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第五章 各类中药制剂分析赵碧清
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中药制剂的分类丸剂,胶剂,膏药,颗粒剂,滴眼剂散剂,合剂,露剂,糖浆剂,软膏剂片剂,酒剂,茶剂,滴丸剂,注射剂锭剂,酊剂,搽剂,胶囊剂,滴鼻剂栓剂,巴布膏剂,橡胶膏剂气雾剂喷雾剂,煎膏剂（膏滋）
流浸膏剂与浸膏剂
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注射用双黄连（冻干）
处方,连翘、金银花、黄芩检查,pH值、水分、蛋白质、鞣质、树脂、草酸盐、钾离子、重金属、砷盐、热原、无菌、
溶血与凝聚
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第一节 中药注射剂的分析注射剂系指药材经提取、纯化后制成的注入体内 溶液,乳状液 及供临用前配制成溶液的粉末或浓溶液的 无菌制剂 。
注射剂是直接注入人体的制剂，显效快，毒副反应也快，必须严格要求其质量。除应照药典要求对其进行 无菌检查,热原,澄明度 检查等一般注射剂质量检查外，还应根据中药注射剂的特点进行有关的检测。
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一、一般质量要求澄明度检查 －－,澄明度检查细则和判断标准,
无菌检查 －－照,药典,附录 ⅩⅢ B 无菌检查法 进行装量差异应符合规定
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除另有规定外，注射用 无菌粉末 照下述方法检查，
应符合规定。
取供试品 3瓶（支）,除去 标签、铝盖，容器外壁用乙醇擦净、干燥。开启时注意避免玻璃屑等异物落入容器中，分别迅速 精密称定,倾出 内容物，
容器用水或乙醇洗净，在适宜条件下干燥后再分别精密称定 每一容器的重量，求出每瓶（支）的装量与平均装量。每瓶（支）装量与平均装量相比较，
应符合表中规定。如有 1瓶（支）不符合规定，应另取 10瓶（支）复试，均应符合规定。
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平均装量 装量差异限度
0.05g及 0.05g以下 〒 15％
0.05g以上至 0.15g 〒 10％
0.15g以上至 0.50g 〒 7％
0.50g以上 〒 5％
凡规定检查 含量均匀度 的注射用无菌粉末，一般不再进行装量差异检查。
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不溶性微粒静脉滴注用注射液 水溶液,注射用 无菌粉末,
按临床使用浓度配制后，照注射剂中不溶性微粒检查法（附录 Ⅸ R ）检查，应符合规定。
装量为 100ml以上的静脉滴注用注射液，每毫升中含 10μ m以上的微粒不得过 20粒，含 25μ m以上的微粒不得过 2粒。
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二、特殊要求检查
pH值检查 pH值一般应在 4.0-9.0之间，但同一品种的 pH
允许差异范围不超过 1.0。
蛋白质检查 除另有规定外，取注射液 1ml，加新配制的
30％磺基水杨酸试液 1ml，混合，放臵 5分钟，不得出现浑浊。注射液中如含有遇酸能产生沉淀的成分，可改加 鞣酸试液 1～ 3滴，不得出现浑浊。
鞣质检查
--取注射液 1ml，加新配制的含 1％ 鸡蛋清 的生理盐水
5ml，放臵 10分钟，不得出现浑浊或沉淀。
--取注射液 1ml，加 稀醋酸 1滴，再加 氯化钠明胶试液
4～ 5滴，不得出现浑浊和沉淀。
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※ 含有聚乙二醇、聚山梨酯等聚氧乙烯基物质的注射液，
虽有鞣质也不产生沉淀,对这类注射液应取未加附加剂前的半成品检查。
树脂检查 另有规定外，取注射液 5ml，加 盐酸 1滴，放臵
30分钟，应无絮状物析出。注射液中如含有遇酸能产生沉淀的成分，可改加 氯仿 10ml振摇 提取,分取氯仿液，臵水浴上蒸干，残渣加冰醋酸 2ml使溶解，臵具塞试管中，加水 3ml，
混匀，放臵 30分钟，应无絮状物析出。
草酸盐检查 静脉注射用注射液水溶液除另有规定外，
取注射液 2ml，用稀盐酸调节 pH值至 1～ 2，滤过，滤液调节 pH值至 5～ 6，加 3％ 氯化钙 溶液 2～ 3滴，放臵 10分钟，
不得出现浑浊或沉淀。
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钾离子检查 应 在 1.0mg/ml以下四苯硼酸钠法,除另有规定外，取静脉注射用注射液 2ml,蒸干,
先用小火炽灼至 炭化,再在 500～ 600℃ 炽灼至完全灰化，加稀醋酸使 溶解 。臵 25ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液。取 10ml纳氏比色管两支，甲管中精密加入标准钾离子溶液 0.8ml，加碱性甲醛溶液 (取甲醛溶液，用 0.1mol／ L氢氧化钠溶液调节 pH值至 8.0～ 9.0)12滴,3％乙二胺四醋酸二钠溶液 2滴,3％四苯硼钠溶液 0.5ml，加水稀释成 10ml，乙管中精密加入供试品溶液 1ml，与甲管同时依法操作，摇匀，甲、乙两管同臵黑纸上，自上向下透视,乙管中显出的 浊度 与甲管比较，
不得更浓。
其它,重金属、砷盐、水分、炽灼残渣、色泽等
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三、安全性检查热原检查 一定量的注射剂，注入家兔体内，在规定时间，观察家兔体温升高的情况。注射剂量一般为 1-5ml/kg计，静脉滴注按人体剂量的 3-10倍量计。
刺激性检查 肌肉刺激性检查、血管刺激性检查过敏反应 全身主动性过敏试验、被动皮肤过敏试验；根据药物作用特点选择其他过敏反应的试验。
溶血试验 — 观 察注射液使 2%红细胞混悬液溶血或凝聚的情况。要求 0.3ml注射液在 2小时内不产生溶血作用异常毒性 --系将一定剂量的供试品溶液注入小鼠体内或口服给药，在规定时间内观察小鼠死亡情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。
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中药注射剂的鉴别方法一般以化学法和薄层色谱法应用较多 。 含量测定应选择灵敏度高,准确度高的仪器分析方法 。
四、质量分析规定中药注射剂在 固定中药材品种,产地 和 采收期 的前提下,需制定中药材,有效部位或中间体,
注射剂的指纹图谱 。
中药材、中药注射剂指纹图谱是指中药材、中药注射剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材、注射剂特性的共有峰图谱。
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中药指纹图谱一、概述
★ 中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析技术，得到的能够标示其化学特征的 色谱或光谱图 。
★ 中药指纹图谱是一种综合的，可量化的检验技术，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药及其制剂质量的真实性、优良性和稳定性。,整体性,和,模糊性,
为其显著特点。
★ 中药指纹图谱涉及多种光谱法和色谱法，其中色谱法为主流方法，尤其是 HPLC,TLCS和 GC已成为公认的三种常规分析手段。
由于 HPLC具有分离效能高、选择性高、灵敏度高、速度快、应用范围广等特点，大多数中药成分可在高效液相色谱仪上进行分析，且积累了丰富的经验。因此 高效液相色谱法 已成为中药指纹图谱的 首选 方法。
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中药指纹图谱举例银杏提取物的 HPLC指纹图谱陈皮的薄层色谱指纹图谱
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★ 中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法都不足以解决这一问题。
建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行 整体 描述和评价。这也正好符合中医药整体学说。在此基础上，如果进一步开展 谱效学研究，可使中药质量与其药效真正结合起来，有助于阐明中药作用机理。
总之，中药指纹图谱的研究和建立，对于提高中药质量，促进中药现代化具有重要意义。
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★ 美国食品药品管理局（ FDA）、世界卫生组织（ WHO）以及欧共体（ EEC）等均在有关文件中指出可使用指纹图谱控制和评价中药（天然药物）的质量。故指纹图谱已被国际医药界认可。
目前我国已规定中药注射剂质量标准中必须建立指纹图谱检测方法，并对此作出了具体的技术要求。此外，该方法在中药材规范化生产（ GLP）实施过程中亦得到广泛的应用。
作为一项新技术，中药指纹图谱在实际应用中还面临许多问题。
只有进一步加强中药材和中成药生产的规范化，中药化学成分和中药药理研究的系统化和标准化，才能保证中药质量的稳定性，
从而促进中药指纹图谱的建立和实施。
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二、指纹图谱对高效液相色谱仪的要求
（一）选择在线脱气流动相在使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体 O2等。脱气的方法有离线式脱气和 在线式脱气 。离线式脱气有吹氦脱气法、加热回流法、抽真空脱气法、超声波脱气法等。在线式脱气技术是把真空脱气装臵串接到贮液系统中，
并合膜过滤器，实现流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。在线式脱气法的脱气效果明显优于离线式脱气法，并适用于多元溶剂系统。
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（二）选择低压梯度洗脱梯度洗脱是指对多元溶剂系统在洗脱过程中连续或间断地改其组成比例，以调节它的极性，使每个流出组分获得最佳分离结果。此法在中药指纹图谱分析中广泛应用。
梯度洗脱可分为 高压梯度洗脱 和 低压梯度洗脱 两种方式。
低压梯度洗脱是在常压下将多元溶剂输至混合器中混合，然后用压输液泵将流动相输入色谱中，其 优点 是：①仅需使用一个高压输液泵；②减少了溶剂可压性的影响，并能完全消除由溶剂混合引起的热力学体积变化所带来的误差。
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（三）选择六通阀手动进样目前常用的进样装臵有六通阀手动进样器和自动进样器。前者重现性较好，且价格适中，可以满足中药指纹图谱研究中对样品进样的基本要求。
Load
inject
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（四）色谱柱的选择一般选用于 5~10μm C 18
填料柱，以 4.6mm〓 250mm较适宜。其他特殊填料的色谱柱，
如辛基柱（ C8）,氨基柱（ NH2）,腈基柱（ CN）,硅胶柱（ Silica）、酸性柱和碱性柱等，可视研究对象的不同而采用。
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（六）选择柱温箱在不同柱温下同一成分的保留时间往往发生迁移，有时还会影响成分的分离效果。由于中药样品成分的复杂性，尤其是中药指纹图谱要求色谱峰的相对保留时间、峰面积比值应相对恒定，因此对柱温应严格控制，以保证分析方法的重现性。
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（七）首选紫外检测器（ UVD）
大多数中药成分在可见或紫外光区有吸收，故 UVD在现代高效液相色谱中应用最广泛。其特点是灵敏度高、线性范围宽，对流动相的流速和温度变化不敏感，波长可选择，可用于梯度洗脱。
此外，蒸发激光散射检测器（ ELSD）和二极管陈列检测器
（ DAD）在中药指纹图谱分析中亦有重要作用。 ELSD适用于皂苷、多糖等无紫外吸收的成分； DAD可以获得吸收度 -波长 -时间的三维光谱 -色谱图，这对于色谱峰的定性分析和纯度检查是十分重要的。
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三、中药指纹图谱建立的原则和步骤
（一）一般原则中药指纹图谱的建立应以系统的化学成分和药理学研究为依托，体现系统性、特征性和稳定性三基本原则。
1.系统性 是指指纹图谱中反映的化学成分应包括该中药有效部位所含大部分成分，或全部指标性成分，如中药两头尖中抗肿瘤的有效成分为皂苷类化合物，则其指纹图谱应尽可能地反映其中的皂苷类成分；银杏叶的有效成分是黄酮和银杏内酯类，则其指纹图谱可采用两种方法，针对这两类成分分别分析，达到系统全面的目的。
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2.特征性 是指指纹图谱中反映的化学信息（如保留时间等）应具有较强的专属性，这些信息的综合结果，将能明确地区分中药的真伪与优劣，成为中药自身的,化学条码,。
例如，北五味子的 HPLC指纹图谱和 TLC指纹图谱，不仅包括多种的五味子木脂素类成分，而且具有许多知类成分，这些成分的峰位顺序、峰高或峰面积比值在一定范围内是固定的，并且随药材品种不同而产生差异，据此可以很好地区别其来源、
产地、判别药材的真伪优劣。
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3.稳定性 是指所建立的指纹图谱在规定的方法、条件下的耐用程度，即不同操作者、不同实验室所重复做出的指纹图谱应在所允许的误差范围内，以体现其通用性和实用性。因而要求包括样品制备、分析方法、实验过程、数据采集、处理、分析等全过程都要规范化操作，同时，还应建立相应的评价机构，对其进行客观评价。
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（二）一般步骤（以注射剂为例）
设计方案 → 收集样品 → 制备供试液 → 选择参照物 → 优化 实验条件 → 建立标准指纹图谱及其技术参数
1,方案的设计
（ 1）研究对象的确定 在充分调研的基础上确定成品中的药效成分，作为成品和中间体指纹图谱的研究对象，即检测目标。例如，黄芪含黄酮、皂苷及多糖三类有效成分，黄芪多糖注射液及其中间体的指纹图谱则以多糖为研究对象，黄芪原药材的指纹图谱应把黄酮、皂苷及多糖作为研究象。
复方注射剂应以君药、臣药中的有效成分作为指纹图谱的主要研究对象，佐使药中的成分可采用其它方法进行辅助补充性研究 。
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（ 2）研究方法的选择 应根据研究对象的物理化学性质来选择相应研究方法。大多数化合物可采用 HPLC。例如黄芪中黄酮、皂苷、多糖等。挥发性成分应采用 GC。例如鱼腥草中的鱼腥草素、土木香中的土木香内酯等。此外，还可考虑使用 TLC和 CE。
一个中药制剂的指纹图谱可以同时采用多种方法进行研究。
当然还需考虑药品检验系统复核时的设备、技术等因素。
（ 3）研究内容 主要研究内容有原药材、中间体、注射剂的指纹图谱，涉及样品名称、来源、制备、测定方法，指纹图谱及技术参数等。
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2,样品的收集 （注意样品的代表性）
(1)至少要收集 10个 批次样品，切不可将同一批次样品分散成数个批次充当样品。
(2)原药材尽可能固定产地 (来自 GAP基地药材,道 地药材 )、采收期、炮制方法。对光线稳定，疗效稳定，无临床不良反应的药材批次应重点选择。还应收集不同产地、不同采收期的药材，以便进行指纹图谱的比较研究。
(3)中间体、注射剂样品的收集应重点选择工艺稳定，疗效恒定，
无不良反应的批次。
(4)留样应不少于实验用量的 3倍。
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3,供试品溶液的制备
（ 1）药材供试液的制备 根据所含成分的理化性质，通过溶剂提取，液液萃取、沉淀、吸附等方法，分离富集样品。例如，黄芪中黄酮类成分通过碱的萃取；皂苷类通过大孔吸附树脂吸附；苦参中总生物碱通过阳离子交换树脂分离；挥发性样品常用水蒸汽蒸馏法制备。
样品富集后，还需通过氧化铝预柱,C18预柱、硅胶预柱或聚酰胺预柱等，除去色素等杂质，最后通过微孔滤膜，供 HPLC测试。
（ 2）中间体供试液制备 可针对有效成分处理，并参照原药材供试液制备方法。
（ 3）注射剂供试液制备 液体注射剂一般无需特殊处理，可直接分析检测
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4,参照物的选择一般选取样品中容易获得且含量较高的一个主要活性成分或指标成分作为参照物。参照物主要用于指纹图谱技术参数的确定，如特征峰 (共有峰 )的相对保留时间，峰面积比值等。
并有助于图谱的稳定性、重现性的考查。例如三七药材的指纹图谱中以 三七皂苷 R1为参照物（ S） 。由于指纹图谱比较复杂，内标物不易选择、插入，故一般不以内标物做为参照物 。
1.三七皂苷 R1（ S）
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5,实验方法和条件的优化其目的是通过比较实验，从中选取相对简单易行的方法和条件，获取足以代表品种特征的指纹图谱，以满足指纹图谱的专属性、重现性和普适性的要求。
方法和条件须经过严格的方法学验证。例如稳定性试验，
精密度试验，重现性试验等。
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【 注意事项 】
① 供试液的制备和色谱分析时均须 定量操作 以保证图谱在整体特征上进行半定量 (差异程度或相似程度 )的比较。
②指纹图谱分析 不同于含量测定,提高其分离度应以不牺牲色谱的整体特征为前提，故 不应孤立地苛求分离度 达到含量测定的要求。
③采用 HPLC和 GC制定指纹图谱，记录时间一般为 1小时 。
(实测 2小时 )。
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6,标准指纹图谱及其技术参数的建立
(1)测得的大量色谱数据需经分析和数据处理，才能获得标准指纹图谱 (拟合指纹图谱 )及其技术参数，以此作为评价药品指纹图谱的依据。
(2)技术参数主要包括 总峰面积,共有峰序号,参照峰 (S),共有峰相对保留时间 (RRT),共有峰峰面积比值 (RA)和 非共峰面积 等。
共有峰 亦称特征峰（包括参照峰）系指所有被检批次中均含有的相同色谱峰，主要来源于样品中主要有效成分或指标成分。共有峰的化学归属，可采用对照品加入法或 HPLC/DAD/MS/MS联用技术进行鉴别，后者可在无对照品的情况下使用 。
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（ 3）指纹图谱相关性的考察注射剂中各特征峰均可在原药材及中间体指纹图谱中得到追踪，以验证所建指纹图谱的正确性。中间体与注射剂的指纹图谱应非常接近，药材图谱中的色谱峰应比注射剂多。必要时可采用加入某一原药材，有效部位或中间体的供试品或制备某一原药材，有效部位或中间体阴性供试品的方法标定各指纹图谱之间的相关性。应提供相关性研究的指纹图谱。
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四、药品指纹图谱的评价药品指纹图谱的评价系指以建立起来的标准指纹图谱为依据，将样品指纹图谱与之进行相似性分析比较，从而对药品质量做出判断和评价。
中药指纹图谱的评价不同于含量测定，它强调的是 相似性
(Similarity)，而不是相同性 (Identity)，也即着重辨识完整图谱,面貌,,而不是求索细枝末节。分析比较的目的是对供试品与对照品之间的差异或一致性作出的评价。
相似性的比较可以用,相似度,表示，相似度可借助国家药典委员会推荐的,中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件,计算，一般情况下相似度在 0.9～ 1.0之间即符合规定。
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第二节 液体中药制剂的分析液体中药制剂用药材提取物制备的液体制剂合剂、糖浆剂、酒剂、茶剂、酊剂滴鼻剂、滴眼剂、露剂、搽剂等
（无植物组织与细胞，故无显微鉴别）
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1、合剂与口服液合剂系指药材用水或其他溶剂，采用适宜方法提取，经浓缩制成的内服液体制剂。
（单剂量合剂也可称为,口服液,）
2、酒剂和酊剂酒剂 药材用蒸馏酒提取制成的澄清液体制剂酊剂 药物用规定浓度的乙醇提取或溶解而制成的澄清液体制剂
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一、一般质量要求：
（一）性状 ——气味、沉淀
（二）相对密度（合剂、口服液）和总固体含量（酒剂）
相对密度测定,比重瓶和韦氏比重称总固体的含量测定方法一：
无水乙醇搅拌提取后挥干测定 → 含糖、蜂蜜的酒剂方法二：
直接取上清液挥干测定 → 不含糖、蜂蜜的酒剂
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（三） pH值 与稳定性有关一般应对合剂和口服液的 pH值作出规定
（四）装量差异单剂量灌装的合剂、口服液,装量差异检查；
合剂、酒剂、酊剂,最低装量检查；
检查方法：
取供试品 5支，将内容物分别倒入经校正的干燥量筒内，室温下检视，每支装量与标示装量相比较，少于标示装量的不得多于 1支，并不得少于标示装量的 95%。
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（ 五）乙醇量：酒剂、酊剂测定方法,气固色谱法 或蒸馏法
（六）甲醇量酒剂中每 1L供试液含甲醇量不得超过 0.05％。
（七）防腐剂量山梨酸 （ CH3CH=CHCH=CHCOOH）
性质,微溶于水，易溶于乙醇、乙醚，可溶于碳酸氢钠溶液，极易随水蒸干挥发
HPLC测定,C18色谱柱，甲醇 -水 -乙酸,260nm
检测
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（八）微生物限度标准细菌数
（个 /ml）
霉菌、酵母菌数（个 /ml）
大肠杆菌
（个 /ml） 其他合剂 100 100 不得检出酒剂 500 100 不得检出 外用酒剂和酊剂均不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。酊剂 100 100 不得检出
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二、质量分析的特点：
当处方中药味 较少 且有效成分明确时，选择有效成分作为质控指标，如大黄口服液中的蒽醌衍生物；
对于药味 较多 的处方，则可选择一个或几个有代表性的成分作为质控指标。
对于处方药味较多，成分复杂，选择质控指标成分有困难的酒剂，可采用测定药酒总固体量的方法控制其质量。
合剂,属水性液体制剂；含杂质量较大，有一定的粘度，大多需净化分离后方能进行。常用的净化方法有液 -液萃取法及柱色谱法。
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酒剂和酊剂：
含醇量较高，杂质较少，澄明度也好，样品的前处理相对较易。对一些成分复杂的样品，仍需经净化分离后进行分析。
常用净化方法：
酒剂或酊剂：加热蒸去乙醇，然后再用适当的有机溶剂萃取。
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双丹口服液处方,丹参、牡丹皮制法,以上 2味，牡丹皮蒸馏，蒸馏液另器收集，药渣和丹参加水煎煮二次，第一次 2h，第二次 1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为 1.14～ 1.16（ 60℃ ）的清膏，加乙醇使含醇量达 60％，混匀，冷藏 24h，滤过，滤液回收乙醇至相对密度为 1.14～ 1.16（ 60℃ ）的清膏，加入牡丹皮蒸馏液和水至约
900mL，混匀，冷藏 48h，滤过，滤液加入蜂蜜 150g，苯甲酸钠
3g，加水至 1000mL，摇匀，灌装，即得。
性状,本品为红棕色的液体；味辛，微苦。
鉴别,丹皮酚 TLC检查
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检查,相对密度 不低于 1.05
pH应为 4.0～ 5.0
含量测定,HPLC 测丹皮酚
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第三节 半固体中药制剂的分析半固体中药制剂,
流浸膏剂、浸膏剂、糖浆剂、煎膏剂等一、一般质量要求
（一）性状 ——气味、澄清度、沉淀除另有规定外，流浸膏剂每 l毫升应相当 1克原药材；浸膏剂每 1ml相当 2～ 5克原药材。
（二）乙醇量流浸膏剂至少含 20%乙醇。
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（三）含糖量除另有规定外，糖浆剂含蔗糖量一般不低于
45%(g／ ml)；煎膏剂中加炼蜜或糖 (或转化糖 )的量 —般不超过清膏重量的 3倍 。
（四） pH值：糖浆剂
（五）相对密度和总固体含量凡加药材细粉的煎膏剂，不再检查相对密度
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（六）不溶物：煎膏剂测定方法取供试品 5g，加热水 200ml，搅拌使溶解，放 3min
后观察，不得有焦屑等异物（微量细小纤维、颗粒不在此限）。
（七）装量差异单剂量灌装的糖浆剂必须作装量差异检查流浸膏剂、浸膏剂、煎膏剂应作最低装量检查
（八）微生物限度标准细菌数不得超过 100个 /g，霉菌数、酵母菌数不得超过 100个 /g，均不得检出大肠杆菌。
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二、质量分析的特点由单味药组成时，相对杂质较少，个别制剂可经稀释后直接测定。
指标成分不清楚，可通过测定浸出物含量或总固体含量的方法来模糊地控制其质量。
糖浆剂分析前常需分离、净化处理。
煎膏剂在预处理时可先加水或稀醇稀释；可向煎膏剂中加适量的惰性材料低温烘干后，按固体样品处理。
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第四节 固体中药制剂的分析固体中药制剂：
丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、栓剂、滴丸剂一、丸剂 一般质量要求性状 ——外观、色泽、口感等水分含量除另有规定外，大蜜丸、小蜜丸、浓缩蜜丸中含水分不得超过 15%；水蜜丸、浓缩水蜜丸不得超过 12%；
水丸、糊丸、浓缩水丸不得超过 9%；微丸按其所属丸剂类型的规定制定；蜡丸不检查水分。
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重量差异或装量差异溶散时限 （大蜜丸、蜡丸除外）
蜡丸：崩解时限检查微生物限度检查细菌数
（个 /g）
霉菌、酵母菌数（个 /g）
大肠杆菌（个
/g）
不含原药材粉 1000 100
均不得检出含原药材粉 30000 100
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质量分析的特点
1、样品的预处理
2、样品的提取
3、样品的净化
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二、片剂（浸膏片、半浸膏片、全粉片）
1、性状 外观完整光洁，色泽均匀
2、重量差异取供试品 20片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定每片的重量，每片重量与标示片重相比较（凡无标示片重的应与平均片重相比较），超出限度的不得多于 2片，
并不得有 1片超出限度一倍。
0.3g以下 〒 7.5％
0.3g或 0.3g以上 〒 5％
※ 除薄膜衣片按上述检查法检查外，糖衣片与肠溶衣片应在包衣前检查片芯的重量差异，符合规定后，方可包衣，包衣后不再检查重量差异 。
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3、硬度（脆碎度） ——内控标准通过加压测定硬度。中药压制片硬度在 2-3kg
为好。
4、脆碎度 ——振荡后，检查药片的损坏程度
5、含量均匀度检 查小剂量片剂中单剂含量偏离标示量的程度。
凡检查含量均匀度的制剂不再检查重（装）量差异。
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检查对象
① 标示量小于 10mg、主药含量小于每片重量 5%
② 标示量小于 2mg、主药含量小于每片重量 2%
③ 复方制剂仅检查符合上述条件的组分操作法
①取供试品 10片,分别测定每片以标示量为 100的相对含量 X
② 求其均值 X
③ 标准差 S
④ A = 100 - X
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结果判断
② A+S＞ 15.0
不符合规定符合规定
① A+1.80S≤15.0
复试
⑤ A+1.45S＞ 15.0
不符合规定
④ A+1.45S≤15.0
符合规定
③ A+1.80S＞ 15.0
且 A+S ≤15.0
另取 20片复试
S
A
58
6、崩解时限
（除规定检查溶出度或释放度以及供含化片、咀嚼的片剂除外）
7、溶出度片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度
8、微生物限度检查细菌数
（个 /g）
霉菌、酵母菌数（个 /g）
大肠杆菌（个
/g）
不含原药材粉 100 100 均不得检出含原药材粉 10000 100
59
黄杨宁片 （含黄杨宁）
【 检查 】 含量均匀度 取本品 10片，分别臵量瓶中
（ 0.5mg,50ml； 1mg,100ml），各加 0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液至刻度,80℃ 水浴恒温 1.5小时后取出，冷却至室温，摇匀，离心 6分钟（每分钟转速
3000转），分别取上清液作为供试品溶液，照含量测定项下的方法测定含量。每片的含量与平均含量相比较，差异大于 〒 15%的不得多于 1片，并不得超过 〒 25%。 其他 应符合片剂项下有关的各项规定
（附录ＩＤ）。
60
三、颗粒剂可溶性颗粒剂、混悬性颗粒剂和泡腾性颗粒剂
1、性状干燥、颗粒均匀、色泽一致
2、粒度除另有规定外，取单剂量分装的颗粒剂 15袋
（瓶）或多剂量分装的颗粒剂 1包（瓶），称定重量，
臵药筛内过筛，过筛时，将药筛保持水平状态，左右往返轻轻筛动 3分钟，不能过 1号筛和能过 4号筛的颗粒与粉末总和不得大于 8.0%
3、水分,不得超过 5.0%
61
4、溶化性取供试品 10g，加热水 20倍，搅拌 5分钟，立即观察。
5、装量差异
6、微生物限度检查细菌数
（个 /g）
霉菌、酵母菌数（个 /g）
大肠杆菌
（个 /g）
不含原药材粉 1000 100 均不得检出含原药材粉 10000 100
62
四、散剂 内服散剂、外用散剂
1、性状,干燥、疏松、混合均匀、色泽一致
2、粒度,通过六号筛的粉末重量不得少于 95％。
3、均匀度取供试品适量臵光滑纸上，平铺约 5cm，将其表面压平，在亮处观察，应呈现均匀的色泽，无花斑、
色斑。
4、水分 （不得过 9.0%）
5、装量差异
63
5、微生物限度检查细菌数（个 /g） 霉菌、酵母菌数
（个 /g）
大肠杆菌
（个 /g）
其他一般散剂 30000 100 不得检出口服兼外用散剂
30000 100 不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。
阴道用散剂 100 10
除对已知有效成分选择适宜的方法进行定性,定量分析外,重点应注意对剧毒成分和贵重药材进行分析 。 应注意样品的代表性,药材粉末中具有形态特征的组织碎片是显微鉴别的重要依据,可用于判断制剂的真伪 。
64
五、栓剂性状,药物与基质混合均匀，外观完整、光滑重量差异融变时限硬度 （内控标准）
微生物限度检查细菌数（个 /g） 霉菌、酵母菌数
（个 /g）
其它一般栓剂 10000 100 均不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。用于溃疡出血的栓剂 100 10
65
栓剂是药物和基质混合制成的一种固体制剂，
常用的基质可分为油脂性基质和亲水性基质。
油脂性基质：将栓剂切成小块 → 加适量水 → 温水浴上加热 →
使其融化 → 搅拌一定时间 → 取出于冰浴中再使基质凝固 → 水溶液滤出,反复 2至 3次 → 水溶性成分 。
除去基质的方法有：
将栓剂与硅藻土等惰性材料混合、研匀，转入回流提取器中，用适宜的溶剂回流提取。亲水性基质 → 用有机溶剂提取，
油脂性基质 —— 水或稀醇提取。
被检测成分为生物碱时：栓剂 (脂肪性栓 ) + 氯仿或其它有机溶剂溶解 → 臵分液漏斗 → 加适宜浓度的盐酸或硫酸 → 至生物碱提尽 → 合并酸液 → 碱化 → 有机溶剂提取 → 供试品溶液 。
66
六、滴丸剂性状 大小均匀、色泽一致重量差异溶散时限微生物限度标准细菌数不得超过 1000个 /g，霉菌数、酵母菌数不得超过 100个 /g，不得检出大肠杆菌。
67
第五节 外用膏剂的分析外用膏剂：软膏剂、膏药、橡皮膏剂、巴布膏剂一、软膏剂粒度 不得检出大于 180μm 的粒子。
装量无菌微生物限度标准细菌数不得超过 1000个 /g，霉菌数、酵母菌数不得超过 100个 /g，不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。
68
一般软膏剂分析时可采用：
1、基质滤除测定法称取一定量软膏，加入适当溶剂，加热，软膏液化，放冷，基质凝固，将基质与上清液分开。重复多次，合并滤液后测定。
2、提取分离法在适宜的酸或碱性介质中先用不混溶的有机溶剂将基质提取后除去，再进行测定。
3,软膏中被测物为无机化合物,可经 灼烧,基质分解除尽 。 对灼烧后的无机化合物进行测定 。
4,离心法加适宜的溶剂,混匀,再离心,滤过,分析滤液
69
二、膏药外观 乌黑光亮、油润细腻、老嫩适度、摊涂均匀，无红斑、无飞边缺口，加温后能粘贴于皮肤上且不移动。
重量差异 取供试品 5张，分别称定出总重量。剪取单位面积 (cm2)的裱背称定，折算出裱背重量。
膏药总重量减去裱背重量即为药膏重量，与标示重量相比较不得超出,中国药典,中规定的范围。
标示重量 重量差异限度
3g或 3g以下 〒 10％
3g以上至 12g 〒 7％
12g以上至 30g 〒 6％
30g以上 〒 5％
70
三、橡胶膏剂含膏量取供试品 2片 (每片标示面积大于 35cm2，切取 35cm2)，
除去盖衬，精密称定重量，臵有盖玻璃容器中，加适量溶剂
（如氯仿、乙醚等 ）浸渍，并时时振摇，待布与膏料分离后，
将布取出，用上述溶剂洗涤至布上不残附膏料，挥去溶剂，
在 105℃ 烘箱中干燥 30分钟，移臵干燥器中，冷却 30分钟，精密称定，减失重量即为膏重，按标示面积换算成 100cm2的含膏量，应符合各该品种项下的有关规定。
黏附性
71
耐热实验除另有规定外，取供试品 2片，除去盖衬，臵 120℃ 烘箱中加热 30分钟，放冷后，膏背面应无泛黄及渗油现象；用手指触试膏面，应仍有黏性。
少林风湿跌打膏 (生川乌、生草乌、乌药等 )
【 检查 】 含膏量 照橡胶膏剂含膏量测定法（附录
Ⅰ Q ）用乙醚作溶剂，每 100cm2应不少于 1.5g。
其他 应符合橡胶膏剂项下有关的各项规定
（附录 Ⅰ Q ）。
72
四、巴布膏剂黏附性试验取供试品 3片，在室温下，除去盖衬，臵于长 30cm、
与水平面成 15° 或 30° (按各该品种项下规定 )的斜面滚球装臵中央，膏面向上，斜面上部 10cm及下部 15cm
用 0.025mm厚的涤纶薄膜覆盖，中间留出 5cm膏面，将各该品种项下规定的钢球，自斜面顶端自由滚下。 3
片供试品中应有 2片或 2片以上能在测试段上粘住钢球，
如有 1片不能粘住，再用较小 1号的钢球试验，应能粘住。如只有 1片能粘住钢球，而另 2片只能粘住较小
1号的钢球，则应另取 3片复试。 3片均应能粘住钢球为合格。
73
赋形性试验取供试品 1片，臵 37℃,相对湿度 64％的恒温恒湿箱中 30分钟，取出，用夹子将供试品固定在一平整钢板上，钢板与水平面的倾斜角为 60°,放臵
24小时，膏面应无流淌现象。
含膏量
74
END
第五章 各类中药制剂分析赵碧清
2
中药制剂的分类丸剂,胶剂,膏药,颗粒剂,滴眼剂散剂,合剂,露剂,糖浆剂,软膏剂片剂,酒剂,茶剂,滴丸剂,注射剂锭剂,酊剂,搽剂,胶囊剂,滴鼻剂栓剂,巴布膏剂,橡胶膏剂气雾剂喷雾剂,煎膏剂（膏滋）
流浸膏剂与浸膏剂
3
注射用双黄连（冻干）
处方,连翘、金银花、黄芩检查,pH值、水分、蛋白质、鞣质、树脂、草酸盐、钾离子、重金属、砷盐、热原、无菌、
溶血与凝聚
4
第一节 中药注射剂的分析注射剂系指药材经提取、纯化后制成的注入体内 溶液,乳状液 及供临用前配制成溶液的粉末或浓溶液的 无菌制剂 。
注射剂是直接注入人体的制剂，显效快，毒副反应也快，必须严格要求其质量。除应照药典要求对其进行 无菌检查,热原,澄明度 检查等一般注射剂质量检查外，还应根据中药注射剂的特点进行有关的检测。
5
一、一般质量要求澄明度检查 －－,澄明度检查细则和判断标准,
无菌检查 －－照,药典,附录 ⅩⅢ B 无菌检查法 进行装量差异应符合规定
6
除另有规定外，注射用 无菌粉末 照下述方法检查，
应符合规定。
取供试品 3瓶（支）,除去 标签、铝盖，容器外壁用乙醇擦净、干燥。开启时注意避免玻璃屑等异物落入容器中，分别迅速 精密称定,倾出 内容物，
容器用水或乙醇洗净，在适宜条件下干燥后再分别精密称定 每一容器的重量，求出每瓶（支）的装量与平均装量。每瓶（支）装量与平均装量相比较，
应符合表中规定。如有 1瓶（支）不符合规定，应另取 10瓶（支）复试，均应符合规定。
7
平均装量 装量差异限度
0.05g及 0.05g以下 〒 15％
0.05g以上至 0.15g 〒 10％
0.15g以上至 0.50g 〒 7％
0.50g以上 〒 5％
凡规定检查 含量均匀度 的注射用无菌粉末，一般不再进行装量差异检查。
8
不溶性微粒静脉滴注用注射液 水溶液,注射用 无菌粉末,
按临床使用浓度配制后，照注射剂中不溶性微粒检查法（附录 Ⅸ R ）检查，应符合规定。
装量为 100ml以上的静脉滴注用注射液，每毫升中含 10μ m以上的微粒不得过 20粒，含 25μ m以上的微粒不得过 2粒。
9
二、特殊要求检查
pH值检查 pH值一般应在 4.0-9.0之间，但同一品种的 pH
允许差异范围不超过 1.0。
蛋白质检查 除另有规定外，取注射液 1ml，加新配制的
30％磺基水杨酸试液 1ml，混合，放臵 5分钟，不得出现浑浊。注射液中如含有遇酸能产生沉淀的成分，可改加 鞣酸试液 1～ 3滴，不得出现浑浊。
鞣质检查
--取注射液 1ml，加新配制的含 1％ 鸡蛋清 的生理盐水
5ml，放臵 10分钟，不得出现浑浊或沉淀。
--取注射液 1ml，加 稀醋酸 1滴，再加 氯化钠明胶试液
4～ 5滴，不得出现浑浊和沉淀。
10
※ 含有聚乙二醇、聚山梨酯等聚氧乙烯基物质的注射液，
虽有鞣质也不产生沉淀,对这类注射液应取未加附加剂前的半成品检查。
树脂检查 另有规定外，取注射液 5ml，加 盐酸 1滴，放臵
30分钟，应无絮状物析出。注射液中如含有遇酸能产生沉淀的成分，可改加 氯仿 10ml振摇 提取,分取氯仿液，臵水浴上蒸干，残渣加冰醋酸 2ml使溶解，臵具塞试管中，加水 3ml，
混匀，放臵 30分钟，应无絮状物析出。
草酸盐检查 静脉注射用注射液水溶液除另有规定外，
取注射液 2ml，用稀盐酸调节 pH值至 1～ 2，滤过，滤液调节 pH值至 5～ 6，加 3％ 氯化钙 溶液 2～ 3滴，放臵 10分钟，
不得出现浑浊或沉淀。
11
钾离子检查 应 在 1.0mg/ml以下四苯硼酸钠法,除另有规定外，取静脉注射用注射液 2ml,蒸干,
先用小火炽灼至 炭化,再在 500～ 600℃ 炽灼至完全灰化，加稀醋酸使 溶解 。臵 25ml量瓶中，加水稀释至刻度，混匀，作为供试品溶液。取 10ml纳氏比色管两支，甲管中精密加入标准钾离子溶液 0.8ml，加碱性甲醛溶液 (取甲醛溶液，用 0.1mol／ L氢氧化钠溶液调节 pH值至 8.0～ 9.0)12滴,3％乙二胺四醋酸二钠溶液 2滴,3％四苯硼钠溶液 0.5ml，加水稀释成 10ml，乙管中精密加入供试品溶液 1ml，与甲管同时依法操作，摇匀，甲、乙两管同臵黑纸上，自上向下透视,乙管中显出的 浊度 与甲管比较，
不得更浓。
其它,重金属、砷盐、水分、炽灼残渣、色泽等
12
三、安全性检查热原检查 一定量的注射剂，注入家兔体内，在规定时间，观察家兔体温升高的情况。注射剂量一般为 1-5ml/kg计，静脉滴注按人体剂量的 3-10倍量计。
刺激性检查 肌肉刺激性检查、血管刺激性检查过敏反应 全身主动性过敏试验、被动皮肤过敏试验；根据药物作用特点选择其他过敏反应的试验。
溶血试验 — 观 察注射液使 2%红细胞混悬液溶血或凝聚的情况。要求 0.3ml注射液在 2小时内不产生溶血作用异常毒性 --系将一定剂量的供试品溶液注入小鼠体内或口服给药，在规定时间内观察小鼠死亡情况，以判定供试品是否符合规定的一种方法。
13
中药注射剂的鉴别方法一般以化学法和薄层色谱法应用较多 。 含量测定应选择灵敏度高,准确度高的仪器分析方法 。
四、质量分析规定中药注射剂在 固定中药材品种,产地 和 采收期 的前提下,需制定中药材,有效部位或中间体,
注射剂的指纹图谱 。
中药材、中药注射剂指纹图谱是指中药材、中药注射剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该中药材、注射剂特性的共有峰图谱。
14
中药指纹图谱一、概述
★ 中药指纹图谱是指某些中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析技术，得到的能够标示其化学特征的 色谱或光谱图 。
★ 中药指纹图谱是一种综合的，可量化的检验技术，它是建立在中药化学成分系统研究的基础上，主要用于评价中药及其制剂质量的真实性、优良性和稳定性。,整体性,和,模糊性,
为其显著特点。
★ 中药指纹图谱涉及多种光谱法和色谱法，其中色谱法为主流方法，尤其是 HPLC,TLCS和 GC已成为公认的三种常规分析手段。
由于 HPLC具有分离效能高、选择性高、灵敏度高、速度快、应用范围广等特点，大多数中药成分可在高效液相色谱仪上进行分析，且积累了丰富的经验。因此 高效液相色谱法 已成为中药指纹图谱的 首选 方法。
15
中药指纹图谱举例银杏提取物的 HPLC指纹图谱陈皮的薄层色谱指纹图谱
16
★ 中药及其制剂均为多组分复杂体系，因此评价其质量应采用与之相适应的，能提供丰富鉴别信息的检测方法，但现行的显微鉴别、理化鉴别和含量测定等方法都不足以解决这一问题。
建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行 整体 描述和评价。这也正好符合中医药整体学说。在此基础上，如果进一步开展 谱效学研究，可使中药质量与其药效真正结合起来，有助于阐明中药作用机理。
总之，中药指纹图谱的研究和建立，对于提高中药质量，促进中药现代化具有重要意义。
17
★ 美国食品药品管理局（ FDA）、世界卫生组织（ WHO）以及欧共体（ EEC）等均在有关文件中指出可使用指纹图谱控制和评价中药（天然药物）的质量。故指纹图谱已被国际医药界认可。
目前我国已规定中药注射剂质量标准中必须建立指纹图谱检测方法，并对此作出了具体的技术要求。此外，该方法在中药材规范化生产（ GLP）实施过程中亦得到广泛的应用。
作为一项新技术，中药指纹图谱在实际应用中还面临许多问题。
只有进一步加强中药材和中成药生产的规范化，中药化学成分和中药药理研究的系统化和标准化，才能保证中药质量的稳定性，
从而促进中药指纹图谱的建立和实施。
18
二、指纹图谱对高效液相色谱仪的要求
（一）选择在线脱气流动相在使用前必须进行脱气处理，以除去其中溶解的气体 O2等。脱气的方法有离线式脱气和 在线式脱气 。离线式脱气有吹氦脱气法、加热回流法、抽真空脱气法、超声波脱气法等。在线式脱气技术是把真空脱气装臵串接到贮液系统中，
并合膜过滤器，实现流动相在进入输液泵前的连续真空脱气。在线式脱气法的脱气效果明显优于离线式脱气法，并适用于多元溶剂系统。
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（二）选择低压梯度洗脱梯度洗脱是指对多元溶剂系统在洗脱过程中连续或间断地改其组成比例，以调节它的极性，使每个流出组分获得最佳分离结果。此法在中药指纹图谱分析中广泛应用。
梯度洗脱可分为 高压梯度洗脱 和 低压梯度洗脱 两种方式。
低压梯度洗脱是在常压下将多元溶剂输至混合器中混合，然后用压输液泵将流动相输入色谱中，其 优点 是：①仅需使用一个高压输液泵；②减少了溶剂可压性的影响，并能完全消除由溶剂混合引起的热力学体积变化所带来的误差。
20
（三）选择六通阀手动进样目前常用的进样装臵有六通阀手动进样器和自动进样器。前者重现性较好，且价格适中，可以满足中药指纹图谱研究中对样品进样的基本要求。
Load
inject
21
（四）色谱柱的选择一般选用于 5~10μm C 18
填料柱，以 4.6mm〓 250mm较适宜。其他特殊填料的色谱柱，
如辛基柱（ C8）,氨基柱（ NH2）,腈基柱（ CN）,硅胶柱（ Silica）、酸性柱和碱性柱等，可视研究对象的不同而采用。
22
（六）选择柱温箱在不同柱温下同一成分的保留时间往往发生迁移，有时还会影响成分的分离效果。由于中药样品成分的复杂性，尤其是中药指纹图谱要求色谱峰的相对保留时间、峰面积比值应相对恒定，因此对柱温应严格控制，以保证分析方法的重现性。
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（七）首选紫外检测器（ UVD）
大多数中药成分在可见或紫外光区有吸收，故 UVD在现代高效液相色谱中应用最广泛。其特点是灵敏度高、线性范围宽，对流动相的流速和温度变化不敏感，波长可选择，可用于梯度洗脱。
此外，蒸发激光散射检测器（ ELSD）和二极管陈列检测器
（ DAD）在中药指纹图谱分析中亦有重要作用。 ELSD适用于皂苷、多糖等无紫外吸收的成分； DAD可以获得吸收度 -波长 -时间的三维光谱 -色谱图，这对于色谱峰的定性分析和纯度检查是十分重要的。
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三、中药指纹图谱建立的原则和步骤
（一）一般原则中药指纹图谱的建立应以系统的化学成分和药理学研究为依托，体现系统性、特征性和稳定性三基本原则。
1.系统性 是指指纹图谱中反映的化学成分应包括该中药有效部位所含大部分成分，或全部指标性成分，如中药两头尖中抗肿瘤的有效成分为皂苷类化合物，则其指纹图谱应尽可能地反映其中的皂苷类成分；银杏叶的有效成分是黄酮和银杏内酯类，则其指纹图谱可采用两种方法，针对这两类成分分别分析，达到系统全面的目的。
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2.特征性 是指指纹图谱中反映的化学信息（如保留时间等）应具有较强的专属性，这些信息的综合结果，将能明确地区分中药的真伪与优劣，成为中药自身的,化学条码,。
例如，北五味子的 HPLC指纹图谱和 TLC指纹图谱，不仅包括多种的五味子木脂素类成分，而且具有许多知类成分，这些成分的峰位顺序、峰高或峰面积比值在一定范围内是固定的，并且随药材品种不同而产生差异，据此可以很好地区别其来源、
产地、判别药材的真伪优劣。
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3.稳定性 是指所建立的指纹图谱在规定的方法、条件下的耐用程度，即不同操作者、不同实验室所重复做出的指纹图谱应在所允许的误差范围内，以体现其通用性和实用性。因而要求包括样品制备、分析方法、实验过程、数据采集、处理、分析等全过程都要规范化操作，同时，还应建立相应的评价机构，对其进行客观评价。
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（二）一般步骤（以注射剂为例）
设计方案 → 收集样品 → 制备供试液 → 选择参照物 → 优化 实验条件 → 建立标准指纹图谱及其技术参数
1,方案的设计
（ 1）研究对象的确定 在充分调研的基础上确定成品中的药效成分，作为成品和中间体指纹图谱的研究对象，即检测目标。例如，黄芪含黄酮、皂苷及多糖三类有效成分，黄芪多糖注射液及其中间体的指纹图谱则以多糖为研究对象，黄芪原药材的指纹图谱应把黄酮、皂苷及多糖作为研究象。
复方注射剂应以君药、臣药中的有效成分作为指纹图谱的主要研究对象，佐使药中的成分可采用其它方法进行辅助补充性研究 。
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（ 2）研究方法的选择 应根据研究对象的物理化学性质来选择相应研究方法。大多数化合物可采用 HPLC。例如黄芪中黄酮、皂苷、多糖等。挥发性成分应采用 GC。例如鱼腥草中的鱼腥草素、土木香中的土木香内酯等。此外，还可考虑使用 TLC和 CE。
一个中药制剂的指纹图谱可以同时采用多种方法进行研究。
当然还需考虑药品检验系统复核时的设备、技术等因素。
（ 3）研究内容 主要研究内容有原药材、中间体、注射剂的指纹图谱，涉及样品名称、来源、制备、测定方法，指纹图谱及技术参数等。
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2,样品的收集 （注意样品的代表性）
(1)至少要收集 10个 批次样品，切不可将同一批次样品分散成数个批次充当样品。
(2)原药材尽可能固定产地 (来自 GAP基地药材,道 地药材 )、采收期、炮制方法。对光线稳定，疗效稳定，无临床不良反应的药材批次应重点选择。还应收集不同产地、不同采收期的药材，以便进行指纹图谱的比较研究。
(3)中间体、注射剂样品的收集应重点选择工艺稳定，疗效恒定，
无不良反应的批次。
(4)留样应不少于实验用量的 3倍。
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3,供试品溶液的制备
（ 1）药材供试液的制备 根据所含成分的理化性质，通过溶剂提取，液液萃取、沉淀、吸附等方法，分离富集样品。例如，黄芪中黄酮类成分通过碱的萃取；皂苷类通过大孔吸附树脂吸附；苦参中总生物碱通过阳离子交换树脂分离；挥发性样品常用水蒸汽蒸馏法制备。
样品富集后，还需通过氧化铝预柱,C18预柱、硅胶预柱或聚酰胺预柱等，除去色素等杂质，最后通过微孔滤膜，供 HPLC测试。
（ 2）中间体供试液制备 可针对有效成分处理，并参照原药材供试液制备方法。
（ 3）注射剂供试液制备 液体注射剂一般无需特殊处理，可直接分析检测
31
4,参照物的选择一般选取样品中容易获得且含量较高的一个主要活性成分或指标成分作为参照物。参照物主要用于指纹图谱技术参数的确定，如特征峰 (共有峰 )的相对保留时间，峰面积比值等。
并有助于图谱的稳定性、重现性的考查。例如三七药材的指纹图谱中以 三七皂苷 R1为参照物（ S） 。由于指纹图谱比较复杂，内标物不易选择、插入，故一般不以内标物做为参照物 。
1.三七皂苷 R1（ S）
32
5,实验方法和条件的优化其目的是通过比较实验，从中选取相对简单易行的方法和条件，获取足以代表品种特征的指纹图谱，以满足指纹图谱的专属性、重现性和普适性的要求。
方法和条件须经过严格的方法学验证。例如稳定性试验，
精密度试验，重现性试验等。
33
【 注意事项 】
① 供试液的制备和色谱分析时均须 定量操作 以保证图谱在整体特征上进行半定量 (差异程度或相似程度 )的比较。
②指纹图谱分析 不同于含量测定,提高其分离度应以不牺牲色谱的整体特征为前提，故 不应孤立地苛求分离度 达到含量测定的要求。
③采用 HPLC和 GC制定指纹图谱，记录时间一般为 1小时 。
(实测 2小时 )。
34
6,标准指纹图谱及其技术参数的建立
(1)测得的大量色谱数据需经分析和数据处理，才能获得标准指纹图谱 (拟合指纹图谱 )及其技术参数，以此作为评价药品指纹图谱的依据。
(2)技术参数主要包括 总峰面积,共有峰序号,参照峰 (S),共有峰相对保留时间 (RRT),共有峰峰面积比值 (RA)和 非共峰面积 等。
共有峰 亦称特征峰（包括参照峰）系指所有被检批次中均含有的相同色谱峰，主要来源于样品中主要有效成分或指标成分。共有峰的化学归属，可采用对照品加入法或 HPLC/DAD/MS/MS联用技术进行鉴别，后者可在无对照品的情况下使用 。
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（ 3）指纹图谱相关性的考察注射剂中各特征峰均可在原药材及中间体指纹图谱中得到追踪，以验证所建指纹图谱的正确性。中间体与注射剂的指纹图谱应非常接近，药材图谱中的色谱峰应比注射剂多。必要时可采用加入某一原药材，有效部位或中间体的供试品或制备某一原药材，有效部位或中间体阴性供试品的方法标定各指纹图谱之间的相关性。应提供相关性研究的指纹图谱。
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四、药品指纹图谱的评价药品指纹图谱的评价系指以建立起来的标准指纹图谱为依据，将样品指纹图谱与之进行相似性分析比较，从而对药品质量做出判断和评价。
中药指纹图谱的评价不同于含量测定，它强调的是 相似性
(Similarity)，而不是相同性 (Identity)，也即着重辨识完整图谱,面貌,,而不是求索细枝末节。分析比较的目的是对供试品与对照品之间的差异或一致性作出的评价。
相似性的比较可以用,相似度,表示，相似度可借助国家药典委员会推荐的,中药指纹图谱计算机辅助相似度评价软件,计算，一般情况下相似度在 0.9～ 1.0之间即符合规定。
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第二节 液体中药制剂的分析液体中药制剂用药材提取物制备的液体制剂合剂、糖浆剂、酒剂、茶剂、酊剂滴鼻剂、滴眼剂、露剂、搽剂等
（无植物组织与细胞，故无显微鉴别）
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1、合剂与口服液合剂系指药材用水或其他溶剂，采用适宜方法提取，经浓缩制成的内服液体制剂。
（单剂量合剂也可称为,口服液,）
2、酒剂和酊剂酒剂 药材用蒸馏酒提取制成的澄清液体制剂酊剂 药物用规定浓度的乙醇提取或溶解而制成的澄清液体制剂
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一、一般质量要求：
（一）性状 ——气味、沉淀
（二）相对密度（合剂、口服液）和总固体含量（酒剂）
相对密度测定,比重瓶和韦氏比重称总固体的含量测定方法一：
无水乙醇搅拌提取后挥干测定 → 含糖、蜂蜜的酒剂方法二：
直接取上清液挥干测定 → 不含糖、蜂蜜的酒剂
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（三） pH值 与稳定性有关一般应对合剂和口服液的 pH值作出规定
（四）装量差异单剂量灌装的合剂、口服液,装量差异检查；
合剂、酒剂、酊剂,最低装量检查；
检查方法：
取供试品 5支，将内容物分别倒入经校正的干燥量筒内，室温下检视，每支装量与标示装量相比较，少于标示装量的不得多于 1支，并不得少于标示装量的 95%。
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（ 五）乙醇量：酒剂、酊剂测定方法,气固色谱法 或蒸馏法
（六）甲醇量酒剂中每 1L供试液含甲醇量不得超过 0.05％。
（七）防腐剂量山梨酸 （ CH3CH=CHCH=CHCOOH）
性质,微溶于水，易溶于乙醇、乙醚，可溶于碳酸氢钠溶液，极易随水蒸干挥发
HPLC测定,C18色谱柱，甲醇 -水 -乙酸,260nm
检测
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（八）微生物限度标准细菌数
（个 /ml）
霉菌、酵母菌数（个 /ml）
大肠杆菌
（个 /ml） 其他合剂 100 100 不得检出酒剂 500 100 不得检出 外用酒剂和酊剂均不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。酊剂 100 100 不得检出
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二、质量分析的特点：
当处方中药味 较少 且有效成分明确时，选择有效成分作为质控指标，如大黄口服液中的蒽醌衍生物；
对于药味 较多 的处方，则可选择一个或几个有代表性的成分作为质控指标。
对于处方药味较多，成分复杂，选择质控指标成分有困难的酒剂，可采用测定药酒总固体量的方法控制其质量。
合剂,属水性液体制剂；含杂质量较大，有一定的粘度，大多需净化分离后方能进行。常用的净化方法有液 -液萃取法及柱色谱法。
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酒剂和酊剂：
含醇量较高，杂质较少，澄明度也好，样品的前处理相对较易。对一些成分复杂的样品，仍需经净化分离后进行分析。
常用净化方法：
酒剂或酊剂：加热蒸去乙醇，然后再用适当的有机溶剂萃取。
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双丹口服液处方,丹参、牡丹皮制法,以上 2味，牡丹皮蒸馏，蒸馏液另器收集，药渣和丹参加水煎煮二次，第一次 2h，第二次 1h，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为 1.14～ 1.16（ 60℃ ）的清膏，加乙醇使含醇量达 60％，混匀，冷藏 24h，滤过，滤液回收乙醇至相对密度为 1.14～ 1.16（ 60℃ ）的清膏，加入牡丹皮蒸馏液和水至约
900mL，混匀，冷藏 48h，滤过，滤液加入蜂蜜 150g，苯甲酸钠
3g，加水至 1000mL，摇匀，灌装，即得。
性状,本品为红棕色的液体；味辛，微苦。
鉴别,丹皮酚 TLC检查
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检查,相对密度 不低于 1.05
pH应为 4.0～ 5.0
含量测定,HPLC 测丹皮酚
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第三节 半固体中药制剂的分析半固体中药制剂,
流浸膏剂、浸膏剂、糖浆剂、煎膏剂等一、一般质量要求
（一）性状 ——气味、澄清度、沉淀除另有规定外，流浸膏剂每 l毫升应相当 1克原药材；浸膏剂每 1ml相当 2～ 5克原药材。
（二）乙醇量流浸膏剂至少含 20%乙醇。
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（三）含糖量除另有规定外，糖浆剂含蔗糖量一般不低于
45%(g／ ml)；煎膏剂中加炼蜜或糖 (或转化糖 )的量 —般不超过清膏重量的 3倍 。
（四） pH值：糖浆剂
（五）相对密度和总固体含量凡加药材细粉的煎膏剂，不再检查相对密度
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（六）不溶物：煎膏剂测定方法取供试品 5g，加热水 200ml，搅拌使溶解，放 3min
后观察，不得有焦屑等异物（微量细小纤维、颗粒不在此限）。
（七）装量差异单剂量灌装的糖浆剂必须作装量差异检查流浸膏剂、浸膏剂、煎膏剂应作最低装量检查
（八）微生物限度标准细菌数不得超过 100个 /g，霉菌数、酵母菌数不得超过 100个 /g，均不得检出大肠杆菌。
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二、质量分析的特点由单味药组成时，相对杂质较少，个别制剂可经稀释后直接测定。
指标成分不清楚，可通过测定浸出物含量或总固体含量的方法来模糊地控制其质量。
糖浆剂分析前常需分离、净化处理。
煎膏剂在预处理时可先加水或稀醇稀释；可向煎膏剂中加适量的惰性材料低温烘干后，按固体样品处理。
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第四节 固体中药制剂的分析固体中药制剂：
丸剂、片剂、散剂、颗粒剂、栓剂、滴丸剂一、丸剂 一般质量要求性状 ——外观、色泽、口感等水分含量除另有规定外，大蜜丸、小蜜丸、浓缩蜜丸中含水分不得超过 15%；水蜜丸、浓缩水蜜丸不得超过 12%；
水丸、糊丸、浓缩水丸不得超过 9%；微丸按其所属丸剂类型的规定制定；蜡丸不检查水分。
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重量差异或装量差异溶散时限 （大蜜丸、蜡丸除外）
蜡丸：崩解时限检查微生物限度检查细菌数
（个 /g）
霉菌、酵母菌数（个 /g）
大肠杆菌（个
/g）
不含原药材粉 1000 100
均不得检出含原药材粉 30000 100
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质量分析的特点
1、样品的预处理
2、样品的提取
3、样品的净化
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二、片剂（浸膏片、半浸膏片、全粉片）
1、性状 外观完整光洁，色泽均匀
2、重量差异取供试品 20片，精密称定总重量，求得平均片重后，再分别精密称定每片的重量，每片重量与标示片重相比较（凡无标示片重的应与平均片重相比较），超出限度的不得多于 2片，
并不得有 1片超出限度一倍。
0.3g以下 〒 7.5％
0.3g或 0.3g以上 〒 5％
※ 除薄膜衣片按上述检查法检查外，糖衣片与肠溶衣片应在包衣前检查片芯的重量差异，符合规定后，方可包衣，包衣后不再检查重量差异 。
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3、硬度（脆碎度） ——内控标准通过加压测定硬度。中药压制片硬度在 2-3kg
为好。
4、脆碎度 ——振荡后，检查药片的损坏程度
5、含量均匀度检 查小剂量片剂中单剂含量偏离标示量的程度。
凡检查含量均匀度的制剂不再检查重（装）量差异。
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检查对象
① 标示量小于 10mg、主药含量小于每片重量 5%
② 标示量小于 2mg、主药含量小于每片重量 2%
③ 复方制剂仅检查符合上述条件的组分操作法
①取供试品 10片,分别测定每片以标示量为 100的相对含量 X
② 求其均值 X
③ 标准差 S
④ A = 100 - X
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结果判断
② A+S＞ 15.0
不符合规定符合规定
① A+1.80S≤15.0
复试
⑤ A+1.45S＞ 15.0
不符合规定
④ A+1.45S≤15.0
符合规定
③ A+1.80S＞ 15.0
且 A+S ≤15.0
另取 20片复试
S
A
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6、崩解时限
（除规定检查溶出度或释放度以及供含化片、咀嚼的片剂除外）
7、溶出度片剂等固体制剂在规定溶剂中溶出的速度和程度
8、微生物限度检查细菌数
（个 /g）
霉菌、酵母菌数（个 /g）
大肠杆菌（个
/g）
不含原药材粉 100 100 均不得检出含原药材粉 10000 100
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黄杨宁片 （含黄杨宁）
【 检查 】 含量均匀度 取本品 10片，分别臵量瓶中
（ 0.5mg,50ml； 1mg,100ml），各加 0.05mol/L磷酸二氢钠缓冲液至刻度,80℃ 水浴恒温 1.5小时后取出，冷却至室温，摇匀，离心 6分钟（每分钟转速
3000转），分别取上清液作为供试品溶液，照含量测定项下的方法测定含量。每片的含量与平均含量相比较，差异大于 〒 15%的不得多于 1片，并不得超过 〒 25%。 其他 应符合片剂项下有关的各项规定
（附录ＩＤ）。
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三、颗粒剂可溶性颗粒剂、混悬性颗粒剂和泡腾性颗粒剂
1、性状干燥、颗粒均匀、色泽一致
2、粒度除另有规定外，取单剂量分装的颗粒剂 15袋
（瓶）或多剂量分装的颗粒剂 1包（瓶），称定重量，
臵药筛内过筛，过筛时，将药筛保持水平状态，左右往返轻轻筛动 3分钟，不能过 1号筛和能过 4号筛的颗粒与粉末总和不得大于 8.0%
3、水分,不得超过 5.0%
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4、溶化性取供试品 10g，加热水 20倍，搅拌 5分钟，立即观察。
5、装量差异
6、微生物限度检查细菌数
（个 /g）
霉菌、酵母菌数（个 /g）
大肠杆菌
（个 /g）
不含原药材粉 1000 100 均不得检出含原药材粉 10000 100
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四、散剂 内服散剂、外用散剂
1、性状,干燥、疏松、混合均匀、色泽一致
2、粒度,通过六号筛的粉末重量不得少于 95％。
3、均匀度取供试品适量臵光滑纸上，平铺约 5cm，将其表面压平，在亮处观察，应呈现均匀的色泽，无花斑、
色斑。
4、水分 （不得过 9.0%）
5、装量差异
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5、微生物限度检查细菌数（个 /g） 霉菌、酵母菌数
（个 /g）
大肠杆菌
（个 /g）
其他一般散剂 30000 100 不得检出口服兼外用散剂
30000 100 不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。
阴道用散剂 100 10
除对已知有效成分选择适宜的方法进行定性,定量分析外,重点应注意对剧毒成分和贵重药材进行分析 。 应注意样品的代表性,药材粉末中具有形态特征的组织碎片是显微鉴别的重要依据,可用于判断制剂的真伪 。
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五、栓剂性状,药物与基质混合均匀，外观完整、光滑重量差异融变时限硬度 （内控标准）
微生物限度检查细菌数（个 /g） 霉菌、酵母菌数
（个 /g）
其它一般栓剂 10000 100 均不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。用于溃疡出血的栓剂 100 10
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栓剂是药物和基质混合制成的一种固体制剂，
常用的基质可分为油脂性基质和亲水性基质。
油脂性基质：将栓剂切成小块 → 加适量水 → 温水浴上加热 →
使其融化 → 搅拌一定时间 → 取出于冰浴中再使基质凝固 → 水溶液滤出,反复 2至 3次 → 水溶性成分 。
除去基质的方法有：
将栓剂与硅藻土等惰性材料混合、研匀，转入回流提取器中，用适宜的溶剂回流提取。亲水性基质 → 用有机溶剂提取，
油脂性基质 —— 水或稀醇提取。
被检测成分为生物碱时：栓剂 (脂肪性栓 ) + 氯仿或其它有机溶剂溶解 → 臵分液漏斗 → 加适宜浓度的盐酸或硫酸 → 至生物碱提尽 → 合并酸液 → 碱化 → 有机溶剂提取 → 供试品溶液 。
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六、滴丸剂性状 大小均匀、色泽一致重量差异溶散时限微生物限度标准细菌数不得超过 1000个 /g，霉菌数、酵母菌数不得超过 100个 /g，不得检出大肠杆菌。
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第五节 外用膏剂的分析外用膏剂：软膏剂、膏药、橡皮膏剂、巴布膏剂一、软膏剂粒度 不得检出大于 180μm 的粒子。
装量无菌微生物限度标准细菌数不得超过 1000个 /g，霉菌数、酵母菌数不得超过 100个 /g，不得检出金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌。
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一般软膏剂分析时可采用：
1、基质滤除测定法称取一定量软膏，加入适当溶剂，加热，软膏液化，放冷，基质凝固，将基质与上清液分开。重复多次，合并滤液后测定。
2、提取分离法在适宜的酸或碱性介质中先用不混溶的有机溶剂将基质提取后除去，再进行测定。
3,软膏中被测物为无机化合物,可经 灼烧,基质分解除尽 。 对灼烧后的无机化合物进行测定 。
4,离心法加适宜的溶剂,混匀,再离心,滤过,分析滤液
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二、膏药外观 乌黑光亮、油润细腻、老嫩适度、摊涂均匀，无红斑、无飞边缺口，加温后能粘贴于皮肤上且不移动。
重量差异 取供试品 5张，分别称定出总重量。剪取单位面积 (cm2)的裱背称定，折算出裱背重量。
膏药总重量减去裱背重量即为药膏重量，与标示重量相比较不得超出,中国药典,中规定的范围。
标示重量 重量差异限度
3g或 3g以下 〒 10％
3g以上至 12g 〒 7％
12g以上至 30g 〒 6％
30g以上 〒 5％
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三、橡胶膏剂含膏量取供试品 2片 (每片标示面积大于 35cm2，切取 35cm2)，
除去盖衬，精密称定重量，臵有盖玻璃容器中，加适量溶剂
（如氯仿、乙醚等 ）浸渍，并时时振摇，待布与膏料分离后，
将布取出，用上述溶剂洗涤至布上不残附膏料，挥去溶剂，
在 105℃ 烘箱中干燥 30分钟，移臵干燥器中，冷却 30分钟，精密称定，减失重量即为膏重，按标示面积换算成 100cm2的含膏量，应符合各该品种项下的有关规定。
黏附性
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耐热实验除另有规定外，取供试品 2片，除去盖衬，臵 120℃ 烘箱中加热 30分钟，放冷后，膏背面应无泛黄及渗油现象；用手指触试膏面，应仍有黏性。
少林风湿跌打膏 (生川乌、生草乌、乌药等 )
【 检查 】 含膏量 照橡胶膏剂含膏量测定法（附录
Ⅰ Q ）用乙醚作溶剂，每 100cm2应不少于 1.5g。
其他 应符合橡胶膏剂项下有关的各项规定
（附录 Ⅰ Q ）。
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四、巴布膏剂黏附性试验取供试品 3片，在室温下，除去盖衬，臵于长 30cm、
与水平面成 15° 或 30° (按各该品种项下规定 )的斜面滚球装臵中央，膏面向上，斜面上部 10cm及下部 15cm
用 0.025mm厚的涤纶薄膜覆盖，中间留出 5cm膏面，将各该品种项下规定的钢球，自斜面顶端自由滚下。 3
片供试品中应有 2片或 2片以上能在测试段上粘住钢球，
如有 1片不能粘住，再用较小 1号的钢球试验，应能粘住。如只有 1片能粘住钢球，而另 2片只能粘住较小
1号的钢球，则应另取 3片复试。 3片均应能粘住钢球为合格。
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赋形性试验取供试品 1片，臵 37℃,相对湿度 64％的恒温恒湿箱中 30分钟，取出，用夹子将供试品固定在一平整钢板上，钢板与水平面的倾斜角为 60°,放臵
24小时，膏面应无流淌现象。
含膏量
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END
