1
牛黄解毒片处方,人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、
桔梗、冰片、甘草制法,以上八味，雄黄水飞成极细粉，大黄粉碎成细粉；人工牛黄、冰片研细，其余黄芩等四味加水煎煮二次，每次 2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入大黄、雄黄粉末，制成颗粒，干燥，
再加入人工牛黄、冰片粉末，混匀，压制成片，或包糖衣或薄膜衣，即得。
2
性状：
本品为素片、糖衣片、或薄膜衣片。素片或包衣片除去包衣后显棕黄色；有冰片香气，味微苦，辛。
鉴别：
（ 1）取本品，臵显微镜下观察，草酸钙簇晶大，
直径 60～ 140μm 。不规则碎块金黄色或橙黄色，
有光泽。
3
鉴别 （ 2）取本品 1片，研细，进行微量升华，所得的白色升华物，加新配制的 1％香草醛硫酸溶液，液滴边缘渐显玫瑰红色。
4
鉴别 （ 3）取本品 2片，研细，加三氯甲烷 10ml研磨，
滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇 0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取 胆酸 对照品，加乙醇制成每 1mL含 1mg
的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 VI B）
试验，吸取上述两种溶液各 5μ l，分别点于同一 硅胶
G薄层板上，以正己烷 -乙酸乙酯 -甲醇 -醋酸（ 20,25：
3,2）的上层清液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10％硫酸乙醇溶液，在 105℃ 加热约 10min，臵紫外光灯（ 365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位臵上，显相同颜色的 荧光 斑点。
5
鉴别 （ 4）大黄对照药材、大黄素对照品、硅胶 H板以石油醚（ 30～ 60℃ ） -甲酸乙酯 -甲酸（ 15,5：
1）的上层清液为展开剂。
臵紫外光灯（ 365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位臵上，显相同的 5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位臵上，显相同的橙黄色荧光斑点；臵氨蒸气中熏后，日光下检视，
斑点变为红色。
6
鉴别 （ 5） 黄芩苷对照溶液、含 4％ 醋酸钠 的 硅胶 G
板以乙酸乙酯 -丁酮 -甲酸 -水（ 5,3,1,1）为展开剂，喷 1％三氯化铁乙醇液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位臵上，显相同颜色的斑点。
7
第二章 中药制剂的定性鉴别赵碧清
8
目的,检定制剂的真伪。
方法：
1,性状鉴别
2,显微鉴别法
3,理化鉴别法
1）一般化学反应法
2）升华法
3）荧光法
4）光谱法
5）色谱法
9
一、制片方法
1,散剂、胶囊剂 取粉末，直接加水或水合氯醛透化装片
2,片剂 用刀片直接从药片断面刮取少量粉末或研碎后取少量样品透化装片。
3,水丸、锭剂 研成粉末后取少量直接透化装片。
第一节 中药制剂的显微鉴别适用于直接以中药材原料药粉末制成的中成药或含有中药材粉末的中成药。
10
4,蜜丸 取蜜丸切碎，加水搅拌，洗涤后，臵离心管中离心分离沉淀。如此反复处理以除去蜂蜜后透化装片。
（ 1）氢氧化钾法,将样品臵试管中，加 5%KOH溶液适量，加热至用玻璃挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，去少量至载玻片上，用解剖针撕开，透化后装片。
（ 2）硝铬酸法,将样品至试管中，加 20%硝酸与 20%铬酸等量混合液适量，放臵，至用玻棒挤压能离散，倾去酸液，按 1法洗涤、撕开、装片。
（ 3）氯酸钾法,将样品至试管中，加浓硝酸及氯化钾粉少量，
水浴加热，此后不断加入少量氯化钾粉以使不断产生气泡至用玻棒挤压能离散，倾去酸液，按 1法洗涤、撕开、装片。
11
若观察细胞内含物形状，应选用 不同试剂 制片。
淀粉粒,水或甘油醋酸试液（取甘油,50%醋酸与水各等份混合）；
糊粉粒,甘油；
水溶性内含物,乙醇或水合氯醛试液 (不加热 )。
12
固定标本片制片方法,（可长久保存）
取中成药粉末臵离心管中，加乙醇浸过上面，
玻棒搅拌 5～ 10分钟后离心使粉末沉积，倾去稀醇液，
再加无水乙醇二次，丙酮一次，丙酮、二甲苯等量混合液一次，如前操作，每次 10～ 20分钟；最后加入纯二甲苯，略加搅拌，取处理后的样品微量臵载玻片上，滴加中性树胶，加盖玻片封藏，贴标签。
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二、观察要点中成药粉末镜检时，首先要了解处方中的 药味组成,明确其来源的药用植物的部位，才能根据该部位的显微特征来进行检出。
(一 )根类木栓组织碎片，表面观多为多角形细胞，排列紧密。
导管：直径、节的长短、末梢壁的穿孔及增厚壁的纹理类型。
草酸钙结晶晶形、分泌组织、淀粉粒的形状、脐点层纹均可作为粉末鉴别的依据。
(二 )根茎类与根类药材粉末特征相似。而淀粉粒有时较大，有鳞叶组织，退化的鳞叶表皮细胞大多狭长，细胞壁平直或波状弯曲。
14
(三 )茎类
1,茎类表皮细胞及垂周壁的形状，气孔的类型，毛茸的类型及形态；
导管的类型、直径、长短。
管胞的形态；
纤维的形状、直径、长短、有无晶纤维等。
草酸钙结晶多为方晶及簇晶，单子叶植物偶见针晶。
薄壁组织碎片、石细胞。
15
2,皮类纤维的直径、长短及形状，是否成束存在，
细胞壁厚薄、木化与否，能否看到胞腔及壁孔等。
石细胞的形状、细胞壁增厚情况。
草酸钙结晶多为方晶及簇晶，砂晶及针晶较少。
皮类药材粉末不应含有木质部组织，如导管、管胞等。
3,木类可见导管、管胞、木纤维、木射线及木薄壁细胞。
细胞壁通常均木化。不应有木栓细胞及绿色组织等。
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(四 )花类
1,苞片及花萼 构造类同叶片，表面上可见到气孔及毛茸。
2,花冠上表皮细胞常呈乳头状或绒毛状突起而无气孔，
下表皮细胞常不呈乳头状，
细胞壁微波状弯曲。
维管束组织细小。
3,雄蕊
1）花粉囊内壁细胞的壁不均匀地增厚，呈网状、螺旋状、
环纹状及点状等；
2）花粉粒具圆形、长圆形或多面形等多种形状。
通常具内外两层壁，外壁多数具各种雕纹。
4,雌蕊 柱头的表皮细胞呈乳头状突起，或分化成绒毛状。
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(五 )叶类
1,表皮 上下表皮细胞的形状、大小，角质层的形态，垂周壁的形状、厚度或增厚情况以及有无气孔、毛茸等。
2,气孔气孔的形状、大小、型式，
保卫细胞的形状及内含物，
副卫细胞的数目、大小、形状。
3,毛茸 注意毛茸的种类。
非腺毛,注意细胞的数目、形状、长短、大小、细胞壁的厚薄及表面形态等。多为单列性多细胞毛，少为单细胞毛
。形状一般呈长圆锥形或线形；细胞壁一般较薄，外壁表面大都光滑。
腺毛,注意头部的形状、大小、细胞的数目、排列情况以及柄部的长短、细胞数目及行列数目等。
18
(六 )果实类
1,果皮细胞 的形状、大小。
2,外 果皮上可能有非腺毛及腺毛，注意长短、形状。
3,中 果皮内的分泌组织 油细胞，油室、油管、
石细胞等。
4,内 果皮石细胞，大小、细胞壁的厚薄，如为镶嵌层，则应注意其排列形式。
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(七 )种子类
1,种皮表皮毛的形状、细胞壁的厚薄、是否木化、有无纹理；
石细胞形状、大小、色泽散布及细胞壁的增厚情况。
栅状细胞及油细胞。
2,外胚乳 细胞大小、形状、壁厚、色泽、细胞内含物。
3,内胚乳 细胞形状、厚度、内含物。
4,胚的子叶 有无分泌组织及细胞的内含物。
20
三、应用实例六味地黄丸的显微定性鉴别
[显微鉴别 ] 取本品臵显微镜下观察,
(1)薄壁组织棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物 (熟地黄 )
(2)果皮表皮细胞橙黄色,表面观类多 角形,垂周壁略连珠状增厚 。 (山茱萸 )
(3)淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直 径
24—40um,脐点短缝状或人字状 。
(山药 )3a草酸钙针晶束 3b淀粉粒
(4)草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中,
有时数个排列成行。 (牡丹皮 )
(5)不规则分枝状团块无色，遇水合 氯醛溶化；菌丝无色,直径 4-6um。 (茯苓 )
(6)薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,
集成纹孔群 。 (泽泻 )
21
一、一般化学反应法中药制剂一般选择 有效成分,特征成分 作为鉴别的对象 。
一般化学反应鉴别法多在 试管 中用 湿法 反应进行,制剂样品要先制成适宜的供试液 。 一般情形下用 50％ -70％ 乙醇回流提取制备供试液 。
一般化学反应法用于中药制剂鉴别应该 注意 以下几点：
(1)慎重使用 专属性不好的分析反应,如泡沫生成反应,三氯化铁显色反应等 。
(2)在分析前对样品进行分离,精制,除去干扰分析反应的物质,借此 改善 鉴别方法的 专属性 。
(3)采用 阴性对照和阳性对照 的方式,对拟定的鉴别方法进行反复验证,防止出现假阳性 。
第二节 中药制剂的一般理化鉴别法
22
实例 1 牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应取本品 6片 (去包衣 )，研细，加乙醇 10ml，温热
10分钟，过滤，滤液作如下反应：
(1)取滤液 5ml，加镁粉少量与盐酸 0.5ml，加热，
即显红色。 （黄芩中有大量 黄酮 ）
(2)另取滤液 4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加 30％过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。（大黄中含有 羟基蒽醌 ）
23
实例 2 牙痛一粒丸中蟾蜍、朱砂、雄黄的定性鉴别反应
(1) 取本品约 0.1 g，研细，加氯仿 5ml，浸泡 1小时，滤过，
滤液蒸干，残渣加醋酐少量使溶解，再滴加硫酸，初显蓝紫色，
渐变为蓝绿色。 （蟾蜍）
(2) 取本品约 0.2g，研细，加水湿润后，加氯酸钾的硝酸饱和溶液 2ml，振摇，放冷，离心，取上清液，加氯化钡试液
0.5ml，摇匀，溶液呈白色浑浊，离心，弃去上层酸液，再加水 2ml，振摇，沉淀不溶解。 （雄黄）
(3) 取本品适量，研细，用盐酸湿润后，在光洁的铜片上摩擦，铜片表面即显银白色光泽，加热烘烤后，银白色消失。
（朱砂）
24
二,升华法操作方法：取金属片安放在有圆孔 (直径约 2cm)
的石棉板上,在金属片上放一小金属圈 (内径约
1.5cm,高约 0.8cm),对准石棉板上的圆孔,圈内放入预先研细成粉末的中药制剂一薄层,圈上覆盖载玻片,在石棉板下圆孔处用酒精灯缓缓加热,至粉末开始变焦,去火待冷,载玻片上有升华物凝集 。
将载玻片反转后,臵显微镜下观察结晶形状,色泽
,或取升华物加试液观察反应 。
25
实例 牛黄解毒丸微量升华鉴别取本品进行微量升华，先得白色升华物后（ 冰片 ），继得黄色升华物（ 大黄中蒽醌 ）。将升华物分别臵显微镜下观察：白色升华物呈不定形的无色片状结晶，加新制的 1％香草醛硫酸溶液，渐显紫红色，黄色升华物呈黄色针状结晶或羽状结晶，遇碱显红色，遇酸变为黄色。
26
四、荧光法有些中药材中含有能产生荧光的化学成分，在可见光、
紫外光照射下能发出荧光，或经试剂处理后发出荧光。含有这类药材的中药制剂可用荧光法进行鉴别。通常的操作方法是取制剂的提取液点在滤纸上或试纸上，臵紫外光灯下
(365nm)观察，有时则是加一定的试剂后再进行观察。
实例 l 元胡止痛片的荧光鉴别取本品适量，去糖衣，研细，取粉末 1g，加 0.25mol／ L
硫酸液 10ml振摇片刻，滤过，取滤液数滴，点于滤纸上，阴干后臵紫外光灯 (365nm)下观察，显亮黄色荧光。
27
五、光谱法
(一 )可见－紫外分光光度法不同的药材所含的成分不同,在一定条件下吸收光谱的特征可用于鉴别药材 。 利用这一特点,可见 -紫外分光光度法也可用于中药制剂的鉴别 。
(二 )红外光谱法一个混合物的红外光谱，一般认为是该混合物各组分红外光谱的机械叠加，具全息光谱的特征。
一个中药制剂只要是按规定的处方、加工工艺,规范的药材制成,其红外光谱图就具有稳定性、重复性，就可以作为定性鉴别的依据。
28
六、色谱法中药制剂可用色谱法鉴定，包括 薄层 色谱法,纸色谱法,气相 色谱法和 高效液相 色谱法。
(一 )薄层色谱法使用本法鉴定中药制剂，通常是在同一块薄层板上点入样品和适宜的对照物，采用同一条件依法层析展开，经显色或用其他方法检出色谱斑点后，将样品与对照物所得的色谱图进行对比，作出鉴定。
29
1．样品应作适当的预处理对样品进行初步的分离精制。
常用的预处理方法有：升华法，蒸馏法，溶剂提取法，小型层析柱的柱色谱法、离子交换法等。
2．展开剂的选择 选用能突出主要斑点，便于分析比较的展开剂，如果鉴别的对象相同，应首先试用已有的、较成熟的展开剂。
如无现有展开剂，可先以无水乙醇 -苯（ 1∶4 ）
展开，如主要物质的 Rf在 0.8以上，改用苯 -氯仿
（ 1∶3 ），如主要物质的 Rf在 0.3以下，改用丙酮 -甲醇（ 1∶1 ）。
30
3．对照品的选择 中国药典 (一部 )作薄层鉴别用的对照物有对照品和对照药材两种。
TLC用作中药制剂鉴别的另一类对照物是阴阳对照溶液。
4．薄层色谱的扫描定性鉴别 TLC展开后，斑点的检识方法，
有通用性的，如在紫外光灯下观察出现的荧光，或用碘蒸气、
稀硫酸、磷钼酸显色等，这类方法专属性不强。另一类是专属性较好的显色剂，例如碘化铋钾试液，茚三酮试液和三氯化铝试液等，一般可依次说明斑点归属。
还可用薄层扫描仪将薄层板上的斑点转换绘制成峰形色谱图,这种色谱图以斑点展开后移动的距离为横坐标,斑点对光辐射的吸收强度或发射荧光的强度为纵坐标的峰形曲线图谱 。
31
应用实例 1.大黄及含大黄的成药
1）供试液制备 取各样品适量，加甲醇 20ml浸渍 1h，过滤，
取滤液 5ml，蒸干，加水 10ml使溶解，再加 HCl 1ml，水浴加热
30min，立即冷却，乙醚提取两次,20ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿溶解成 1ml。
2）对照液制备 取大黄对照药材 0.1g．按 供试液制备 作为对照药材溶液；另取芦荟大黄素，大黄酸，大黄素，大黄素甲醚，大黄酚对照品，加甲醇制成 1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3）薄层板 硅胶 H加 0.3％ CMC-Na溶液的自制板；厚度：
300μ m
32
4）点样 分别点样 4μ L。
5）展开剂 石油醚 (30～ 60℃) -甲酸乙酯 -甲酸 (15∶5∶1) 放臵后的上层溶液。
6）展开方式 上行展开；展距,7cm。
7）显色 臵紫外光灯 (365nm)下检视。
8）色谱识别 紫外光灯 (365nm)下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位臵上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点。
9）备注 在部分成药样品的色谱中，除大黄的五个蒽醌成分的斑点外，尚有其它荧光斑点，为处方中的其它成分。
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1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
样品,1．芦荟大黄素； 2．大黄酸； 3．大黄素； 4．大黄素甲醚；
5．大黄酚； 6．大黄 (掌叶大黄 )对照药材；
7．大黄 (唐古特大黄 )对照药材； 8．大黄流浸膏；
9．小儿化毒散； 10．槟榔四消丸； 11．木香槟榔丸；
12．枳实导滞丸； 13．牛黄上清丸； 14．清宁丸；
15．一捻金； 16．牛黄解毒片； 17．牛黄解毒丸
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2.黄连、黄柏及含黄连、黄柏的成药
1）供试液制备 取各品种药粉适量，加甲醇 5ml，
臵水浴回流 15min，过滤，滤液浓缩至 1ml。
2）对照液制备 取盐酸香槟酒小檗碱，硫酸黄连碱，硫酸表小檗碱，非洲防己碱，药根碱，盐酸巴马汀对照品，加甲醇制成每 0.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3）薄层板 硅胶 G自制板；厚度,500um
4）点样 分别点样 1-2 μl
5）展开剂 苯 -醋酸乙酯 -甲醇 -异丙醇 -浓氨试液
(6∶3∶∶1.5∶1.5∶0.5) ；另槽中加入与展开剂等体积浓氨试液。
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6）展开方式 展开箱预平衡 15分钟；上行展开；
展距,8cm
7）显色 臵紫外光灯 (365nm)下检视。
8）色谱识别 中国药典黄连项下收载有味连，雅连，云连三种，总体分析黄连可见 4～ 5个主要的黄色荧光斑点，自下而上，分别为 l.非洲防己碱 +药根碱 (量少 )； 2.巴马汀； 3.小檗碱； 4.表小檗碱 (云连不含，雅连含量低 )； 5.黄连碱 (味连含量高 )。黄柏主要检出巴马汀及小檗碱，可与黄连区别。
36
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
样品,1.黄连 (味连 )； 2.黄连； 3.黄连 (雅连 )； 4.黄连 (云连 )； 5.黄连 (野连 )；
6.黄连 (日本黄连 )； 7.小儿化毒散； 8.万应锭； 9.大补阴丸； 10.木香槟榔丸；
11.香连丸； 12.黄柏； 13.非洲防己碱； 14.药根碱； 15.巴马汀； 16.小檗碱；
17.表小檗碱； 18.黄连碱。
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冠心苏合丸的 薄层扫描 鉴别
（苏合香、冰片、乳香（制）、檀香、青木香）
乳香鉴别薄层扫描图苏合香鉴别薄层扫描图阴性对照阳性对照供试品
38
薄层色谱过程中斑点异常现象的探讨
(一 )边缘效应
1,原因,当展开剂在薄层上运行时，极性较弱的展开剂和挥发较强的展开剂在薄层两边较易挥发，它们在薄层两侧的浓度比在中部的浓度小，因此产生了边缘效应。
2,克服方法
(1)采用单一展开剂以代替混合展开剂。
(2)采用共沸混合展开剂来代替一般混合展开剂。
(3)在展开槽内壁上贴以浸湿了展开剂的滤纸条，或用内容积较小封闭严密的展开槽。
(4)狭的薄层较宽的薄层边缘效应小，采用狭薄层代替宽薄层
39
(二 )拖尾现象
1．产生之 原因 及 克服 方法
(1)点样量太多，展开剂不能全部负载。
克服方法：寻出合适之点样量后，再进行层析
(2)展开剂 pH值偏高。如以中性展开剂层析酸性物质时，常形成斑点拖尾。
克服方法,在展开剂中加入酸，使解离受到抑制，即可防止斑点拖尾。
(3)展开剂的 pH值偏低。如以中性展开剂层析生物碱和其它弱碱时，常观察到斑点拖尾。
克服方法：在层析 K值在 10-3～ 10-8的碱性化合物时，展开剂应调至碱性 (如加入吡啶、二乙胺等 )。
40
(4)吸附剂 pH的影响。 由于化合物与薄层上的酸、碱成盐而产生拖尾现象。
克服方法：换用 pH合适的吸附剂或调整展开剂的
pH，如加入酸或碱等。
(5)吸附剂和展开剂中 痕迹量的金属离子 (如 Ca2+,Mg2+
等 )，使层析后的斑点形成拖尾。特别是被展开的化合物具有 -COOH及酚 -OH等基团时。
克服方法：采用纯净的酸来洗涤和处理吸附剂,可加乙二胺四醋酸二钠（ EDTA)处理。展开剂可用精制的方法来除去金属离子。
41
(三 )斑点形成念珠状
1.产生之原因及克服方法
(1)单一的化合物在层析过程中分解成二个或更多的化合物。
这些化合物是十分相似的,Rf值也极相似，以致彼此重叠。
克服方法：设法防止在层析过程中化合物的分解。如控制 pH
值，防止水解等。
(2)被层析的检样中组分太多，以致在一定长度的薄层上排布不开，彼此重叠，形成念珠状。
克服方法：将检样用不同溶剂分段萃取，使成为二个或数个检样；或适当增长薄层板的长度，延长层析距离；或进行双向展开。
(3)点样在原点处形成复斑。有时由于检样浓度太稀，常进行多次点样。这样容易造成每次点样中心不重合，形成具有复斑的原点 (念珠状的雏形 )，展开后往往形成念珠状。
克服方法：用浓度适宜的检样一次点样。
42
同时 注意：
层析时控制恒定温度；
新鲜配制的展开剂，最好只使用一次；
一般情况下，硅胶、氧化铝的粒度在 200目左右为宜，活度一般在 1～ Ⅱ 级。使用前吸附剂应充分混合。
43
(二 )纸色谱法
(三 )气相色谱法气相色谱法的分离效能高,检测器种类多而且灵敏度高,是混合物鉴别的有效方法 。 该法目前主要是用于含 挥发油和挥发性 成分的制剂分析 。
(四 )高效液相色谱法主要是利用化合物在特定的色谱柱上,在一定条件下的保留值,将某一样品与其对照品在同一条件下,
进行 保留时间 的直接比较作为鉴别依据 。 对于复杂未知成分,也可以加入对照品,观察被测峰是否增高,
以初步作定性结论 。 对于复杂组分尚可采用联机技术
,如本法与质谱联用,先分离后再作定性鉴别 。
44END
牛黄解毒片处方,人工牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、
桔梗、冰片、甘草制法,以上八味，雄黄水飞成极细粉，大黄粉碎成细粉；人工牛黄、冰片研细，其余黄芩等四味加水煎煮二次，每次 2h，合并煎液，滤过，滤液浓缩成稠膏，加入大黄、雄黄粉末，制成颗粒，干燥，
再加入人工牛黄、冰片粉末，混匀，压制成片，或包糖衣或薄膜衣，即得。
2
性状：
本品为素片、糖衣片、或薄膜衣片。素片或包衣片除去包衣后显棕黄色；有冰片香气，味微苦，辛。
鉴别：
（ 1）取本品，臵显微镜下观察，草酸钙簇晶大，
直径 60～ 140μm 。不规则碎块金黄色或橙黄色，
有光泽。
3
鉴别 （ 2）取本品 1片，研细，进行微量升华，所得的白色升华物，加新配制的 1％香草醛硫酸溶液，液滴边缘渐显玫瑰红色。
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鉴别 （ 3）取本品 2片，研细，加三氯甲烷 10ml研磨，
滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇 0.5ml使溶解，作为供试品溶液。另取 胆酸 对照品，加乙醇制成每 1mL含 1mg
的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录 VI B）
试验，吸取上述两种溶液各 5μ l，分别点于同一 硅胶
G薄层板上，以正己烷 -乙酸乙酯 -甲醇 -醋酸（ 20,25：
3,2）的上层清液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以 10％硫酸乙醇溶液，在 105℃ 加热约 10min，臵紫外光灯（ 365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位臵上，显相同颜色的 荧光 斑点。
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鉴别 （ 4）大黄对照药材、大黄素对照品、硅胶 H板以石油醚（ 30～ 60℃ ） -甲酸乙酯 -甲酸（ 15,5：
1）的上层清液为展开剂。
臵紫外光灯（ 365nm）下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位臵上，显相同的 5个橙黄色荧光主斑点；在与对照品色谱相应的位臵上，显相同的橙黄色荧光斑点；臵氨蒸气中熏后，日光下检视，
斑点变为红色。
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鉴别 （ 5） 黄芩苷对照溶液、含 4％ 醋酸钠 的 硅胶 G
板以乙酸乙酯 -丁酮 -甲酸 -水（ 5,3,1,1）为展开剂，喷 1％三氯化铁乙醇液，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位臵上，显相同颜色的斑点。
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第二章 中药制剂的定性鉴别赵碧清
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目的,检定制剂的真伪。
方法：
1,性状鉴别
2,显微鉴别法
3,理化鉴别法
1）一般化学反应法
2）升华法
3）荧光法
4）光谱法
5）色谱法
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一、制片方法
1,散剂、胶囊剂 取粉末，直接加水或水合氯醛透化装片
2,片剂 用刀片直接从药片断面刮取少量粉末或研碎后取少量样品透化装片。
3,水丸、锭剂 研成粉末后取少量直接透化装片。
第一节 中药制剂的显微鉴别适用于直接以中药材原料药粉末制成的中成药或含有中药材粉末的中成药。
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4,蜜丸 取蜜丸切碎，加水搅拌，洗涤后，臵离心管中离心分离沉淀。如此反复处理以除去蜂蜜后透化装片。
（ 1）氢氧化钾法,将样品臵试管中，加 5%KOH溶液适量，加热至用玻璃挤压能离散为止，倾去碱液，加水洗涤后，去少量至载玻片上，用解剖针撕开，透化后装片。
（ 2）硝铬酸法,将样品至试管中，加 20%硝酸与 20%铬酸等量混合液适量，放臵，至用玻棒挤压能离散，倾去酸液，按 1法洗涤、撕开、装片。
（ 3）氯酸钾法,将样品至试管中，加浓硝酸及氯化钾粉少量，
水浴加热，此后不断加入少量氯化钾粉以使不断产生气泡至用玻棒挤压能离散，倾去酸液，按 1法洗涤、撕开、装片。
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若观察细胞内含物形状，应选用 不同试剂 制片。
淀粉粒,水或甘油醋酸试液（取甘油,50%醋酸与水各等份混合）；
糊粉粒,甘油；
水溶性内含物,乙醇或水合氯醛试液 (不加热 )。
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固定标本片制片方法,（可长久保存）
取中成药粉末臵离心管中，加乙醇浸过上面，
玻棒搅拌 5～ 10分钟后离心使粉末沉积，倾去稀醇液，
再加无水乙醇二次，丙酮一次，丙酮、二甲苯等量混合液一次，如前操作，每次 10～ 20分钟；最后加入纯二甲苯，略加搅拌，取处理后的样品微量臵载玻片上，滴加中性树胶，加盖玻片封藏，贴标签。
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二、观察要点中成药粉末镜检时，首先要了解处方中的 药味组成,明确其来源的药用植物的部位，才能根据该部位的显微特征来进行检出。
(一 )根类木栓组织碎片，表面观多为多角形细胞，排列紧密。
导管：直径、节的长短、末梢壁的穿孔及增厚壁的纹理类型。
草酸钙结晶晶形、分泌组织、淀粉粒的形状、脐点层纹均可作为粉末鉴别的依据。
(二 )根茎类与根类药材粉末特征相似。而淀粉粒有时较大，有鳞叶组织，退化的鳞叶表皮细胞大多狭长，细胞壁平直或波状弯曲。
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(三 )茎类
1,茎类表皮细胞及垂周壁的形状，气孔的类型，毛茸的类型及形态；
导管的类型、直径、长短。
管胞的形态；
纤维的形状、直径、长短、有无晶纤维等。
草酸钙结晶多为方晶及簇晶，单子叶植物偶见针晶。
薄壁组织碎片、石细胞。
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2,皮类纤维的直径、长短及形状，是否成束存在，
细胞壁厚薄、木化与否，能否看到胞腔及壁孔等。
石细胞的形状、细胞壁增厚情况。
草酸钙结晶多为方晶及簇晶，砂晶及针晶较少。
皮类药材粉末不应含有木质部组织，如导管、管胞等。
3,木类可见导管、管胞、木纤维、木射线及木薄壁细胞。
细胞壁通常均木化。不应有木栓细胞及绿色组织等。
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(四 )花类
1,苞片及花萼 构造类同叶片，表面上可见到气孔及毛茸。
2,花冠上表皮细胞常呈乳头状或绒毛状突起而无气孔，
下表皮细胞常不呈乳头状，
细胞壁微波状弯曲。
维管束组织细小。
3,雄蕊
1）花粉囊内壁细胞的壁不均匀地增厚，呈网状、螺旋状、
环纹状及点状等；
2）花粉粒具圆形、长圆形或多面形等多种形状。
通常具内外两层壁，外壁多数具各种雕纹。
4,雌蕊 柱头的表皮细胞呈乳头状突起，或分化成绒毛状。
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(五 )叶类
1,表皮 上下表皮细胞的形状、大小，角质层的形态，垂周壁的形状、厚度或增厚情况以及有无气孔、毛茸等。
2,气孔气孔的形状、大小、型式，
保卫细胞的形状及内含物，
副卫细胞的数目、大小、形状。
3,毛茸 注意毛茸的种类。
非腺毛,注意细胞的数目、形状、长短、大小、细胞壁的厚薄及表面形态等。多为单列性多细胞毛，少为单细胞毛
。形状一般呈长圆锥形或线形；细胞壁一般较薄，外壁表面大都光滑。
腺毛,注意头部的形状、大小、细胞的数目、排列情况以及柄部的长短、细胞数目及行列数目等。
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(六 )果实类
1,果皮细胞 的形状、大小。
2,外 果皮上可能有非腺毛及腺毛，注意长短、形状。
3,中 果皮内的分泌组织 油细胞，油室、油管、
石细胞等。
4,内 果皮石细胞，大小、细胞壁的厚薄，如为镶嵌层，则应注意其排列形式。
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(七 )种子类
1,种皮表皮毛的形状、细胞壁的厚薄、是否木化、有无纹理；
石细胞形状、大小、色泽散布及细胞壁的增厚情况。
栅状细胞及油细胞。
2,外胚乳 细胞大小、形状、壁厚、色泽、细胞内含物。
3,内胚乳 细胞形状、厚度、内含物。
4,胚的子叶 有无分泌组织及细胞的内含物。
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三、应用实例六味地黄丸的显微定性鉴别
[显微鉴别 ] 取本品臵显微镜下观察,
(1)薄壁组织棕色至黑棕色，细胞多皱缩，内含棕色核状物 (熟地黄 )
(2)果皮表皮细胞橙黄色,表面观类多 角形,垂周壁略连珠状增厚 。 (山茱萸 )
(3)淀粉粒三角状卵形或矩圆形，直 径
24—40um,脐点短缝状或人字状 。
(山药 )3a草酸钙针晶束 3b淀粉粒
(4)草酸钙簇晶存在于无色薄壁细胞中,
有时数个排列成行。 (牡丹皮 )
(5)不规则分枝状团块无色，遇水合 氯醛溶化；菌丝无色,直径 4-6um。 (茯苓 )
(6)薄壁细胞类圆形,有椭圆形纹孔,
集成纹孔群 。 (泽泻 )
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一、一般化学反应法中药制剂一般选择 有效成分,特征成分 作为鉴别的对象 。
一般化学反应鉴别法多在 试管 中用 湿法 反应进行,制剂样品要先制成适宜的供试液 。 一般情形下用 50％ -70％ 乙醇回流提取制备供试液 。
一般化学反应法用于中药制剂鉴别应该 注意 以下几点：
(1)慎重使用 专属性不好的分析反应,如泡沫生成反应,三氯化铁显色反应等 。
(2)在分析前对样品进行分离,精制,除去干扰分析反应的物质,借此 改善 鉴别方法的 专属性 。
(3)采用 阴性对照和阳性对照 的方式,对拟定的鉴别方法进行反复验证,防止出现假阳性 。
第二节 中药制剂的一般理化鉴别法
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实例 1 牛黄解毒片中大黄、黄芩的定性鉴别反应取本品 6片 (去包衣 )，研细，加乙醇 10ml，温热
10分钟，过滤，滤液作如下反应：
(1)取滤液 5ml，加镁粉少量与盐酸 0.5ml，加热，
即显红色。 （黄芩中有大量 黄酮 ）
(2)另取滤液 4ml，加氢氧化钠试液，显红色，再加 30％过氧化氢溶液，加热，红色不消失，加酸或酸性时，红色变为黄色。（大黄中含有 羟基蒽醌 ）
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实例 2 牙痛一粒丸中蟾蜍、朱砂、雄黄的定性鉴别反应
(1) 取本品约 0.1 g，研细，加氯仿 5ml，浸泡 1小时，滤过，
滤液蒸干，残渣加醋酐少量使溶解，再滴加硫酸，初显蓝紫色，
渐变为蓝绿色。 （蟾蜍）
(2) 取本品约 0.2g，研细，加水湿润后，加氯酸钾的硝酸饱和溶液 2ml，振摇，放冷，离心，取上清液，加氯化钡试液
0.5ml，摇匀，溶液呈白色浑浊，离心，弃去上层酸液，再加水 2ml，振摇，沉淀不溶解。 （雄黄）
(3) 取本品适量，研细，用盐酸湿润后，在光洁的铜片上摩擦，铜片表面即显银白色光泽，加热烘烤后，银白色消失。
（朱砂）
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二,升华法操作方法：取金属片安放在有圆孔 (直径约 2cm)
的石棉板上,在金属片上放一小金属圈 (内径约
1.5cm,高约 0.8cm),对准石棉板上的圆孔,圈内放入预先研细成粉末的中药制剂一薄层,圈上覆盖载玻片,在石棉板下圆孔处用酒精灯缓缓加热,至粉末开始变焦,去火待冷,载玻片上有升华物凝集 。
将载玻片反转后,臵显微镜下观察结晶形状,色泽
,或取升华物加试液观察反应 。
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实例 牛黄解毒丸微量升华鉴别取本品进行微量升华，先得白色升华物后（ 冰片 ），继得黄色升华物（ 大黄中蒽醌 ）。将升华物分别臵显微镜下观察：白色升华物呈不定形的无色片状结晶，加新制的 1％香草醛硫酸溶液，渐显紫红色，黄色升华物呈黄色针状结晶或羽状结晶，遇碱显红色，遇酸变为黄色。
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四、荧光法有些中药材中含有能产生荧光的化学成分，在可见光、
紫外光照射下能发出荧光，或经试剂处理后发出荧光。含有这类药材的中药制剂可用荧光法进行鉴别。通常的操作方法是取制剂的提取液点在滤纸上或试纸上，臵紫外光灯下
(365nm)观察，有时则是加一定的试剂后再进行观察。
实例 l 元胡止痛片的荧光鉴别取本品适量，去糖衣，研细，取粉末 1g，加 0.25mol／ L
硫酸液 10ml振摇片刻，滤过，取滤液数滴，点于滤纸上，阴干后臵紫外光灯 (365nm)下观察，显亮黄色荧光。
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五、光谱法
(一 )可见－紫外分光光度法不同的药材所含的成分不同,在一定条件下吸收光谱的特征可用于鉴别药材 。 利用这一特点,可见 -紫外分光光度法也可用于中药制剂的鉴别 。
(二 )红外光谱法一个混合物的红外光谱，一般认为是该混合物各组分红外光谱的机械叠加，具全息光谱的特征。
一个中药制剂只要是按规定的处方、加工工艺,规范的药材制成,其红外光谱图就具有稳定性、重复性，就可以作为定性鉴别的依据。
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六、色谱法中药制剂可用色谱法鉴定，包括 薄层 色谱法,纸色谱法,气相 色谱法和 高效液相 色谱法。
(一 )薄层色谱法使用本法鉴定中药制剂，通常是在同一块薄层板上点入样品和适宜的对照物，采用同一条件依法层析展开，经显色或用其他方法检出色谱斑点后，将样品与对照物所得的色谱图进行对比，作出鉴定。
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1．样品应作适当的预处理对样品进行初步的分离精制。
常用的预处理方法有：升华法，蒸馏法，溶剂提取法，小型层析柱的柱色谱法、离子交换法等。
2．展开剂的选择 选用能突出主要斑点，便于分析比较的展开剂，如果鉴别的对象相同，应首先试用已有的、较成熟的展开剂。
如无现有展开剂，可先以无水乙醇 -苯（ 1∶4 ）
展开，如主要物质的 Rf在 0.8以上，改用苯 -氯仿
（ 1∶3 ），如主要物质的 Rf在 0.3以下，改用丙酮 -甲醇（ 1∶1 ）。
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3．对照品的选择 中国药典 (一部 )作薄层鉴别用的对照物有对照品和对照药材两种。
TLC用作中药制剂鉴别的另一类对照物是阴阳对照溶液。
4．薄层色谱的扫描定性鉴别 TLC展开后，斑点的检识方法，
有通用性的，如在紫外光灯下观察出现的荧光，或用碘蒸气、
稀硫酸、磷钼酸显色等，这类方法专属性不强。另一类是专属性较好的显色剂，例如碘化铋钾试液，茚三酮试液和三氯化铝试液等，一般可依次说明斑点归属。
还可用薄层扫描仪将薄层板上的斑点转换绘制成峰形色谱图,这种色谱图以斑点展开后移动的距离为横坐标,斑点对光辐射的吸收强度或发射荧光的强度为纵坐标的峰形曲线图谱 。
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应用实例 1.大黄及含大黄的成药
1）供试液制备 取各样品适量，加甲醇 20ml浸渍 1h，过滤，
取滤液 5ml，蒸干，加水 10ml使溶解，再加 HCl 1ml，水浴加热
30min，立即冷却，乙醚提取两次,20ml/次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿溶解成 1ml。
2）对照液制备 取大黄对照药材 0.1g．按 供试液制备 作为对照药材溶液；另取芦荟大黄素，大黄酸，大黄素，大黄素甲醚，大黄酚对照品，加甲醇制成 1mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3）薄层板 硅胶 H加 0.3％ CMC-Na溶液的自制板；厚度：
300μ m
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4）点样 分别点样 4μ L。
5）展开剂 石油醚 (30～ 60℃) -甲酸乙酯 -甲酸 (15∶5∶1) 放臵后的上层溶液。
6）展开方式 上行展开；展距,7cm。
7）显色 臵紫外光灯 (365nm)下检视。
8）色谱识别 紫外光灯 (365nm)下，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位臵上，显相同的五个橙黄色荧光主斑点。
9）备注 在部分成药样品的色谱中，除大黄的五个蒽醌成分的斑点外，尚有其它荧光斑点，为处方中的其它成分。
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1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17
样品,1．芦荟大黄素； 2．大黄酸； 3．大黄素； 4．大黄素甲醚；
5．大黄酚； 6．大黄 (掌叶大黄 )对照药材；
7．大黄 (唐古特大黄 )对照药材； 8．大黄流浸膏；
9．小儿化毒散； 10．槟榔四消丸； 11．木香槟榔丸；
12．枳实导滞丸； 13．牛黄上清丸； 14．清宁丸；
15．一捻金； 16．牛黄解毒片； 17．牛黄解毒丸
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2.黄连、黄柏及含黄连、黄柏的成药
1）供试液制备 取各品种药粉适量，加甲醇 5ml，
臵水浴回流 15min，过滤，滤液浓缩至 1ml。
2）对照液制备 取盐酸香槟酒小檗碱，硫酸黄连碱，硫酸表小檗碱，非洲防己碱，药根碱，盐酸巴马汀对照品，加甲醇制成每 0.5mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
3）薄层板 硅胶 G自制板；厚度,500um
4）点样 分别点样 1-2 μl
5）展开剂 苯 -醋酸乙酯 -甲醇 -异丙醇 -浓氨试液
(6∶3∶∶1.5∶1.5∶0.5) ；另槽中加入与展开剂等体积浓氨试液。
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6）展开方式 展开箱预平衡 15分钟；上行展开；
展距,8cm
7）显色 臵紫外光灯 (365nm)下检视。
8）色谱识别 中国药典黄连项下收载有味连，雅连，云连三种，总体分析黄连可见 4～ 5个主要的黄色荧光斑点，自下而上，分别为 l.非洲防己碱 +药根碱 (量少 )； 2.巴马汀； 3.小檗碱； 4.表小檗碱 (云连不含，雅连含量低 )； 5.黄连碱 (味连含量高 )。黄柏主要检出巴马汀及小檗碱，可与黄连区别。
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1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18
样品,1.黄连 (味连 )； 2.黄连； 3.黄连 (雅连 )； 4.黄连 (云连 )； 5.黄连 (野连 )；
6.黄连 (日本黄连 )； 7.小儿化毒散； 8.万应锭； 9.大补阴丸； 10.木香槟榔丸；
11.香连丸； 12.黄柏； 13.非洲防己碱； 14.药根碱； 15.巴马汀； 16.小檗碱；
17.表小檗碱； 18.黄连碱。
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冠心苏合丸的 薄层扫描 鉴别
（苏合香、冰片、乳香（制）、檀香、青木香）
乳香鉴别薄层扫描图苏合香鉴别薄层扫描图阴性对照阳性对照供试品
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薄层色谱过程中斑点异常现象的探讨
(一 )边缘效应
1,原因,当展开剂在薄层上运行时，极性较弱的展开剂和挥发较强的展开剂在薄层两边较易挥发，它们在薄层两侧的浓度比在中部的浓度小，因此产生了边缘效应。
2,克服方法
(1)采用单一展开剂以代替混合展开剂。
(2)采用共沸混合展开剂来代替一般混合展开剂。
(3)在展开槽内壁上贴以浸湿了展开剂的滤纸条，或用内容积较小封闭严密的展开槽。
(4)狭的薄层较宽的薄层边缘效应小，采用狭薄层代替宽薄层
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(二 )拖尾现象
1．产生之 原因 及 克服 方法
(1)点样量太多，展开剂不能全部负载。
克服方法：寻出合适之点样量后，再进行层析
(2)展开剂 pH值偏高。如以中性展开剂层析酸性物质时，常形成斑点拖尾。
克服方法,在展开剂中加入酸，使解离受到抑制，即可防止斑点拖尾。
(3)展开剂的 pH值偏低。如以中性展开剂层析生物碱和其它弱碱时，常观察到斑点拖尾。
克服方法：在层析 K值在 10-3～ 10-8的碱性化合物时，展开剂应调至碱性 (如加入吡啶、二乙胺等 )。
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(4)吸附剂 pH的影响。 由于化合物与薄层上的酸、碱成盐而产生拖尾现象。
克服方法：换用 pH合适的吸附剂或调整展开剂的
pH，如加入酸或碱等。
(5)吸附剂和展开剂中 痕迹量的金属离子 (如 Ca2+,Mg2+
等 )，使层析后的斑点形成拖尾。特别是被展开的化合物具有 -COOH及酚 -OH等基团时。
克服方法：采用纯净的酸来洗涤和处理吸附剂,可加乙二胺四醋酸二钠（ EDTA)处理。展开剂可用精制的方法来除去金属离子。
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(三 )斑点形成念珠状
1.产生之原因及克服方法
(1)单一的化合物在层析过程中分解成二个或更多的化合物。
这些化合物是十分相似的,Rf值也极相似，以致彼此重叠。
克服方法：设法防止在层析过程中化合物的分解。如控制 pH
值，防止水解等。
(2)被层析的检样中组分太多，以致在一定长度的薄层上排布不开，彼此重叠，形成念珠状。
克服方法：将检样用不同溶剂分段萃取，使成为二个或数个检样；或适当增长薄层板的长度，延长层析距离；或进行双向展开。
(3)点样在原点处形成复斑。有时由于检样浓度太稀，常进行多次点样。这样容易造成每次点样中心不重合，形成具有复斑的原点 (念珠状的雏形 )，展开后往往形成念珠状。
克服方法：用浓度适宜的检样一次点样。
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同时 注意：
层析时控制恒定温度；
新鲜配制的展开剂，最好只使用一次；
一般情况下，硅胶、氧化铝的粒度在 200目左右为宜，活度一般在 1～ Ⅱ 级。使用前吸附剂应充分混合。
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(二 )纸色谱法
(三 )气相色谱法气相色谱法的分离效能高,检测器种类多而且灵敏度高,是混合物鉴别的有效方法 。 该法目前主要是用于含 挥发油和挥发性 成分的制剂分析 。
(四 )高效液相色谱法主要是利用化合物在特定的色谱柱上,在一定条件下的保留值,将某一样品与其对照品在同一条件下,
进行 保留时间 的直接比较作为鉴别依据 。 对于复杂未知成分,也可以加入对照品,观察被测峰是否增高,
以初步作定性结论 。 对于复杂组分尚可采用联机技术
,如本法与质谱联用,先分离后再作定性鉴别 。
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