准确
? 临床 iv 时大鼠可用 ip代替,im或 sc可变换注射
部位
基本内容和要求 ---- 剂量及分组
? 三个给药组 (大动物可二个组 ),单位, mg(ml,IU)
/kg 或 /m2
? 以不等浓度等容量给药
? 低剂量组 --高于有效剂量，不出现毒性反应
? 中剂量组 --产生轻微或中等度毒性反应
? 高剂量组 --产生明显或严重的毒性反应，或个
别动物死亡
? 空白对照 --溶媒或其它赋形剂，若溶媒或赋形
剂有毒性时则增加正常对照组
基本内容和要求 ---- 剂量及分组
? <3月，大鼠♂♀各 10只 /组
? ≥3月，大鼠♂♀各 20只 /组
? 大动物大剂量组♂♀各 3只,其余 ♂♀各 2只 /组
? 限度试验：如小鼠 ig急毒 > 5 g/Kg,iv > 2g/Kg
仍无毒性反应和死亡或仅个别有毒性反应,可只
做一个 >50ACD(犬用 30ACD)的剂量组
基本内容和要求 ---- 给药周期
表, 临床与动物给药对应周期
临床给药周期 动物给药周期
1～ 3天 14天
1周 1月
4周 3月
≥1月 6月
? ≥3月可一周 6天给药,周日休息,每天给药时间相同
基本内容和要求 ---- 检测指标
一般观察
? 外观体征和行为活动 (NS兴奋或抑制，肌肉麻
痹或震颤，步态异常等 ),皮毛贴身或稀疏竖散,
粪便性状、颜色、食量及体重变化
? 大动物应增加瞳孔、肛温、呼吸、呕吐、流涎、
尿、皮肤粘膜 (充血、紫绀、苍白 )、眼、鼻、
外阴部分泌物等,发现死亡或濒死动物应 1小时
内及时尸检
基本内容和要求 ---- 检测指标
血液学指标
? 红细胞（ RBC）、血红蛋白（ Hb）、红细胞
压积（ Hct）、红细胞平均容积（ MCV）、红
细胞平均血红蛋白含量（ MCH）、红细胞平
均血红蛋白浓度（ MCHC）、血小板（ Plat）
计数、白细胞（ WBC）计数及分类（淋巴细
胞和粒细胞）、凝血时间（ CT），必要时进
行网织红细胞计数
基本内容和要求 ---- 检测指标
血液生化指标
? 丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天门冬氨酸氨基转
移酶 (AST)、碱性磷酸酶（ ALP）、总胆红素
（ Tbill）、尿素氮（ BUN）、肌酐（ Cr）、
总蛋白（ TP）、白蛋白（ Alb）、血葡萄糖
（ Glu）、总胆固醇（ Tch）
? 必要时增加相应的血液生化指标
? 大动物要做尿液检查, 亚硝酸盐,pH、蛋白质、
尿 RBC、葡萄糖、酮体、胆红素、尿胆原、尿
比重、尿 WBC
基本内容和要求 ---- 检测指标
病检器官
? 脏器系数：心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、
甲状腺、胸腺、睾丸、前列腺和子宫
? 组织学检查：对照组和高剂量组要详细检查，
其它剂量组在高剂量组有异常时才进行检查
? 检查器官, 心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、
胰腺、胃、十二指肠、回肠、结肠、垂体、前
列腺、脊髓、胸骨 (骨和骨髓 )、淋巴结、膀胱、
甲状腺、胸腺、睾丸 (连附睾 )、子宫 (连卵巢 )、
视神经, 注射部位
基本内容和要求 ---- 检测指标
心电图 Ⅱ 导联
? 大动物长期毒性必须做
? 主要观察指标,心率,P波电压,P-R间
期,R波电压,QRS时间,ST段,T波电
压和 Q-T间期
基本内容和要求 ---- 恢复期观察
? 最后一次给药后 24h每组活杀 2/3～ 1/2,检测各
项指标，留 1/3～ 1/2动物继续观察 2～ 4周，再
活杀检查,了解毒性反应的可逆程度和可能出现
的迟发性毒性反应
? 恢复期除不给受试物外，其它观察内容与给药
期相同
? 引起不可逆损伤者要慎重考虑临床试验问题
基本内容和要求 ---- 指标检测时间
? 大鼠三个月以内, 一般在最后一次给药后 24h
和恢复期结束各进行一次 。 必要时中间插一次；
大鼠 3个月以上,可在试验中间活杀少量动物
(高剂量组和对照组 )检测指标
? 犬长毒试验则应有正常值 2次，给药后 1-1.5月
测一次,停药一次，恢复期结束一次
基本内容和要求 ---- 资料整理
? 首页写明, 负责者的姓名, 职称, 实验开始及
结束日期, 实验承担单位, 研究室负责人和资
料保存单位
? 试验指导者, 课题负责人, 病理学检查, 血液生化
指标测定, 血液学指标测定及给药观察者
? 第二页书写试验摘要
? 第三页开始写正文, 引言, 材料与方法, 结果
? 合理的统计图, 表
? 有差异的指标应进行统计处理
? 应客观地描述尸检及组织病理学检查结果
? 对各种异常现象可用半定量的方式表述，揭示量 --
时关系
有关问题 ---受试药
? Ⅰ 类药
? 结构确证，工艺稳定，纯度 >98.5％，稳定性试验基
本完成且符合要求，至少是中试产品
? 非注射给药可用原料药，必要时加赋形对照
? 注射药或局部用药须做成稳定制剂，要有赋形对照，
写清注射剂的 pH和渗透压。赋形剂须是药用规格
? Ⅱ 类药
? 和国外药品有相同的质量标准。提供受试药的理化
性质如溶解度、吸湿性、对光、热等稳定性,含量、
解离常数 (pka)、油水分配系数等。符合临床试用质
量标准
有关问题 ---动物
? 二种动物, 啮齿类，首选大鼠。非啮齿类，常
用犬，一类新药用 Beagle犬，其他可用杂种犬,
基因工程生物制品用猴
? 常用大鼠, Wistar和 Sprague Dewley株
? 年龄, 大鼠 6-8周龄,体重 ≤平均体重的 20％,
Beagle犬 4～ 12月龄,杂种犬 <5年
? 试验周期 ≥6月,应考虑到动物的自然死亡,可以
每组增加♂♀各一只,大鼠一年死亡 15％，一
年半死亡 50％，二年死亡达 70～ 80％。大鼠和
杂种犬都应多领购 1/4～ 1/3
有关问题 ---饲养管理
主要因素 动物类别小鼠、大鼠 豚鼠、家兔 犬
温度 (℃ ) 20-26 18-28 18-28
湿 度 40-60% 40-60% 40-60%
换气次数 10-15次 /h 10-15次 /h 10-15次 /h
气流速度 13-18cm/s 13-18cm/s 13-18cm/s
压 力 正 压 正 压 负 压
洁 净 度 100000级 100000级
落下细菌 ＜＝ 3个 /皿 ＜＝ 3个 /皿
照 明 150-300 Lux 150-300 Lux
噪 声 ＜ 60 db ＜ 60 db
臭 气 氨浓度＜ 20 ppm 氨浓度＜ 20 ppm
有关问题 ---预试
? 不使实验重复的最好办法就是预试
? 预试依据
? 国外同类产品甚至是相同药物临床前及临床药理资料
? 急性毒性、药效学或药动学或拟推荐临床的剂量
? 预试时间一般 2周至 1个月
? 生物制品预试更重要，摸出产生抗体的规律，一
旦产生抗体，立即终止试验，生殖毒性等反复给
药均应考虑这一问题，一旦产生抗体，其实验继
续进行下去的结果就与原来不同
有关问题 ---剂量
? LD50法
? 大鼠 1/10,1/50,1/100 LD50，犬剂量减半
? MTD法
? 大鼠 MTD,1/3MTD,1/10MTD,犬剂量减半
? MBS(Metabolic Body Size)法
? 大鼠 10 Cmax,5 Cmax,Cmax,犬剂量减半
? ACD法
? 大鼠 3个月试验 50～ 100ACD,30～ 50ACD、
10～ 20ACD
? 大鼠 6个月试验 30～ 50ACD,15～ 25ACD、
5～ 10ACD
? 犬剂量减半
有关问题 ---剂量
表 常用动物等效剂量折算表
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
项 目 人 犬 猴 兔 豚鼠 大鼠 小鼠
────────────────────────────────
成年时体重 (kg) 70 12 4 1.5 0.4 0.2 0.02
换算常数 (k) 12.3 11.6 11.8 12 10.5 10.5 10
每公斤用药量折算 (mg/kg) 1 1.5 2.2 3.1 4.3 5.4 11.0
体表面积折算等效剂量比 1 0.32 0.16 0.07 0.031 0.018 0.0026
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
有关问题 ---剂量
? 由于溶解度 (注射剂 )关系,剂量无法再增加时,
应允许以最大可溶浓度和最大允许容量给药
? 一些腔道用药, 血浆代用品 的高剂量也应采
用类似方法
? 防止犬与大鼠剂量倒置
? 必要时增加阳性对照组
有关问题 ---分组
? ♂♀ 分别随机分组
? 把体重过大、过小去掉，以免差异过大，开
始实验时大鼠体重不应超过 ± 20％
? 大动物则根据给药前生理生化指标测定把指
标过高或过低的动物去掉
有关问题 ---给药途径
? 与临床给药途径一致
? 注射剂要考虑溶液的 pH、刺激性及渗透压等，
以免造成注射局部损伤或坏死
? 大鼠 iv长毒可改用 ip注射,im或 sc可采用多
点交换注射
? 临床有用药后加上照光 (血卟啉类＋激光 )或
X-照射 (CM-Na光敏剂＋ γ-射线 )，动物上只
给药没有其他条件，观察到的毒性较加照光
后的毒性低
有关问题 ---给药途径
? 特殊情况下可改变给药途径
? 胆道给药溶解胆结石
? 肿瘤局部注射给药 (肝瘤注射 )
? 舌下给药
? 腔道给药 (阴道, 关节腔注射, 硬膜或脊髓腔给药,
滴耳药 )
? 内病外治, 穴位给药 (肝脐贴药或其他穴位给药,)
艾炙加中药
? 药酒治病, 中药加烤电
? 雾化吸入
? 抗肝癌导向药物动脉注射
? Vd可改用 iv代替, 反之则否
有关问题 ---实验周期
? 西药 ---临床给药周期的 3～ 4倍
? 中药 ---临床给药周期的 2倍以上,最长不过半年
? 对于生物技术药品长毒的试验周期,不仅参考
临床疗程,还要考虑产生抗体的时间,一旦产生
抗体,立即停止给药,因为抗体产生后不仅中和
血液中的药品,而且可能产生变态反应而干扰
药品生物学效应
有关问题 ---实验周期
? 实验周期 <3月,每天给药
? 实验周期 ≥3月,每周六天给药,
周日休息,不应每周给药 5天
有关问题 ---指标选择
? 如何预测新药可能引起的毒性反应
? 从新药药效作用或其它药理作用特点推测
? 根据新药的化学结构从已知同类药物的毒
性特点推测
? 从急毒和长毒预试结果预测可能的毒性反
应，增加检测指标
? 据文献资料或临床预试产生的毒副反应来
增加检测指标
有关问题 ---指标选择
? 增加可疑组织或器官的负荷，可使损伤明显表
现出来
? 外周血网织红细胞计数应受到重视
? AST受标本溶血影响大
? 年轻大鼠 ALP可比成熟大鼠高 2-3倍，应强调
组间对照
? 犬血尿素氮天热时升高,32℃ 以上可升高 30-
50%
? 免疫功能增强（感染）或自身免疫功能亢进时，
球蛋白增高，相反则偏低
有关问题 ---指标选择
? 病理学检查称重时尽量剔除脂肪和结缔组织，
尤其是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的组织
器官
? 病理变化最好半定量：无病理变化 (-)为 0分,可
疑（ ± ）为 0.5分，轻度（＋）为１分，中度
（ ++）为２分，重度（ +++)为３分
? 病理检查一般可见灶性炎症、炎细胞浸润、灶
性出血、瘀血及可疑细胞变性等均可能与药物
无关，可因自身感染、宰杀方法等造成
有关问题 ---测试方法
? 测试方法必须公认，有文献依据
? 新的测试方法要经同行专家认可
? 对于某一指标的不同测试方法，应交待清
楚选择的理由
? 方法选择原则是简便、快速、灵敏、准确
有关问题 ---测试次数
? 能反映动态变化
? 一般行为活动宜每天观察记录
? 食量宜每天称重
? 大鼠体重宜每周一次，按体重给药
? 其它生理指标每半月至１月一次
? 大动物心电图用 II导联，至少给药前、给药
期间、给药后及停药结束各测一次
? 发现有阳性指标应加大观察密度
有关问题 ---测试次数
? 大动物生化检测，给药前 2次、给药期间１ -２
次，停药时及实验结束各 1次，这样就可看出
动态变化，并能了解是否可逆，不仅可以进行
组间比较，也可进行自身对照
? 大鼠长毒未强调动态观察，只是指出必要时给
药期可测一次，主要是因为生化指标较多，采
血量大
有关问题 ---停药观察
? 时间的长短取决于给药周期，一般可 1/3 - 1/2
给药周期，或 2-6周
? 了解毒性反应在停药后能否恢复
? 观察有否迟发性毒性反应，特别是神经系统毒
性反应
有关问题 ---数据处理
? 定量数据均用 x ± s表示，用国际单位
? 不能只与对照组比较，给药组之间还要比较，
以说明量 --毒关系；大动物还要进行自身对照
? 正态分布，用 t检验或方差分析，非正态分布，
用非参数统计分析法（ Ridit分析或秩和检验）
? P<0.05应具体分析
有关问题 ---资料整理
? 原始资料应保存完好，我国规定原
始资料至少保存至生产后２年
长期毒性
? 确实做好预试 周密设计剂量
? 精心饲养动物 细心观察反应
? 认真测定指标 实事求是总结
? 目的意义
? 基本内容和要求
? 有关问题
目的意义
? 毒性剂量
? 安全范围
? 毒性反应, 性质、程度、量毒关系、产生
时间，达峰时间,持续时间及反复产生毒
性反应时间、迟发性、蓄积性、耐受性
? 毒性反应靶器官
? 毒性反应是否可逆
基本内容和要求 ---- 动物
? 二种动物，啮齿类首选大鼠，非啮齿类用犬 (Ⅰ
类药 Beagle犬，其它杂种犬 ),必要时用猴
? 动物应写明供应单位及邮编，品系及生产合格
证号 (杂种犬例外 )
? 大鼠 6-8周龄，体重差异不超过平均体重的 20％。
3个月以上可选 5-6周龄大鼠
? Beagle犬 4-12月龄，杂种犬龄＜ 5年
? ♂♀各半
基本内容和要求 ---- 饲养管理
? 饲料写明供应单位，自配应提供配方及成分含
量的检测报告
? 动物室温度、湿度、光照和通风条件应达标
? 笼养大鼠每笼 ≤5只，♂♀分开，有条件时单笼
饲养,实验前适应 ≥1周,食量每天记录，体重每
周称一次。
? 犬宜单笼饲养，定量喂食,Beagle犬实验前至
少训养 1-2周，标准饲料喂养。杂种犬要预先检
疫、驱虫，实验前至少训养 1月
基本内容和要求 ---- 受试药
? 写明药名、批号、来源、规格、纯度、理化特
性、保存条件及配制方法。
? 溶媒或其他赋形剂注明规格、来源、纯度、批
号
? 应符合临床试用质量标准，最好和药效、一般
药理、急性毒性、药代动力学研究用药有相同
质量标准
基本内容和要求 ---- 给药途径
? 与临床给药途径一致
? 混入饲料或饮水中灌服时
? 保证受试药分布均匀
? 在配制饲料或溶于饮水后仍旧稳定
? 计量准确
? 临床 iv 时大鼠可用 ip代替,im或 sc可变换注射
部位
基本内容和要求 ---- 剂量及分组
? 三个给药组 (大动物可二个组 ),单位, mg(ml,IU)
/kg 或 /m2
? 以不等浓度等容量给药
? 低剂量组 --高于有效剂量，不出现毒性反应
? 中剂量组 --产生轻微或中等度毒性反应
? 高剂量组 --产生明显或严重的毒性反应，或个
别动物死亡
? 空白对照 --溶媒或其它赋形剂，若溶媒或赋形
剂有毒性时则增加正常对照组
基本内容和要求 ---- 剂量及分组
? <3月，大鼠♂♀各 10只 /组
? ≥3月，大鼠♂♀各 20只 /组
? 大动物大剂量组♂♀各 3只,其余 ♂♀各 2只 /组
? 限度试验：如小鼠 ig急毒 > 5 g/Kg,iv > 2g/Kg
仍无毒性反应和死亡或仅个别有毒性反应,可只
做一个 >50ACD(犬用 30ACD)的剂量组
基本内容和要求 ---- 给药周期
表, 临床与动物给药对应周期
临床给药周期 动物给药周期
1～ 3天 14天
1周 1月
4周 3月
≥1月 6月
? ≥3月可一周 6天给药,周日休息,每天给药时间相同
基本内容和要求 ---- 检测指标
一般观察
? 外观体征和行为活动 (NS兴奋或抑制，肌肉麻
痹或震颤，步态异常等 ),皮毛贴身或稀疏竖散,
粪便性状、颜色、食量及体重变化
? 大动物应增加瞳孔、肛温、呼吸、呕吐、流涎、
尿、皮肤粘膜 (充血、紫绀、苍白 )、眼、鼻、
外阴部分泌物等,发现死亡或濒死动物应 1小时
内及时尸检
基本内容和要求 ---- 检测指标
血液学指标
? 红细胞（ RBC）、血红蛋白（ Hb）、红细胞
压积（ Hct）、红细胞平均容积（ MCV）、红
细胞平均血红蛋白含量（ MCH）、红细胞平
均血红蛋白浓度（ MCHC）、血小板（ Plat）
计数、白细胞（ WBC）计数及分类（淋巴细
胞和粒细胞）、凝血时间（ CT），必要时进
行网织红细胞计数
基本内容和要求 ---- 检测指标
血液生化指标
? 丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天门冬氨酸氨基转
移酶 (AST)、碱性磷酸酶（ ALP）、总胆红素
（ Tbill）、尿素氮（ BUN）、肌酐（ Cr）、
总蛋白（ TP）、白蛋白（ Alb）、血葡萄糖
（ Glu）、总胆固醇（ Tch）
? 必要时增加相应的血液生化指标
? 大动物要做尿液检查, 亚硝酸盐,pH、蛋白质、
尿 RBC、葡萄糖、酮体、胆红素、尿胆原、尿
比重、尿 WBC
基本内容和要求 ---- 检测指标
病检器官
? 脏器系数：心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、
甲状腺、胸腺、睾丸、前列腺和子宫
? 组织学检查：对照组和高剂量组要详细检查，
其它剂量组在高剂量组有异常时才进行检查
? 检查器官, 心、肝、脾、肺、肾、脑、肾上腺、
胰腺、胃、十二指肠、回肠、结肠、垂体、前
列腺、脊髓、胸骨 (骨和骨髓 )、淋巴结、膀胱、
甲状腺、胸腺、睾丸 (连附睾 )、子宫 (连卵巢 )、
视神经, 注射部位
基本内容和要求 ---- 检测指标
心电图 Ⅱ 导联
? 大动物长期毒性必须做
? 主要观察指标,心率,P波电压,P-R间
期,R波电压,QRS时间,ST段,T波电
压和 Q-T间期
基本内容和要求 ---- 恢复期观察
? 最后一次给药后 24h每组活杀 2/3～ 1/2,检测各
项指标，留 1/3～ 1/2动物继续观察 2～ 4周，再
活杀检查,了解毒性反应的可逆程度和可能出现
的迟发性毒性反应
? 恢复期除不给受试物外，其它观察内容与给药
期相同
? 引起不可逆损伤者要慎重考虑临床试验问题
基本内容和要求 ---- 指标检测时间
? 大鼠三个月以内, 一般在最后一次给药后 24h
和恢复期结束各进行一次 。 必要时中间插一次；
大鼠 3个月以上,可在试验中间活杀少量动物
(高剂量组和对照组 )检测指标
? 犬长毒试验则应有正常值 2次，给药后 1-1.5月
测一次,停药一次，恢复期结束一次
基本内容和要求 ---- 资料整理
? 首页写明, 负责者的姓名, 职称, 实验开始及
结束日期, 实验承担单位, 研究室负责人和资
料保存单位
? 试验指导者, 课题负责人, 病理学检查, 血液生化
指标测定, 血液学指标测定及给药观察者
? 第二页书写试验摘要
? 第三页开始写正文, 引言, 材料与方法, 结果
? 合理的统计图, 表
? 有差异的指标应进行统计处理
? 应客观地描述尸检及组织病理学检查结果
? 对各种异常现象可用半定量的方式表述，揭示量 --
时关系
有关问题 ---受试药
? Ⅰ 类药
? 结构确证，工艺稳定，纯度 >98.5％，稳定性试验基
本完成且符合要求，至少是中试产品
? 非注射给药可用原料药，必要时加赋形对照
? 注射药或局部用药须做成稳定制剂，要有赋形对照，
写清注射剂的 pH和渗透压。赋形剂须是药用规格
? Ⅱ 类药
? 和国外药品有相同的质量标准。提供受试药的理化
性质如溶解度、吸湿性、对光、热等稳定性,含量、
解离常数 (pka)、油水分配系数等。符合临床试用质
量标准
有关问题 ---动物
? 二种动物, 啮齿类，首选大鼠。非啮齿类，常
用犬，一类新药用 Beagle犬，其他可用杂种犬,
基因工程生物制品用猴
? 常用大鼠, Wistar和 Sprague Dewley株
? 年龄, 大鼠 6-8周龄,体重 ≤平均体重的 20％,
Beagle犬 4～ 12月龄,杂种犬 <5年
? 试验周期 ≥6月,应考虑到动物的自然死亡,可以
每组增加♂♀各一只,大鼠一年死亡 15％，一
年半死亡 50％，二年死亡达 70～ 80％。大鼠和
杂种犬都应多领购 1/4～ 1/3
有关问题 ---饲养管理
主要因素 动物类别小鼠、大鼠 豚鼠、家兔 犬
温度 (℃ ) 20-26 18-28 18-28
湿 度 40-60% 40-60% 40-60%
换气次数 10-15次 /h 10-15次 /h 10-15次 /h
气流速度 13-18cm/s 13-18cm/s 13-18cm/s
压 力 正 压 正 压 负 压
洁 净 度 100000级 100000级
落下细菌 ＜＝ 3个 /皿 ＜＝ 3个 /皿
照 明 150-300 Lux 150-300 Lux
噪 声 ＜ 60 db ＜ 60 db
臭 气 氨浓度＜ 20 ppm 氨浓度＜ 20 ppm
有关问题 ---预试
? 不使实验重复的最好办法就是预试
? 预试依据
? 国外同类产品甚至是相同药物临床前及临床药理资料
? 急性毒性、药效学或药动学或拟推荐临床的剂量
? 预试时间一般 2周至 1个月
? 生物制品预试更重要，摸出产生抗体的规律，一
旦产生抗体，立即终止试验，生殖毒性等反复给
药均应考虑这一问题，一旦产生抗体，其实验继
续进行下去的结果就与原来不同
有关问题 ---剂量
? LD50法
? 大鼠 1/10,1/50,1/100 LD50，犬剂量减半
? MTD法
? 大鼠 MTD,1/3MTD,1/10MTD,犬剂量减半
? MBS(Metabolic Body Size)法
? 大鼠 10 Cmax,5 Cmax,Cmax,犬剂量减半
? ACD法
? 大鼠 3个月试验 50～ 100ACD,30～ 50ACD、
10～ 20ACD
? 大鼠 6个月试验 30～ 50ACD,15～ 25ACD、
5～ 10ACD
? 犬剂量减半
有关问题 ---剂量
表 常用动物等效剂量折算表
━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━
项 目 人 犬 猴 兔 豚鼠 大鼠 小鼠
────────────────────────────────
成年时体重 (kg) 70 12 4 1.5 0.4 0.2 0.02
换算常数 (k) 12.3 11.6 11.8 12 10.5 10.5 10
每公斤用药量折算 (mg/kg) 1 1.5 2.2 3.1 4.3 5.4 11.0
体表面积折算等效剂量比 1 0.32 0.16 0.07 0.031 0.018 0.0026
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有关问题 ---剂量
? 由于溶解度 (注射剂 )关系,剂量无法再增加时,
应允许以最大可溶浓度和最大允许容量给药
? 一些腔道用药, 血浆代用品 的高剂量也应采
用类似方法
? 防止犬与大鼠剂量倒置
? 必要时增加阳性对照组
有关问题 ---分组
? ♂♀ 分别随机分组
? 把体重过大、过小去掉，以免差异过大，开
始实验时大鼠体重不应超过 ± 20％
? 大动物则根据给药前生理生化指标测定把指
标过高或过低的动物去掉
有关问题 ---给药途径
? 与临床给药途径一致
? 注射剂要考虑溶液的 pH、刺激性及渗透压等，
以免造成注射局部损伤或坏死
? 大鼠 iv长毒可改用 ip注射,im或 sc可采用多
点交换注射
? 临床有用药后加上照光 (血卟啉类＋激光 )或
X-照射 (CM-Na光敏剂＋ γ-射线 )，动物上只
给药没有其他条件，观察到的毒性较加照光
后的毒性低
有关问题 ---给药途径
? 特殊情况下可改变给药途径
? 胆道给药溶解胆结石
? 肿瘤局部注射给药 (肝瘤注射 )
? 舌下给药
? 腔道给药 (阴道, 关节腔注射, 硬膜或脊髓腔给药,
滴耳药 )
? 内病外治, 穴位给药 (肝脐贴药或其他穴位给药,)
艾炙加中药
? 药酒治病, 中药加烤电
? 雾化吸入
? 抗肝癌导向药物动脉注射
? Vd可改用 iv代替, 反之则否
有关问题 ---实验周期
? 西药 ---临床给药周期的 3～ 4倍
? 中药 ---临床给药周期的 2倍以上,最长不过半年
? 对于生物技术药品长毒的试验周期,不仅参考
临床疗程,还要考虑产生抗体的时间,一旦产生
抗体,立即停止给药,因为抗体产生后不仅中和
血液中的药品,而且可能产生变态反应而干扰
药品生物学效应
有关问题 ---实验周期
? 实验周期 <3月,每天给药
? 实验周期 ≥3月,每周六天给药,
周日休息,不应每周给药 5天
有关问题 ---指标选择
? 如何预测新药可能引起的毒性反应
? 从新药药效作用或其它药理作用特点推测
? 根据新药的化学结构从已知同类药物的毒
性特点推测
? 从急毒和长毒预试结果预测可能的毒性反
应，增加检测指标
? 据文献资料或临床预试产生的毒副反应来
增加检测指标
有关问题 ---指标选择
? 增加可疑组织或器官的负荷，可使损伤明显表
现出来
? 外周血网织红细胞计数应受到重视
? AST受标本溶血影响大
? 年轻大鼠 ALP可比成熟大鼠高 2-3倍，应强调
组间对照
? 犬血尿素氮天热时升高,32℃ 以上可升高 30-
50%
? 免疫功能增强（感染）或自身免疫功能亢进时，
球蛋白增高，相反则偏低
有关问题 ---指标选择
? 病理学检查称重时尽量剔除脂肪和结缔组织，
尤其是肾上腺、甲状腺、前列腺等较小的组织
器官
? 病理变化最好半定量：无病理变化 (-)为 0分,可
疑（ ± ）为 0.5分，轻度（＋）为１分，中度
（ ++）为２分，重度（ +++)为３分
? 病理检查一般可见灶性炎症、炎细胞浸润、灶
性出血、瘀血及可疑细胞变性等均可能与药物
无关，可因自身感染、宰杀方法等造成
有关问题 ---测试方法
? 测试方法必须公认，有文献依据
? 新的测试方法要经同行专家认可
? 对于某一指标的不同测试方法，应交待清
楚选择的理由
? 方法选择原则是简便、快速、灵敏、准确
有关问题 ---测试次数
? 能反映动态变化
? 一般行为活动宜每天观察记录
? 食量宜每天称重
? 大鼠体重宜每周一次，按体重给药
? 其它生理指标每半月至１月一次
? 大动物心电图用 II导联，至少给药前、给药
期间、给药后及停药结束各测一次
? 发现有阳性指标应加大观察密度
有关问题 ---测试次数
? 大动物生化检测，给药前 2次、给药期间１ -２
次，停药时及实验结束各 1次，这样就可看出
动态变化，并能了解是否可逆，不仅可以进行
组间比较，也可进行自身对照
? 大鼠长毒未强调动态观察，只是指出必要时给
药期可测一次，主要是因为生化指标较多，采
血量大
有关问题 ---停药观察
? 时间的长短取决于给药周期，一般可 1/3 - 1/2
给药周期，或 2-6周
? 了解毒性反应在停药后能否恢复
? 观察有否迟发性毒性反应，特别是神经系统毒
性反应
有关问题 ---数据处理
? 定量数据均用 x ± s表示，用国际单位
? 不能只与对照组比较，给药组之间还要比较，
以说明量 --毒关系；大动物还要进行自身对照
? 正态分布，用 t检验或方差分析，非正态分布，
用非参数统计分析法（ Ridit分析或秩和检验）
? P<0.05应具体分析
有关问题 ---资料整理
? 原始资料应保存完好，我国规定原
始资料至少保存至生产后２年
长期毒性
? 确实做好预试 周密设计剂量
? 精心饲养动物 细心观察反应
? 认真测定指标 实事求是总结
