实验十一 应用薄层色谱法检识中药制剂 (一)目的要求 学习中药制剂的鉴别方法,通过实验要求: 1.掌握薄层色谱法的操作技术及分离原理。 2.掌握中药制剂鉴别的一般程序及定性检识的原理。 3.熟悉检识其所含化学成分的方法与实验技术。 (二)实验原理 本实验是根据中药制剂牛黄解毒片中的主要成分或特征成分的性质,选用适当的溶剂和方法对试样进行预处理,尽量排除干扰物质,达到提高待测成分或特征成分的相对浓度,以利在进行薄层色谱鉴别时提高色谱清晰度,实现应用薄层色谱检测技术鉴别和控制中药制剂质量。 (三)实验内容 牛黄解毒片为包衣片。处方为:牛黄50g,雄黄50g,石膏200g,大黄200g,黄芩150g,桔梗100g,冰片25g,甘草50g。以上八味药,雄黄水飞或粉碎成极细粉;大黄粉碎成细粉;牛黄、冰片研细;其余黄芩等四味加水煎煮2次,每次2小时,合并煎煮液,滤过,滤液浓缩成稠膏,加入大黄、雄黄粉末,制成颗粒,干燥,再加入牛黄、冰片粉末,混匀,压制成1000片,包衣即得。 1.牛黄的鉴别 (1)供试液制备;取本品10片,刮去包衣,研碎,加10ml氯仿研磨,滤过,再用10ml氯仿浸洗滤渣,合并滤液,浓缩至1ml为供试液。 (2)对照液制备:①取胆酸0.001g溶于1ml氯仿中,作为对照品溶液。②取缺牛黄的模拟牛黄解毒片(相当于10片),按供试液制备法处理,得阴性对照液。 (3)薄层色谱检识 薄层板:硅胶G-CMC-Na 样 品:牛黄解毒片供试液 对照品:胆酸对照液 模拟牛黄解毒片对照液 展开剂:正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇(6∶32∶1∶1) 显色剂:喷雾5%磷钼酸乙酸溶液,110℃加热10分钟 2.冰片的鉴别 (1)供试液制备:取本品2片,刮去包衣,研碎,加4ml甲醇-氯仿(1∶1),室温下浸渍30min,时加振摇,滤过,滤液使成5ml,作为供试液。 (2)对照液制备:①取冰片适量,加甲醇-氯仿(1∶1)溶解,制成1ml含4mg的溶液。②取缺冰片的模拟牛黄解毒片(相当于2片),按供试液制备法处理,得阴性对照液。 (3)薄层色谱检识 薄层板:硅胶G 试 样:牛黄解毒片供试液 对照品:冰片对照液,模拟牛黄解毒片对照液 展开剂:石油醚-醋酸乙酯-苯(18∶2∶4) 显色剂:喷雾5%磷钼酸乙醇溶液,110℃加热显色 3.大黄的鉴别 (1)供试液制备:取本品6片,刮去包衣,研碎,加10ml甲醇回流提取15分钟,冷后滤过,滤液使成5ml,作为供试液。 (2)对照液制备:①取1g大黄药材,同供试液制备法制成对照液。②分别取大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量,加乙醇溶解成1ml对照品溶液。③取缺大黄的模拟牛黄解毒片(相当于6片),同供试液制备法制得阴性对照液。 (3)薄层色谱检识 薄层板:硅胶CMC-Na 试 样:牛黄解毒片供试液、 对照品:大黄药材对照液,模拟牛黄解毒片对照液 大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照液 展开剂:石油醚(60~90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15∶5∶1)上层溶液 显色剂:显色前后置日光及紫外光(365nm)下观察,再喷雾0.5%醋酸镁乙醇溶液显色。 4.黄芩的鉴别 (1)供试液的制备:取本品6片,刮去包衣,研碎,加10ml甲醇回流提取15分钟,放冷后滤过,滤液使成5ml,作为供试液。 (2)对照液的制备:①取1g黄芩,同供试液制备法处理,得对照液。②取黄芩苷对照品适量,加乙醇溶液1ml含1mg的对照品溶液。③取缺黄芩的模拟牛黄解毒片(相当于6片),同供试液制备法制得阴性对照液。 (3)薄层色谱检识 薄层板:硅胶CMC-Na 试 样:牛黄解毒片供试液 对照品:黄芩药材对照液,黄芩苷对照液,模拟牛黄解毒片对照液 展开剂:醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1) 显色剂:喷雾1%三氯化铁乙醇溶液 5.甘草的鉴别 (1)供试液的制备:取本品6片,刮去包衣,研细,加乙醚20ml,回流提取1小时,滤过,残渣挥干乙醚,加入甲醇20ml加热回流1小时,放冷后滤过,滤液浓缩至2ml为供试液。 (2)对照液制备:①取甘草药材1g,剪细,同供试液制备法处理,得对照液;②取缺甘草的模拟牛黄解毒片(相当于6片),同供试液制备法制得阴性对照液。 (3)薄层色谱检识 方法一 薄层板:硅胶CMC-Na 试 样:牛黄解毒片供试液 对照品:甘草对照液,模拟牛黄解毒片对照液 展开剂:先用苯-氯仿-甲醇(10∶10∶1)展开至前沿,取出晾干,再以苯-氯仿-甲醇(5∶5∶1)作第二次展开。 显色剂:在紫外灯(365nm)下检视 方法二 薄层板:硅胶G加1%氢氧化钠溶液铺板,晾干 试 样:牛黄解毒片供试液 对照品:甘草药材对照液,模拟牛黄解毒片对照液 展开剂:醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(30∶2∶2∶4) 显色剂:喷雾10%硫酸乙醇溶液,105℃加热,显蓝色斑点 (四)思考题 1.薄层色谱鉴别中药制剂时,通常要制备一系列的对照液,为什么? 2.制备阴性对照液对薄层色谱鉴别中药制剂有什么意义? 3.制备冰片供试液,为什么要在低温或室温条件下操作,对色谱鉴别有什么影响? 4.大黄中5种主要游离蒽醌成分展开后其Rf值为什么不同?请阐明理由。