实验二 补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的提取分离与检识 （一）目的要求 学习香豆素类化合物的提取分离及检识，通过实验要求： 1．掌握用溶剂法提取香豆素类化合物的操作技术。 2．通过补骨脂素和异补骨脂素的分离，熟悉干柱色谱的操作技术。 3．掌握香豆素类化合物的检识方法。 （二）主要化学成分的结构及性质 补骨脂 为豆科植物补骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果实，全国各地多有栽培。含有多种呋喃香豆素类成分，主要含补骨脂内酯 （补骨脂素）、异补骨脂内酯 （异补骨脂素）和补骨脂次素等。其中补骨脂素和异补骨脂素为抗白癜风的主要有效成分，具有光敏性质。 1.补骨脂素(psoralen) 又称补骨脂内酯，分子式C11H6O3，分子量186.16。无色针状结晶（乙醇），mp.189～190℃，有挥发性。溶于甲醇、乙醇、苯、氯仿、丙酮；微溶于水、乙醚和石油醚。 2.异补骨脂素(isopsoralen) 分子式 C11H6O3，分子量186.16。无色针状结晶，mp.137～138℃，溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯、氯仿，微溶于水、乙醚，难溶于冷石油醚。   补骨脂素 异补骨脂素 3.补骨脂乙素(isobavachalcone) 又称补骨脂酮、异补骨脂查耳酮。分子式C20H20O4，分子量324.36。黄色片状结晶（甲醇-水），mp. 166～167℃。 4.补骨脂甲素(coryfolin) 又称补骨脂黄酮，分子式C20H20O4，分子量324.36。无色针状结晶，mp.191～192℃。   补骨脂乙素 补骨脂甲素 （三）实验原理 本实验根据补骨脂素和异补骨脂素等在乙醇中溶解度大，利用乙醇从中药补骨脂中提取补骨脂素及异补骨脂素等，并用活性炭吸附脱色，再依据补骨脂素和异补骨脂素的极性差异，利用氧化铝干柱色谱予以分离。 （四）实验内容 1.提取 方法Ⅰ:见书 方法Ⅱ:见书 2.精制 见书 3.分离 取色谱用中性氧化铝12g，装于直径1.0cm×28cm的干柱用色谱柱中。将补骨脂素精制品0.2g溶于少量甲醇，加入0.5g氧化铝拌匀，60℃烘干，加样，以苯-石油醚（4∶1）并每50ml加入15滴丙酮为洗脱剂，展层至柱底，置紫外灯下观察，用刀片切取两段蓝色荧光色带，分别用甲醇回流提取，滤过，滤液回收溶剂至小体积，静置析晶，抽滤，分别得到补骨脂素和异补骨脂素结晶。 4.检识 （1）异羟肟酸铁反应 取试样少许于试管中，加入7％盐酸羟胺甲醇溶液2～3滴，再加10％氢氧化钠甲醇溶液2～3滴，于水浴上加热数分钟，冷却后，加盐酸调pH3～4，加1％三氯化铁1～2滴，观察溶液颜色。 （2）开环闭环试验 取试样少许加稀氢氧化钠溶液1～2ml，加热，观察现象，再加稀盐酸试剂数滴，观察所产生现象。 （3）荧光 取试样少许溶于氯仿中，用毛细管点于滤纸上，晾干后在紫外灯下观察荧光。 （4）薄层色谱检识 薄层板：硅胶G-CMC-Na板 试 样：补骨脂素乙醇液 异补骨脂素乙醇液 对照品：补骨脂素对照品乙醇液 异补骨脂素对照品乙醇液 展开剂：①苯-醋酸乙酯（9∶1） ②苯-石油醚（4∶1）每50ml含丙酮15滴 显 色：紫外灯下观察荧光 （五）实验说明及注意事项 1．提取药材应是未炮制过的补骨脂种子,其补骨脂素和异补骨脂素等成分含量较高。 2．补骨脂素和异补骨脂素含内酯结构，具有内酯类成分的通性，可用碱提酸沉法提取，但因补骨脂种子中含有大量油脂和糖类成分，易与碱水发生皂化反应和形成胶状物，致使难以滤过，降低收得率，故选用50％乙醇提取而不用碱溶酸沉法提取。 3．由补骨脂种子中提取所得的精制品，为补骨脂素和异补骨脂素的混合物结晶，两者含量近于1∶1，但随药材品种、质量等不同而有差异。在进行干柱色谱分离之前，应先进行薄层色谱检查，了解两者含量情况。因两者皆具有光敏作用，均为有效成分，故临床应用时，不必将两者分开。 （六）思考题 1．从中药中提取香豆素类成分还有哪些方法？ 2．异羟肟酸铁反应的机理是什么？