实验十 黄连中盐酸小檗碱的提取分离与检识 （一）目的要求 学习提取精制和检识黄连中的小檗碱，通过实验要求： 1．掌握小檗碱的结构特点和理化性质。 2．熟悉浸渍法、盐析法、结晶法和薄层色谱法的基本操作过程及注意事项。 3．了解盐酸小檗碱的检识方法。 （二）主要化学成分的结构及性质 黄连为毛茛科植物黄连Coptis chinensis Franch.、三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y.Cheng et Hsiao、峨嵋野连Coptis omeiensis(Chen)C.Y.Cheng或云连Coptis teeta Wall.的根茎。黄连的根状茎含多种生物碱，主要为小檗碱（黄连素），约5％～8％，其次为黄连碱、甲基黄连碱、掌叶防己碱、药根碱、木兰碱等。叶含小檗碱1.49％。 小檗碱(berberine)：分子式(C20H18NO4)＋，分子量336.37。系季铵生物碱。游离小檗碱为黄色针状结晶（乙醚），mp.145℃，能缓缓溶于冷水（1∶20），可溶于冷乙醇（1∶100），易溶于热水或热乙醇，难溶于丙酮、氯仿、苯，几乎不溶于石油醚。盐酸小檗碱(C20H17NO4·HCl·2H2O)，为黄色结晶，微溶于冷水（1∶500），易溶于沸水，几乎不溶于冷乙醇、氯仿和乙醚。硫酸小檗碱( (C20H18NO4)2·SO4·3H2O)，溶于水（1∶30），溶于乙醇。重硫酸小檗碱(C20H18NO4·HSO4)为黄色结晶或粉末，溶于水（1∶150），微溶于乙醚。   小檗碱 木兰碱 （三）实验原理 根据小檗碱的盐酸盐在水中溶解度小，而小檗碱的硫酸盐水中溶解度较大。因此，从植物原料中提取小檗碱时常用稀硫酸水溶液浸泡或渗漉，然后向提取液中加入10％的食盐，在盐析的同时，也提供了氯离子，使其硫酸盐转变为氯化小檗碱（即盐酸小檗碱）而析出。 （四）实验内容 1．盐酸小檗碱的提取、精制 略 2．盐酸小檗碱的检识 （1）浓硝酸或漂白粉试验：取盐酸小檗碱少许，加4ml稀硫酸溶解，分置于两支试管中。一支试管滴加浓硝酸数滴，即显樱红色。另一支试管加少许漂白粉，也立即显樱红色。 （2）丙酮试验：取盐酸小檗碱约50mg，加蒸馏水3ml缓缓加热溶解后，加氢氧化钠试剂2滴，显橙色。溶液放冷后，加丙酮4滴振摇，即发生混浊。放置后析出黄色丙酮小檗碱沉淀。 （3）没食子酸试验：取盐酸小檗碱约20mg，置白瓷皿中，加硫酸1ml溶解后，加5％没食子酸的乙醇溶液5滴，置水浴上加热，即显翠绿色。 （4）薄层色谱检识 薄层板：中性氧化铝（软板） 试 样：自制盐酸小檗碱乙醇溶液 对照品：盐酸小檗碱对照品乙醇溶液 展开剂：氯仿－甲醇（9∶1） 显 色：自然光下观察黄色斑点或紫外灯下观察荧光 （5）纸色谱检识 支持剂：新华层析滤纸（中速、20cm×7cm） 试 样：自制盐酸小檗碱乙醇溶液 对照品：盐酸小檗碱对照品乙醇溶液 展开剂：正丁醇-醋酸-水（4∶1∶1） 显 色：紫外灯下观察荧光 （五）实验说明及注意事项 1．浸泡黄连粗粉的硫酸水溶液，一般为0.2％～0.3％为宜。若硫酸水溶液浓度过高，小檗碱可成为重硫酸小檗碱，其溶解度（1∶150）明显较硫酸小檗碱（1∶30）小，从而影响提取效果。硫酸水溶液浸出效果与浸渍时间有关，有报道，浸渍12小时约可浸出小檗碱80％，浸渍24小时，可浸出92％。常规提取应浸渍多次，使小檗碱提取完全，本实验中只收集第一次浸出液。 2．进行盐析时，加入氯化钠的量，以提取液量的10％（g/v）计算，即可达到析出盐酸小檗碱的目的。氯化钠的用量不可过多，否则溶液的相对密度增大，造成析出的盐酸小檗碱结晶呈悬浮状态难以下沉。盐析用的氯化钠用市售的精制食盐，因粗制食盐混有较多泥沙等杂质，影响产品质量。 3．在精制盐酸小檗碱过程中，因盐酸小檗碱放冷极易析出结晶，所以加热煮沸后，应迅速抽滤或保温滤过，防止溶液在滤过过程中冷却，析出盐酸小檗碱结晶阻塞滤材，造成滤过困难，减低提取率。 4．本实验流程也适用于以三棵针、黄柏为原料提取小檗碱，但因其小檗碱含量较低，应加大药材量，以150g以上为宜。 （六）思考题 1．怎样从黄连中提取分离盐酸小檗碱？原理是什么？ 2．试述小檗碱的检识方法。 3．用薄层色谱法检识小檗碱时，为什么常选用氧化铝为吸附剂？如果选用硅胶作吸附剂，怎样操作才能达到较准确的结果。