实验十一 应用薄层色谱法检识中药制剂 （一）目的要求 学习中药制剂的鉴别方法，通过实验要求： 1．掌握薄层色谱法的操作技术及分离原理。 2．掌握中药制剂鉴别的一般程序及定性检识的原理。 3．熟悉检识其所含化学成分的方法与实验技术。 （二）实验原理 本实验是根据中药制剂牛黄解毒片中的主要成分或特征成分的性质，选用适当的溶剂和方法对试样进行预处理，尽量排除干扰物质，达到提高待测成分或特征成分的相对浓度，以利在进行薄层色谱鉴别时提高色谱清晰度，实现应用薄层色谱检测技术鉴别和控制中药制剂质量。 （三）实验内容 牛黄解毒片为包衣片。处方为：牛黄50g，雄黄50g，石膏200g，大黄200g，黄芩150g，桔梗100g，冰片25g，甘草50g。以上八味药，雄黄水飞或粉碎成极细粉；大黄粉碎成细粉；牛黄、冰片研细；其余黄芩等四味加水煎煮2次，每次2小时，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入大黄、雄黄粉末，制成颗粒，干燥，再加入牛黄、冰片粉末，混匀，压制成1000片，包衣即得。 1．牛黄的鉴别 （1）供试液制备；取本品10片，刮去包衣，研碎，加10ml氯仿研磨，滤过，再用10ml氯仿浸洗滤渣，合并滤液，浓缩至1ml为供试液。 （2）对照液制备：①取胆酸0.001g溶于1ml氯仿中，作为对照品溶液。②取缺牛黄的模拟牛黄解毒片（相当于10片），按供试液制备法处理，得阴性对照液。 （3）薄层色谱检识 薄层板：硅胶G-CMC-Na 样 品：牛黄解毒片供试液 对照品：胆酸对照液 模拟牛黄解毒片对照液 展开剂：正己烷-醋酸乙酯-醋酸-甲醇（6∶32∶1∶1） 显色剂：喷雾5％磷钼酸乙酸溶液，110℃加热10分钟 2．冰片的鉴别 （1）供试液制备：取本品2片，刮去包衣，研碎，加4ml甲醇-氯仿（1∶1），室温下浸渍30min，时加振摇，滤过，滤液使成5ml，作为供试液。 （2）对照液制备：①取冰片适量，加甲醇-氯仿（1∶1）溶解，制成1ml含4mg的溶液。②取缺冰片的模拟牛黄解毒片（相当于2片），按供试液制备法处理，得阴性对照液。 （3）薄层色谱检识 薄层板：硅胶G 试 样：牛黄解毒片供试液 对照品：冰片对照液，模拟牛黄解毒片对照液 展开剂：石油醚-醋酸乙酯-苯（18∶2∶4） 显色剂：喷雾5％磷钼酸乙醇溶液，110℃加热显色 3．大黄的鉴别 （1）供试液制备：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml甲醇回流提取15分钟，冷后滤过，滤液使成5ml，作为供试液。 （2）对照液制备：①取1g大黄药材，同供试液制备法制成对照液。②分别取大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照品适量，加乙醇溶解成1ml对照品溶液。③取缺大黄的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。 （3）薄层色谱检识 薄层板：硅胶CMC-Na 试 样：牛黄解毒片供试液、 对照品：大黄药材对照液，模拟牛黄解毒片对照液 大黄素、芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚对照液 展开剂：石油醚（60～90℃）-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上层溶液 显色剂：显色前后置日光及紫外光（365nm）下观察，再喷雾0.5％醋酸镁乙醇溶液显色。 4．黄芩的鉴别 （1）供试液的制备：取本品6片，刮去包衣，研碎，加10ml甲醇回流提取15分钟，放冷后滤过，滤液使成5ml，作为供试液。 （2）对照液的制备：①取1g黄芩，同供试液制备法处理，得对照液。②取黄芩苷对照品适量，加乙醇溶液1ml含1mg的对照品溶液。③取缺黄芩的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。 （3）薄层色谱检识 薄层板：硅胶CMC-Na 试 样：牛黄解毒片供试液 对照品：黄芩药材对照液，黄芩苷对照液，模拟牛黄解毒片对照液 展开剂：醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5∶3∶1∶1） 显色剂：喷雾1％三氯化铁乙醇溶液 5．甘草的鉴别 （1）供试液的制备：取本品6片，刮去包衣，研细，加乙醚20ml，回流提取1小时，滤过，残渣挥干乙醚，加入甲醇20ml加热回流1小时，放冷后滤过，滤液浓缩至2ml为供试液。 （2）对照液制备：①取甘草药材1g，剪细，同供试液制备法处理，得对照液；②取缺甘草的模拟牛黄解毒片（相当于6片），同供试液制备法制得阴性对照液。 （3）薄层色谱检识 方法一 薄层板：硅胶CMC-Na 试 样：牛黄解毒片供试液 对照品：甘草对照液，模拟牛黄解毒片对照液 展开剂：先用苯-氯仿-甲醇（10∶10∶1）展开至前沿，取出晾干，再以苯-氯仿-甲醇（5∶5∶1）作第二次展开。 显色剂：在紫外灯（365nm）下检视 方法二 薄层板：硅胶G加1％氢氧化钠溶液铺板，晾干 试 样：牛黄解毒片供试液 对照品：甘草药材对照液，模拟牛黄解毒片对照液 展开剂：醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（30∶2∶2∶4） 显色剂：喷雾10％硫酸乙醇溶液，105℃加热，显蓝色斑点 （四）思考题 1．薄层色谱鉴别中药制剂时，通常要制备一系列的对照液，为什么？ 2．制备阴性对照液对薄层色谱鉴别中药制剂有什么意义？ 3．制备冰片供试液，为什么要在低温或室温条件下操作，对色谱鉴别有什么影响？ 4．大黄中5种主要游离蒽醌成分展开后其Rf值为什么不同？请阐明理由。