课件 002 兽医微生物学教学课件 1
兽
医
微
生
物
学
兽医微生物学
(多媒体教学课件 )
天津农学院动科系动物预防医学教研室制作
2003/02/28
课件 002 兽医微生物学教学课件 3
绪言 共六部分，介绍微生物与微生物学的概念，微生物学发展简史，微生
物学理论与技术成就及应用，兽医微生物学的地位、任务与贡献。
细菌总论 共七章，介绍细菌的形态、构造、生理，消毒与灭菌，细菌生态、
致病机理、遗传变异，细菌分类与命名等。
免疫基础 共七章，介绍抗原抗体，免疫系统，抗感染免疫，变态反应，免
疫调节，免疫技术及应用等。
细菌各论 共十二章，介绍各属重要病原细菌的形态、生化特性、致病性、
微生物学诊断和免疫防治等。
真菌 共二章，介绍真菌的分类、形态、生化及致病特性，真菌病的诊断与
防治等。
病毒 共十四章，介绍病毒的形态、构造、繁殖、遗传、培养，病毒的致病
性。各科属重要病毒形态、生化及致病特性，微生物学诊断和防治等。
实验 共十多个，显微镜油镜的使用，细菌形态及构造观察，细菌抹片制备
及染色，培养基的制备，细菌的分离培养、生长表现观察、生化试验、药
敏试验，沉淀反应和凝集反应，重要病原菌的认识，真菌与病毒培养测定
等 。
内
容
简
介
课件 002 兽医微生物学教学课件 4
第八章 抗原与抗体
第九章 免疫系统与免疫应答
第十章 抗感染免疫
第十一章 变态反应
第十二章 免疫调节与免疫遗传
第十三章 免疫血清学技术
第十四章 免疫学的应用
课件 002 兽医微生物学教学课件 5
第十二章 免疫调节与免疫遗传（自学）
第十三章 免疫血清学技术
第一节 概念
第二节 凝聚性反应
第三节 标记抗体技术
第四节 补体参与的试验
第五节 中和试验
课件 002 兽医微生物学教学课件 6
抗原与相应抗体在体内和体外均能发生特异性
结合, 因抗体主要来自血清, 因此在体外进行的抗
原抗体反应称为 血清学反应 或 免疫血清学技术 。
第一节 概 述
免疫血清学技术按抗原抗体反应性质不同可分为,
1,凝聚性反应 包括凝集试验和沉淀试验 。
2,标记抗体技术 包括荧光抗体, 酶标抗体, 放射
性标记抗体, 发光标记抗体技术等 。
3,补体参与的反应 补体结合试验, 免疫黏附试验
等 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 7
4,中和反应 病毒中和试验, 毒素中和试验 。
一、血清学反应的一般特点
1,特异性与交叉性 血清学反应具有高度特异性，如
抗猪瘟病毒的抗体只能与猪瘟病毒结合，而不能与
口蹄疫病毒结合。这是血清学试验用于分析各种抗
原和进行疾病诊断的基础。
但若两种天然抗原之间含有 部分共同抗原 时，则
发生 交叉反应 。交叉反应是区分血清型和亚型的重
要依据。
课件 002 兽医微生物学教学课件 8
2,抗原抗体结合机理 抗原和抗体的结合为 弱能非
共价键结合, 其结合力决定于抗原决定簇和抗体的
抗原结合点之间形成的非共价键的数量, 性质和距
离 。
常规的血清学反应，如凝集反应、沉淀反应、补
体结合反应等，只有在抗原与抗体呈 适当比例 时，
结合反应才出现凝集，沉淀等 可见反应,在最适比
例时，反应最明显。
这种因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反
应的现象，称为 带现象（图 13-1-166） 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 9
二, 血清学反应的影响因素
1.电解质 特异性的抗原和抗体具有对应的极性基 (羧
基, 氨基等 ),它们互相吸附后, 其电荷和极性被中
和因而失去亲水性, 变为憎水系统 。
易 受电解质作用失去电荷 而互相凝聚, 发生凝集或
沉淀反应 。
2.温度 较高的温度可以增加抗原和抗体接触的机会,
从而加速反应的出现 。 常用 37℃ 水浴保温 。
3.酸碱度 血清学反应常用 pH为 6-8,过高或过低的
pH可使抗原抗体复合物重新离解 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 10
第二节 凝聚性试验
抗原与相应抗体结合形成复合物, 在有电解质存
在下, 复合物相互凝聚形成肉眼可见的凝聚小块或
沉淀物, 根据此现象来测定相应抗体或抗原, 称为
凝聚性试验 。 分为 凝集试验和沉淀试验 。
一, 凝集试验
细菌, 红细胞等颗粒性抗原, 与相应抗体结合,
在有适当电解质存在下, 形成肉眼可见的凝集团块,
称为 凝集试验 。 参与的抗体主要为 IgG,IgM。 凝
集试验可用于检测抗原或抗体, 优点是操作简便 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 11
根据抗原的性质分为 直接凝集试验 和 间接凝集试验 。
1.直接凝集试验 颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现
凝集现象的试验称作直接凝集试验。按操作方法可分
玻片法 和 试管法 两种。
（ 1）玻片法 为一种 定性试验 。将含有已知抗体的诊
断血清与待检抗原悬液在玻片上混合，数分钟后，如
出现颗粒状或絮状凝集，即为阳性反应。
此法简便快速，适用于新分细菌的鉴定或分型。如
沙门氏菌的鉴定。也可用已知的诊断抗原，检测待检
血清中的相应抗体，如布氏杆菌、鸡白痢全血平板凝
集试验。
课件 002 兽医微生物学教学课件 12
（ 2）试管法 为一种 定量试验,用以检测血清抗体
含量。
将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后加入等
量抗原，置 37℃ 水浴数小时观察。视不同凝集程度
记录为 ++++(100％凝集 ),+++(75％凝集 ),++(50
％凝集 ),+(25％凝集 )和 -(不凝集 )。以其 ++以上的
血清最大稀释度为该血清的凝集价 (或称滴度 )。
试验时必须设置 阳性血清, 阴性血清和生理盐水
等对照 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 13
2.间接凝集试验 将可溶性抗原 (或抗体 ) 吸附不溶性
颗粒载体的表面, 与相应抗体 (或抗原 )作用, 在电解
质存在条件下, 出现的特异性的凝集反应称为 间接
凝集反应 。
优点 敏感性高, 比直接凝集反应敏感 2-8倍 。
常用载体 红细胞 (绵羊红细胞 ),胶乳颗粒等 。 当
载体吸附了可溶性抗原后即称为 致敏颗粒 。
间接血凝试验 是将 可溶性抗原 致敏于红细胞表面,
用以检测相应抗体 。
反向间接血凝试验 如将 抗体 致敏于红细胞表面,
用以检测检样中相应抗原 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 14
3.乳胶凝集试验 (LAT) 用它胶乳微球 （ 直径约
0.8um） 作载体吸附某些抗原 (或抗体 ),可用以检
测相应的抗体 (或抗原 )。
优点 快速简便, 易保存, 较准确等 。
4.协同凝集试验 (COAG) 葡萄球菌 A蛋白 (SPA) 能
与多种动物 IgG分子的 Fc片结合, 结合后保持其
抗体活性, 当与相应的抗原结合时, 就可产生凝
集反应 。 本法广泛应用于多种细菌和某些病毒的
快速诊断 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 15
二、沉淀试验
可溶性抗原与相应抗体结合，在电解质存在下，形
成肉眼可见的白色沉淀，称为 沉淀试验 。
参与沉淀试验的抗原称 沉淀原,抗体称为 沉淀素。
抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，抗原分子较小，如细菌的
外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组
织浸出液等。
1.环状沉淀试验 在小口径试管内 先加入已知抗血清,
然后小心沿管壁加入 待检抗原 于血清表面, 使之成为
分界清晰的两层 。 数分钟后, 两层液面交界处出现白
色环状沉淀, 即为阳性反应 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 16
用途 用于抗原的定性试验，如诊断炭疽的 Ascoli试
验、链球菌血清型鉴定、沉淀素的效价滴定等。试
验时出现白色沉淀带的最高血清稀释倍数，即为血
清的沉淀价。
课件 002 兽医微生物学教学课件 17
2.琼脂（免疫）扩散试验 琼脂凝胶呈多孔结构，孔
内充满水分,1％琼脂凝胶的孔径约为 85nm，各种
抗原抗体在琼脂凝胶中自由扩散。抗原抗体在琼脂
凝胶中扩散，当二者在比例适当处相遇，即发生沉
淀反应，形成肉眼可见的 沉淀带,称为琼脂免疫扩
散，又简称 琼脂扩散 和 免疫扩散 。双向双扩散最常
用。
双向双扩散 双向双扩散试验，简称双扩散。即用
1％琼脂浇成厚 2-3mm的凝胶板，在其上打圆孔，于
相邻孔内滴加抗原和抗体，在饱和湿度下，扩散 24h
或数日，观察沉淀带。
课件 002 兽医微生物学教学课件 18
抗原抗体在琼脂凝胶内相向扩散，在两孔之间比
例最合适的位置上出现 沉淀带 。
双向扩散主要 用于抗原和抗体的测定。 用 8%
Nacl溶液制 1%琼脂糖平板，打孔（ 7孔梅花形、孔
径 6 mm周边与中心孔距 3 mm）。
课件 002 兽医微生物学教学课件 19
1.双扩散用于疾病诊断,
以 IBD诊断为例，中心孔
加 IBD标准阳性血清，周
围孔分别加 IBD标准抗原、
生理盐水、待检抗原
1.2.3.4。
2.双扩散用于抗体检测,
以免疫鸡 IBD抗体检测为
例，中心孔加 IBD标准抗
原，周围孔分别加 IBD标
准阳性血清,,IBD阴性血
清、待检血清 1.2.3.4。
课件 002 兽医微生物学教学课件 20
3.对流免疫电泳
原理 抗原 在碱性溶液 (>pH8,2)中 带负电荷,
在电场中 向正极移动, 而抗体球蛋白带电荷弱,
在琼脂电泳时, 由于电渗作用, 向相反的负极泳
动 。 将抗体置正极端, 抗原置负极端, 电泳时抗
原抗体相向泳动, 在两孔之间形成沉淀带 。
琼脂凝胶制备 选用优质琼脂 （ 或琼脂糖 ）, 浓
度为 1％ -2％, pH通常用 pH8.2-8.6的巴比妥缓冲
液, 离子强度为 0.025-0.075mol／ L,并加 0.01％
硫柳汞作防腐剂 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 21
极 - +极
Ab Ag
Ab
Ab
Ag
Ag
试验操作 制备琼脂凝胶玻板, 打孔, 挑去孔内琼脂
后, 将 抗原置负极一侧孔内, 抗血清置正极侧孔 。 加
样后电泳 30-90min观察结果 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 22
试验操作 制备琼脂凝胶玻板, 打孔, 挑去孔内琼
脂后, 将 抗原置负极一侧孔内, 抗血清置正极侧孔 。
加样后电泳 30-90min观察结果 。
本法优点
a.敏感 较双扩散敏感 10-16倍；
b.快速 仅需 1h左右，大大缩短了沉淀带出现的时间。
c.用途 适用快速诊断检测。如乙型肝炎抗原的快速
检测，猪传染性水泡病和口蹄疫等的快速确诊，
IBD,MD的快速检测等。
课件 002 兽医微生物学教学课件 23
第三 节 标记 抗体技 术
抗体, 抗原分子小, 在含量低时形成的抗原抗体复
合物是不可见的 。 有一些物质即使在超微量时也能通
过特殊的方法将其检查出来, 如果将这些物质标记在
抗体分子上, 可以通过检测标记分子来显示抗原抗体
复合物的存在, 此种根据 抗原抗体结合的特异性 和 标
记分子的敏感性 建立的技术, 称为标记抗体技
术 。,
高敏感性的标记分子主要有 荧光素, 酶分子, 放射
性同位素 三种, 由此建立 荧光抗体技术, 酶标抗体技
术 和 同位素标记抗体技术 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 24
其特异性和敏感性远远超过常规血清学方法，被
广泛应用于病原微生物鉴定、传染病的诊断、分子
生物学中的基因表达产物分析等。
第四节 补体结合试验
补体结合试验是应用可溶性抗原, 与相抗体结合
后, 其抗原抗体复合物可以结合补体, 但这一反应
肉眼不能察觉, 如再加入致敏红细胞 (溶血系 ),可根
据是否出现溶血反应判定反应系统中是否存在相应
的抗原和抗体 。 参与补体结合反应的抗体称为 补体
结抗体 。 补体结合抗体主要为 IgG和 IgM。 通常是利
用已知抗原检测未知抗体 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 25
第五节 中和试验
根据 抗体能否中和病毒的感染性 而建立的免疫学试
验称为中和试验。中和试验极为特异和敏感,主要用
于病毒感染的血清学诊断,病毒分离株的鉴定、不同
病毒株的抗原关系研究、疫苗免疫原性的评价、免疫
血清的质量评价和测定动物血清抗体的检测等。
中和试验的基本过程 先将 抗血清与病毒混合,经
适当时间 作用 。然后 接种于宿主系统 以检测混合液中
的病毒 感染力 。宿主系统可以是鸡胚、动物或细胞培
养等，目前大多采用细胞中和试验。
课件 002 兽医微生物学教学课件 26
根据其产生的保护效果的差异，可判断该病毒是否
已被中和，并根据一定方法计算中和的程度 (中和指
数 )，即代表中和抗体的效价。
种类 根据测定中方法的不同, 中和试验主要有两种 。
一是测定能使动物或细胞死亡数目减少至 50％ (半数保
护率, PD50)血清稀释度, 即终点法中和试验 。 二是
测定使病毒在细胞上形成的空斑数目减少至 50％ 时血
清稀释度, 即空斑减少法中和试验 。
毒素和抗毒素 亦可进行中和试验，其方法与病毒中
和试验基本相同。
课件 002 兽医微生物学教学课件 27
感谢观看此片
欢迎指导
兽
医
微
生
物
学
兽医微生物学
(多媒体教学课件 )
天津农学院动科系动物预防医学教研室制作
2003/02/28
课件 002 兽医微生物学教学课件 3
绪言 共六部分，介绍微生物与微生物学的概念，微生物学发展简史，微生
物学理论与技术成就及应用，兽医微生物学的地位、任务与贡献。
细菌总论 共七章，介绍细菌的形态、构造、生理，消毒与灭菌，细菌生态、
致病机理、遗传变异，细菌分类与命名等。
免疫基础 共七章，介绍抗原抗体，免疫系统，抗感染免疫，变态反应，免
疫调节，免疫技术及应用等。
细菌各论 共十二章，介绍各属重要病原细菌的形态、生化特性、致病性、
微生物学诊断和免疫防治等。
真菌 共二章，介绍真菌的分类、形态、生化及致病特性，真菌病的诊断与
防治等。
病毒 共十四章，介绍病毒的形态、构造、繁殖、遗传、培养，病毒的致病
性。各科属重要病毒形态、生化及致病特性，微生物学诊断和防治等。
实验 共十多个，显微镜油镜的使用，细菌形态及构造观察，细菌抹片制备
及染色，培养基的制备，细菌的分离培养、生长表现观察、生化试验、药
敏试验，沉淀反应和凝集反应，重要病原菌的认识，真菌与病毒培养测定
等 。
内
容
简
介
课件 002 兽医微生物学教学课件 4
第八章 抗原与抗体
第九章 免疫系统与免疫应答
第十章 抗感染免疫
第十一章 变态反应
第十二章 免疫调节与免疫遗传
第十三章 免疫血清学技术
第十四章 免疫学的应用
课件 002 兽医微生物学教学课件 5
第十二章 免疫调节与免疫遗传（自学）
第十三章 免疫血清学技术
第一节 概念
第二节 凝聚性反应
第三节 标记抗体技术
第四节 补体参与的试验
第五节 中和试验
课件 002 兽医微生物学教学课件 6
抗原与相应抗体在体内和体外均能发生特异性
结合, 因抗体主要来自血清, 因此在体外进行的抗
原抗体反应称为 血清学反应 或 免疫血清学技术 。
第一节 概 述
免疫血清学技术按抗原抗体反应性质不同可分为,
1,凝聚性反应 包括凝集试验和沉淀试验 。
2,标记抗体技术 包括荧光抗体, 酶标抗体, 放射
性标记抗体, 发光标记抗体技术等 。
3,补体参与的反应 补体结合试验, 免疫黏附试验
等 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 7
4,中和反应 病毒中和试验, 毒素中和试验 。
一、血清学反应的一般特点
1,特异性与交叉性 血清学反应具有高度特异性，如
抗猪瘟病毒的抗体只能与猪瘟病毒结合，而不能与
口蹄疫病毒结合。这是血清学试验用于分析各种抗
原和进行疾病诊断的基础。
但若两种天然抗原之间含有 部分共同抗原 时，则
发生 交叉反应 。交叉反应是区分血清型和亚型的重
要依据。
课件 002 兽医微生物学教学课件 8
2,抗原抗体结合机理 抗原和抗体的结合为 弱能非
共价键结合, 其结合力决定于抗原决定簇和抗体的
抗原结合点之间形成的非共价键的数量, 性质和距
离 。
常规的血清学反应，如凝集反应、沉淀反应、补
体结合反应等，只有在抗原与抗体呈 适当比例 时，
结合反应才出现凝集，沉淀等 可见反应,在最适比
例时，反应最明显。
这种因抗原过多或抗体过多而出现抑制可见反
应的现象，称为 带现象（图 13-1-166） 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 9
二, 血清学反应的影响因素
1.电解质 特异性的抗原和抗体具有对应的极性基 (羧
基, 氨基等 ),它们互相吸附后, 其电荷和极性被中
和因而失去亲水性, 变为憎水系统 。
易 受电解质作用失去电荷 而互相凝聚, 发生凝集或
沉淀反应 。
2.温度 较高的温度可以增加抗原和抗体接触的机会,
从而加速反应的出现 。 常用 37℃ 水浴保温 。
3.酸碱度 血清学反应常用 pH为 6-8,过高或过低的
pH可使抗原抗体复合物重新离解 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 10
第二节 凝聚性试验
抗原与相应抗体结合形成复合物, 在有电解质存
在下, 复合物相互凝聚形成肉眼可见的凝聚小块或
沉淀物, 根据此现象来测定相应抗体或抗原, 称为
凝聚性试验 。 分为 凝集试验和沉淀试验 。
一, 凝集试验
细菌, 红细胞等颗粒性抗原, 与相应抗体结合,
在有适当电解质存在下, 形成肉眼可见的凝集团块,
称为 凝集试验 。 参与的抗体主要为 IgG,IgM。 凝
集试验可用于检测抗原或抗体, 优点是操作简便 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 11
根据抗原的性质分为 直接凝集试验 和 间接凝集试验 。
1.直接凝集试验 颗粒性抗原与凝集素直接结合并出现
凝集现象的试验称作直接凝集试验。按操作方法可分
玻片法 和 试管法 两种。
（ 1）玻片法 为一种 定性试验 。将含有已知抗体的诊
断血清与待检抗原悬液在玻片上混合，数分钟后，如
出现颗粒状或絮状凝集，即为阳性反应。
此法简便快速，适用于新分细菌的鉴定或分型。如
沙门氏菌的鉴定。也可用已知的诊断抗原，检测待检
血清中的相应抗体，如布氏杆菌、鸡白痢全血平板凝
集试验。
课件 002 兽医微生物学教学课件 12
（ 2）试管法 为一种 定量试验,用以检测血清抗体
含量。
将待检血清用生理盐水作倍比稀释，然后加入等
量抗原，置 37℃ 水浴数小时观察。视不同凝集程度
记录为 ++++(100％凝集 ),+++(75％凝集 ),++(50
％凝集 ),+(25％凝集 )和 -(不凝集 )。以其 ++以上的
血清最大稀释度为该血清的凝集价 (或称滴度 )。
试验时必须设置 阳性血清, 阴性血清和生理盐水
等对照 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 13
2.间接凝集试验 将可溶性抗原 (或抗体 ) 吸附不溶性
颗粒载体的表面, 与相应抗体 (或抗原 )作用, 在电解
质存在条件下, 出现的特异性的凝集反应称为 间接
凝集反应 。
优点 敏感性高, 比直接凝集反应敏感 2-8倍 。
常用载体 红细胞 (绵羊红细胞 ),胶乳颗粒等 。 当
载体吸附了可溶性抗原后即称为 致敏颗粒 。
间接血凝试验 是将 可溶性抗原 致敏于红细胞表面,
用以检测相应抗体 。
反向间接血凝试验 如将 抗体 致敏于红细胞表面,
用以检测检样中相应抗原 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 14
3.乳胶凝集试验 (LAT) 用它胶乳微球 （ 直径约
0.8um） 作载体吸附某些抗原 (或抗体 ),可用以检
测相应的抗体 (或抗原 )。
优点 快速简便, 易保存, 较准确等 。
4.协同凝集试验 (COAG) 葡萄球菌 A蛋白 (SPA) 能
与多种动物 IgG分子的 Fc片结合, 结合后保持其
抗体活性, 当与相应的抗原结合时, 就可产生凝
集反应 。 本法广泛应用于多种细菌和某些病毒的
快速诊断 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 15
二、沉淀试验
可溶性抗原与相应抗体结合，在电解质存在下，形
成肉眼可见的白色沉淀，称为 沉淀试验 。
参与沉淀试验的抗原称 沉淀原,抗体称为 沉淀素。
抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，抗原分子较小，如细菌的
外毒素、内毒素、菌体裂解液，病毒的可溶性抗原、血清、组
织浸出液等。
1.环状沉淀试验 在小口径试管内 先加入已知抗血清,
然后小心沿管壁加入 待检抗原 于血清表面, 使之成为
分界清晰的两层 。 数分钟后, 两层液面交界处出现白
色环状沉淀, 即为阳性反应 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 16
用途 用于抗原的定性试验，如诊断炭疽的 Ascoli试
验、链球菌血清型鉴定、沉淀素的效价滴定等。试
验时出现白色沉淀带的最高血清稀释倍数，即为血
清的沉淀价。
课件 002 兽医微生物学教学课件 17
2.琼脂（免疫）扩散试验 琼脂凝胶呈多孔结构，孔
内充满水分,1％琼脂凝胶的孔径约为 85nm，各种
抗原抗体在琼脂凝胶中自由扩散。抗原抗体在琼脂
凝胶中扩散，当二者在比例适当处相遇，即发生沉
淀反应，形成肉眼可见的 沉淀带,称为琼脂免疫扩
散，又简称 琼脂扩散 和 免疫扩散 。双向双扩散最常
用。
双向双扩散 双向双扩散试验，简称双扩散。即用
1％琼脂浇成厚 2-3mm的凝胶板，在其上打圆孔，于
相邻孔内滴加抗原和抗体，在饱和湿度下，扩散 24h
或数日，观察沉淀带。
课件 002 兽医微生物学教学课件 18
抗原抗体在琼脂凝胶内相向扩散，在两孔之间比
例最合适的位置上出现 沉淀带 。
双向扩散主要 用于抗原和抗体的测定。 用 8%
Nacl溶液制 1%琼脂糖平板，打孔（ 7孔梅花形、孔
径 6 mm周边与中心孔距 3 mm）。
课件 002 兽医微生物学教学课件 19
1.双扩散用于疾病诊断,
以 IBD诊断为例，中心孔
加 IBD标准阳性血清，周
围孔分别加 IBD标准抗原、
生理盐水、待检抗原
1.2.3.4。
2.双扩散用于抗体检测,
以免疫鸡 IBD抗体检测为
例，中心孔加 IBD标准抗
原，周围孔分别加 IBD标
准阳性血清,,IBD阴性血
清、待检血清 1.2.3.4。
课件 002 兽医微生物学教学课件 20
3.对流免疫电泳
原理 抗原 在碱性溶液 (>pH8,2)中 带负电荷,
在电场中 向正极移动, 而抗体球蛋白带电荷弱,
在琼脂电泳时, 由于电渗作用, 向相反的负极泳
动 。 将抗体置正极端, 抗原置负极端, 电泳时抗
原抗体相向泳动, 在两孔之间形成沉淀带 。
琼脂凝胶制备 选用优质琼脂 （ 或琼脂糖 ）, 浓
度为 1％ -2％, pH通常用 pH8.2-8.6的巴比妥缓冲
液, 离子强度为 0.025-0.075mol／ L,并加 0.01％
硫柳汞作防腐剂 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 21
极 - +极
Ab Ag
Ab
Ab
Ag
Ag
试验操作 制备琼脂凝胶玻板, 打孔, 挑去孔内琼脂
后, 将 抗原置负极一侧孔内, 抗血清置正极侧孔 。 加
样后电泳 30-90min观察结果 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 22
试验操作 制备琼脂凝胶玻板, 打孔, 挑去孔内琼
脂后, 将 抗原置负极一侧孔内, 抗血清置正极侧孔 。
加样后电泳 30-90min观察结果 。
本法优点
a.敏感 较双扩散敏感 10-16倍；
b.快速 仅需 1h左右，大大缩短了沉淀带出现的时间。
c.用途 适用快速诊断检测。如乙型肝炎抗原的快速
检测，猪传染性水泡病和口蹄疫等的快速确诊，
IBD,MD的快速检测等。
课件 002 兽医微生物学教学课件 23
第三 节 标记 抗体技 术
抗体, 抗原分子小, 在含量低时形成的抗原抗体复
合物是不可见的 。 有一些物质即使在超微量时也能通
过特殊的方法将其检查出来, 如果将这些物质标记在
抗体分子上, 可以通过检测标记分子来显示抗原抗体
复合物的存在, 此种根据 抗原抗体结合的特异性 和 标
记分子的敏感性 建立的技术, 称为标记抗体技
术 。,
高敏感性的标记分子主要有 荧光素, 酶分子, 放射
性同位素 三种, 由此建立 荧光抗体技术, 酶标抗体技
术 和 同位素标记抗体技术 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 24
其特异性和敏感性远远超过常规血清学方法，被
广泛应用于病原微生物鉴定、传染病的诊断、分子
生物学中的基因表达产物分析等。
第四节 补体结合试验
补体结合试验是应用可溶性抗原, 与相抗体结合
后, 其抗原抗体复合物可以结合补体, 但这一反应
肉眼不能察觉, 如再加入致敏红细胞 (溶血系 ),可根
据是否出现溶血反应判定反应系统中是否存在相应
的抗原和抗体 。 参与补体结合反应的抗体称为 补体
结抗体 。 补体结合抗体主要为 IgG和 IgM。 通常是利
用已知抗原检测未知抗体 。
课件 002 兽医微生物学教学课件 25
第五节 中和试验
根据 抗体能否中和病毒的感染性 而建立的免疫学试
验称为中和试验。中和试验极为特异和敏感,主要用
于病毒感染的血清学诊断,病毒分离株的鉴定、不同
病毒株的抗原关系研究、疫苗免疫原性的评价、免疫
血清的质量评价和测定动物血清抗体的检测等。
中和试验的基本过程 先将 抗血清与病毒混合,经
适当时间 作用 。然后 接种于宿主系统 以检测混合液中
的病毒 感染力 。宿主系统可以是鸡胚、动物或细胞培
养等，目前大多采用细胞中和试验。
课件 002 兽医微生物学教学课件 26
根据其产生的保护效果的差异，可判断该病毒是否
已被中和，并根据一定方法计算中和的程度 (中和指
数 )，即代表中和抗体的效价。
种类 根据测定中方法的不同, 中和试验主要有两种 。
一是测定能使动物或细胞死亡数目减少至 50％ (半数保
护率, PD50)血清稀释度, 即终点法中和试验 。 二是
测定使病毒在细胞上形成的空斑数目减少至 50％ 时血
清稀释度, 即空斑减少法中和试验 。
毒素和抗毒素 亦可进行中和试验，其方法与病毒中
和试验基本相同。
课件 002 兽医微生物学教学课件 27
感谢观看此片
欢迎指导
