第八章 基因表达与调控
第一节 基因的概念
? 经典遗传学:遗传物质的传递规律
? 分子遗传学( 1953,Watson & Crick):
基因的本质-化学、结构
基因的功能-基因表达、调控与性状表现
基因的变化-基因突变等
一、经典遗传学中基因的概念
功能单位:控制一个或者几个性状。
结构单位:染色体片段-基因位点( locus)与
染色体一起有丝分裂和减数分裂。
是突变最小单位,A?a
是交换最小单位,A- B
? 经典遗传学认为:基因是遗传上最小的结构与功
能单位,不能分割。是结构与
功能的统一体
二、分子遗传学中基因的概念
1,基因的本质:
( 1)基因是特定 长度 和 碱基序列 的 DNA片段
( 2)核苷酸序列中蕴藏着遗传信息:
mRNA 多肽
DNA tRNA
rRNA
调节基因
无翻译产物
翻 译
转 录 结构
基因
2,基因遗传结构的可分性
( 1)拟等位基因的发现:
Oliver( 1940),果蝇
野生型 突变型
(卵圆眼) (菱形眼)
szl
yzl
都位于 X 染色体上 27.2
szl
szl szl yzl yzlyzl
yzl
szl
Y Y


F1,应该全是菱形眼, 但是却意外发现了 0.2%的野生卵圆形眼 。
为什么? 推断:
i 回复突变:
ii 等位基因, 不等位,, 和 虽然都位于
X27.2
这个基因位点 ( locus), 但是, 它们却处在不
同的座位 ( site), 基因内部不同座位之间发生
重组:
szlyzlszl Y szl yzl yzl Y× ×
( 0.2%)
szl yzl
szl +
yzl+
27.2
F1:
Oliver的两个学生设计了一个更巧妙的实验, 证明了同
一个基因内部的不同座位之间可以发生交换, 而且排除了突
变的可能性:
yy aprapr splspl × + w + Y
( 黄身, 杏黄眼, 分叉刚毛 ) ( 灰身, 白眼, 直刚毛 )
F1 X染色体y
+
apr +
+ w
spl
+
0 1.5 3.0
y apr + spl


由于 apr 和 w都位于 X的 1.5位点, 是等位基因 。 让该
F1自交, F2不应该有 红眼 个体出现 。 但结果却是出现了
0.1%的红眼:
— 如果是回复突变:红眼果蝇应该是黄身,
分叉刚毛, 或者灰身, 直刚毛 。
— 如果是在图示位置发生交换,红眼都是灰
身, 分叉刚毛 。
实验证明:红眼都是灰身, 分叉刚毛, 所以是基因位点内
部两个座位之间交换的结果 。
( 2)顺反测验
基因既然可以划分为不同的遗传单位,那么基因的界限
在哪儿? —— 顺反测验
?概念,
顺式( cis)-同侧,像“相引相”
反式( trans)-不同侧,像“相斥相”
? 步骤:
?创建双突变杂合二倍体:
注意,a1,a2 是基因产物相同或者相似的突变基因
? 有无互补作用?
A B
a b
A b
a B
+ +
a1 a2
+ a2
a1 +
顺式 反式
a1,a2 a1,a2
等位基因 非等位基因
+ +
a1 a2
+ a2
a1 +
野生型
gene1 gene2
野生型
突变型
gene1 gene2
野生型 突变型
顺式:
反式:
DNA 转录 mRNA mRNA
顺式:无论 a1,a2是否等位, 都表现为野生型, 因此在顺
反测验中只能起对照作用 。
反式:顺反测验如果没有互补作用 ?a1,a2 等位基因
顺反测验如果有互补作用 ?a1,a2 非等位基因
? 顺反子 ( citron),在顺反测验中没有互补作用的所有座位的
突变。是功能的最小单位。实际上相当于一个基因。
( 3)基因的细微结构
?T4噬菌体 rII区的细微结构
T4噬菌体染色体上有三个区段,决定三种快速溶菌类型:
rI,rII,rIII (注意:第七章噬菌体作图时的 r是 T2的基因 )
Benzer( 1950)对 rII深入研究:
首先,获得了 2000多个独立的突变株,估计有 400~500个
突变位点。
其后,双重感染 E.coli B(同时),形成双突变杂合二倍
体,进行互补测验。发现突变体可以分为 rIIA 和
rIIB二组:其中只有分别属于 rIIA 和 rIIB的突变
体之间可以互补,而 rIIA或者 rIIB内部的突变体之
间没有互补效应 ?rII区有 A,B二个顺反子。
最后,作连锁图,
rx- ry重组值=
双重感染 E.Coli B
+ rx
ry +
+ ry rx +
+ ry
rx +
rx ry
+ +
E.Coli B
E.Coli K12(?)
所有基因型噬菌斑
野生型噬菌斑
2× E.Coli K12(?)噬菌斑数
E.Coli B噬菌斑数 × 100%
顺反子 ( citron) 是功能的基本单位, 但是一个顺反子内部
同的区段可以发生基因突变 ?
突变子( muton):突变的最小单位。
重组子( recon),重组的最小单位。重组子作图。
i.e,基因不是最小的(遗传)结构单位。
? 高等动植物的复等位基因
a1
A a2 基因突变的多方向性:即同一个
a3 基因内部不同座位发生突变。
a4
如何判断是否是复等位基因?顺反测验-
3,基因概念的发展:
移动基因(跳跃基因):转座子
断裂基因:内含子、外显子
重叠基因:同一段 DNA不同的读码或终止方式,产生不
同的表达产物。一般常见于原核生物。
假基因:与正常基因序列高度同源,但是不表达。
4,基因与性状表达
基因( DNA) ? mRNA ?蛋白质
tRNA
rRNA
A B A B
结构蛋白
酶蛋白



现代谢
例 1,人的镰形红血球贫血症
?S (GTA,Val)
?A (GAA,Glu)
?C (AAA,Lys)
豌豆:圆粒-皱粒
R-淀粉分支酶( SBE)基因正常,淀粉粒形成 ?圆
粒豌豆。
r - SBE基因插入失活( 0.8kb),蔗糖积累 ?皱粒。
Beadle,G W & Tatum,E L,“一个基因一个酶” ?
“一个基因一个多肽”
一个多肽或多个多肽 ?生物性状。
局限性
例 2 豌豆的圆粒与皱粒
第二节 基因表达的调控
基因表达的调控:
细胞、组织功能的分化
细胞的全能性与 不同发育阶段的分化。
不同环境
基因表达的时空调控。
一般表现两个层次:( 1)转录水平
( 2)转录后水平
一, 原核生物基因表达的调控
(一)主要在转录水平调控:
负调控:
gene ON OFF
正调控:
gene OFF ON
诱导,活性阻遏蛋白 ?失活
诱导因子 +
非活性激活蛋白 ?活性
阻遏:
失活阻遏蛋白 ?活性
共阻遏蛋白 +
活性激活蛋白 ?失活
阻遏蛋白
激活蛋白
1,乳糖操纵元 ( lac operon)
( 1)乳糖操纵元的结构
lacI lacZ lacY lacA
PlacI Plac Olac
RNA
DNA
lacZ lacY lacAlacI
乳糖阻遏物(单体、四聚体) ?-半乳糖苷酶 渗透酶 乙酰转移酶
Protein
乳糖 葡萄糖+半乳糖 增加乳糖的吸收 功能未知
( 2)乳糖操纵元转录调节
Plac lacZ lacY lacA转录被阻滞
RNA
聚合酶 Olac
被激活的乳糖阻抑物四聚体
乳糖 诱导物
(异乳糖)
失活的乳糖阻抑物 -诱导物复合体
Olac
Plac lacZ lacY lacA
RNA
聚合酶
转录被诱导
lacZ lacY lacARNA
cAMP-CRP
Complex
? Plac弱启动子, 当体内葡萄糖缺乏时, cAMP?并与 cAMP
受体蛋白 (CRP) 结合成复合物,再结合到图中的位置, 可
使 DNA发生 900弯曲, 转录效率提高 50倍 —— 正调控 。
? 葡萄糖 ?cAMP合成 ??lacZ ?
2,色氨酸操纵元
? 色氨酸操纵元的结构和色氨酸阻抑物的功能
? 弱化作用 —— 前导序列可以组成性转录。
? 弱化子:
? 前导 RNA结构
? 重要性:使色氨酸转录抑制 10倍。
trpAtrpBtrpCtrpE trpD
Ptrp Otrp 前导序列 a 前导肽
Trp 阻抑物 色氨酸
激活
RNA trpE trpD trpC trpB trpA
色氨酸合成所需的酶
trpR
? 弱化子:缺失导致转录水平上升的不依赖于 σ因子的 DNA序列,如果形
成发夹结构就可以作为一个高效的转录终止子。
? 前导 RNA序列
5’trp mRNA trpL
1 2 3 4
寡聚 U区
trpE
(a) 正常
(b) 高 [Trp]
1 2 转录终止
3 4
(C) 低 [Trp]
1
2 3
4
转录延伸
(二)翻译水平的调控
1,E,coli 核糖体合成反馈抑制:
核糖体合成过量 ?核糖体与本身 mRNA的
( 1) UTR( 5’非翻译区)结合或者
( 2) Shine-dalgarno 序列( AGGAGGU与 rRNA互
补配对)结合。
2,反义 RNA:
与 UTR或者 Shine-dalgarno结合
?翻译 ?
(一) 真核生物基因表达的调控机制要复杂得多
1,基因组大得多:
重复序列
多个调节基因调控一个或多个结构基因
2,基因分布在不同染色体
3,复杂的染色质结构
(二) 几种调控机制
1,DNA的改变
二、真核生物基因表达的调控
( 1)基因剂量与基因扩增:
蟾蜍(昆虫、鱼、两栖):卵母细胞发育
rDNA 600?2× 106,临时扩增 4000 倍。
癌细胞中的致癌基因。
( 2) DNA重排
基因从远离启动子的位置移到距离启动子近的
位置,从而启动转录。
( 3) DNA甲基化(去甲基化)
5-mC —— CpG岛
N6-mA
7-mG
2,转录水平的调控
5’ A B 3’
CAAT box
TATA box
翻译起始 翻译停止
TAA/TAG/TGA
加 Poly (A) 信号
加帽,转录起始
信号肽序列
UTR
1 32
1,,2,3,外显子
A,B,内含子边界
真核基因的结构示意图
( 1)顺式作用元件( DNA)调控作用:
a,启动子,基因转录起始位点( +1)到上游 100-200bp以内
一组具有独立功能的 DNA序列,每个元件
7~20bp,决定转录起始点和转录频率。
b,增强子,位于转录起始点上游(多数)、下游、内含子,
有的相距达 1 kb 的 DNA 序列,长度 ? 20bp,
与转录激活子结合,在合适转录因子存在时
表达某一基因,或通过竞争转录不同的基因。
c,选择性启动子,有些真核生物的基因具有两个或两个以上
的启动子,用于不同细胞中表达。
( 2)反式作用因子(蛋白质)调控作用:
a,转录因子, 可与 RNA 聚合酶和 /或启动子 /增强子结合的 蛋白
质,启动转录或转录延伸。包括 转录激活子。 反式作用因子
的功能结构域:
I,DNA结合结构域( DNA Binding Domain)
螺旋-转角-螺旋( HTH)
锌指( zinc finger):
碱性亮氨酸拉链( bZIP)
II,转录活激活结构域( Transactivating domain):
与 RNA聚合酶或者其它转录因子结合,激活转录。
DBD:螺旋-转角-螺旋( HTH)
DBD:锌指( Zinc Finger)
DBD:碱性亮氨酸拉链( bZIAP)
( 3)其它 调控途径:
a,mRNA 的降解,
3’ 非编码区 5’-UUUA-3’ 是 RNA 快速降解的标志。
b,选择 mRNA切割
同一初级转录产物在不同细胞中以不同的方式切割
加工,形成不同的成熟 mRNA
c,激素的调控作用
激素 ?双翅目昆虫唾腺染色体变化(唾腺染色体
疏松图式变化)
激素 + 受体 ?转录因子磷酸化
d,染色质的结构
3,翻译水平的调控
( 1) mRNA 加尾, 20 PolyA ?handreds of Poly A。
种子中 mRNA加尾后才翻译。
( 2)阻抑蛋白与 mRNA 结合 ?翻译受阻。
( 3)蛋白质翻译后加工:
a,蛋白质折叠:蛋白质+分子伴侣 ?折叠
b,蛋白酶切割:
?末端切割,原蜂毒(无毒) ?蜂毒(有毒)
胰岛素的切割
信号肽的切割
胰岛素的切割 前体胰岛素
胰岛素原
胰岛素
信号肽:
N-端疏水性强的氨基酸组成,与膜脂容易结合,?
内质网膜运输。切除后蛋白质有活性。
?多聚蛋白质的切割:
一个多肽链切割成多个功能蛋白质,如动物激素。
c,蛋白质化学修饰:
乙酰基、甲基、磷酸基、糖基 ?N端,C端 或者侧链。
磷酸化:
糖基化,Ser,Thr O-糖基化
Asn N-联糖基化
d,蛋白质内含子
Intein Extein Intein
成熟蛋白质 有核酸内切酶活性