收 稿 日 期,2003-12-03
作 者 简 介,温 周 瑞,1966 年 生,男,江 西 瑞 昌 人,副 研 究 员,主要 从 事 渔 业 生 态 和 鱼 类 营 养 研 究 。
中 草 药 对 水 产 动 物 免 疫 作 用 研 究 进 展温 周 瑞,刘 慧 集,骆 敏,周 敏
(湖 北 省 水 产 科 学 研 究 所,武 汉 430071)
摘 要,中 草 药 具 有 免 疫 调 节 作 用 的 主 要 成 分 包 括 生 物 碱,多 糖,皂 甙,蒽 类,挥 发 油,有 机 酸 等,中 药 免 疫调 节 剂 对 机 体 的 作 用,主 要 通 过 激 活 网 状 内 皮 系 统 和 补 体,激 活 巨 噬 细 胞 和 T,B 淋 巴 细 胞 以 及 诱 生 多 种 细胞 因 子 等 途 径 。 综 述 了 中 草 药 对 鱼 类,虾 蟹 的 免 疫 作 用 。
关 键 词,中 草 药 ;免 疫 作 用 ;水 产 动 物 ;研 究 进 展中 图 分 类 号,S948 文 献 标 识 码,A 文 章 编 号,1003-1278 (2004) 02-0001-03
鱼 病 一 直 是 水 产 养 殖 发 展 的 主 要 制 约 因 素 。 据 测算,2002 年 4～ 10 月 全 国 水 产 养 殖 因 病 害 造 成 的 直 接 经济 损 失 达 到 141 亿 元 [1] 。 为 了 治 疗 和 预 防 鱼 类 的 疾 病,
不 得 不 使 用 各 种 化 学 药 物 和 抗 生 素 。 长 期 用 药,不 仅 使病 原 菌 的 抗 药 性 越 来 越 明 显,而 且 药 物 残 留 的 危 害 也 日益 显 现 。 因 此 为 了 寻 求 鱼 病 的 防 治 方 法,国 内 外 水 产 科技 工 作 者 做 了 大 量 研 究 工 作,不 少 试 验 证 明 有 些 物 质 可以 提 高 鱼 体 免 疫 力,达 到 抗 病 的 效 果,这 类 物 质 统 称 为 免疫 增 强 剂 。
免 疫 增 强 剂 也 叫 免 疫 刺 激 剂,当 它 和 抗 原 一 起 使 用时 能 刺 激 动 物 特 异 性 免 疫 机 制 ;单 独 使 用 时 能 刺 激 非 特异 性 免 疫 机 制,而 使 鱼 类 对 各 种 抗 原 有 较 强 的 应 答 能 力,
如 提 高 吞 噬 细 胞 的 吞 噬 能 力,提 高 补 体 活 力 等 。 常 用 的免 疫 刺 激 剂 有 弗 氏 完 全 佐 剂,葡 聚 糖,左 旋 咪 唑,中 草 药和 激 素,维 生 素 C 和 E等 [2] 。 有 关 资 料 表 明,近 200 种 中草 药 具 有 免 疫 促 进 作 用 。
1 水 产 动 物 的 免 疫 系 统鱼 类 的 免 疫 系 统 包 括 免 疫 器 官,淋 巴 细 胞,免 疫 球 蛋白 及 一 些 体 液 淋 巴 因 子 等 。 鱼 类 主 要 行 使 非 特 异 性 与 特异 性 两 大 免 疫 防 御 功 能 。 鱼 类 的 免 疫 应 答 器 官 与 组 织 主要 指 前 肾,脾 脏,胸 腺 以 及 消 化 道 淋 巴 组 织 与 血 液 淋 巴等 。 根 据 反 应 功 能,鱼 类 的 非 特 异 性 免 疫 物 质 主 要 包 括溶 菌 酶,壳 质 酶,干 扰 素,凝 集 素,溶 菌 (血 ) 素,沉 降 素,急性 感 染 时 出 现 的 急 性 期 蛋 白 质 等 。 属 于 无 脊 椎 动 物 的 甲壳 动 物 和 软 体 动 物 均 缺 乏 免 疫 球 蛋 白,主 要 通 过 物 理 屏障,吞 噬 作 用,溶 菌 作 用 和 凝 集 作 用 等 清 除 入 侵 的 病 原菌 。
2 中 草 药 的 主 要 成 分 及 其 免 疫 作 用 机 理中 草 药 中 具 有 免 疫 调 节 作 用 的 成 分 主 要 包 括 生 物碱,多 糖,皂 甙,蒽 类,挥 发 油,有 机 酸 等 。 如 茶 叶 生 物 碱
(包 括 咖 啡 碱 和 茶 碱 ),黄 芪 多 糖,人 参 皂 甙,大 蒜 素,甘 草酸 等 有 显 著 增 强 机 体 免 疫 功 能 的 作 用 [3] 。
中 药 免 疫 调 节 剂 对 机 体 的 作 用,主 要 通 过 激 活 网 状内 皮 系 统 和 补 体,激 活 巨 噬 细 胞 和 T,B 淋 巴 细 胞 和 诱 生多 种 细 胞 因 子 等 途 径 。 如 中 药 多 糖 作 为 生 物 效 应 调 节剂,主 要 影 响 机 体 的 网 状 内 皮 系 统,具 有 促 进 胸 腺 反 应,
刺 激 巨 噬 细 胞 的 吞 噬 功 能 和 淋 巴 细 胞,白 细 胞,NK 细 胞,
补 体 系 统 以 及 RNA,DNA,蛋 白 质 的 合 成 和 体 内 的
cAMP,cGMP 的 含 量,最 终 可 以 促 进 抗 体 的 生 成,使 淋 巴因 子 及 干 扰 素 的 诱 生 增 强 。 甙 类 可 加 强 网 状 内 皮 系 统 吞噬 功 能,并 促 进 抗 体 生 成,促 进 抗 原 抗 体 反 应 和 淋 巴 细 胞转 化 ;生 物 碱 能 增 强 体 液 和 细 胞 免 疫 功 能,刺 激 巨 噬 细 胞吞 噬 功 能 。
根 据 对 动 物 的 免 疫 增 强 作 用 机 理,按 免 疫 调 节 的 功能,中 草 药 可 分 为 以 下 几 类,① 对 免 疫 器 官 作 用 的 中 草药 。 动 物 实 验 证 明,冬 虫 夏 草,虫 草 菌 浸 剂,黄 芪 类 多 糖能 明 显 增 强 小 鼠 脾 重,拮 抗 强 的 松 龙 或 环 磷 酰 胺 引 起 的脾 重 减 轻,但 能 引 起 胸 腺 萎 缩 ;肉 苁 蓉,山 蚁 精,白 何 首乌,毛 花 猕 猴 桃 对 小 鼠 脾 脏 及 胸 腺 的 重 量 都 有 一 定 的 提升 作 用 ;绞 股 蓝,猪 苓 多 糖,紫 菜 多 糖 及 人 参 培 养 细 胞 多糖 能 明 显 增 加 小 鼠 脾 重,对 胸 腺 未 见 显 著 影 响 [4] 。 ② 提高 淋 巴 母 细 胞 分 化 能 力 的 中 草 药 。 如 黄 连,黄 芪,黄 芩,
蒲 公 英,金 银 花,地 丁,五 味 子,川 芎,红 花,柴 胡,白 芍,生地 等 。 ③ 促 进 抗 体 生 成 的 中 草 药 。 有 洋 金 花,千 金 藤,红花,川 芎,大 蒜,猪 苓,黄 连,黄 芩,鱼 腥 草,白 花 蛇 舌 草 等 。
④ 诱 生 干 扰 素 和 促 进 产 生 免 疫 球 蛋 白 的 中 草 药 。 有 刺 五加,黄 芪,龙 胆 草,瓜 蒌 皮,石 斛,丝 瓜 等 。 ⑤ 具 备 网 状 内皮 系 统 或 提 高 白 细 胞 吞 噬 功 能 的 中 草 药 。 有 黄 连,黄 芩,
鱼 腥 草,大 蒜,白 花 蛇 舌 草,千 金 藤,大 黄,白 术,防 己,杜仲,甘 草,穿 心 莲,金 银 花,大 青 叶,一 支 黄 花 等 [5] 及 苦 参,
银 耳,巴 戟 天,鸡 血 藤,女 贞 子,熟 地,小 茴 香,淫 羊 霍,板蓝 根 多 糖,三 颗 针,汉 防 己,补 骨 脂 等 [6] 。
3 中 草 药 用 于 水 产 动 物 免 疫 研 究 现 状
3,1 中 草 药 对 鱼 类 的 免 疫 增 强 作 用用 中 草 药 作 为 佐 剂,提 高 疫 苗 的 免 疫 效 果 。 研 究 较多 的 是 茛 菪 类 药,采 用 茛 菪 类 药 作 为 鱼 病 免 疫 防 治 的 一种 增 效 药 物,与 疫 苗 联 合 应 用 。 茛 菪 类 药 具 有 调 节 植 物神 经,兴 奋 循 环 和 呼 吸 中 枢,解 除 平 滑 肌 痉 挛,调 节 免 疫功 能 。 艾 桃 山 等 [7] 试 验 结 果 表 明,草 鱼 水 花 用 多 联 疫 苗
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加 茛 菪 剂 浸 泡 后,其 由 夏 花 养 成 大 规 格 草 鱼 种 的 成 活 率比 对 照 组 提 高 21.9%,并 且 在 经 过 5 个 月 的 饲 养 后 仍 可获 得 46.7% 的 免 疫 保 护 力 。 赵 建 培 等 [8] 按 每 千 克 饲 料 添加 2m g 茛 菪 1 号,投 喂 罗 非 鱼,试 验 组 增 重 率 比 对 照 组 提高 约 16% 。
不 少 试 验 表 明 中 草 药 作 为 饲 料 添 加 剂 对 鱼 类 产 生 直接 的 免 疫 增 强 作 用 。 甘 草 甜 素 含 1 分 子 甘 草 酸,有 抗 炎症 和 抗 肿 瘤 作 用,Jan g 等 [9] 报 道 用 甘 草 酸 体 外 处 理 虹 鳟能 加 强 巨 噬 细 胞 呼 吸 爆 炸 活 性 。 梁 思 析,王 爱 波 [10] 报 道,
在 饲 料 中 每 天 每 千 克 中 添 加 5～ 10m g 甘 草 酸,对 鱼 类 的血 细 胞 比 容 和 血 清 蛋 白 量 有 增 加 的 趋 势 ;随 着 甘 草 酸 添加 量 的 增 加,溶 菌 酶 活 性,补 体 价,巨 噬 细 胞 的 吞 噬 率 以及 凝 集 抗 体 价 等 均 有 不 同 程 度 的 上 升,说 明 添 加 甘 草 酸可 明 显 增 强 鱼 体 免 疫 力 。
马 俊 岭 [11] 用 鲤 鱼 研 究 发 现,大 黄,黄 连,花 粉 能 引 起鱼 体 免 疫 器 官 重 量,吞 噬 细 胞 吞 噬 能 力 和 溶 菌 酶 活 性 增加,是 免 疫 增 强 剂,而 无 花 果 为 免 疫 抑 制 剂 。 KiHon g
Kim[12] 研 究 了 芦 荟 对 rockfish Sebastes schlegeli 幼 鱼 非 特异 性 免 疫 和 抗 病 力 的 影 响,试 验 鱼 驯 养 期 间 感 染 溶 藻 胶弧 菌,投 喂 芦 荟 质 量 分 数 为 0,1,5 g/k g 的 饲 料 6 周,饲 料中 添 加 芦 荟 对 血 清 溶 菌 酶 活 性 影 响 不 明 显,但 头 肾 白 细胞 化 学 发 光 反 应 对 照 组 和 1 g/k g 组 明 显 高 于 ( p <0,05)
5 g/k g 饲 料 组,试 验 结 束 时 总 死 亡 率 5 g/k g 饲 料 组 明 显低 于 ( p <0,05) 对 照 组 和 1 g/k g 饲 料 组,说 明 适 量 的 芦 荟可 增 强 rockfish 幼 鱼 抵 抗 溶 藻 胶 弧 菌 的 能 力 。
杜 仲 富 含 氨 基 酸,维 生 素,矿 物 质 等 多 种 常 规 营 养 成分 外,还 含 有 独 有 的 绿 原 酸,杜 仲 苷,松 脂 素 苷,杜 仲 酸 及黄 酮 类 等 天 然 活 性 物 质 。 罗 庆 华 [13] 在 鲤 鱼 饲 料 中 添 加 质量 分 数 2%,4%,6% 的 杜 仲 叶 粉,饲 养 30d 后,能 明 显 提高 鲤 鱼 的 免 疫 应 答 水 平,增 强 抗 细 菌 感 染 能 力,促 进 鲤 的生 长,尤 以 添 加 4%,6% 的 效 果 显 著 。 王 永 玲 等 [14] 在 饲料 中 分 别 添 加 质 量 分 数 1% 的 党 参,黄 芪,黄 芩,刺 五 加,
大 蒜,黄 连,螺 旋 藻,对 银 鲫 均 有 促 生 长 的 作 用,其 中 以 螺旋 藻 组 生 长 最 快,增 重 率 比 对 照 组 提 高 11.55%,饲 料 系数 比 对 照 组 下 降 了 11.48%; 党 参 组,大 蒜 组,黄 芪 组 和 刺五 加 组 增 重 率 比 对 照 组 的 分 别 提 高 了 10.18%,7.99%,
7.36% 和 7.29%,黄 连 和 黄 芩 组 增 重 率 均 比 对 照 组 略 高 。
简 纪 常 等 [15] 研 究 表 明,将 黄 芪,当 归,党 参,马 蔸 苓,板 蓝根 和 甘 草 粉 碎 后,分 别 以 质 量 分 数 为 35%,20%,15%,
10% 和 10% 的 比 例 混 匀,再 分 别 以 质 量 分 数 为 0.5% 和
1.0% 的 量 加 入 粉 碎 的 鲤 配 合 饲 料 中,饲 喂 药 饵 15,30d
后 的 NBT 阳 性 细 胞 数 和 溶 菌 酶 活 力 均 显 著 高 于 对 照 组
( P <0,05),该 配 方 既 能 明 显 提 高 建 鲤 的 吞 噬 细 胞,中 性粒 细 胞 和 巨 噬 细 胞 的 数 量,又 能 提 高 其 溶 菌 酶 的 活 力,从而 明 显 提 高 建 鲤 的 非 特 异 性 免 疫 能 力 。
Jichan gJian [16] 用 中 药 AstragalusRoot ( Radix astra2
galin seu Hedysari ) 与 ChineseAn gelicaRoot ( Radix angel2
icae sinensis ) 以 重 量 5∶ 1 的 比 例 添 加 到 切 碎 的 鱼 肉 中,投喂 大 黄 鱼 Pseudosciaena crocea,添 加 量 1% 和 1.5% 时,投喂 20,25,30d 后,NBT 阳 性 细 胞 和 溶 菌 酶 活 性 显 著 增 加
( P <0,05),15d 后 补 体 活 性 明 显 增 强 ( P <0,05) 。 感 染溶 藻 胶 弧 菌 的 病 鱼 在 添 加 1% 和 1.5% 组 的 成 活 率 较 高
(93.3% ),添 加 0.5% 的 组 和 对 照 组 累 计 死 亡 率 分 别 为
37% 和 75% 。 试 验 结 果 表 明,中 药 可 以 增 强 大 黄 鱼 非 特异 性 免 疫 功 能 和 抗 病 力 。 陈 孝 煊 等 [17] 用 质 量 分 数 1% 的大 黄,穿 心 莲,板 蓝 根 和 金 银 花 水 提 取 物 的 饵 料 连 续 饲 喂异 育 银 鲫 28d,投 喂 药 饵 后 4d,血 液 白 细 胞 吞 噬 百 分 比 与对 照 组 相 比 均 有 极 显 著 差 异 ( P <0,01) ;投 喂 药 饵 后 4d
或 7d,吞 噬 指 数 与 对 照 组 相 比 有 显 著 或 极 显 著 差 异 ;在停 喂 药 饵 后 的 10d,吞 噬 百 分 比 和 吞 噬 指 数 与 对 照 组 相比 仍 有 极 显 著 差 异,投 喂 药 饵 后 血 清 和 体 表 粘 液 溶 菌 酶活 性 有 明 显 提 高 。
3,2 中 草 药 对 虾,蟹 的 免 疫 增 强 作 用中 草 药 在 对 虾 养 殖 的 作 用 亦 有 较 多 报 道 。 沈 锦 玉等 [18] 用 复 合 中 草 药,菌 苗,脂 多 糖 等 作 为 免 疫 药 物 投 喂 中国 对 虾,服 用 免 疫 药 物 后,溶 菌 活 力 随 时 间 的 推 移 由 对 照组 平 均 0.2 增 高 至 0.38,且 各 组 间 差 异 较 显 著,高 浓 度 药饵 组 均 优 于 低 浓 度 的 。 这 一 结 果 显 示 药 物 在 一 定 程 度 上提 高 了 机 体 的 非 特 异 性 免 疫 。 对 虾 口 服 免 疫 药 饵 约 1 个月 后,用 毒 力 较 强 的 溶 藻 弧 菌 攻 毒,口 服 免 疫 药 饵 组 虾 的免 疫 保 护 率 为 78.95% ～ 89.47%,而 对 照 组 为 0,说 明 虾对 疾 病 抵 抗 力 增 强 。 罗 日 祥 [19] 用 9 种 中 草 药 配 制 的 l 号制 剂 (合 等 量 的 黄 芪,猪 苓,杜 仲,枸 杞 子,鱼 腥 草,甘 草,
陈 皮,茯 苓 和 黄 连 )和 4 种 中 草 药 配 制 的 2 号 制 剂 (含 等 量的 鱼 腥 草,枸 杞 子,陈 皮 和 丹 皮 ) 对 中 国 对 虾 进 行 投 喂,结果 表 明,l 号 制 剂 对 对 虾 的 免 疫 系 统 有 激 活 作 用,且 这 种作 用 在 一 定 时 间 范 围 内 随 着 药 饵 投 喂 时 间 的 延 长 而 加强,2 号 制 剂 对 对 虾 的 免 疫 系 统 起 抑 制 或 破 坏 作 用 。 杜 爱芳 [20] 用 4 种 复 合 中 草 药 制 剂 对 中 国 对 虾 进 行 投 喂,经 测定 这 4 种 制 剂 使 对 虾 血 细 胞 吞 噬 活 性 相 对 细 菌 的 杀 伤 活性 均 显 著 高 于 对 照 组,免 疫 保 护 率 也 有 提 高 。 杜 爱 芳等 [21] 用 大 蒜 油 与 从 多 种 中 草 药 中 提 取 的 皂 苷 类 天 然 活 性物 质 组 成 复 方 制 剂,以 0.2% 的 比 例 添 加 于 对 虾 饲 料 中,
结 果 表 明,对 虾 血 细 胞 吞 噬 率,杀 伤 率 和 吞 噬 指 数 有 极 显著 提 高,细 胞 杀 伤 指 数 显 著 提 高 ;对 虾 血 淋 巴 中 的 溶 菌 活力 极 显 著 提 高,酚 氧 化 酶 活 力 显 著 提 高 ;溶 藻 弧 菌 攻 毒后,对 虾 免 疫 保 护 率 提 高 86% 。 崔 青 曼 等 [22] 用 海 藻 多糖,大 黄,黄 芪,连 翘 等 为 主 要 成 分,研 制 出 复 方 饲 料 添 加剂,饲 喂 河 蟹,证 实 了 该 添 加 剂 可 显 著 地 提 高 河 蟹 机 体 的免 疫 功 能 。 李 义 等 [23] 采 用 黄 芪,党 参,大 黄,板 蓝 根 等 10
余 味 中 草 药,粉 碎 过 筛 后 制 成 复 方 添 加 剂,按 质 量 分 数
1%,2%,3% 添 加 于 基 础 饲 料 中 制 成 颗 粒 药 饵 投 喂 罗 氏沼 虾,结 果 表 明,罗 氏 沼 虾 血 细 胞 吞 噬 百 分 比 和 吞 噬 指数,血 清 溶 菌 酶 活 力 及 酚 氧 化 酶 活 力 均 显 著 提 高 ;经 嗜 水气 单 胞 菌 攻 毒 后,各 试 验 组 的 免 疫 保 护 率 也 明 显 提 高 ;在各 试 验 组 中 以 2% 组 效 果 最 好 。 试 验 证 明,该 添 加 剂 可 显著 地 提 高 罗 氏 沼 虾 的 免 疫 功 能,有 效 地 预 防 嗜 水 气 单 胞菌 的 感 染 。 陈 孝 煊 等 [24] 将 1% 的 大 黄 和 黄 连 拌 饵 投 喂 克氏 原 螯 虾 和 红 螯 螯 虾,结 果 表 明 大 黄 和 黄 连 均 能 增 强 克氏 原 螯 虾 和 红 螯 螯 虾 血 细 胞 的 吞 噬 活 性,在 克 氏 原 螯 虾还 显 示 了 对 活 弧 菌 攻 毒 有 很 好 的 免 疫 保 护 率,说 明 大 黄和 黄 连 可 以 增 强 两 种 螯 虾 的 非 特 异 性 免 疫 功 能 。
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另 外,张 兆 华 [25] 根 据 亲 鳖 和 稚 幼 鳖 的 生 长 特 点,研究 出 用 于 亲 鳖 的 具 有 促 进 性 腺 发 育,促 进 排 卵,提 高 免 疫功 能 和 保 健 防 病 作 用 的 中 草 药 添 加 剂 五 子 生 精 散,增 卵散 I 号,增 卵 散 2 号 ;用 于 稚,幼 鳖 的 中 草 药 添 加 剂 解 僵散,促 长 散 I 号,以 及 用 于 防 治 疾 病 的 中 草 药 添 加 剂 保 健投 1～ 4 号 。
4 中 草 药 免 疫 增 强 剂 在 水 产 养 殖 上 的 应 用 前 景中 草 药 因 取 自 动 物,植 物,矿 物 及 其 产 品,由 组 方 配伍 规 律 和 配 伍 禁 忌 组 成,充 分 利 用 各 味 中 草 药 相 互 作 用,
提 高 了 对 疾 病 预 防 及 治 疗 效 果,对 机 体 生 理 功 能 无 明 显损 害,不 产 生 抗 药 性 和 毒 副 作 用,安 全 性 好,无 药 物 残 留,
不 会 造 成 环 境 污 染 。 中 草 药 除 能 提 高 水 产 动 物 非 特 异 性免 疫 能 力 外,还 能 调 整 机 体 新 陈 代 谢,提 高 抗 应 激 能 力,
具 有 抗 生 素 作 用,营 养 作 用,双 向 调 节 作 用,诱 食 作 用 等多 种 功 能 [26] 。 因 此,中 草 药 作 为 饲 料 添 加 剂 已 成 为 当 今畜 牧 水 产 业 研 究 的 热 点 。 中 草 药 用 作 水 产 动 物 免 疫 增 强剂 的 研 究,虽 有 一 些 报 道,但 总 的 说 来,还 处 于 起 步 阶 段 。
目 前 生 产 应 用 中 存 在 产 品 添 加 量 大,有 效 成 分 不 明,作 用机 理 不 清,作 用 效 果 不 稳 定,剂 型 单 一 等 问 题 [27] 。 今 后 应着 重 开 展 以 下 几 方 面 研 究 工 作,利 用 现 代 化 学 分 析 手 段,
对 中 草 药 中 的 有 效 成 分 如 多 糖,甙 类,生 物 碱,挥 发 油 等,
进 行 提 取 分 离 和 鉴 定 ;对 中 草 药 有 效 成 分 的 作 用 机 理 进行 深 入 研 究,更 具 体 了 解 其 免 疫 增 强 作 用 的 原 理 ;加 强 中草 药 的 配 伍 及 其 协 同 机 理 的 研 究 ;加 强 中 草 药 成 品 和 原料 的 质 量 控 制,进 行 产 品 的 毒 理 安 全 研 究 以 及 免 疫 增 强剂 使 用 技 术,如 饲 料 添 加,浸 泡,注 射 等 具 体 剂 量,用 药 时间,用 药 程 序 等,并 针 对 不 同 种 类 水 产 动 物 研 究 出 专 用 的免 疫 增 强 剂 。
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中 草 药 对 水 产 动 物 免 疫 作 用 研 究 进 展温 周 瑞,刘 慧 集,骆 敏,周 敏
(湖 北 省 水 产 科 学 研 究 所,武 汉 430071)
摘 要,中 草 药 具 有 免 疫 调 节 作 用 的 主 要 成 分 包 括 生 物 碱,多 糖,皂 甙,蒽 类,挥 发 油,有 机 酸 等,中 药 免 疫调 节 剂 对 机 体 的 作 用,主 要 通 过 激 活 网 状 内 皮 系 统 和 补 体,激 活 巨 噬 细 胞 和 T,B 淋 巴 细 胞 以 及 诱 生 多 种 细胞 因 子 等 途 径 。 综 述 了 中 草 药 对 鱼 类,虾 蟹 的 免 疫 作 用 。
关 键 词,中 草 药 ;免 疫 作 用 ;水 产 动 物 ;研 究 进 展中 图 分 类 号,S948 文 献 标 识 码,A 文 章 编 号,1003-1278 (2004) 02-0001-03
鱼 病 一 直 是 水 产 养 殖 发 展 的 主 要 制 约 因 素 。 据 测算,2002 年 4～ 10 月 全 国 水 产 养 殖 因 病 害 造 成 的 直 接 经济 损 失 达 到 141 亿 元 [1] 。 为 了 治 疗 和 预 防 鱼 类 的 疾 病,
不 得 不 使 用 各 种 化 学 药 物 和 抗 生 素 。 长 期 用 药,不 仅 使病 原 菌 的 抗 药 性 越 来 越 明 显,而 且 药 物 残 留 的 危 害 也 日益 显 现 。 因 此 为 了 寻 求 鱼 病 的 防 治 方 法,国 内 外 水 产 科技 工 作 者 做 了 大 量 研 究 工 作,不 少 试 验 证 明 有 些 物 质 可以 提 高 鱼 体 免 疫 力,达 到 抗 病 的 效 果,这 类 物 质 统 称 为 免疫 增 强 剂 。
免 疫 增 强 剂 也 叫 免 疫 刺 激 剂,当 它 和 抗 原 一 起 使 用时 能 刺 激 动 物 特 异 性 免 疫 机 制 ;单 独 使 用 时 能 刺 激 非 特异 性 免 疫 机 制,而 使 鱼 类 对 各 种 抗 原 有 较 强 的 应 答 能 力,
如 提 高 吞 噬 细 胞 的 吞 噬 能 力,提 高 补 体 活 力 等 。 常 用 的免 疫 刺 激 剂 有 弗 氏 完 全 佐 剂,葡 聚 糖,左 旋 咪 唑,中 草 药和 激 素,维 生 素 C 和 E等 [2] 。 有 关 资 料 表 明,近 200 种 中草 药 具 有 免 疫 促 进 作 用 。
1 水 产 动 物 的 免 疫 系 统鱼 类 的 免 疫 系 统 包 括 免 疫 器 官,淋 巴 细 胞,免 疫 球 蛋白 及 一 些 体 液 淋 巴 因 子 等 。 鱼 类 主 要 行 使 非 特 异 性 与 特异 性 两 大 免 疫 防 御 功 能 。 鱼 类 的 免 疫 应 答 器 官 与 组 织 主要 指 前 肾,脾 脏,胸 腺 以 及 消 化 道 淋 巴 组 织 与 血 液 淋 巴等 。 根 据 反 应 功 能,鱼 类 的 非 特 异 性 免 疫 物 质 主 要 包 括溶 菌 酶,壳 质 酶,干 扰 素,凝 集 素,溶 菌 (血 ) 素,沉 降 素,急性 感 染 时 出 现 的 急 性 期 蛋 白 质 等 。 属 于 无 脊 椎 动 物 的 甲壳 动 物 和 软 体 动 物 均 缺 乏 免 疫 球 蛋 白,主 要 通 过 物 理 屏障,吞 噬 作 用,溶 菌 作 用 和 凝 集 作 用 等 清 除 入 侵 的 病 原菌 。
2 中 草 药 的 主 要 成 分 及 其 免 疫 作 用 机 理中 草 药 中 具 有 免 疫 调 节 作 用 的 成 分 主 要 包 括 生 物碱,多 糖,皂 甙,蒽 类,挥 发 油,有 机 酸 等 。 如 茶 叶 生 物 碱
(包 括 咖 啡 碱 和 茶 碱 ),黄 芪 多 糖,人 参 皂 甙,大 蒜 素,甘 草酸 等 有 显 著 增 强 机 体 免 疫 功 能 的 作 用 [3] 。
中 药 免 疫 调 节 剂 对 机 体 的 作 用,主 要 通 过 激 活 网 状内 皮 系 统 和 补 体,激 活 巨 噬 细 胞 和 T,B 淋 巴 细 胞 和 诱 生多 种 细 胞 因 子 等 途 径 。 如 中 药 多 糖 作 为 生 物 效 应 调 节剂,主 要 影 响 机 体 的 网 状 内 皮 系 统,具 有 促 进 胸 腺 反 应,
刺 激 巨 噬 细 胞 的 吞 噬 功 能 和 淋 巴 细 胞,白 细 胞,NK 细 胞,
补 体 系 统 以 及 RNA,DNA,蛋 白 质 的 合 成 和 体 内 的
cAMP,cGMP 的 含 量,最 终 可 以 促 进 抗 体 的 生 成,使 淋 巴因 子 及 干 扰 素 的 诱 生 增 强 。 甙 类 可 加 强 网 状 内 皮 系 统 吞噬 功 能,并 促 进 抗 体 生 成,促 进 抗 原 抗 体 反 应 和 淋 巴 细 胞转 化 ;生 物 碱 能 增 强 体 液 和 细 胞 免 疫 功 能,刺 激 巨 噬 细 胞吞 噬 功 能 。
根 据 对 动 物 的 免 疫 增 强 作 用 机 理,按 免 疫 调 节 的 功能,中 草 药 可 分 为 以 下 几 类,① 对 免 疫 器 官 作 用 的 中 草药 。 动 物 实 验 证 明,冬 虫 夏 草,虫 草 菌 浸 剂,黄 芪 类 多 糖能 明 显 增 强 小 鼠 脾 重,拮 抗 强 的 松 龙 或 环 磷 酰 胺 引 起 的脾 重 减 轻,但 能 引 起 胸 腺 萎 缩 ;肉 苁 蓉,山 蚁 精,白 何 首乌,毛 花 猕 猴 桃 对 小 鼠 脾 脏 及 胸 腺 的 重 量 都 有 一 定 的 提升 作 用 ;绞 股 蓝,猪 苓 多 糖,紫 菜 多 糖 及 人 参 培 养 细 胞 多糖 能 明 显 增 加 小 鼠 脾 重,对 胸 腺 未 见 显 著 影 响 [4] 。 ② 提高 淋 巴 母 细 胞 分 化 能 力 的 中 草 药 。 如 黄 连,黄 芪,黄 芩,
蒲 公 英,金 银 花,地 丁,五 味 子,川 芎,红 花,柴 胡,白 芍,生地 等 。 ③ 促 进 抗 体 生 成 的 中 草 药 。 有 洋 金 花,千 金 藤,红花,川 芎,大 蒜,猪 苓,黄 连,黄 芩,鱼 腥 草,白 花 蛇 舌 草 等 。
④ 诱 生 干 扰 素 和 促 进 产 生 免 疫 球 蛋 白 的 中 草 药 。 有 刺 五加,黄 芪,龙 胆 草,瓜 蒌 皮,石 斛,丝 瓜 等 。 ⑤ 具 备 网 状 内皮 系 统 或 提 高 白 细 胞 吞 噬 功 能 的 中 草 药 。 有 黄 连,黄 芩,
鱼 腥 草,大 蒜,白 花 蛇 舌 草,千 金 藤,大 黄,白 术,防 己,杜仲,甘 草,穿 心 莲,金 银 花,大 青 叶,一 支 黄 花 等 [5] 及 苦 参,
银 耳,巴 戟 天,鸡 血 藤,女 贞 子,熟 地,小 茴 香,淫 羊 霍,板蓝 根 多 糖,三 颗 针,汉 防 己,补 骨 脂 等 [6] 。
3 中 草 药 用 于 水 产 动 物 免 疫 研 究 现 状
3,1 中 草 药 对 鱼 类 的 免 疫 增 强 作 用用 中 草 药 作 为 佐 剂,提 高 疫 苗 的 免 疫 效 果 。 研 究 较多 的 是 茛 菪 类 药,采 用 茛 菪 类 药 作 为 鱼 病 免 疫 防 治 的 一种 增 效 药 物,与 疫 苗 联 合 应 用 。 茛 菪 类 药 具 有 调 节 植 物神 经,兴 奋 循 环 和 呼 吸 中 枢,解 除 平 滑 肌 痉 挛,调 节 免 疫功 能 。 艾 桃 山 等 [7] 试 验 结 果 表 明,草 鱼 水 花 用 多 联 疫 苗
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加 茛 菪 剂 浸 泡 后,其 由 夏 花 养 成 大 规 格 草 鱼 种 的 成 活 率比 对 照 组 提 高 21.9%,并 且 在 经 过 5 个 月 的 饲 养 后 仍 可获 得 46.7% 的 免 疫 保 护 力 。 赵 建 培 等 [8] 按 每 千 克 饲 料 添加 2m g 茛 菪 1 号,投 喂 罗 非 鱼,试 验 组 增 重 率 比 对 照 组 提高 约 16% 。
不 少 试 验 表 明 中 草 药 作 为 饲 料 添 加 剂 对 鱼 类 产 生 直接 的 免 疫 增 强 作 用 。 甘 草 甜 素 含 1 分 子 甘 草 酸,有 抗 炎症 和 抗 肿 瘤 作 用,Jan g 等 [9] 报 道 用 甘 草 酸 体 外 处 理 虹 鳟能 加 强 巨 噬 细 胞 呼 吸 爆 炸 活 性 。 梁 思 析,王 爱 波 [10] 报 道,
在 饲 料 中 每 天 每 千 克 中 添 加 5～ 10m g 甘 草 酸,对 鱼 类 的血 细 胞 比 容 和 血 清 蛋 白 量 有 增 加 的 趋 势 ;随 着 甘 草 酸 添加 量 的 增 加,溶 菌 酶 活 性,补 体 价,巨 噬 细 胞 的 吞 噬 率 以及 凝 集 抗 体 价 等 均 有 不 同 程 度 的 上 升,说 明 添 加 甘 草 酸可 明 显 增 强 鱼 体 免 疫 力 。
马 俊 岭 [11] 用 鲤 鱼 研 究 发 现,大 黄,黄 连,花 粉 能 引 起鱼 体 免 疫 器 官 重 量,吞 噬 细 胞 吞 噬 能 力 和 溶 菌 酶 活 性 增加,是 免 疫 增 强 剂,而 无 花 果 为 免 疫 抑 制 剂 。 KiHon g
Kim[12] 研 究 了 芦 荟 对 rockfish Sebastes schlegeli 幼 鱼 非 特异 性 免 疫 和 抗 病 力 的 影 响,试 验 鱼 驯 养 期 间 感 染 溶 藻 胶弧 菌,投 喂 芦 荟 质 量 分 数 为 0,1,5 g/k g 的 饲 料 6 周,饲 料中 添 加 芦 荟 对 血 清 溶 菌 酶 活 性 影 响 不 明 显,但 头 肾 白 细胞 化 学 发 光 反 应 对 照 组 和 1 g/k g 组 明 显 高 于 ( p <0,05)
5 g/k g 饲 料 组,试 验 结 束 时 总 死 亡 率 5 g/k g 饲 料 组 明 显低 于 ( p <0,05) 对 照 组 和 1 g/k g 饲 料 组,说 明 适 量 的 芦 荟可 增 强 rockfish 幼 鱼 抵 抗 溶 藻 胶 弧 菌 的 能 力 。
杜 仲 富 含 氨 基 酸,维 生 素,矿 物 质 等 多 种 常 规 营 养 成分 外,还 含 有 独 有 的 绿 原 酸,杜 仲 苷,松 脂 素 苷,杜 仲 酸 及黄 酮 类 等 天 然 活 性 物 质 。 罗 庆 华 [13] 在 鲤 鱼 饲 料 中 添 加 质量 分 数 2%,4%,6% 的 杜 仲 叶 粉,饲 养 30d 后,能 明 显 提高 鲤 鱼 的 免 疫 应 答 水 平,增 强 抗 细 菌 感 染 能 力,促 进 鲤 的生 长,尤 以 添 加 4%,6% 的 效 果 显 著 。 王 永 玲 等 [14] 在 饲料 中 分 别 添 加 质 量 分 数 1% 的 党 参,黄 芪,黄 芩,刺 五 加,
大 蒜,黄 连,螺 旋 藻,对 银 鲫 均 有 促 生 长 的 作 用,其 中 以 螺旋 藻 组 生 长 最 快,增 重 率 比 对 照 组 提 高 11.55%,饲 料 系数 比 对 照 组 下 降 了 11.48%; 党 参 组,大 蒜 组,黄 芪 组 和 刺五 加 组 增 重 率 比 对 照 组 的 分 别 提 高 了 10.18%,7.99%,
7.36% 和 7.29%,黄 连 和 黄 芩 组 增 重 率 均 比 对 照 组 略 高 。
简 纪 常 等 [15] 研 究 表 明,将 黄 芪,当 归,党 参,马 蔸 苓,板 蓝根 和 甘 草 粉 碎 后,分 别 以 质 量 分 数 为 35%,20%,15%,
10% 和 10% 的 比 例 混 匀,再 分 别 以 质 量 分 数 为 0.5% 和
1.0% 的 量 加 入 粉 碎 的 鲤 配 合 饲 料 中,饲 喂 药 饵 15,30d
后 的 NBT 阳 性 细 胞 数 和 溶 菌 酶 活 力 均 显 著 高 于 对 照 组
( P <0,05),该 配 方 既 能 明 显 提 高 建 鲤 的 吞 噬 细 胞,中 性粒 细 胞 和 巨 噬 细 胞 的 数 量,又 能 提 高 其 溶 菌 酶 的 活 力,从而 明 显 提 高 建 鲤 的 非 特 异 性 免 疫 能 力 。
Jichan gJian [16] 用 中 药 AstragalusRoot ( Radix astra2
galin seu Hedysari ) 与 ChineseAn gelicaRoot ( Radix angel2
icae sinensis ) 以 重 量 5∶ 1 的 比 例 添 加 到 切 碎 的 鱼 肉 中,投喂 大 黄 鱼 Pseudosciaena crocea,添 加 量 1% 和 1.5% 时,投喂 20,25,30d 后,NBT 阳 性 细 胞 和 溶 菌 酶 活 性 显 著 增 加
( P <0,05),15d 后 补 体 活 性 明 显 增 强 ( P <0,05) 。 感 染溶 藻 胶 弧 菌 的 病 鱼 在 添 加 1% 和 1.5% 组 的 成 活 率 较 高
(93.3% ),添 加 0.5% 的 组 和 对 照 组 累 计 死 亡 率 分 别 为
37% 和 75% 。 试 验 结 果 表 明,中 药 可 以 增 强 大 黄 鱼 非 特异 性 免 疫 功 能 和 抗 病 力 。 陈 孝 煊 等 [17] 用 质 量 分 数 1% 的大 黄,穿 心 莲,板 蓝 根 和 金 银 花 水 提 取 物 的 饵 料 连 续 饲 喂异 育 银 鲫 28d,投 喂 药 饵 后 4d,血 液 白 细 胞 吞 噬 百 分 比 与对 照 组 相 比 均 有 极 显 著 差 异 ( P <0,01) ;投 喂 药 饵 后 4d
或 7d,吞 噬 指 数 与 对 照 组 相 比 有 显 著 或 极 显 著 差 异 ;在停 喂 药 饵 后 的 10d,吞 噬 百 分 比 和 吞 噬 指 数 与 对 照 组 相比 仍 有 极 显 著 差 异,投 喂 药 饵 后 血 清 和 体 表 粘 液 溶 菌 酶活 性 有 明 显 提 高 。
3,2 中 草 药 对 虾,蟹 的 免 疫 增 强 作 用中 草 药 在 对 虾 养 殖 的 作 用 亦 有 较 多 报 道 。 沈 锦 玉等 [18] 用 复 合 中 草 药,菌 苗,脂 多 糖 等 作 为 免 疫 药 物 投 喂 中国 对 虾,服 用 免 疫 药 物 后,溶 菌 活 力 随 时 间 的 推 移 由 对 照组 平 均 0.2 增 高 至 0.38,且 各 组 间 差 异 较 显 著,高 浓 度 药饵 组 均 优 于 低 浓 度 的 。 这 一 结 果 显 示 药 物 在 一 定 程 度 上提 高 了 机 体 的 非 特 异 性 免 疫 。 对 虾 口 服 免 疫 药 饵 约 1 个月 后,用 毒 力 较 强 的 溶 藻 弧 菌 攻 毒,口 服 免 疫 药 饵 组 虾 的免 疫 保 护 率 为 78.95% ～ 89.47%,而 对 照 组 为 0,说 明 虾对 疾 病 抵 抗 力 增 强 。 罗 日 祥 [19] 用 9 种 中 草 药 配 制 的 l 号制 剂 (合 等 量 的 黄 芪,猪 苓,杜 仲,枸 杞 子,鱼 腥 草,甘 草,
陈 皮,茯 苓 和 黄 连 )和 4 种 中 草 药 配 制 的 2 号 制 剂 (含 等 量的 鱼 腥 草,枸 杞 子,陈 皮 和 丹 皮 ) 对 中 国 对 虾 进 行 投 喂,结果 表 明,l 号 制 剂 对 对 虾 的 免 疫 系 统 有 激 活 作 用,且 这 种作 用 在 一 定 时 间 范 围 内 随 着 药 饵 投 喂 时 间 的 延 长 而 加强,2 号 制 剂 对 对 虾 的 免 疫 系 统 起 抑 制 或 破 坏 作 用 。 杜 爱芳 [20] 用 4 种 复 合 中 草 药 制 剂 对 中 国 对 虾 进 行 投 喂,经 测定 这 4 种 制 剂 使 对 虾 血 细 胞 吞 噬 活 性 相 对 细 菌 的 杀 伤 活性 均 显 著 高 于 对 照 组,免 疫 保 护 率 也 有 提 高 。 杜 爱 芳等 [21] 用 大 蒜 油 与 从 多 种 中 草 药 中 提 取 的 皂 苷 类 天 然 活 性物 质 组 成 复 方 制 剂,以 0.2% 的 比 例 添 加 于 对 虾 饲 料 中,
结 果 表 明,对 虾 血 细 胞 吞 噬 率,杀 伤 率 和 吞 噬 指 数 有 极 显著 提 高,细 胞 杀 伤 指 数 显 著 提 高 ;对 虾 血 淋 巴 中 的 溶 菌 活力 极 显 著 提 高,酚 氧 化 酶 活 力 显 著 提 高 ;溶 藻 弧 菌 攻 毒后,对 虾 免 疫 保 护 率 提 高 86% 。 崔 青 曼 等 [22] 用 海 藻 多糖,大 黄,黄 芪,连 翘 等 为 主 要 成 分,研 制 出 复 方 饲 料 添 加剂,饲 喂 河 蟹,证 实 了 该 添 加 剂 可 显 著 地 提 高 河 蟹 机 体 的免 疫 功 能 。 李 义 等 [23] 采 用 黄 芪,党 参,大 黄,板 蓝 根 等 10
余 味 中 草 药,粉 碎 过 筛 后 制 成 复 方 添 加 剂,按 质 量 分 数
1%,2%,3% 添 加 于 基 础 饲 料 中 制 成 颗 粒 药 饵 投 喂 罗 氏沼 虾,结 果 表 明,罗 氏 沼 虾 血 细 胞 吞 噬 百 分 比 和 吞 噬 指数,血 清 溶 菌 酶 活 力 及 酚 氧 化 酶 活 力 均 显 著 提 高 ;经 嗜 水气 单 胞 菌 攻 毒 后,各 试 验 组 的 免 疫 保 护 率 也 明 显 提 高 ;在各 试 验 组 中 以 2% 组 效 果 最 好 。 试 验 证 明,该 添 加 剂 可 显著 地 提 高 罗 氏 沼 虾 的 免 疫 功 能,有 效 地 预 防 嗜 水 气 单 胞菌 的 感 染 。 陈 孝 煊 等 [24] 将 1% 的 大 黄 和 黄 连 拌 饵 投 喂 克氏 原 螯 虾 和 红 螯 螯 虾,结 果 表 明 大 黄 和 黄 连 均 能 增 强 克氏 原 螯 虾 和 红 螯 螯 虾 血 细 胞 的 吞 噬 活 性,在 克 氏 原 螯 虾还 显 示 了 对 活 弧 菌 攻 毒 有 很 好 的 免 疫 保 护 率,说 明 大 黄和 黄 连 可 以 增 强 两 种 螯 虾 的 非 特 异 性 免 疫 功 能 。
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另 外,张 兆 华 [25] 根 据 亲 鳖 和 稚 幼 鳖 的 生 长 特 点,研究 出 用 于 亲 鳖 的 具 有 促 进 性 腺 发 育,促 进 排 卵,提 高 免 疫功 能 和 保 健 防 病 作 用 的 中 草 药 添 加 剂 五 子 生 精 散,增 卵散 I 号,增 卵 散 2 号 ;用 于 稚,幼 鳖 的 中 草 药 添 加 剂 解 僵散,促 长 散 I 号,以 及 用 于 防 治 疾 病 的 中 草 药 添 加 剂 保 健投 1～ 4 号 。
4 中 草 药 免 疫 增 强 剂 在 水 产 养 殖 上 的 应 用 前 景中 草 药 因 取 自 动 物,植 物,矿 物 及 其 产 品,由 组 方 配伍 规 律 和 配 伍 禁 忌 组 成,充 分 利 用 各 味 中 草 药 相 互 作 用,
提 高 了 对 疾 病 预 防 及 治 疗 效 果,对 机 体 生 理 功 能 无 明 显损 害,不 产 生 抗 药 性 和 毒 副 作 用,安 全 性 好,无 药 物 残 留,
不 会 造 成 环 境 污 染 。 中 草 药 除 能 提 高 水 产 动 物 非 特 异 性免 疫 能 力 外,还 能 调 整 机 体 新 陈 代 谢,提 高 抗 应 激 能 力,
具 有 抗 生 素 作 用,营 养 作 用,双 向 调 节 作 用,诱 食 作 用 等多 种 功 能 [26] 。 因 此,中 草 药 作 为 饲 料 添 加 剂 已 成 为 当 今畜 牧 水 产 业 研 究 的 热 点 。 中 草 药 用 作 水 产 动 物 免 疫 增 强剂 的 研 究,虽 有 一 些 报 道,但 总 的 说 来,还 处 于 起 步 阶 段 。
目 前 生 产 应 用 中 存 在 产 品 添 加 量 大,有 效 成 分 不 明,作 用机 理 不 清,作 用 效 果 不 稳 定,剂 型 单 一 等 问 题 [27] 。 今 后 应着 重 开 展 以 下 几 方 面 研 究 工 作,利 用 现 代 化 学 分 析 手 段,
对 中 草 药 中 的 有 效 成 分 如 多 糖,甙 类,生 物 碱,挥 发 油 等,
进 行 提 取 分 离 和 鉴 定 ;对 中 草 药 有 效 成 分 的 作 用 机 理 进行 深 入 研 究,更 具 体 了 解 其 免 疫 增 强 作 用 的 原 理 ;加 强 中草 药 的 配 伍 及 其 协 同 机 理 的 研 究 ;加 强 中 草 药 成 品 和 原料 的 质 量 控 制,进 行 产 品 的 毒 理 安 全 研 究 以 及 免 疫 增 强剂 使 用 技 术,如 饲 料 添 加,浸 泡,注 射 等 具 体 剂 量,用 药 时间,用 药 程 序 等,并 针 对 不 同 种 类 水 产 动 物 研 究 出 专 用 的免 疫 增 强 剂 。
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