第 21卷 第 3期 大 连 水 产 学 院 学 报 Vol,21 No,3
2 0 0 6年 9 月 JOURNAL OF DAL IAN F ISHER IES UN IVERSITY Sep,2 0 0 6
文 章 编 号,1000 - 9957 (2006) 03 - 0231 - 05
黄 芪 对 史 氏 鲟 抗 氧 化 能 力 及 免 疫 力 的 影 响刘 红 柏 1,2, 卢 彤 岩 2, 张 春 燕 3, 孙 大 江 2, 白 秀 娟 1
(1,东 北 农 业 大 学,黑 龙 江 哈 尔 滨 150030; 2,中 国 水 产 科 学 研 究 院 黑 龙 江 水 产 研 究 所,黑 龙 江 哈 尔 滨 150070;
3,黑 龙 江 省 中 医 医 院,黑 龙 江 哈 尔 滨 150030)
摘 要,采 用 灌 服 的 方 法 研 究 了 黄 芪 A stragalus m em branaceus水 煎 剂 对 1 +龄 史 氏 鲟 A cipenser schrencki部分 非 特 异 性 免 疫 指 标 和 抗 氧 化 能 力 的 影 响 。 试 验 分 3组 进 行,每 组 放 史 氏 鲟 10尾,每 日 灌 服 1次 黄芪 水 煎 剂,剂 量 均 按 每 100 g鱼 体 重 灌 服 013 mL药 液,相 当 于 黄 芪 (干 物 质 ) 的 用 量 为 日 投 喂 饲 料重 量 的 015% (A组 ),110% (B组 ) 和 210% (C组 ),对 照 组 鱼 灌 服 蒸 馏 水 。 结 果 显 示,A组 和 B
组 的 史 氏 鲟 被 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 后,血 浆 及 各 组 织 中 的 溶 菌 酶 含 量 呈 升 高 的 趋 势,C组 鱼 的 不 同 组 织 变化 不 一,但 均 无 统 计 学 意 义 ; 史 氏 鲟 血 浆 中 的 一 氧 化 氮 (NO) 及 一 氧 化 氮 合 酶 (NOS) 无 显 著 变 化,
但 B组 和 C组 史 氏 鲟 肝 脏 中 的 NO含 量 与 对 照 组 有 显 著 差 异 ( P < 0105),C组 史 氏 鲟 肝 脏 中 的 NOS
活 性 也 与 对 照 组 有 显 著 差 异 ( P < 0105) ; 对 史 氏 鲟 血 浆 及 肝 脏 中 超 氧 化 物 岐 化 酶 ( SOD ) 的 活 性 有增 强 作 用,尤 其 B 组 鱼 的 SOD 酶 活 性 较 对 照 组 显 著 升 高 ; 黄 芪 能 显 著 降 低 史 氏 鲟 血 浆 中 丙 二 醛
(MDA) 的 含 量,提 高 史 氏 鲟 的 抗 氧 化 能 力 。
关 键 词,黄 芪 ; 史 氏 鲟 ; 免 疫 ; 抗 氧 化中 图 分 类 号,S94215 文 献 标 识 码,A
黄 芪 A stragalus m em branaceus是 最 常 用 的 补 益 中 草 药 之 一,含 有 黄 芪 皂 甙,多 糖,黄 酮,氨 基 酸,
微 量 元 素,胆 碱 及 叶 酸 等 多 种 化 学 成 分,具 有 明 显 的 免 疫 调 节 功 能,能 诱 生 干 扰 素,起 到 抗 病 毒 的 作用 [ 1 - 3 ]。 黄 芪 的 资 源 丰 富,价 格 合 理,在 水 产 上 具 有 良 好 的 应 用 前 景 。 本 试 验 中,作 者 采 用 对 史 氏 鲟
Acipenser schrencki幼 鱼 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 的 方 法,首 次 研 究 了 黄 芪 作 为 免 疫 添 加 剂 对 史 氏 鲟 幼 鱼 抗 氧 化能 力 和 免 疫 力 的 影 响,旨 在 为 其 在 水 产 上 的 实 际 应 用 提 供 理 论 依 据 。
1 材 料 与 方 法
111 材 料中 药 黄 芪 购 自 哈 尔 滨 世 一 堂 药 店 。 一 氧 化 氮 (NO) 试 剂 盒,一 氧 化 氮 合 酶 (NOS) 测 定 试 剂 盒,
超 氧 化 物 歧 化 酶 ( SOD) 测 试 盒,丙 二 醛 (MDA ) 测 定 试 剂 盒,微 球 菌 粉,溶 菌 酶 标 准 品,蛋 白 标准 品 (56 g/L) 及 考 马 斯 亮 兰 蛋 白 测 定 试 剂 盒 均 购 自 南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所 。
112 方 法
11211 药 液 的 提 取 称 取 干 燥 的 黄 芪 60 g放 入 砂 锅 中,加 水 浸 泡 2 h,第 1次 熬 45 m in,将 药 汁 倒出,再 加 水 熬 20 m in,过 滤,将 两 次 药 汁 合 并 浓 缩 成 100 mL,其 中 1 mL药 液 相 当 于 016 g黄 芪 (干物 质 ) 的 水 煎 剂,经 高 压 灭 菌 后 存 放 于 冰 箱 (4℃ ) 中 备 用 。
11212 试 验 鱼 的 饲 养 及 样 品 采 集 取 健 康,非 免 疫 状 态 下 的 1 +龄 史 氏 鲟,平 均 体 重 为 0110～ 0115
kg,于 室 内 水 族 箱 (019 m × 015 m × 0145 m) 中 养 殖,每 箱 放 10尾 鱼,每 日 按 鱼 体 重 的 118%投 喂饵 料 。 各 水 族 箱 配 有 蓄 水 池,循 环 过 滤 泵 及 充 气 泵 。
试 验 设 3个 试 验 组 及 对 照 组,每 组 设 两 个 平 行 。 黄 芪 灌 服 剂 量 参 照 中 草 药 作 为 免 疫 增 强 剂 和 饲 料
收 稿 日 期,2005205230
基 金 项 目,科 技 部,十 五 攻 关 计 划,项 目 资 助 (2001BA505B506) ; 黑 龙 江 省 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 (C0322)
作 者 简 介,刘 红 柏 (1970 - ),女,博 士,副 研 究 员 。 E - mail,hongbailiu@yahoo1com1cn 通 讯 作 者,白 秀 娟,女,教 授 。 E - mail:
bxj630306@1631com
添 加 剂 的 用 量 [ 4 - 6 ],每 日 灌 服 1次 。 灌 服 前 将 黄 芪 水 煎 剂 按 不 同 浓 度 稀 释,使 每 组 试 验 鱼 均 按 每 100
g鱼 体 重 灌 服 013 mL药 液,相 当 于 黄 芪 (干 物 质 ) 的 用 量 分 别 为 日 投 喂 饲 料 重 量 的 015% (A组 )、
110% (B组 ) 和 210% (C组 ),对 照 组 灌 服 灭 菌 蒸 馏 水 。 连 续 灌 服 两 周 后 对 全 部 试 验 鱼 统 一 采 样 。
于 试 验 鱼 尾 动 (静 ) 脉 处 采 集 肝 素 抗 凝 血,4℃ 下 以 3 500 r/m in离 心 20 m in,取 血 浆 。 解 剖 取 鱼 各 组织 的 样 品,将 血 浆 及 组 织 样 品 立 即 置 于 - 70℃ 下 保 存 。
113 各 项 指 标 的 测 定
11311 样 品 的 处 理 准 确 称 取 试 验 鱼 组 织 样 品 与 预 冷 的 生 理 盐 水,按 w∶ φ = 1∶ 9稀 释,匀 浆 机 匀 浆,
分 别 按 不 同 检 测 指 标 及 试 剂 盒 所 要 求 的 速 度 和 时 间 离 心,取 上 清 液 进 行 检 测 。 血 浆 在 37℃ 下 水 浴 融化 后 即 可 检 测 。 每 个 检 测 指 标 的 样 本 数 n = 15,溶 菌 酶 检 测 的 样 本 数 n = 20,均 设 平 行 样 。
11312 NO及 NOS的 测 定 取 肝 脏 上 清 液 及 血 浆,操 作 按 NO及 NOS试 剂 盒 说 明 书 进 行 。
组 织 中 NOS活 力 单 位 定 义 每 毫 克 组 织 蛋 白 每 分 钟 生 成 1 nmol NO为 一 个 酶 活 力 单 位 。
血 浆 中 NOS活 力 单 位 定 义 每 毫 升 血 浆 每 分 钟 生 成 1 nmol NO为 一 个 酶 活 力 单 位 。
11313 SOD活 性 的 测 定 参 照 其 它 动 物 测 定 SOD的 取 样 量,设 定 N 个 样 品 取 样 值,从 中 选 取 几 个 样本,按 试 剂 盒 说 明 书 操 作,测 定 其 样 品 管 及 对 照 管 的 吸 光 值 。 按 下 式 计 算 百 分 抑 制 率,
百 分 抑 制 率 = (对 照 管 吸 光 度 $ 测 定 管 吸 光 度 ) /对 照 管 吸 光 度,
其 计 算 结 果 在 0148～ 0150之 间 的 为 最 佳 取 样 量 。 选 择 此 最 佳 取 样 量,按 试 剂 盒 说 明 书 对 待 测 样 本 进行 SOD活 性 测 定 。
血 浆 中 SOD活 性 定 义 每 毫 升 反 应 液 中,对 SOD抑 制 率 达 50%时 所 对 应 的 SOD量 为 一 个 SOD
活 力 单 位 (U )。
组 织 匀 浆 中 SOD活 力 定 义 每 毫 克 组 织 蛋 白 在 1 mL反 应 液 中,对 SOD抑 制 率 达 50%时 所 对 应的 SOD量 为 一 个 SOD活 力 单 位 (U )。
11314 MDA含 量 的 测 定 按 MDA测 定 试 剂 盒 中 的 操 作 方 法 对 试 验 鱼 血 浆,肝 组 织 中 的 MDA含 量 进行 测 定 。
11315 溶 菌 酶 含 量 的 测 定 取 微 球 菌 粉 加 入 010 1 mol/L的 PBS,研 磨,制 成 5 mg/mL的 微 球 菌 粉 贮备 菌 液,4℃ 下 保 存,一 周 内 可 用 。 测 定 时 按 φ (贮 备 菌 液 ) ∶ φ (溶 剂 ) = 1∶ 29的 量 稀 释 成 应 用 菌液 。 取 溶 菌 酶 标 准 品 加 蒸 馏 水 配 成 2 mg/mL的 标 准 品 贮 备 液 (保 存 同 贮 备 菌 液 ),用 时 以 蒸 馏 水 稀 释
50倍,即 成 40μ g/mL的 标 准 品 应 用 液 。
将 试 管 放 入 冰 水 浴 中,每 管 加 入 应 用 菌 液 210 mL,然 后 在 标 准 管 中 加 入 012 mL的 溶 菌 酶 标 准 品应 用 液,测 定 管 中 加 入 组 织 匀 浆 上 清 液 (取 10%组 织,于 4℃ 下 匀 浆,以 10 000 r/m in离 心 20 m in)。
混 匀 后,测 定 吸 光 度 A0。 将 比 色 后 的 溶 液 立 即 倒 回 到 冰 水 浴 的 试 管 中,将 试 管 取 出,37℃ 下 水 浴 30
m in后,立 即 取 试 管 放 入 冰 水 浴 中,于 530 nm处 测 定 吸 光 度 A t。 然 后 将 吸 光 度 A换 算 成 透 光 度 T ( T
= 1 /10A ),根 据 下 列 公 式 计 算 出 溶 菌 酶 的 含 量,
样 品 中 溶 菌 酶 含 量 (μ g/mL或 μ g/g) = (样 品 Tt $ 样 品 T0 )(标 准 品 T
t -标 准 品 T0 )
× 标 准 管 浓 度 × 样 本 稀 释 倍 数,
其 中,Tt — — — 水 浴 后 吸 光 度 A t换 算 出 的 透 光 度 ; T0 — — — 水 浴 前 吸 光 度 A0换 算 出 的 透 光 度 。
11316 组 织 中 蛋 白 质 含 量 的 测 定 采 用 考 马 斯 亮 兰 蛋 白 测 试 盒 测 定 肝 组 织 提 取 液 中 的 蛋 白 质 含 量 。
11317 数 据 处 理 对 数 据 结 果 采 用 SPSS软 件 最 小 显 著 差 数 法 (LSD ) 进 行 处 理 。
2 结 果
211 黄 芪 水 煎 剂 对 史 氏 鲟 血 浆 及 肝 脏 中 NO及 NOS的 影 响从 表 1可 见,给 史 氏 鲟 灌 服 不 同 剂 量 的 黄 芪 水 煎 剂 后,其 血 浆 中 的 NO及 NOS虽 然 较 对 照 组 略 有上 升,但 差 异 不 显 著 ( P > 0105) ; B组 及 C组 鱼 肝 脏 中 的 NO与 对 照 组 相 比 差 异 显 著 ( P < 0105),
而 C组 鱼 肝 脏 中 的 NOS与 对 照 组 相 比 差 异 也 显 著 ( P < 0105)。
232 大 连 水 产 学 院 学 报 第 21卷表 1 灌 服 不 同 剂 量 黄 芪 水 煎 剂 后 史 氏 鲟 肝 脏 和 血 浆 中 NO含 量 及 NOS酶 活 性 的 变 化
Tab11 NO levels and No syn theta se ( NO S) activ ities in liver and pla sma of Am ur sturgeon dr ink ing
d ifferen t dosages of aqueous extract of m em branous m ilkvetch root
组 别 group
肝 脏 liver
NO / (μ mol· g - 1 ) NOS/ (U· mg- 1 )
血 浆 p lasma
NO / (μ mol· L - 1 ) NOS/ (U· mL - 1 )
对 照 control 2176 ± 1133a 3171 ± 0179a 441175 ± 107177a 14148 ± 4193a
A 3112 ± 0182ac 3175 ± 0167a 496195 ± 58112a 14143 ± 1125a
B 5130 ± 2129bc 4193 ± 1175ab 512180 ± 36158a 16183 ± 0158a
C 5168 ± 1167b 5151 ± 0179b 472144 ± 65126a 16103 ± 2162a
注,同 一 列 数 值 上 标 有 相 邻 字 母 者 表 示 差 异 显 著 ( P < 0105),标 有 相 间 字 母 者 表 示 差 异 极 显 著 ( P < 0101)。 下 同 。
Note,Values in the same column with adjacent superscrip ts are significantly different ( P < 0105),with interval superscrip ts are extremely sig2
nificantly different ( P < 0101).
212 黄 芪 水 煎 剂 对 史 氏 鲟 SOD活 性 和 MDA含 量 的 影 响由 表 2可 见,给 史 氏 鲟 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 后,其 血 浆 及 肝 脏 中 的 SOD活 性 上 升,其 中 B组 鱼 血 浆及 肝 脏 中 的 SOD活 性 比 对 照 组 显 著 升 高 ( P < 0105),其 余 两 组 的 上 升 幅 度 不 明 显 ; 3组 鱼 血 浆 中 的
MDA含 量 均 明 显 降 低,同 对 照 组 比 较 均 有 极 显 著 的 差 异 ( P < 0101),肝 脏 中 的 MDA含 量 也 呈 现 下降 趋 势,但 与 对 照 组 比 较 无 显 著 性 差 异 ( P > 0105)。
表 2 灌 服 不 同 剂 量 黄 芪 水 煎 剂 后 史 氏 鲟 血 浆 及 肝 脏 中 SOD酶 活 性 和 MDA含 量 的 变 化
Tab12 Superox ide d ism uta se( SOD ) activ ities and ma lona ldehyde(MDA) levels in pla sma and liver of
Am ur sturgeon dr ink ing d ifferen t dosages of aqueous extract of m em branous m ilkvetch root
组 别 group
肝 脏 liver
SOD活 性 activity
/ (U· mL - 1 )
MDA含 量 content
/ (U· mg - 1 )
血 浆 p lasma
SOD活 性 activity
/ ( nmol· mL - 1 )
MDA含 量 content
/ ( nmol· mg - 1 )
对 照 control 315136 ± 57136a 42164 ± 23198a 272128 ± 75109a 22125 ± 7160a
A 361123 ± 110167ab 34177 ± 16116a 286196 ± 34142ab 9114 ± 3190c
B 451171 ± 82162b 34121 ± 19129a 341157 ± 20198b 7198 ± 2128c
C 376197 ± 72155ab 27125 ± 17172a 283159 ± 57128ab 8170 ± 1189c
213 黄 芪 水 煎 剂 对 史 氏 鲟 溶 菌 酶 含 量 的 影 响从 表 3可 见,给 史 氏 鲟 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 后,血 浆 中 溶 菌 酶 的 量 有 所 上 升,B组 上 升 的 幅 度 最 大,C组上 升 幅 度 最 小,肝 脏 中 溶 菌 酶 的 变 化 趋 势 与 血 浆 中 相 似 ; A组 和 B组 鱼 的 胃,幽 门 垂,前 肠 及 后 肠 的 溶 菌酶 量 均 有 所 上 升,C组 鱼 这 几 种 组 织 的 溶 菌 酶 量 较 对 照 组 稍 有 下 降 。 但 各 试 验 组 与 对 照 组 的 溶 菌 酶 量差 异 均 不 显 著 ( P > 0105)。
表 3 灌 服 不 同 剂 量 黄 芪 水 煎 剂 后 史 氏 鲟 血 浆 及 组 织 中 溶 菌 酶 含 量 的 变 化
Tab13 L ysozym e con ten t in pla sma and tissues of Am ur sturgeon by ora l adm in istra tion of aqueous
extract of m em branous m ilkvetch root μ g/mL
组 别
group
血 浆 / (μ g· g - 1 )
p lasma
肝
liver
胃
stomach
幽 门 垂
pyloric caecum
前 肠
foregut
后 肠
hindgut
对 照 control 38163 ± 6172 244170 ± 58187 241164 ± 97157 569178 ± 55136 640196 ± 195174 629133 ± 152176
A 43192 ± 6167 275167 ± 34117 289193 ± 131184 570173 ± 10913 690149 ± 26124 678113 ± 96116
B 52145 ± 11188 311189 ± 92100 283164 ± 120158 814139 ± 170147 723100 ± 186128 694159 ± 185120
C 40155 ± 11154 267161 ± 50115 213144 ± 117112 535167 ± 141124 431196 ± 98105 540179 ± 198104
3 讨 论对 史 氏 鲟 采 用 灌 服 药 液 法,很 容 易 确 定 鱼 类 饲 料 中 黄 芪 的 添 加 剂 量 及 其 作 用 效 果,可 避 免 由 于 饲
332第 3期 刘 红 柏,等,黄 芪 对 史 氏 鲟 抗 氧 化 能 力 及 免 疫 力 的 影 响料 散 在 水 中 不 易 确 定 摄 入 量 及 因 史 氏 鲟 的 非 抢 食 性 摄 食 造 成 的 饲 料 添 加 药 物 的 浪 费 。 黄 芪 是 一 种 具 有双 向 免 疫 调 节 作 用 的 物 质,且 对 NO的 生 成 也 具 有 双 向 调 节 作 用 [ 7 - 8 ]。 史 氏 鲟 被 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 后,
A组 鱼 血 浆 中 的 NO及 NOS虽 呈 上 升 趋 势,但 没 有 显 著 性 变 化,而 B组 和 C组 鱼 肝 脏 中 的 NO则 显 著上 升,C组 鱼 的 NOS活 性 也 显 著 增 强,表 明 黄 芪 水 煎 剂 对 鱼 肝 脏 的 影 响 较 大,这 可 能 与 黄 芪 的 作 用机 理 或 给 服 方 式 有 关,同 时 也 表 明 NO在 保 护 肝 脏 中 能 起 到 重 要 作 用 。 Hogg等 [ 9 ]指 出,NO是 一 种 链式 阻 断 剂,能 抑 制 脂 质 过 氧 化,清 除 氧 自 由 基 。 在 生 理 条 件 下,cNOS合 成 适 量 的 NO会 对 机 体 起 保护 作 用 ; 但 在 病 理 条 件 下,由 iNOS合 成 大 量 的 NO 与 氧 自 由 基 共 同 存 在 时,则 对 机 体 有 损 伤 作用 [ 10 ]。 因 此,W ink等 [ 11 ]提 出,适 量 的 NO能 清 除 活 性 氧,过 量 的 NO能 抑 制 抗 氧 化 系 统,使 机 体 的过 氧 化 损 伤 作 用 增 强 。 本 试 验 中,被 灌 服 黄 芪 后 史 氏 鲟 的 血 浆 及 肝 脏 中 NO及 NOS的 变 化 较 为 平 缓,
说 明 黄 芪 可 能 起 到 了 对 抗 氧 自 由 基,增 强 cNOS活 性,抑 制 iNOS的 表 达 和 促 成 NO大 量 生 成 的 作 用 。
NO易 与 超 氧 阴 离 子 反 应 生 成 超 氧 化 亚 硝 基 阴 离 子,酸 化 后 分 解 成 为 毒 性 很 大 的 氧 化 剂 羟 自 由 基和 二 氧 化 氮,因 此,在 抗 感 染 中 具 有 非 特 异 性 的 杀 伤 力 。 但 在 这 种 情 况 下 NO的 生 理 功 能 受 到 阻 滞,
并 导 致 组 织 损 伤,此 时 SOD的 存 在 就 显 得 极 为 重 要 [ 12 ]。 SOD能 减 少 上 述 这 种 反 应,在 机 体 多 种 组 织器 官 中 具 有 保 护 意 义 [ 13 - 14 ]。 史 氏 鲟 被 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 后,SOD活 性 上 升,说 明 黄 芪 具 有 抗 氧 化 的 作用,对 SOD的 活 性 有 促 进 作 用 。 免 疫 添 加 剂 的 剂 量 对 SOD活 性 的 影 响 也 很 大 。 Eder等 [ 15 ]发 现,给 大鼠 投 喂 高 剂 量 的 维 生 素 E后,其 SOD的 酶 活 力 明 显 低 于 投 喂 低 剂 量 维 生 素 E的 大 鼠 。 本 试 验 的 结 果表 明,黄 芪 对 史 氏 鲟 SOD的 作 用 也 为 剂 量 依 赖,即 不 同 剂 量 的 黄 芪 使 SOD活 性 升 高 的 幅 度 不 同,其中 B组 试 验 鱼 血 浆 及 肝 脏 中 SOD的 酶 活 性 最 高,与 对 照 组 差 异 显 著 。
SOD酶 活 性 的 升 高 有 助 于 减 少 脂 质 过 氧 化 物 的 生 成 。 本 试 验 结 果 显 示,黄 芪 水 煎 剂 明 显 降 低 了脂 质 过 氧 化 产 物 MDA的 产 生,各 试 验 组 鱼 的 血 浆 和 肝 脏 中 的 MDA含 量 均 较 对 照 组 降 低,且 血 浆 中有 极 显 著 的 下 降 。 尽 管 有 研 究 发 现,MDA的 降 低 并 不 总 是 与 抗 氧 化 酶 活 性 的 升 高 相 一 致 [ 16 ],但 黄 芪这 种 能 降 低 机 体 内 MDA的 含 量,提 高 SOD酶 活 性 的 作 用,说 明 它 对 机 体 的 影 响 是 有 益 的 。
SOD,MDA及 NO三 者 在 机 体 的 抗 氧 化 和 免 疫 保 护 方 面 有 着 密 切 的 关 系 。 小 鼠 砷 中 毒 后,肝 脏 中
MDA含 量 升 高,而 SOD及 NO的 生 成 降 低,服 用 竹 节 荪 提 取 液 后,SOD活 性 及 NO的 含 量 升 高,而
MDA的 含 量 则 下 降 [ 17 ] ; 疲 劳 大 鼠 服 用 中 药 口 服 液 后,血 中 MDA含 量 明 显 降 低,而 SOD酶 活 性 和 NO
的 含 量 则 升 高 [ 18 ]。 这 与 本 试 验 的 结 果 相 同 。
有 研 究 表 明 [ 19 ],黄 芪 中 的 总 黄 酮 和 总 皂 甙 具 有 良 好 的 清 除 氧 自 由 基 的 作 用,而 总 多 糖 有 部 分 清除 氧 自 由 基 的 作 用,其 作 用 强 度 与 浓 度 呈 反 比 。 本 试 验 中 很 可 能 是 黄 芪 多 糖 的 这 种 作 用,造 成 了 史 氏鲟 NO,SOD及 MDA的 变 化 与 黄 芪 水 煎 剂 的 灌 服 剂 量 不 成 正 比 。
Paulsen等 [ 20 ]认 为,溶 菌 酶 的 量 和 活 性 变 化 是 由 于 免 疫 物 质 刺 激 巨 噬 细 胞 分 化 导 致 溶 菌 酶 基 因 的复 制 。 本 试 验 中,选 择 血 浆 和 主 要 的 消 化 组 织 进 行 检 测,尽 管 黄 芪 对 史 氏 鲟 溶 菌 酶 量 的 影 响 效 果 不 显著,但 结 果 显 示,灌 服 黄 芪 可 以 使 溶 菌 酶 的 量 发 生 一 定 的 变 化 且 与 剂 量 相 关 。 Clerton等 [ 21 ]在 观 察 虹鳟 免 疫 反 应 时,发 现 在 添 加 剂 的 免 疫 调 节 中 消 化 道 局 部 免 疫 反 应 比 系 统 免 疫 反 应 的 变 化 大 。 因 此,测定 消 化 道 内 的 免 疫 因 子,尤 其 是 测 定 溶 菌 酶 的 水 平 和 活 性 对 于 研 究 黄 芪 的 免 疫 调 节 作 用 具 有 重 要 意义 。
Clerton等 [ 21 ]给 虹 鳟 投 喂 维 生 素 E时 也 发 现,当 饲 料 中 维 生 素 E的 添 加 剂 量 为 295 mg/kg时,血清 中 溶 菌 酶 的 活 性 下 降 ; 当 添 加 剂 量 降 低 到 28 mg/kg时,溶 菌 酶 的 活 性 上 升,这 说 明 添 加 剂 量 对 免疫 指 标 的 影 响 非 常 重 要 。 本 试 验 的 结 果 也 显 示,黄 芪 的 剂 量 过 高 并 没 有 使 鱼 体 内 溶 菌 酶 的 含 量 升 高,
反 而 降 低,表 明 不 同 的 中 药 添 加 剂 量 可 以 产 生 不 同 甚 至 作 用 相 反 的 效 果 。
参 考 文 献,
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Effects of the aqueous extract of astragalus root Astraga lus
m em branaceus on immun ity and antioxidation in Amur
sturgeon ( Acipenser schrencki Brandt)
L IU Hong2bai1,2, LU Tong2yan2, ZHANG Chun2yan3, SUN Da2jiang2, BA I Xiu2juan1
(1,Northeast Agriculture University,Harbin 150030,China; 2,Heilongjiang R iver Fisheries Research Institute,Chinese Academy
of Fishery Sciences,Harbin 150070,China; 3,Heilongjiang Traditional Chinese Medical University,Harbin 150030,China)
Abstract,Effects of aqueous extract of radix A stragalus m em branaceus Fisch on immunity and antioxidation of
1 year old Amur sturgeon (A cipenser schrencki B randt) were studied by oral perfusion,The sturgeon were oral2
ly perfused aqueous extracts from A stragalus root at a rate of 0,5% ( Group A ),1,0% ( Group B ) and 2,0%
( Group C) of diet and distilled water at a rate of 0,3 mL /100 g body weight( Group D ) once a day,respec2
tively,The results showed that lysozyme level in p lasma and different tissues increased in Group A and Group
B,and changed in Group C,but statistically there were no significant,There were no significant differences in
nitrogen monoxide (NO ) and nitrogen monoxide synthetase (NOS) levels in p lasma in all group s,In hepato2
pancrease in Group B and Group C,however,NO levels were significantly higher than that in Group D,NOS
level in hepatopancrease was significantly higher than that in Group D,The fish in Group B had higher super2
oxide dismutase ( SOD) than that in Group D.
Key words:A stragalus root; Amur sturgeon; immunity; antioxidation
532第 3期 刘 红 柏,等,黄 芪 对 史 氏 鲟 抗 氧 化 能 力 及 免 疫 力 的 影 响
2 0 0 6年 9 月 JOURNAL OF DAL IAN F ISHER IES UN IVERSITY Sep,2 0 0 6
文 章 编 号,1000 - 9957 (2006) 03 - 0231 - 05
黄 芪 对 史 氏 鲟 抗 氧 化 能 力 及 免 疫 力 的 影 响刘 红 柏 1,2, 卢 彤 岩 2, 张 春 燕 3, 孙 大 江 2, 白 秀 娟 1
(1,东 北 农 业 大 学,黑 龙 江 哈 尔 滨 150030; 2,中 国 水 产 科 学 研 究 院 黑 龙 江 水 产 研 究 所,黑 龙 江 哈 尔 滨 150070;
3,黑 龙 江 省 中 医 医 院,黑 龙 江 哈 尔 滨 150030)
摘 要,采 用 灌 服 的 方 法 研 究 了 黄 芪 A stragalus m em branaceus水 煎 剂 对 1 +龄 史 氏 鲟 A cipenser schrencki部分 非 特 异 性 免 疫 指 标 和 抗 氧 化 能 力 的 影 响 。 试 验 分 3组 进 行,每 组 放 史 氏 鲟 10尾,每 日 灌 服 1次 黄芪 水 煎 剂,剂 量 均 按 每 100 g鱼 体 重 灌 服 013 mL药 液,相 当 于 黄 芪 (干 物 质 ) 的 用 量 为 日 投 喂 饲 料重 量 的 015% (A组 ),110% (B组 ) 和 210% (C组 ),对 照 组 鱼 灌 服 蒸 馏 水 。 结 果 显 示,A组 和 B
组 的 史 氏 鲟 被 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 后,血 浆 及 各 组 织 中 的 溶 菌 酶 含 量 呈 升 高 的 趋 势,C组 鱼 的 不 同 组 织 变化 不 一,但 均 无 统 计 学 意 义 ; 史 氏 鲟 血 浆 中 的 一 氧 化 氮 (NO) 及 一 氧 化 氮 合 酶 (NOS) 无 显 著 变 化,
但 B组 和 C组 史 氏 鲟 肝 脏 中 的 NO含 量 与 对 照 组 有 显 著 差 异 ( P < 0105),C组 史 氏 鲟 肝 脏 中 的 NOS
活 性 也 与 对 照 组 有 显 著 差 异 ( P < 0105) ; 对 史 氏 鲟 血 浆 及 肝 脏 中 超 氧 化 物 岐 化 酶 ( SOD ) 的 活 性 有增 强 作 用,尤 其 B 组 鱼 的 SOD 酶 活 性 较 对 照 组 显 著 升 高 ; 黄 芪 能 显 著 降 低 史 氏 鲟 血 浆 中 丙 二 醛
(MDA) 的 含 量,提 高 史 氏 鲟 的 抗 氧 化 能 力 。
关 键 词,黄 芪 ; 史 氏 鲟 ; 免 疫 ; 抗 氧 化中 图 分 类 号,S94215 文 献 标 识 码,A
黄 芪 A stragalus m em branaceus是 最 常 用 的 补 益 中 草 药 之 一,含 有 黄 芪 皂 甙,多 糖,黄 酮,氨 基 酸,
微 量 元 素,胆 碱 及 叶 酸 等 多 种 化 学 成 分,具 有 明 显 的 免 疫 调 节 功 能,能 诱 生 干 扰 素,起 到 抗 病 毒 的 作用 [ 1 - 3 ]。 黄 芪 的 资 源 丰 富,价 格 合 理,在 水 产 上 具 有 良 好 的 应 用 前 景 。 本 试 验 中,作 者 采 用 对 史 氏 鲟
Acipenser schrencki幼 鱼 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 的 方 法,首 次 研 究 了 黄 芪 作 为 免 疫 添 加 剂 对 史 氏 鲟 幼 鱼 抗 氧 化能 力 和 免 疫 力 的 影 响,旨 在 为 其 在 水 产 上 的 实 际 应 用 提 供 理 论 依 据 。
1 材 料 与 方 法
111 材 料中 药 黄 芪 购 自 哈 尔 滨 世 一 堂 药 店 。 一 氧 化 氮 (NO) 试 剂 盒,一 氧 化 氮 合 酶 (NOS) 测 定 试 剂 盒,
超 氧 化 物 歧 化 酶 ( SOD) 测 试 盒,丙 二 醛 (MDA ) 测 定 试 剂 盒,微 球 菌 粉,溶 菌 酶 标 准 品,蛋 白 标准 品 (56 g/L) 及 考 马 斯 亮 兰 蛋 白 测 定 试 剂 盒 均 购 自 南 京 建 成 生 物 工 程 研 究 所 。
112 方 法
11211 药 液 的 提 取 称 取 干 燥 的 黄 芪 60 g放 入 砂 锅 中,加 水 浸 泡 2 h,第 1次 熬 45 m in,将 药 汁 倒出,再 加 水 熬 20 m in,过 滤,将 两 次 药 汁 合 并 浓 缩 成 100 mL,其 中 1 mL药 液 相 当 于 016 g黄 芪 (干物 质 ) 的 水 煎 剂,经 高 压 灭 菌 后 存 放 于 冰 箱 (4℃ ) 中 备 用 。
11212 试 验 鱼 的 饲 养 及 样 品 采 集 取 健 康,非 免 疫 状 态 下 的 1 +龄 史 氏 鲟,平 均 体 重 为 0110～ 0115
kg,于 室 内 水 族 箱 (019 m × 015 m × 0145 m) 中 养 殖,每 箱 放 10尾 鱼,每 日 按 鱼 体 重 的 118%投 喂饵 料 。 各 水 族 箱 配 有 蓄 水 池,循 环 过 滤 泵 及 充 气 泵 。
试 验 设 3个 试 验 组 及 对 照 组,每 组 设 两 个 平 行 。 黄 芪 灌 服 剂 量 参 照 中 草 药 作 为 免 疫 增 强 剂 和 饲 料
收 稿 日 期,2005205230
基 金 项 目,科 技 部,十 五 攻 关 计 划,项 目 资 助 (2001BA505B506) ; 黑 龙 江 省 自 然 科 学 基 金 资 助 项 目 (C0322)
作 者 简 介,刘 红 柏 (1970 - ),女,博 士,副 研 究 员 。 E - mail,hongbailiu@yahoo1com1cn 通 讯 作 者,白 秀 娟,女,教 授 。 E - mail:
bxj630306@1631com
添 加 剂 的 用 量 [ 4 - 6 ],每 日 灌 服 1次 。 灌 服 前 将 黄 芪 水 煎 剂 按 不 同 浓 度 稀 释,使 每 组 试 验 鱼 均 按 每 100
g鱼 体 重 灌 服 013 mL药 液,相 当 于 黄 芪 (干 物 质 ) 的 用 量 分 别 为 日 投 喂 饲 料 重 量 的 015% (A组 )、
110% (B组 ) 和 210% (C组 ),对 照 组 灌 服 灭 菌 蒸 馏 水 。 连 续 灌 服 两 周 后 对 全 部 试 验 鱼 统 一 采 样 。
于 试 验 鱼 尾 动 (静 ) 脉 处 采 集 肝 素 抗 凝 血,4℃ 下 以 3 500 r/m in离 心 20 m in,取 血 浆 。 解 剖 取 鱼 各 组织 的 样 品,将 血 浆 及 组 织 样 品 立 即 置 于 - 70℃ 下 保 存 。
113 各 项 指 标 的 测 定
11311 样 品 的 处 理 准 确 称 取 试 验 鱼 组 织 样 品 与 预 冷 的 生 理 盐 水,按 w∶ φ = 1∶ 9稀 释,匀 浆 机 匀 浆,
分 别 按 不 同 检 测 指 标 及 试 剂 盒 所 要 求 的 速 度 和 时 间 离 心,取 上 清 液 进 行 检 测 。 血 浆 在 37℃ 下 水 浴 融化 后 即 可 检 测 。 每 个 检 测 指 标 的 样 本 数 n = 15,溶 菌 酶 检 测 的 样 本 数 n = 20,均 设 平 行 样 。
11312 NO及 NOS的 测 定 取 肝 脏 上 清 液 及 血 浆,操 作 按 NO及 NOS试 剂 盒 说 明 书 进 行 。
组 织 中 NOS活 力 单 位 定 义 每 毫 克 组 织 蛋 白 每 分 钟 生 成 1 nmol NO为 一 个 酶 活 力 单 位 。
血 浆 中 NOS活 力 单 位 定 义 每 毫 升 血 浆 每 分 钟 生 成 1 nmol NO为 一 个 酶 活 力 单 位 。
11313 SOD活 性 的 测 定 参 照 其 它 动 物 测 定 SOD的 取 样 量,设 定 N 个 样 品 取 样 值,从 中 选 取 几 个 样本,按 试 剂 盒 说 明 书 操 作,测 定 其 样 品 管 及 对 照 管 的 吸 光 值 。 按 下 式 计 算 百 分 抑 制 率,
百 分 抑 制 率 = (对 照 管 吸 光 度 $ 测 定 管 吸 光 度 ) /对 照 管 吸 光 度,
其 计 算 结 果 在 0148～ 0150之 间 的 为 最 佳 取 样 量 。 选 择 此 最 佳 取 样 量,按 试 剂 盒 说 明 书 对 待 测 样 本 进行 SOD活 性 测 定 。
血 浆 中 SOD活 性 定 义 每 毫 升 反 应 液 中,对 SOD抑 制 率 达 50%时 所 对 应 的 SOD量 为 一 个 SOD
活 力 单 位 (U )。
组 织 匀 浆 中 SOD活 力 定 义 每 毫 克 组 织 蛋 白 在 1 mL反 应 液 中,对 SOD抑 制 率 达 50%时 所 对 应的 SOD量 为 一 个 SOD活 力 单 位 (U )。
11314 MDA含 量 的 测 定 按 MDA测 定 试 剂 盒 中 的 操 作 方 法 对 试 验 鱼 血 浆,肝 组 织 中 的 MDA含 量 进行 测 定 。
11315 溶 菌 酶 含 量 的 测 定 取 微 球 菌 粉 加 入 010 1 mol/L的 PBS,研 磨,制 成 5 mg/mL的 微 球 菌 粉 贮备 菌 液,4℃ 下 保 存,一 周 内 可 用 。 测 定 时 按 φ (贮 备 菌 液 ) ∶ φ (溶 剂 ) = 1∶ 29的 量 稀 释 成 应 用 菌液 。 取 溶 菌 酶 标 准 品 加 蒸 馏 水 配 成 2 mg/mL的 标 准 品 贮 备 液 (保 存 同 贮 备 菌 液 ),用 时 以 蒸 馏 水 稀 释
50倍,即 成 40μ g/mL的 标 准 品 应 用 液 。
将 试 管 放 入 冰 水 浴 中,每 管 加 入 应 用 菌 液 210 mL,然 后 在 标 准 管 中 加 入 012 mL的 溶 菌 酶 标 准 品应 用 液,测 定 管 中 加 入 组 织 匀 浆 上 清 液 (取 10%组 织,于 4℃ 下 匀 浆,以 10 000 r/m in离 心 20 m in)。
混 匀 后,测 定 吸 光 度 A0。 将 比 色 后 的 溶 液 立 即 倒 回 到 冰 水 浴 的 试 管 中,将 试 管 取 出,37℃ 下 水 浴 30
m in后,立 即 取 试 管 放 入 冰 水 浴 中,于 530 nm处 测 定 吸 光 度 A t。 然 后 将 吸 光 度 A换 算 成 透 光 度 T ( T
= 1 /10A ),根 据 下 列 公 式 计 算 出 溶 菌 酶 的 含 量,
样 品 中 溶 菌 酶 含 量 (μ g/mL或 μ g/g) = (样 品 Tt $ 样 品 T0 )(标 准 品 T
t -标 准 品 T0 )
× 标 准 管 浓 度 × 样 本 稀 释 倍 数,
其 中,Tt — — — 水 浴 后 吸 光 度 A t换 算 出 的 透 光 度 ; T0 — — — 水 浴 前 吸 光 度 A0换 算 出 的 透 光 度 。
11316 组 织 中 蛋 白 质 含 量 的 测 定 采 用 考 马 斯 亮 兰 蛋 白 测 试 盒 测 定 肝 组 织 提 取 液 中 的 蛋 白 质 含 量 。
11317 数 据 处 理 对 数 据 结 果 采 用 SPSS软 件 最 小 显 著 差 数 法 (LSD ) 进 行 处 理 。
2 结 果
211 黄 芪 水 煎 剂 对 史 氏 鲟 血 浆 及 肝 脏 中 NO及 NOS的 影 响从 表 1可 见,给 史 氏 鲟 灌 服 不 同 剂 量 的 黄 芪 水 煎 剂 后,其 血 浆 中 的 NO及 NOS虽 然 较 对 照 组 略 有上 升,但 差 异 不 显 著 ( P > 0105) ; B组 及 C组 鱼 肝 脏 中 的 NO与 对 照 组 相 比 差 异 显 著 ( P < 0105),
而 C组 鱼 肝 脏 中 的 NOS与 对 照 组 相 比 差 异 也 显 著 ( P < 0105)。
232 大 连 水 产 学 院 学 报 第 21卷表 1 灌 服 不 同 剂 量 黄 芪 水 煎 剂 后 史 氏 鲟 肝 脏 和 血 浆 中 NO含 量 及 NOS酶 活 性 的 变 化
Tab11 NO levels and No syn theta se ( NO S) activ ities in liver and pla sma of Am ur sturgeon dr ink ing
d ifferen t dosages of aqueous extract of m em branous m ilkvetch root
组 别 group
肝 脏 liver
NO / (μ mol· g - 1 ) NOS/ (U· mg- 1 )
血 浆 p lasma
NO / (μ mol· L - 1 ) NOS/ (U· mL - 1 )
对 照 control 2176 ± 1133a 3171 ± 0179a 441175 ± 107177a 14148 ± 4193a
A 3112 ± 0182ac 3175 ± 0167a 496195 ± 58112a 14143 ± 1125a
B 5130 ± 2129bc 4193 ± 1175ab 512180 ± 36158a 16183 ± 0158a
C 5168 ± 1167b 5151 ± 0179b 472144 ± 65126a 16103 ± 2162a
注,同 一 列 数 值 上 标 有 相 邻 字 母 者 表 示 差 异 显 著 ( P < 0105),标 有 相 间 字 母 者 表 示 差 异 极 显 著 ( P < 0101)。 下 同 。
Note,Values in the same column with adjacent superscrip ts are significantly different ( P < 0105),with interval superscrip ts are extremely sig2
nificantly different ( P < 0101).
212 黄 芪 水 煎 剂 对 史 氏 鲟 SOD活 性 和 MDA含 量 的 影 响由 表 2可 见,给 史 氏 鲟 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 后,其 血 浆 及 肝 脏 中 的 SOD活 性 上 升,其 中 B组 鱼 血 浆及 肝 脏 中 的 SOD活 性 比 对 照 组 显 著 升 高 ( P < 0105),其 余 两 组 的 上 升 幅 度 不 明 显 ; 3组 鱼 血 浆 中 的
MDA含 量 均 明 显 降 低,同 对 照 组 比 较 均 有 极 显 著 的 差 异 ( P < 0101),肝 脏 中 的 MDA含 量 也 呈 现 下降 趋 势,但 与 对 照 组 比 较 无 显 著 性 差 异 ( P > 0105)。
表 2 灌 服 不 同 剂 量 黄 芪 水 煎 剂 后 史 氏 鲟 血 浆 及 肝 脏 中 SOD酶 活 性 和 MDA含 量 的 变 化
Tab12 Superox ide d ism uta se( SOD ) activ ities and ma lona ldehyde(MDA) levels in pla sma and liver of
Am ur sturgeon dr ink ing d ifferen t dosages of aqueous extract of m em branous m ilkvetch root
组 别 group
肝 脏 liver
SOD活 性 activity
/ (U· mL - 1 )
MDA含 量 content
/ (U· mg - 1 )
血 浆 p lasma
SOD活 性 activity
/ ( nmol· mL - 1 )
MDA含 量 content
/ ( nmol· mg - 1 )
对 照 control 315136 ± 57136a 42164 ± 23198a 272128 ± 75109a 22125 ± 7160a
A 361123 ± 110167ab 34177 ± 16116a 286196 ± 34142ab 9114 ± 3190c
B 451171 ± 82162b 34121 ± 19129a 341157 ± 20198b 7198 ± 2128c
C 376197 ± 72155ab 27125 ± 17172a 283159 ± 57128ab 8170 ± 1189c
213 黄 芪 水 煎 剂 对 史 氏 鲟 溶 菌 酶 含 量 的 影 响从 表 3可 见,给 史 氏 鲟 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 后,血 浆 中 溶 菌 酶 的 量 有 所 上 升,B组 上 升 的 幅 度 最 大,C组上 升 幅 度 最 小,肝 脏 中 溶 菌 酶 的 变 化 趋 势 与 血 浆 中 相 似 ; A组 和 B组 鱼 的 胃,幽 门 垂,前 肠 及 后 肠 的 溶 菌酶 量 均 有 所 上 升,C组 鱼 这 几 种 组 织 的 溶 菌 酶 量 较 对 照 组 稍 有 下 降 。 但 各 试 验 组 与 对 照 组 的 溶 菌 酶 量差 异 均 不 显 著 ( P > 0105)。
表 3 灌 服 不 同 剂 量 黄 芪 水 煎 剂 后 史 氏 鲟 血 浆 及 组 织 中 溶 菌 酶 含 量 的 变 化
Tab13 L ysozym e con ten t in pla sma and tissues of Am ur sturgeon by ora l adm in istra tion of aqueous
extract of m em branous m ilkvetch root μ g/mL
组 别
group
血 浆 / (μ g· g - 1 )
p lasma
肝
liver
胃
stomach
幽 门 垂
pyloric caecum
前 肠
foregut
后 肠
hindgut
对 照 control 38163 ± 6172 244170 ± 58187 241164 ± 97157 569178 ± 55136 640196 ± 195174 629133 ± 152176
A 43192 ± 6167 275167 ± 34117 289193 ± 131184 570173 ± 10913 690149 ± 26124 678113 ± 96116
B 52145 ± 11188 311189 ± 92100 283164 ± 120158 814139 ± 170147 723100 ± 186128 694159 ± 185120
C 40155 ± 11154 267161 ± 50115 213144 ± 117112 535167 ± 141124 431196 ± 98105 540179 ± 198104
3 讨 论对 史 氏 鲟 采 用 灌 服 药 液 法,很 容 易 确 定 鱼 类 饲 料 中 黄 芪 的 添 加 剂 量 及 其 作 用 效 果,可 避 免 由 于 饲
332第 3期 刘 红 柏,等,黄 芪 对 史 氏 鲟 抗 氧 化 能 力 及 免 疫 力 的 影 响料 散 在 水 中 不 易 确 定 摄 入 量 及 因 史 氏 鲟 的 非 抢 食 性 摄 食 造 成 的 饲 料 添 加 药 物 的 浪 费 。 黄 芪 是 一 种 具 有双 向 免 疫 调 节 作 用 的 物 质,且 对 NO的 生 成 也 具 有 双 向 调 节 作 用 [ 7 - 8 ]。 史 氏 鲟 被 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 后,
A组 鱼 血 浆 中 的 NO及 NOS虽 呈 上 升 趋 势,但 没 有 显 著 性 变 化,而 B组 和 C组 鱼 肝 脏 中 的 NO则 显 著上 升,C组 鱼 的 NOS活 性 也 显 著 增 强,表 明 黄 芪 水 煎 剂 对 鱼 肝 脏 的 影 响 较 大,这 可 能 与 黄 芪 的 作 用机 理 或 给 服 方 式 有 关,同 时 也 表 明 NO在 保 护 肝 脏 中 能 起 到 重 要 作 用 。 Hogg等 [ 9 ]指 出,NO是 一 种 链式 阻 断 剂,能 抑 制 脂 质 过 氧 化,清 除 氧 自 由 基 。 在 生 理 条 件 下,cNOS合 成 适 量 的 NO会 对 机 体 起 保护 作 用 ; 但 在 病 理 条 件 下,由 iNOS合 成 大 量 的 NO 与 氧 自 由 基 共 同 存 在 时,则 对 机 体 有 损 伤 作用 [ 10 ]。 因 此,W ink等 [ 11 ]提 出,适 量 的 NO能 清 除 活 性 氧,过 量 的 NO能 抑 制 抗 氧 化 系 统,使 机 体 的过 氧 化 损 伤 作 用 增 强 。 本 试 验 中,被 灌 服 黄 芪 后 史 氏 鲟 的 血 浆 及 肝 脏 中 NO及 NOS的 变 化 较 为 平 缓,
说 明 黄 芪 可 能 起 到 了 对 抗 氧 自 由 基,增 强 cNOS活 性,抑 制 iNOS的 表 达 和 促 成 NO大 量 生 成 的 作 用 。
NO易 与 超 氧 阴 离 子 反 应 生 成 超 氧 化 亚 硝 基 阴 离 子,酸 化 后 分 解 成 为 毒 性 很 大 的 氧 化 剂 羟 自 由 基和 二 氧 化 氮,因 此,在 抗 感 染 中 具 有 非 特 异 性 的 杀 伤 力 。 但 在 这 种 情 况 下 NO的 生 理 功 能 受 到 阻 滞,
并 导 致 组 织 损 伤,此 时 SOD的 存 在 就 显 得 极 为 重 要 [ 12 ]。 SOD能 减 少 上 述 这 种 反 应,在 机 体 多 种 组 织器 官 中 具 有 保 护 意 义 [ 13 - 14 ]。 史 氏 鲟 被 灌 服 黄 芪 水 煎 剂 后,SOD活 性 上 升,说 明 黄 芪 具 有 抗 氧 化 的 作用,对 SOD的 活 性 有 促 进 作 用 。 免 疫 添 加 剂 的 剂 量 对 SOD活 性 的 影 响 也 很 大 。 Eder等 [ 15 ]发 现,给 大鼠 投 喂 高 剂 量 的 维 生 素 E后,其 SOD的 酶 活 力 明 显 低 于 投 喂 低 剂 量 维 生 素 E的 大 鼠 。 本 试 验 的 结 果表 明,黄 芪 对 史 氏 鲟 SOD的 作 用 也 为 剂 量 依 赖,即 不 同 剂 量 的 黄 芪 使 SOD活 性 升 高 的 幅 度 不 同,其中 B组 试 验 鱼 血 浆 及 肝 脏 中 SOD的 酶 活 性 最 高,与 对 照 组 差 异 显 著 。
SOD酶 活 性 的 升 高 有 助 于 减 少 脂 质 过 氧 化 物 的 生 成 。 本 试 验 结 果 显 示,黄 芪 水 煎 剂 明 显 降 低 了脂 质 过 氧 化 产 物 MDA的 产 生,各 试 验 组 鱼 的 血 浆 和 肝 脏 中 的 MDA含 量 均 较 对 照 组 降 低,且 血 浆 中有 极 显 著 的 下 降 。 尽 管 有 研 究 发 现,MDA的 降 低 并 不 总 是 与 抗 氧 化 酶 活 性 的 升 高 相 一 致 [ 16 ],但 黄 芪这 种 能 降 低 机 体 内 MDA的 含 量,提 高 SOD酶 活 性 的 作 用,说 明 它 对 机 体 的 影 响 是 有 益 的 。
SOD,MDA及 NO三 者 在 机 体 的 抗 氧 化 和 免 疫 保 护 方 面 有 着 密 切 的 关 系 。 小 鼠 砷 中 毒 后,肝 脏 中
MDA含 量 升 高,而 SOD及 NO的 生 成 降 低,服 用 竹 节 荪 提 取 液 后,SOD活 性 及 NO的 含 量 升 高,而
MDA的 含 量 则 下 降 [ 17 ] ; 疲 劳 大 鼠 服 用 中 药 口 服 液 后,血 中 MDA含 量 明 显 降 低,而 SOD酶 活 性 和 NO
的 含 量 则 升 高 [ 18 ]。 这 与 本 试 验 的 结 果 相 同 。
有 研 究 表 明 [ 19 ],黄 芪 中 的 总 黄 酮 和 总 皂 甙 具 有 良 好 的 清 除 氧 自 由 基 的 作 用,而 总 多 糖 有 部 分 清除 氧 自 由 基 的 作 用,其 作 用 强 度 与 浓 度 呈 反 比 。 本 试 验 中 很 可 能 是 黄 芪 多 糖 的 这 种 作 用,造 成 了 史 氏鲟 NO,SOD及 MDA的 变 化 与 黄 芪 水 煎 剂 的 灌 服 剂 量 不 成 正 比 。
Paulsen等 [ 20 ]认 为,溶 菌 酶 的 量 和 活 性 变 化 是 由 于 免 疫 物 质 刺 激 巨 噬 细 胞 分 化 导 致 溶 菌 酶 基 因 的复 制 。 本 试 验 中,选 择 血 浆 和 主 要 的 消 化 组 织 进 行 检 测,尽 管 黄 芪 对 史 氏 鲟 溶 菌 酶 量 的 影 响 效 果 不 显著,但 结 果 显 示,灌 服 黄 芪 可 以 使 溶 菌 酶 的 量 发 生 一 定 的 变 化 且 与 剂 量 相 关 。 Clerton等 [ 21 ]在 观 察 虹鳟 免 疫 反 应 时,发 现 在 添 加 剂 的 免 疫 调 节 中 消 化 道 局 部 免 疫 反 应 比 系 统 免 疫 反 应 的 变 化 大 。 因 此,测定 消 化 道 内 的 免 疫 因 子,尤 其 是 测 定 溶 菌 酶 的 水 平 和 活 性 对 于 研 究 黄 芪 的 免 疫 调 节 作 用 具 有 重 要 意义 。
Clerton等 [ 21 ]给 虹 鳟 投 喂 维 生 素 E时 也 发 现,当 饲 料 中 维 生 素 E的 添 加 剂 量 为 295 mg/kg时,血清 中 溶 菌 酶 的 活 性 下 降 ; 当 添 加 剂 量 降 低 到 28 mg/kg时,溶 菌 酶 的 活 性 上 升,这 说 明 添 加 剂 量 对 免疫 指 标 的 影 响 非 常 重 要 。 本 试 验 的 结 果 也 显 示,黄 芪 的 剂 量 过 高 并 没 有 使 鱼 体 内 溶 菌 酶 的 含 量 升 高,
反 而 降 低,表 明 不 同 的 中 药 添 加 剂 量 可 以 产 生 不 同 甚 至 作 用 相 反 的 效 果 。
参 考 文 献,
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432 大 连 水 产 学 院 学 报 第 21卷
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Effects of the aqueous extract of astragalus root Astraga lus
m em branaceus on immun ity and antioxidation in Amur
sturgeon ( Acipenser schrencki Brandt)
L IU Hong2bai1,2, LU Tong2yan2, ZHANG Chun2yan3, SUN Da2jiang2, BA I Xiu2juan1
(1,Northeast Agriculture University,Harbin 150030,China; 2,Heilongjiang R iver Fisheries Research Institute,Chinese Academy
of Fishery Sciences,Harbin 150070,China; 3,Heilongjiang Traditional Chinese Medical University,Harbin 150030,China)
Abstract,Effects of aqueous extract of radix A stragalus m em branaceus Fisch on immunity and antioxidation of
1 year old Amur sturgeon (A cipenser schrencki B randt) were studied by oral perfusion,The sturgeon were oral2
ly perfused aqueous extracts from A stragalus root at a rate of 0,5% ( Group A ),1,0% ( Group B ) and 2,0%
( Group C) of diet and distilled water at a rate of 0,3 mL /100 g body weight( Group D ) once a day,respec2
tively,The results showed that lysozyme level in p lasma and different tissues increased in Group A and Group
B,and changed in Group C,but statistically there were no significant,There were no significant differences in
nitrogen monoxide (NO ) and nitrogen monoxide synthetase (NOS) levels in p lasma in all group s,In hepato2
pancrease in Group B and Group C,however,NO levels were significantly higher than that in Group D,NOS
level in hepatopancrease was significantly higher than that in Group D,The fish in Group B had higher super2
oxide dismutase ( SOD) than that in Group D.
Key words:A stragalus root; Amur sturgeon; immunity; antioxidation
532第 3期 刘 红 柏,等,黄 芪 对 史 氏 鲟 抗 氧 化 能 力 及 免 疫 力 的 影 响
