第二章 菌种的扩大培养
?定义：菌种的扩大培养就是把保藏
的菌种，即砂土管，冷冻干燥管中
处于休眠状态的生产菌种接入试管
斜面活化，再经过扁瓶或药瓶和种
子罐，逐级扩大培养后达到一定的
数量和质量的纯种培养过程。这些
纯种的培养物称为种子。
种子必须具备的条件
① 菌种细胞的生长活力强，接种后在发酵罐
中能迅速生长
②生理性状稳定
③菌体总量和浓度能满足大容量发酵罐的要
求
④无杂菌污染（不带杂菌）
⑤生产能力稳定
种 子 制 备 过 程
?实验室种子制备阶段：琼脂
斜面至固体培养基扩大培养
（如茄子瓶斜面培养等或液
体摇瓶培养
?生产车间种子制备阶段：种
子罐扩大培养
砂土管（冷冻干燥管） 斜面
摇瓶
固 体 斜面
摇瓶
固 体
种 子 罐 发 酵罐
斜面 1 0 ml 试管
25 27 o c
2 3d
500 1 0 0 0 ml 三角 瓶
( 2 5 0 ml 5 0 0 m l 麦 芽 汁 )
25
2d
5 1 0 L 麦 芽 汁
15 20
3 5d
发 酵罐
o c
o c
实验室种子制备
? 在砂土管或冷冻干燥管内保藏的菌种以
无菌的方式接至适合的斜面培养基上，
培养成熟后挑选正常的菌落再接一次试
管斜面并至摇瓶。
生产车间种子制备
? 实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接
到种子罐进行扩大培养
? 种子罐培养一方面使菌种获得足够的数
量，另一方面种子罐中的培养基更接近
发酵罐培养的醪液成分和培养条件，譬
如通无菌空气，搅拌形式等等，以使菌
体适应发酵环境
种子罐级数的确定
? 种子罐的级数是指制备种子需逐级扩大
培养的次数
? 对于生长快的细胞，种子用量的比例少，
即需要的接种量少，所以相应的种子罐
也少
接种种龄和接种量
? 接种龄
种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种子
罐或发酵罐时的培养时间
? 接种量
接种量指的是移入的种子悬浮液体积和接种后
培养液体的体积的比例
? 种子质量的判断
种子质量的控制措施
? 菌种稳定性的检查
将保藏菌株溶于无菌的生理盐水中，逐级稀释，
然后在培养皿琼脂固体培养基上划线培养，长
出菌落，选择形态优良的菌落接入三角瓶进行
液体摇瓶培养，检测出生产率高的菌种备用
? 杂菌检查
显微镜观察，或平板培养试验，即将种子液涂
在平板培养皿上划线培养，观察有无异常菌落，
定时检查，防止漏检
?定义：菌种的扩大培养就是把保藏
的菌种，即砂土管，冷冻干燥管中
处于休眠状态的生产菌种接入试管
斜面活化，再经过扁瓶或药瓶和种
子罐，逐级扩大培养后达到一定的
数量和质量的纯种培养过程。这些
纯种的培养物称为种子。
种子必须具备的条件
① 菌种细胞的生长活力强，接种后在发酵罐
中能迅速生长
②生理性状稳定
③菌体总量和浓度能满足大容量发酵罐的要
求
④无杂菌污染（不带杂菌）
⑤生产能力稳定
种 子 制 备 过 程
?实验室种子制备阶段：琼脂
斜面至固体培养基扩大培养
（如茄子瓶斜面培养等或液
体摇瓶培养
?生产车间种子制备阶段：种
子罐扩大培养
砂土管（冷冻干燥管） 斜面
摇瓶
固 体 斜面
摇瓶
固 体
种 子 罐 发 酵罐
斜面 1 0 ml 试管
25 27 o c
2 3d
500 1 0 0 0 ml 三角 瓶
( 2 5 0 ml 5 0 0 m l 麦 芽 汁 )
25
2d
5 1 0 L 麦 芽 汁
15 20
3 5d
发 酵罐
o c
o c
实验室种子制备
? 在砂土管或冷冻干燥管内保藏的菌种以
无菌的方式接至适合的斜面培养基上，
培养成熟后挑选正常的菌落再接一次试
管斜面并至摇瓶。
生产车间种子制备
? 实验室制备的孢子斜面或摇瓶种子移接
到种子罐进行扩大培养
? 种子罐培养一方面使菌种获得足够的数
量，另一方面种子罐中的培养基更接近
发酵罐培养的醪液成分和培养条件，譬
如通无菌空气，搅拌形式等等，以使菌
体适应发酵环境
种子罐级数的确定
? 种子罐的级数是指制备种子需逐级扩大
培养的次数
? 对于生长快的细胞，种子用量的比例少，
即需要的接种量少，所以相应的种子罐
也少
接种种龄和接种量
? 接种龄
种子罐中培养的菌体从开始移入下一级种子
罐或发酵罐时的培养时间
? 接种量
接种量指的是移入的种子悬浮液体积和接种后
培养液体的体积的比例
? 种子质量的判断
种子质量的控制措施
? 菌种稳定性的检查
将保藏菌株溶于无菌的生理盐水中，逐级稀释，
然后在培养皿琼脂固体培养基上划线培养，长
出菌落，选择形态优良的菌落接入三角瓶进行
液体摇瓶培养，检测出生产率高的菌种备用
? 杂菌检查
显微镜观察，或平板培养试验，即将种子液涂
在平板培养皿上划线培养，观察有无异常菌落，
定时检查，防止漏检
