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第二十章 革兰氏阳性无
芽孢杆菌
?岳 华
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丹毒丝菌属
本属只有一种, 即猪丹毒丝菌, 是猪丹毒病
的病原体, 通称猪丹毒杆菌 。 DNA的 G十
Cmol/%为 36~ 40。
形态与染色 本菌为直或稍弯曲的细杆菌,
两端钝圆,大小 0.2~ 0.4um× 0.8~ 2.5um,单
在或呈 V形、堆状或短链排列,易形成长丝状。
G+,在老龄培养物中菌体着色能力较差,常呈
阴性。无鞭毛、无荚膜、不产生芽孢。
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培养与生化特性
本菌为微需氧菌。 pH在 6.7~ 9.2范围内均
可生长,最适 pH为 7.2~ 7.6,生长温度为
5~42℃,最适温度为 30~ 37℃ 。在普通琼脂培
养基和普通肉汤中生长不良,如加入 0.2%~
0.5%葡萄糖或 5%~ 10%血液、血清则生长茂盛;
在血琼脂平皿上经 37℃24h 培养可形成湿润、
光滑、透明、灰白色、露珠样的圆形小菌落,
并形成 α 溶血环。在麦康凯培养基不生长。
在肉汤中呈轻度浑浊,有少量白色黏稠沉淀。
不形成菌膜和菌环。
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在加有 5%马血清和 1%蛋白胨水的糖培养
基中可发酵葡萄糖、果糖和乳糖,产酸不产气 ;
不发酵甘露醇、山梨醇、肌醇、水杨素、鼠李
糖、蔗糖、渔藻糖、棉实糖、菊糖。产生 H2S,
不产生靛基质和接触酶,不分解尿素。甲基红
及 VP试验阴性。明胶穿刺生长特殊,沿穿刺线
横向四周生长,如试管刷状,但明胶不液化。
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抵抗力
本菌对腐败和干燥环境有较强的抵抗力 。
在饮水中可存活 5d,在污水中可存活 15d,在深
埋的尸体中可存活 9个月 。 在病死猪熏制的火腿
中 3个月后仍可在深部分离出活菌 。 对热和直射
光较敏感, 70℃ 经 5~ 15min可完全杀死 。 对常
用消毒剂抵抗力不强, 0.5%甲醛数十分钟可杀
死 。 用 10%生石灰乳或 0.1%过氧乙酸涂刷墙壁和
喷洒猪圈是目前较好的消毒方法 。 本菌可耐
0.2%的苯酚, 对青霉素很敏感 。
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抗原结构与血清型
本菌最初被分为 A,B,N型。现通用阿拉
伯数字为型号,用英文小写字母表示亚型,目
前共有 25个血清型和 1a,1b及 2a,2b亚型。分
型是依据菌体可溶性的耐热肽聚糖的抗原性。
大多数菌株为 1型和 2型 (相当于以前的 A型和 B
型 ),从急性败血症分离的菌株多为 la型,从
亚急性及慢性病病例分离的则多为 2型。
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致病机理与致病性
本菌通过消化道感染, 进入血流, 而后定
殖在局部或引致全身感染 。 已知无致病力菌株
对消化道上皮细胞黏附力差, 且易被吞噬细胞
消化 。 但致病菌株的黏附素及抗吞噬物质尚不
清楚 。
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末发现外毒素,细菌产生的神经氨酸酶是
可能的毒力因子,菌株的毒力与该酶的量有相关
性,酶的存在有助于菌体侵袭宿主细胞。在细菌
神经氨酸酶的作用下,宿主组织黏蛋白、血纤维
蛋白原等被除去 N-乙酚神经氨酸,从而减弱了黏
蛋白筹对机体的保护作用。感染动物能产生神经
氨酸酶抗体,已证实实验动物通过对该酶的主动
或被动免疫可获得保护。
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猪 丹 毒
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慢性:
最普遍特
征是关节炎。
有的出现心功
能不全。
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本菌在自然界分布十分广泛, 可寄生于哺
乳动物, 禽和鱼类 。 其中猪分离率最高, 可引
致 3~ 12月龄猪猪丹毒 ;3~ 4周岁的羔羊可致慢
性多发性关节炎 ;鸡与火鸡感染后呈现衰弱和
下痢 ;鸭可出现败血症, 并侵害输卵管 。 小鼠
和鸽子最易感, 实验感染时皮下注射 2~ 5d内
呈败血死亡 ;家兔和豚鼠抵抗力较强 。
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人可经外伤感染, 发生皮肤病变, 称 "类
丹毒 ",病状与人的丹毒病相似, 但后者由化
脓链球菌所致 。
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从健康猪的扁桃体, 禽类及水生动物体表
均可分离出不同血清型的菌株, 这些菌株对小
鼠和仔猪有较强的致病力 。 已从 70多种动物中
分离到本菌, 带菌率和发病率与饲养条件, 气
候变化及猪龄大小有密切关系, 是一种, 自源
性传染病, 。
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微生物学诊断
1,显微镜检查 可采取高热期病猪耳静脉血
作涂片, 染色, 镜检 。 死后可采取心血及新鲜肝,
脾, 肾, 淋巴结等制成涂片, 革兰氏染色镜检 。
如发现少量典型杆菌, 可初步确诊 。 如为慢性心
内膜炎病例, 可用心脏瓣膜增生物涂片, 镜检 。
羔羊患关节炎病时, 可检查关节滑膜囊液 。
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2,分离培养 分离培养时可用含有
0.2%(W/V)的葡萄糖或 5%~ 10%无菌马血清 (W/V)
的半固体琼脂培养基。为提高分离率可采用含
有 1/100万结晶紫,l/5万叠氮钠的 10%马血清
肉汤及琼脂平板。也可在马丁肉汤中加入新霉
素 (400ug/ml)或万古霉素 (70ug/ml),抑制
某些杂菌生长。
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3,细菌鉴定 主要考虑与李氏杆菌鉴别诊
断,区别要点见本章李氏杆菌有关内容。可用
鸽子肌肉注射培养物,死后取心血和脾脏涂片,
染色、镜检,并同时分离细菌。血清型鉴定时,
将待鉴定菌株的纯培养物加入 1%甲醛灭活,经
洗涤、高压、离心处理后制成沉淀原,与模式
菌株的高免血清作琼脂扩散试验。
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4、血清学诊断
可采用生长凝集试验诊断,是根据猪丹毒
杆菌在生长繁殖中能与该菌抗血清发生特异性
凝集设计的。即在含有抗猪丹毒血清的培养基
中接种被检组织液或纯培养物,置 37℃ 培养
18~ 24h,观察有无细菌凝集。检测猪血清时,
不发病猪凝集价在 1:20以下,发病或有免疫力
的猪凝集价在 1:320以上。如检测患猪组织或
分离的待检菌,有凝集者即判为阳性。
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免疫与治疗
本菌具有良好的免疫原性,目前我国应用猪
丹毒 GC42或 C4T(l0)弱毒菌株制成的冻干苗,用
20%铝胶生理盐水稀释后,在仔猪断奶后接种 5~
7亿活菌,有良好的免疫力。若用以无加倍口服
也有效。应用灭活苗也有较好的保护效果。
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世界卫生组织提出的猪丹毒灭活苗的标准
为:以干燥菌苗 0.8mg接种小鼠,免疫 2~ 3周
后,攻击强毒菌 50%以上获得保护,为 1个单位,
有效菌苗每毫升必须含 20个单位,猪接种 60个
单位以上,免疫期 6个本菌的细胞壁提取物 P64
是一种有效的免疫原,猪体免疫试验表明,它
与弱毒疫苗具有同样有效的保护力。用牛或马
制备的抗猪丹毒血清可用于紧急预防和治疗。
也可用青霉素治疗病猪。