第二章
酶 (Enzyme)
1.酶的概念
酶 是一类由活性细胞产生的具有催化作用和
高度专一性的特殊 蛋白质 。简单说，酶是一类由
活性细胞产生的 生物催化剂 。
一、酶的概念
2.酶催化作用的特点
(1) 酶和一般催化剂的 共性,
? 加快反应速度；
? 不改变平衡常数；
? 自身不参与反应。
(2) 酶催化作用 特性,
? 条件温和,常温、常压,pH=7；
? 高效率,反应速度与不加催化剂相比可提高 108～
1020，与加普通催化剂相比可提高 107～ 1013；
? 专一性,即酶只能对特定的一种或一类底物起作用，这种专一性是由酶蛋白的立
体结构所决定的。可分为：
绝对专一性：有些酶只作用于一种底物，催化一个反应,而不作用于任何其它
物质。
相对专一性：这类酶对结构相近的一类底物都有作用。包括键专一性和簇（基团）
专一性。
立体异构专一性：这类酶不能辨别底物不同的立体异构体，只对其中的某一种构
型起作用，而不催化其他异构体。包括旋光异构专一性和几何异构专一性。
? 易变敏感性,易受各种因素的影响，在活细胞内受到精密严格的调节控制。
二、酶的化学本质及结构功能特点
1.发展史
(1)酶是蛋白质,
1926年,James Summer由刀豆制出脲酶结晶确立酶是蛋白质的观念，
其具有蛋白质的一切性质。
(2)核酶的发现：
1981～ 1982年,Thomas R.Cech实验发现有催化活性的天然 RNA—
Ribozyme。
L19 RNA和核糖核酸酶 P的 RNA组分具有酶活性是两个最著名的例子。
1955年，发现 DNA的催化活性。
(3)抗体酶（ abzyme）：
1986年,Richard Lerrur和 Peter Schaltz运用单克隆抗体技术制备
了具有酶活性的抗体（ catalytic antibody）。
酶
单成份酶,脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸
酶等。
双成份酶
酶蛋白
辅因子
（ 简单蛋白质 ）
（结合蛋白质）
（ apoenzyme）
（ cofacter)
辅酶 （ coenzyme)
辅基 (prosthetic group)
全酶 (holoenzyme） = 酶蛋白 + 辅因子
2.酶的组成
3.酶的辅因子
? 酶的辅因子是酶的对热稳定的非蛋白小分子物
质部分，其主要作用是作为电子、原子或某些基
团的载体参与反应并促进整个催化过程。
(1)传递电子体,如 卟啉铁, 铁硫簇 ；
(2)传递氢（递氢体）,如 FMN/FAD,NAD/NADP,C0Q、
硫辛酸 ；
(3)传递酰基体,如 C0A,TPP,硫辛酸 ；
(4)传递一碳基团,如 四氢叶酸 ；
(5)传递磷酸基,如 ATP,GTP；
(6)其它作用,转氨基，如 VB6 ； 传递 CO2，如 生物素 。
?维生素和辅酶
? 维生素是机体维持正常生命活动所 必不可少 的一类小分子
有机物质。
? 多数维生素维生素作为辅酶和辅基的组成成分，参与体内
的物质代谢。
? 维生素一般习惯分为 脂溶性 和 水溶性 两大类。其中脂溶性
维生素在体内可直接参与代谢的调节作用，而水溶性维生
素是通过转变成辅酶对代谢起调节作用。
? 某些小分子有机化合物与酶蛋白结合在一起并协同实施催
化作用, 这类分子被称为 辅酶 （ 或辅基 ） 。
? 辅酶是一类具有特殊化学结构和功能的化合物 。 参与的酶
促反应主要为 氧化 -还原反应或基团转移反应 。
? 大多数辅酶的 前体 主要是水溶性 B 族维生素。许多维生素
的生理功能与辅酶的作用密切相关。
I,脂溶性维生素
? 维生素 A,D,E,K均溶于脂类溶剂，不溶于水，在食物中
通常与脂肪一起存在，吸收它们，需要脂肪和胆汁酸。
① 维生素 A
? 维生素 A分 A1,A2两种，是不饱和一元醇类。维生素 A1又称为视
黄醇,A2称为脱氢视黄醇。
? 主要功能：维持上皮组织健康及正常视觉，促进年幼动物的正常
生长。
C H 2 O H
C H 2 O H
A 1
A 2
② 维生素 D
? 维生素 D是固醇类化合物，主要有 D2,D3,D4,D5。其中
D2,D3活性最高。
麦角固醇
7- 脱氢胆固醇
22- 双氢麦角固醇
7- 脱氢谷固醇
维生素 D2
维生素 D3
维生素 D4
维生素 D5
? 维生素 D的结构
? 在生物体内,D2和 D3本身不具有生物活性。它们在肝脏和
肾脏中进行羟化后，形成 1,25-二羟基维生素 D。其中 1，
25-二羟基维生素 D3是生物活性最强的。
? 主要功能：调节钙、磷代谢，维持血液中钙、磷浓度正常，
促使骨骼正常发育。
H O
R
③ 维生素 E
? 维生素 E又叫做生育酚，目前发现的有 6种，其中 ?,?,?，
?四种有生理活性。
? 主要功能：具有抗氧化剂的功能，可作为食品添加剂使用，
还可保护细胞膜的完整性；同时还有抗不育的作用。
O
H O
R 2
R 1
R 3
④ 维生素 K
? 维生素 K有 3种,K1,K2,K3。其中 K3是人工合成的。维生
素 K是 2-甲基萘醌的衍生物。
? 主要功能：促进肝脏合成凝血酶原，促进血液的凝固。
O
O
O
O
C H 2 [ C H C ( C H 3 ) C H 2 C H 2 ] 5 C H C ( C H 3 ) 2
II,水溶性维生素
① 维生素 B1和羧化辅酶
? 维生素 B1又称硫胺素，在体内 以焦磷酸硫胺素 (TPP)形式
存在。缺乏时表现出多发性神经炎、皮肤麻木、心力衰
竭、四肢无力、下肢水肿 。
C l
-
N
+
S
C H 3
C H 2 C H 2 O H
N
N
N H 2
H 3 C
C H 2
? 焦磷酸硫胺素 (TPP)是脱羧酶的辅酶，催化丙酮酸或 α–酮
戊二酸的氧化脱羧反应，所以又称为羧化辅酶。
N
N
N H 2
H 3 C
C H 2 N
+
S
C H 3
C H 2 C H 2 O P O
O
P
O H
O H
O
O H
C l
-
② 维生素 B2和黄素辅酶
? 维生素 B2又称核黄素, 由核糖醇和 6,7-二甲基异咯嗪两
部分组成 。
? 缺乏时组织呼吸减弱, 代谢强度降低 。 主要症状为口腔
发炎, 舌炎, 角膜炎, 皮炎等 。
N
C
C
N H
N
N
O
O
C H 2 C H C H C H C H 2 O P O H
O H O H O H O
O H
C H 3
C H 3
? FAD(黄素 -腺嘌呤二核苷酸 )和 FMN(黄素单核苷酸 )是核黄
素 (维生素 B2)的衍生物 。 它们在脱氢酶催化的氧化 -还原
反应中, 起着电子和质子的传递体作用 。
C H 3
C H 3
N
C
C
N H
N
N
O
O
C H 2 C H C H C H C H 2 O P O
O H O H O H O
O H
O
C H 2
O H O H
N
N
N H 2
N
N
F M N F A D
③ 泛酸和辅酶 A（ CoA）
? 维生素 B3又称泛酸, 是由 ?,?-二羟基 -?-?-二甲
基丁酸和一分子 ?-丙氨酸缩合而成 。
C H 2 C
C H 3
C H 3
C H
O H
C
O
N H C H 2 C H 2 C
O H
C O O H
O
? 辅酶 A是生物体内代谢反应中乙酰化酶的辅酶, 它
是含泛酸的复合核苷酸 。 它的重要生理功能是传递
酰基, 是形成代谢中间产物的重要辅酶 。
C H
2
C
C H
3
C H
3
C H
O H
C
O
N H C H
2
C H
2
C N H C H
2
C H
2
S H
O
O
O O HP
O
O H
H O
N
N
N H
2
N
N
O
P
O
O O H
PO O
O H
C H
2
④ 维生素 PP和辅酶 I、辅酶 II
? 维生素 PP包括尼克酸 （ 又称烟酸 ） 和尼克酰胺
（ 又称烟酰胺 ） 两种物质 。 在体内主要以尼克
酰胺形式存在, 尼克酸是尼克酰胺的前体 。
N
C O O H
N
C O N H 2
尼克酸 尼克酰胺
? 维生素 PP能维持神经组织的健康 。 缺乏时表现出
神经营养障碍, 出现皮炎 。
? NAD+ (烟酰胺 -腺嘌呤二核苷酸, 又称为辅酶 I)
和 NADP+(烟酰胺 -腺嘌呤磷酸二核苷酸,又称为辅
酶 II )是维生素烟酰胺的衍生物, 它们是多种重
要脱氢酶的辅酶 。
O
C H 2 O P O P O C H 2
O H O H
O O
O
-
O
-
N
+
C O N H 2
O
O H O H ( O P O 3 H 2 )
N
N
N H 2
N
N
⑤ 维生素 B6和磷酸吡哆醛
? 维生素 B6包括吡哆醇、吡哆醛和吡哆胺。
? 维生素 B6在体内经磷酸化作用转化为相应的磷酸脂，参
加代谢的主要的是磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺。磷酸吡哆
醛是氨基酸转氨作用、脱羧作用和消旋作用的辅酶。
N
H 3 C
H O
C H 2 N H 2
C H 2 O H
N
H 3 C
H O
C H O
C H 2 O H
N
H 3 C
H O
C H O
C H 2 O P O H
O
O H
N
H 3 C
H O
C H 2 N H 2
C H 2 O P O H
O
O H
磷 酸 吡 哆 醛 磷 酸 吡 哆 胺
⑥ 生物素
? 生物素是 B族维生素 B7，它是多种羧化酶的辅酶。
? 生物素的功能是作为 CO2的递体，在生物合成中
起传递和固定 CO2的作用。H N N H
C
O
C HH 2 C
S
( C H 2 ) 4 C O O H
⑦ 叶酸和叶酸辅酶
? 维生素 B11又称叶酸，作为辅酶的是叶酸加氢的还原产物
四氢叶酸。
? 四氢叶酸的主要作用是作为一碳基团, 如 -CH3,-CH2-,
-CHO 等的载体, 参与多种生物合成过程 。
N
N
H 2 N
O H
N
N
H
H
C H 2
H
H
H
N H C
O
N H C H C O O H
C H 2
C H 2
C O O H
⑧ 维生素 B12和 B12辅酶
? 维生素 B12又称为钴胺素。维生素 B12分子中与 Co+
相连的 CN基被 5’ -脱氧腺苷所取代，形成维生
素 B12辅酶。
? 维生素 B12辅酶的主要功能是作为变位酶的辅酶，
催化底物分子内基团 (主要为甲基 )的变位反应。
⑨ 维生素 C
? 维生素 C能防治坏血病，故又称抗坏血酸。 在体
内参与氧化还原反应，羟化反应。人体不能合
成。
C
C
C
C
C
C H 2 O H
O
H O
H O
H
H O H
O O
C
C
O
O
O
HH O
H
C H 2 O H
C
C
C
⑩ 硫辛酸
? 硫辛酸是少数不属于维生素的辅酶。硫辛酸是 6,8-二硫
辛酸，有两种形式：即硫辛酸（氧化型）和二氢硫辛酸
（还原型）。
S C H
S C H
C H 2
C H 2 C H 2 C H 2 C H 2 C O O H
11,辅酶 Q（ CoQ）
? 辅酶 Q又称为泛醌，广泛存在与动物和细
菌的线粒体中。
? 辅酶 Q的活性部分是它的醌环结构，主要
功能是作为线粒体呼吸链氧化 -还原酶的
辅酶，在酶与底物分子之间传递电子。
O
O
C H 3 O
C H 3 O
C H 3
( C H 2 C H C C H 2 ) n H
C H 3
n = 6 - 1 0
4.酶结构与功能特点
? 蛋白质的结构特点：
一级、二级、三级、四级结构
根据结构不同酶可分为：
I,单体酶,只有单一的三级结构蛋白质构成。
II,寡聚酶,由多个（两个以上）具有三级结构的
亚基聚合而成。
III,多酶复合体,由几个功能相关的酶嵌合而成的
复合体。
? 与催化作用相关的结构特点
(1)活性中心：酶分子中直接和底物结合并起催化反应的空
间局限（部位）。
? 结合部位 (Binding
site)：酶分子中与底
物结合的部位或区域
一般称为结合部位 。
? 催化部位 (Catalytic site),
酶分子中促使底物发生化
学变化的部位称为催化部
位。
? 通常将酶的结合部位和催
化部位总称为酶的活性部
位或活性中心。
? 结合部位决定酶的专一性，
? 催化部位决定酶所催化反
应的性质。
? 调控部位 (Regulatory site):酶分子中存在着一
些可以与其他分子发生某种程度的结合的部位，
从而引起酶分子空间构象的变化，对酶起激活或
抑制作用
(2)必须 基团：酶表现催化活性不可缺少的基团。
? 亲核性基团：丝氨酸的羟基，半胱氨酸的巯基和组氨酸的咪唑基。
? 酸碱性基团：门冬氨酸和谷氨酸的羧基，赖氨酸的氨基，酪氨酸的酚
羟基，组氨酸的咪唑基和半胱氨酸的巯基等。
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
O H
O H
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
S H
S H
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
N
N H
N
N
H
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
C H
2
C
O H
O
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
C
O H
O
C O O H
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
C H
2
C H
2
C H
2
N H
2
N H
2
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
O H
O H
亲核性基团 酸碱性基团
(3)酶原和酶原的激活：
? 酶原,没有活性的酶的前体。
? 酶原的激活,酶原在一定条件下经适当的物质作用可转变成有活性的
酶。酶原转变成酶的过程称为酶原的激活。
? 本质,酶原的激活实质上是酶活性部位形成或暴露的过程。
(4)同功酶：能催化同一化学反应的一类酶。
? 活性中心相似或相同：催化同一化学反应。
? 分子结构不同：理化性质和免疫学性质不同。
C H 3 C H C O O H
O H
N A D + H +C H 3 C C O O H
O
N A D H
三、酶的分类及命名
1,酶的分类
(1) 氧化 -还原酶 Oxidoreductase
? 氧化 -还原酶催化氧化 -还原反应。
? 主要包括脱氢酶 (Dehydrogenase)和氧化酶 (Oxidase)。
? 如，乳酸 (Lactate)脱氢酶催化乳酸的脱氢反应。
C H 3 C H C O O H
N H 2
H O O C C H 2 C H 2 C C O O H
O
H O O C C H 2 C H 2 C H C O O H
N H 2
C H 3 C C O O H
O
(2) 转移酶 Transferase
? 转移酶催化基团转移反应，即将一个底物分子的
基团或原子转移到另一个底物的分子上。
例如,谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。
H 2 OC O O C H 2 C H 3R R C O O H C H 3 C H 2 O H
(3) 水解酶 Hydrolase
? 水解酶催化底物的加水分解反应。
? 主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。
? 例如，脂肪酶 (Lipase)催化的脂的水解反应
H O O C C H = C H C O O H H 2 O H O O C C H 2 C H C O O H
O H
(4) 裂解酶 Lyase
? 裂合酶催化从底物分子中移去一个基团或 原子
形成双键的反应及其逆反应。
? 主要包括醛缩酶、水化酶及脱氨酶等。
? 例如,延胡索酸水合酶催化的反应。
O
C H 2 O H
O H
O H
O H
O H O
C H 2 O H C H 2 O H
O H
O H
O H
(5) 异构酶 Isomerase
? 异构酶催化各种同分异构体的相互转化，即底物
分子内基团或原子的重排过程。
例如,6-磷酸葡萄糖异构酶催化的反应。
(6) 合成酶 Ligase or Synthetase
? 合成酶，又称为连接酶，能够催化 C-C,C-O,C-N
以及 C-S 键的形成反应。这类反应必须与 ATP分解
反应相互偶联。
A + B + ATP + H-O-H ===A ? B + ADP +Pi
例如，丙酮酸羧化酶催化的反应
丙酮酸 + CO2 ? 草酰乙酸
3'3'
3'3'3'
3'3'3'3'
3'
5'5'5'5'
5'
5'5'5'5'5'
BBBBB
PP P
+
P O HPP
BBBB
PPPP
P
B
P
(7) 核酸酶（催化核酸） Ribozyme
? 核酸酶是唯一的非蛋白酶。它是一类特殊的 RNA，
能够催化 RNA分子中的磷酸酯键的水解及其逆反
应。
2,酶的命名
(1)习惯命名法,
1,根据其催化底物来命名；
2,根据所催化反应的性质来命名；
3,结合上述两个原则来命名；
4,有时在这些命名基础上加上酶的来源或其
它特点。
(2)国际系统命名法
? 系统名称包括底物名称、构型、反应性质，最后加一个酶
字。例如：
习惯名称,谷丙转氨酶
系统名称,丙氨酸,?-酮戊二酸氨基转移酶
酶催化的反应,
谷氨酸 + 丙酮酸 ?? ?-酮戊二酸 + 丙氨酸
1.酶催化作用的 本质,降低反应活化能
2.酶催化作用的 中间产（络合）物学说
? 在酶催化的反应中，第一步是酶与底物形成酶－
底物中间复合物。当底物分子在酶作用下发生化
学变化后，中间复合物再分解成产物和酶。
E + S ==== E-S ??? P + E
? 许多实验事实证明了 E－ S复合物的存在。 E－ S复
合物形成的速率与酶和底物的性质有关。
四、酶作用的机制
3.酶与底物结合形成中间络
合物的方式（理论）
(1)锁钥假说 (lock and key
hypothesis)：
? 认为整个酶分子的天然构象
是具有刚性结构的，酶表面
具有特定的形状。酶与底物
的结合如同一把钥匙对一把
锁一样
(2)诱导契合假说（ induced–fit
hypothesis),
? 该学说认为酶表面并没有一
种与底物互补的固定形状，
而只是由于底物的诱导才形
成了互补形状,
4,使酶具有高效催化的因素
(1)临近定向效应：
? 在酶促反应中，底物分子结合到酶的活性中心，一方面底物在酶活性
中心的有效浓度大大增加，有利于提高反应速度；
? 另一方面，由于活性中心的立体结构和相关基团的诱导和定向作用，
使底物分子中参与反应的基团相互接近，并被严格定向定位，使酶促
反应具有高效率和专一性特点。
(2),张力, 和, 形变,,
? 底物与酶结合诱导酶的分子构象变化，变化的酶分子又使底物分子的
敏感键产生, 张力, 甚至, 形变,,从而促使酶－底物中间产物进
入过渡态。
(3)酸碱催化：
? 酸 -碱催化可分为狭义的酸 -碱催化和广义的酸 -碱催化。酶参与的酸 -
碱催化反应一般都是广义的酸－碱催化方式。
? 广义酸－碱催化是指通过质子酸提供部分质子,或是通过质子碱接受
部分质子的作用，达到降低反应活化能的过程。
? 酶活性部位上的某些基团可以作为良好的质子供体或受体对底物进行
酸碱催化。
? His 残基的咪唑基是酶的酸碱催化作用中最活泼的一个催化功能团。
- C O O H,- N H 3,- S H,
+
OH NH N H
+
- C O O,- N H 2,- S,
-,,-
O
-
N HN:
广义酸基团 广义碱基团
（质子供体） （质子受体 ）
(4)共价催化：
? 催化剂通过与底物形成反应活
性很高的共价过渡产物，使反
应活化能降低，从而提高反应
速度的过程，称为共价催化。
? 酶中参与共价催化的基团主要
包括 His 的咪唑基,Cys 的硫
基,Asp 的羧基,Ser 的羟基
等。
? 某些辅酶，如焦磷酸硫胺素和
磷酸吡哆醛等也可以参与共价
催化作用。
1.底物浓度 对酶促反应速度影响
① 在酶浓度,pH，温度等条件
不变的情况下研究底物浓度
和反应速度的关系。如右图
所示：
? 在低底物浓度时,反应速度
与底物浓度成正比，表现为
一级反应特征 。
? 当底物浓度达到一定值，几
乎所有的酶都与底物结合后，
反应速度达到最大值
（ Vmax），此时再增加底物
浓度，反应速度不再增加，
表现为 零级反应 。
五、酶促反应的速度及其影响因素
② 米氏方程
? 1913年，德国化学家 Michaelis和 Menten根据 中
间产物学说 对酶促反映的动力学进行研究，推
导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关
系的著名公式，称为 米氏方程 。
V=
V m a x [ S ]
K m + [ S ]
Km — 米氏常数
Vmax — 最大反应速度
根据中间产物学说，酶促反应分两步进行,
? 米氏方程的推导：
? 米氏常数 Km的意义,
? 由米氏方程可知，当反应速度等于最大反应速度一半
时,即 V = 1/2 Vmax,Km = [S]
? 上式表示,米氏常数是 反应速度为最大值的一半时的
底物浓度 。
? 因此,米氏常数的单位为 mol/L。
? 不同的酶具有不同 Km值，它是酶的一个重要的特征物
理常数。
? Km值只是在固定的底物，一定的温度和 pH条件下，一
定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的 Km值。
? Km值表示酶与底物之间的 亲和程度, Km值大表示亲和
程度小，酶的催化活性低 ; Km值小表示亲和程度大,
酶的催化活性高。
测定 Km和 V的方法很多，最常用的是 Lineweaver–Burk的
作图法 — 双倒数作图法 。
1 Km 1 1
??? = ?? ? ??? + ??
V Vmax [S] Vmax
取米氏方程式的倒数形式：
-4 -2 0 2 4 6 8 10
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1/[S ](1/m m ol,L
-1
)
1/v
1/Vmax
斜率 =Km/Vmax
-1/Km
? 米氏常数 Km的 测定：
2.抑制剂 对酶反应的影响
? 有些物质能与酶分子上某些必须基团结合（作用 ),使酶的
活性中心的化学性质发生改变，导致酶活力下降或丧失，
这种现象称为 酶的抑制作用 。
? 能够引起酶的抑制作用的化合物则称为 抑制剂
（ inhibitor)
? 酶的抑制剂一般具备两个方面的 特点,
? a.在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相
似。
? b.能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳
定的复合体或结合物。
? 抑制作用的类型：
(1)不可逆抑制作用,
? 抑制剂与酶反应中心
的活性基团以共价形
式结合，引起酶的永
久性失活。如有机磷
毒剂二异丙基氟磷酸
酯。
(2)可逆抑制作用,
? 抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑
制剂可以通过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活
性。
? 根椐抑制剂与酶结合的情况，又可以分为三类：
I,竞争性抑制：
? 某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性
中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心
之外，其结果是酶促反应被抑制了。
? 竟争性抑制通常可以通过增大底物浓度，即提高底物的竞争能力
来消除。
? 竞争性抑制可用下式表示：
? 有竞争性抑制剂存在时,Km值增大 (1+[I]/Ki)倍，
且 Km值随 [I]的增高而增大；
? 在 [E]固定时，当 [S] ﹥﹥ Km (1+[I]/Ki),Km
(1+[I]/Ki)项可忽略不计，则 v= Vmax，即最大
反应速度不变。
? 竞争性抑制作用的速度方程：
? 竞争性抑制作用的 Lineweaver–Burk图,
II,非竞争性抑制：
? 酶可同时与底物及抑制剂结合，引起酶分子构象变化，并导至酶活
性下降。由于这类物质并不是与底物竞争与活性中心的结合，所以
称为非竞争性抑制剂。
? 如某些金属离子（ Cu2+,Ag+,Hg2+）以及 EDTA等，通常能与酶分
子的调控部位中的 -SH基团作用，改变酶的空间构象，引起非竞争
性抑制。
? 非竟争性抑制不能通过增大底物浓度的方法来消除 。
? 非竞争性抑制可用下式表示：
? 有非竞争性抑制剂存在时,V值减小 (1+[I]/Ki)倍，
且 V值随 [I]的增高而降低；
? Km值不变。
? 非竞争性抑制作用的速度方程：
? 非竞争性抑制作用的 Lineweaver–Burk图,
? 有反竞争性抑制剂存在时,Km和 V值均减小 (1+[I]/Ki)倍，且
都随 [I]的增高而降低 。
III,反竞争性抑制,
? 酶只有在与底物结合后，才能与抑制剂结合，引起酶活性下降。
? 反竞争性抑制可用下式表示：
? 反竞争性抑制作用的速度方程：
? 反竞争性抑制作用的 Lineweaver–Burk图,
3.激活剂 对酶反应的影响
? 凡是能提高酶活力的简单化合物都称为 激活剂
（ activator)。其中大部分是一些无机离子和小分子简单
有机物。 如,Na+,K+,Ca2+,Mg2+,Cu2+,Zn2+,Co2+、
Cr2+,Fe2+,Cl-,Br-,I-,CN-,NO3-,PO4-等；
? 这些离子可与酶分子上的氨基酸侧链基团结合，可能是酶
活性部位的组成部分，也可能作为辅酶或辅基的一个组成
部分起作用；
? 一般情况下，一种激活剂对某种酶是激活剂，而对另一种
酶则起抑制作用；
? 对于同一种酶，不同激活剂浓度会产生不同的作用。
4.酶浓度 对酶反应的影响
? 在底物足够过量而其它条件固定的情况下，并且反应系统
中不含有抑制酶活性的物质及其他不利于酶发挥作用的因
素时，酶促反应的速度和酶浓度成正比。
5.温度 对酶反应的影响
? 一方面是温度升高,酶促
反应速度加快。
? 另一方面,温度升高,酶
的高级结构将发生变化
或变性，导致酶活性降
低甚至丧失。
? 因此大多数酶都有一个
最适温度 。 在最适温度
条件下,反应速度最大。
10 20 30 40 50 60 70 80 90
0
20
40
60
80
100
T e mp e r a t u r e
O
C
R
e
l
a
t
i
v
e
A
c
t
i
v
i
t
y
(
%)
最适温度
6.pH对酶反应的
影响
? 在一定的 pH下,酶
具有最大的催化活
性,通常称此 pH为
最适 pH。
7.酶的别构（变构）效应：
? 由于效应物的存在，而引起酶的 结构（构象） 变化。
? 别构酶 (Allosteric enzyme)的 特点,
? 一般是 寡聚酶,由多亚基组成，包括催化部位和调节（别
构）部位；
? 具有 别构效应 。指酶和一个配体（底物，调节物）结合后
可以影响酶和另一个配体（底物）的结合能力。
相同（均为底物）：同促效应（ homotropic effect）
不同（效应调节物）：异促效应 （ heterotropic effect）
根据配体结合
后对后继配
体的影响
根据配体性质
正协同效应 （ positive cooperative effect）
负协同效应 （ negative cooperative effect）
? 动力学特点,不符合米曼方程双曲线。
? 别构酶与非调节酶动力学曲线的比较
? 别构酶举例：天冬氨酸转氨甲酰酶，简称 ATCase
8.固定化酶
? 固定化酶 是通过吸附、耦联、交联和包埋等物理
或化学的方法把酶连接到某种载体上，做成仍具
有酶催化活性的水不溶性酶。
? 作用特点,稳定性提高，易分离，可反复使用，
提高操作的机械强度。
六、酶的分离纯化与酶活力测定
1.酶的分离纯化
① 基本原则,提取过程中避免酶变性而失去活性；防止强
酸、强碱、高温和剧烈搅拌等；要求在低温下操作，加
入的化学试剂不使酶变性，操作中加入缓冲溶液,
② 基本操作程序：
a,选材,微生物（微生物发酵物, 胞内酶，胞外酶），动
物（动物器脏：消化酶，血液,SOD酶，尿液：尿激酶
等）,植物（木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶等）。
b,抽提,加入提取液提取。胞内酶先要进行细胞破碎（机
械研磨，超声波破碎，反复冻融或自溶等），
c,分离,先进行净化处理（过滤，絮凝，离心脱色），再
采用沉淀法分离（盐析法，有机溶剂沉淀法，超离心
等）。
d,纯化,可采用离子交换层析，凝胶过滤，液相色谱，亲
和色谱和超滤等方法。
③ 酶的制剂形式：
a,固体：干燥（冰冻升华，喷雾干燥，真空干燥）
b,液体
④ 保存：低温下短期保存。
2.酶活力的测定
① 概念
? 酶活力,又称为酶活性，一般把酶催化一定化学反应的能
力称为酶活力，通常以在一定条件下酶所催化的化学反应
速度来表示。
? 基本原理,酶是蛋白质，种类多，结构复杂多样，一般对酶
的测定，不是直接测定其酶蛋白的浓度，而是测定其催化
化学反应的能力，这是基于在最优化条件下，当底物足够
（过量），在酶促反应的初始阶段，酶促反应的速度（初
速度）与酶的浓度成正比（即 V=K［ E］），故酶活力测定
的是化学反应速度，一定条件下可代表酶活性分子浓度。
② 酶活力测定
I,酶活力测定就是测定一定量的酶，在单位时间内产物 (P)的生成
（增加）量或底物（ S）的消耗（减少）量。即测定时确定三种量：
①加入一定量的酶；②一定时间间隔；③物质的增减量 。
II,测定酶活力常有以下几种方法：
? 在一个反应体系中，加入一定量的酶液，开始计时反应，经一定时
间反应后，终止反应，测定在这一时间间隔内发生的化学反应量
（终止时与起始时的浓度差），这时测得的是 初速度
? 在一定条件下，加入一定量底物（规定），再加入合适量的酶液，
测定完成该反应（底物反应完）所需的时间，（ 非初速度,为一平
? 动态连续测定法 。在反应体系中，加入酶，用仪器连续监测整个酶
促反应过程中底物的消耗或产物的生成。
? 快速反应追踪法 。近年来，追踪极短时间（ 10-3s以下）内反应过程
的方法和装臵已经应用。其代表有 停流法（ stopped-flow）和温度
跃变法（ temperature jump）。
III.
? 测酶活所用的反应条件应该是 最适条件,所谓最适条件包括最适温
度、最适 pH、足够大的底物浓度、适宜的离子强度、适当稀释的酶
IV,酶活力测定方法：
? 反应计时 。反应计时必须准确。反应体系必须预热至规定温度后，
加入酶液并立即计时。反应到时，要立即灭酶活性，终止反应，
并记录终了时间。终止酶反应，常使酶立刻变性，最常用的方法
是加入三氯乙酸或过氯酸使酶蛋白沉淀，也可用 SDS使酶变性，或
迅速加热使酶变性。有些酶可用非变性法来停止反应或用破坏其
辅因子来停止反应 。
? 反应量的测定 。测底物减少量或产物生成量均可。在反应过程中
产物是从无到有，变化量明显，极利于测定，所以大都测定产物
具体物质量的测定，据被测定物质的物理化学性质通过定量分析
法测定。常用的方法有：
? 光谱分析法,酶将产物转变为（直接或间接）一个可用 分光光度
法或荧光光度法 测出的化合物。
? 化学法,利用化学反应使产物变成一个可用某种物理方法测出的
化合物，然后再反过来算出酶的活性。
? 放射性化学法,用同位素标记的底物，经酶作用后生成含放射性
的产物，在一定时间内，生成的放射性产物量与酶活性成正比。
3.酶活力的表示方法及计算
I,酶活力单位
? 酶活力可用单位时间内单位体积中底物的减少量或产物
的增加量表示，单位为 mol/min等。
? 酶活力单位的基本定义 为：规定条件（最适条件）下一
定时间内催化完成一定化学反应量所需的酶量。
? 据不同情况有几种酶活力单位（ activity unit）或又称
酶单位 （ enzyme unit
a,国际单位,
? 一般用活力单位 U（ Unit） 表示，许多酶活力单位都是以
最佳条件或某一固定条件下每分钟催化生成 1μ mol产物
所需要的酶量为一个酶活力单位。
? 一个, Katal”单位是指在一定条件下 1秒钟内转化 1mol底物所需的酶量。
? Kat和 U的换算关系,1 Kat=6× 107U,1U=16067n Kat
? 以上的酶单位定义中，如果底物（ S）有一个以上可被作用的化学键，
则一个酶单位表示 1分钟使 1μmol 有关基团转化的酶量。如果是两个相
同的分子参加反应，则每分钟催化 2μmol 底物转化的酶量称为一个酶单
位。
? 在, U”和, kat”酶活力单位的定义和应用中，酶催化底物的分子量必须
是已知的，否则将无法计算 。
b,习惯单位,
在实际使用中，结果测定和应用都比较方便、直观，规定的酶活力单
① α -淀粉酶活力单位,每小时分解 1g可溶性淀粉的酶量为一个酶单位。
（ QB546-80），也有规定每小时分解 1mL2%可溶性淀粉溶液为无色糊精
② 糖化酶活力单位,在规定条件下，每小时转化可溶性淀粉产生 1mg还原糖
③ 蛋白酶,规定条件下，每分钟分解底物酪蛋白产生 1μg 酪氨酸所需的酶量。
④ DNA限制性内切酶,推荐反应条件下，一小时内可完全消化 1μg 纯化的 DNA
II,比活力 （ specific activity）
? 酶的比活力是每单位（一般是 mg）蛋白质中的酶活力单位数（如：
酶单位 /mg蛋白），实际应用中也用每单位制剂中含有的酶活力数
表示（如：酶单位 /mL（液体制剂），酶单位 /g（固体制剂）），
对同一种酶来讲，比活力愈高则表示酶的纯度越高（含杂质越少），
? 在评价纯化酶的纯化操作中，还有一个概念就是回收率。
回收率 =某纯化操作后的总活力 /某纯化操作前的总活力
［总活力 =比活力 ×
III,酶活力计算及计算举例
? 酶活力计算是将实验中所用各种参数和所测得的实验数据（反应时
间、酶液稀释度和用量、产物生成量等）换算成每毫升（或每克）
酶制剂中所含的酶活力单位数。
? 酶活力测定举例,福林 -酚（ Lowry）法 测定蛋白酶活力。该方法的
基本原理是以酪蛋白为底物进行反应，然后用福林 -酚试剂显色，
并用光度法测定酶促反应产物酪氨酸的生成量。测定在初速度阶段
本章小结
一、酶
1,酶的概念
2,酶催化作用的特点
① 共性
② 特性,条件温和、高效率、专一性、易变敏感性
二、酶的化学本质及结构功能特点
I,酶,单纯酶
结合酶,全酶 = 酶蛋白 + 辅因子
II,酶的辅因子
? 维生素和辅酶
? 维生素是机体维持正常生命活动所必不可少的一类小分子有机物质。
? 维生素一般习惯分为脂溶性和水溶性两大类。
? 辅酶是一类具有特殊化学结构和功能的化合物 。 参与的酶促反应主要为氧化 -还原反应或基团转移反应 。
? 大多数辅酶的前体主要是水溶性 B 族维生素。许多维生素的生理功
能与辅酶的作用密切相关。
III,酶结构与功能特点
(1)活性中心, 结合部位、催化部位、调控部位
(2)必须基团
(3)酶原和酶原的激活
(4)同功酶
三、酶的分类及命名
四、酶作用的机制
1.酶催化作用的 本质,降低反应活化能
2.酶催化作用的 中间产（络合）物学说
E + S ==== E-S ??? P + E
3.酶与底物结合形成中间络合物的方式,锁钥假说、诱导契合假说
4,使酶具有高效催化的因素
? 临近定向效应
?, 张力, 和, 形变,
? 酸碱催化
? 共价催化
五、酶促反应的速度及其影响因素
1.底物浓度对酶促反应速度的影响
? 米氏方程
? 米氏常数 Km的意义,米氏常数是反应速度为最大值的一半
时的底物浓度。米氏常数的单位为 mol/L。
? Km值表示酶与底物之间的亲和程度,Km值大表示亲和程度
小，酶的催化活性低 ; Km值小表示亲和程度大,酶的催化
活性高。
V=
V m a x [ S ]
K m + [ S ]
2.抑制剂对酶反应的影响
? 抑制作用的类型：
? 不可逆抑制作用
? 可逆抑制作用
a,竞争性抑制
b,非竞争性抑制
c,反竞争性抑制
a b c
3.激活剂对酶反应的影响：提高酶活力
4.酶浓度对酶反应的影响,在一定条件下酶促反应的速度和酶浓度成正比。
5.温度对酶反应的影响,最适温度
6.pH对酶反应的影响：最适 pH
7.酶的别构（变构）效应
? 别构酶的特点：
? 一般是寡聚酶
? 具有别构效应
? 反应速度和底物浓度关系不 符合米曼方程双曲线
8.固定化酶
六、酶的分离纯化与酶活力测定
1.酶的分离纯化
① 基本原则：提取过程中避免酶变性而失去活性
② 基本操作程序：
a,选材
b,抽提
c,分离
d,纯化
③ 酶的制剂形式与保存
2.酶活力的测定
I,概念
? 酶活力,又称为酶活性，一般把酶催化一定化学反应的
能力称为酶活力，通常以在一定条件下酶所催化的化学
反应速度来表示。
II,酶活力测定就是测定一定量的酶，在单位时间内产物 (P)
的生成（增加）量或底物（ S）的消耗（减少）量。即
测定时确定 三种量,①加入一定量的酶；②一定时间间
隔；③物质的增减量。
III,测定酶活力常有以下几种方法
? 初速度法
? 平均速度法
? 动态连续测定法
? 快速反应追踪法
? 测酶活所用的反应条件应该是最适条件
? 酶活力测定方法：
? 反应计时
? 反应量的测定,根据被测定物质的物理化学性质通过定量
分析法测定。常用的方法有：光谱分析法、化学法和放射
性化学法。
3.酶活力的表示方法及计算
? 酶活力单位的基本定义为：规定条件（最适条件）下一定
时间内催化完成一定化学反应量所需的酶量。
a,国际单位：, U” 和, Kat”
b,习惯单位
? 比活力：酶的比活力是每单位（一般是 mg）蛋白质中的酶
活力单位数（如：酶单位 /mg蛋白）。
? 回收率 =某纯化操作后的总活力 /某纯化操作前的总活力
酶 (Enzyme)
1.酶的概念
酶 是一类由活性细胞产生的具有催化作用和
高度专一性的特殊 蛋白质 。简单说，酶是一类由
活性细胞产生的 生物催化剂 。
一、酶的概念
2.酶催化作用的特点
(1) 酶和一般催化剂的 共性,
? 加快反应速度；
? 不改变平衡常数；
? 自身不参与反应。
(2) 酶催化作用 特性,
? 条件温和,常温、常压,pH=7；
? 高效率,反应速度与不加催化剂相比可提高 108～
1020，与加普通催化剂相比可提高 107～ 1013；
? 专一性,即酶只能对特定的一种或一类底物起作用，这种专一性是由酶蛋白的立
体结构所决定的。可分为：
绝对专一性：有些酶只作用于一种底物，催化一个反应,而不作用于任何其它
物质。
相对专一性：这类酶对结构相近的一类底物都有作用。包括键专一性和簇（基团）
专一性。
立体异构专一性：这类酶不能辨别底物不同的立体异构体，只对其中的某一种构
型起作用，而不催化其他异构体。包括旋光异构专一性和几何异构专一性。
? 易变敏感性,易受各种因素的影响，在活细胞内受到精密严格的调节控制。
二、酶的化学本质及结构功能特点
1.发展史
(1)酶是蛋白质,
1926年,James Summer由刀豆制出脲酶结晶确立酶是蛋白质的观念，
其具有蛋白质的一切性质。
(2)核酶的发现：
1981～ 1982年,Thomas R.Cech实验发现有催化活性的天然 RNA—
Ribozyme。
L19 RNA和核糖核酸酶 P的 RNA组分具有酶活性是两个最著名的例子。
1955年，发现 DNA的催化活性。
(3)抗体酶（ abzyme）：
1986年,Richard Lerrur和 Peter Schaltz运用单克隆抗体技术制备
了具有酶活性的抗体（ catalytic antibody）。
酶
单成份酶,脲酶、蛋白酶、淀粉酶、核糖核酸
酶等。
双成份酶
酶蛋白
辅因子
（ 简单蛋白质 ）
（结合蛋白质）
（ apoenzyme）
（ cofacter)
辅酶 （ coenzyme)
辅基 (prosthetic group)
全酶 (holoenzyme） = 酶蛋白 + 辅因子
2.酶的组成
3.酶的辅因子
? 酶的辅因子是酶的对热稳定的非蛋白小分子物
质部分，其主要作用是作为电子、原子或某些基
团的载体参与反应并促进整个催化过程。
(1)传递电子体,如 卟啉铁, 铁硫簇 ；
(2)传递氢（递氢体）,如 FMN/FAD,NAD/NADP,C0Q、
硫辛酸 ；
(3)传递酰基体,如 C0A,TPP,硫辛酸 ；
(4)传递一碳基团,如 四氢叶酸 ；
(5)传递磷酸基,如 ATP,GTP；
(6)其它作用,转氨基，如 VB6 ； 传递 CO2，如 生物素 。
?维生素和辅酶
? 维生素是机体维持正常生命活动所 必不可少 的一类小分子
有机物质。
? 多数维生素维生素作为辅酶和辅基的组成成分，参与体内
的物质代谢。
? 维生素一般习惯分为 脂溶性 和 水溶性 两大类。其中脂溶性
维生素在体内可直接参与代谢的调节作用，而水溶性维生
素是通过转变成辅酶对代谢起调节作用。
? 某些小分子有机化合物与酶蛋白结合在一起并协同实施催
化作用, 这类分子被称为 辅酶 （ 或辅基 ） 。
? 辅酶是一类具有特殊化学结构和功能的化合物 。 参与的酶
促反应主要为 氧化 -还原反应或基团转移反应 。
? 大多数辅酶的 前体 主要是水溶性 B 族维生素。许多维生素
的生理功能与辅酶的作用密切相关。
I,脂溶性维生素
? 维生素 A,D,E,K均溶于脂类溶剂，不溶于水，在食物中
通常与脂肪一起存在，吸收它们，需要脂肪和胆汁酸。
① 维生素 A
? 维生素 A分 A1,A2两种，是不饱和一元醇类。维生素 A1又称为视
黄醇,A2称为脱氢视黄醇。
? 主要功能：维持上皮组织健康及正常视觉，促进年幼动物的正常
生长。
C H 2 O H
C H 2 O H
A 1
A 2
② 维生素 D
? 维生素 D是固醇类化合物，主要有 D2,D3,D4,D5。其中
D2,D3活性最高。
麦角固醇
7- 脱氢胆固醇
22- 双氢麦角固醇
7- 脱氢谷固醇
维生素 D2
维生素 D3
维生素 D4
维生素 D5
? 维生素 D的结构
? 在生物体内,D2和 D3本身不具有生物活性。它们在肝脏和
肾脏中进行羟化后，形成 1,25-二羟基维生素 D。其中 1，
25-二羟基维生素 D3是生物活性最强的。
? 主要功能：调节钙、磷代谢，维持血液中钙、磷浓度正常，
促使骨骼正常发育。
H O
R
③ 维生素 E
? 维生素 E又叫做生育酚，目前发现的有 6种，其中 ?,?,?，
?四种有生理活性。
? 主要功能：具有抗氧化剂的功能，可作为食品添加剂使用，
还可保护细胞膜的完整性；同时还有抗不育的作用。
O
H O
R 2
R 1
R 3
④ 维生素 K
? 维生素 K有 3种,K1,K2,K3。其中 K3是人工合成的。维生
素 K是 2-甲基萘醌的衍生物。
? 主要功能：促进肝脏合成凝血酶原，促进血液的凝固。
O
O
O
O
C H 2 [ C H C ( C H 3 ) C H 2 C H 2 ] 5 C H C ( C H 3 ) 2
II,水溶性维生素
① 维生素 B1和羧化辅酶
? 维生素 B1又称硫胺素，在体内 以焦磷酸硫胺素 (TPP)形式
存在。缺乏时表现出多发性神经炎、皮肤麻木、心力衰
竭、四肢无力、下肢水肿 。
C l
-
N
+
S
C H 3
C H 2 C H 2 O H
N
N
N H 2
H 3 C
C H 2
? 焦磷酸硫胺素 (TPP)是脱羧酶的辅酶，催化丙酮酸或 α–酮
戊二酸的氧化脱羧反应，所以又称为羧化辅酶。
N
N
N H 2
H 3 C
C H 2 N
+
S
C H 3
C H 2 C H 2 O P O
O
P
O H
O H
O
O H
C l
-
② 维生素 B2和黄素辅酶
? 维生素 B2又称核黄素, 由核糖醇和 6,7-二甲基异咯嗪两
部分组成 。
? 缺乏时组织呼吸减弱, 代谢强度降低 。 主要症状为口腔
发炎, 舌炎, 角膜炎, 皮炎等 。
N
C
C
N H
N
N
O
O
C H 2 C H C H C H C H 2 O P O H
O H O H O H O
O H
C H 3
C H 3
? FAD(黄素 -腺嘌呤二核苷酸 )和 FMN(黄素单核苷酸 )是核黄
素 (维生素 B2)的衍生物 。 它们在脱氢酶催化的氧化 -还原
反应中, 起着电子和质子的传递体作用 。
C H 3
C H 3
N
C
C
N H
N
N
O
O
C H 2 C H C H C H C H 2 O P O
O H O H O H O
O H
O
C H 2
O H O H
N
N
N H 2
N
N
F M N F A D
③ 泛酸和辅酶 A（ CoA）
? 维生素 B3又称泛酸, 是由 ?,?-二羟基 -?-?-二甲
基丁酸和一分子 ?-丙氨酸缩合而成 。
C H 2 C
C H 3
C H 3
C H
O H
C
O
N H C H 2 C H 2 C
O H
C O O H
O
? 辅酶 A是生物体内代谢反应中乙酰化酶的辅酶, 它
是含泛酸的复合核苷酸 。 它的重要生理功能是传递
酰基, 是形成代谢中间产物的重要辅酶 。
C H
2
C
C H
3
C H
3
C H
O H
C
O
N H C H
2
C H
2
C N H C H
2
C H
2
S H
O
O
O O HP
O
O H
H O
N
N
N H
2
N
N
O
P
O
O O H
PO O
O H
C H
2
④ 维生素 PP和辅酶 I、辅酶 II
? 维生素 PP包括尼克酸 （ 又称烟酸 ） 和尼克酰胺
（ 又称烟酰胺 ） 两种物质 。 在体内主要以尼克
酰胺形式存在, 尼克酸是尼克酰胺的前体 。
N
C O O H
N
C O N H 2
尼克酸 尼克酰胺
? 维生素 PP能维持神经组织的健康 。 缺乏时表现出
神经营养障碍, 出现皮炎 。
? NAD+ (烟酰胺 -腺嘌呤二核苷酸, 又称为辅酶 I)
和 NADP+(烟酰胺 -腺嘌呤磷酸二核苷酸,又称为辅
酶 II )是维生素烟酰胺的衍生物, 它们是多种重
要脱氢酶的辅酶 。
O
C H 2 O P O P O C H 2
O H O H
O O
O
-
O
-
N
+
C O N H 2
O
O H O H ( O P O 3 H 2 )
N
N
N H 2
N
N
⑤ 维生素 B6和磷酸吡哆醛
? 维生素 B6包括吡哆醇、吡哆醛和吡哆胺。
? 维生素 B6在体内经磷酸化作用转化为相应的磷酸脂，参
加代谢的主要的是磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺。磷酸吡哆
醛是氨基酸转氨作用、脱羧作用和消旋作用的辅酶。
N
H 3 C
H O
C H 2 N H 2
C H 2 O H
N
H 3 C
H O
C H O
C H 2 O H
N
H 3 C
H O
C H O
C H 2 O P O H
O
O H
N
H 3 C
H O
C H 2 N H 2
C H 2 O P O H
O
O H
磷 酸 吡 哆 醛 磷 酸 吡 哆 胺
⑥ 生物素
? 生物素是 B族维生素 B7，它是多种羧化酶的辅酶。
? 生物素的功能是作为 CO2的递体，在生物合成中
起传递和固定 CO2的作用。H N N H
C
O
C HH 2 C
S
( C H 2 ) 4 C O O H
⑦ 叶酸和叶酸辅酶
? 维生素 B11又称叶酸，作为辅酶的是叶酸加氢的还原产物
四氢叶酸。
? 四氢叶酸的主要作用是作为一碳基团, 如 -CH3,-CH2-,
-CHO 等的载体, 参与多种生物合成过程 。
N
N
H 2 N
O H
N
N
H
H
C H 2
H
H
H
N H C
O
N H C H C O O H
C H 2
C H 2
C O O H
⑧ 维生素 B12和 B12辅酶
? 维生素 B12又称为钴胺素。维生素 B12分子中与 Co+
相连的 CN基被 5’ -脱氧腺苷所取代，形成维生
素 B12辅酶。
? 维生素 B12辅酶的主要功能是作为变位酶的辅酶，
催化底物分子内基团 (主要为甲基 )的变位反应。
⑨ 维生素 C
? 维生素 C能防治坏血病，故又称抗坏血酸。 在体
内参与氧化还原反应，羟化反应。人体不能合
成。
C
C
C
C
C
C H 2 O H
O
H O
H O
H
H O H
O O
C
C
O
O
O
HH O
H
C H 2 O H
C
C
C
⑩ 硫辛酸
? 硫辛酸是少数不属于维生素的辅酶。硫辛酸是 6,8-二硫
辛酸，有两种形式：即硫辛酸（氧化型）和二氢硫辛酸
（还原型）。
S C H
S C H
C H 2
C H 2 C H 2 C H 2 C H 2 C O O H
11,辅酶 Q（ CoQ）
? 辅酶 Q又称为泛醌，广泛存在与动物和细
菌的线粒体中。
? 辅酶 Q的活性部分是它的醌环结构，主要
功能是作为线粒体呼吸链氧化 -还原酶的
辅酶，在酶与底物分子之间传递电子。
O
O
C H 3 O
C H 3 O
C H 3
( C H 2 C H C C H 2 ) n H
C H 3
n = 6 - 1 0
4.酶结构与功能特点
? 蛋白质的结构特点：
一级、二级、三级、四级结构
根据结构不同酶可分为：
I,单体酶,只有单一的三级结构蛋白质构成。
II,寡聚酶,由多个（两个以上）具有三级结构的
亚基聚合而成。
III,多酶复合体,由几个功能相关的酶嵌合而成的
复合体。
? 与催化作用相关的结构特点
(1)活性中心：酶分子中直接和底物结合并起催化反应的空
间局限（部位）。
? 结合部位 (Binding
site)：酶分子中与底
物结合的部位或区域
一般称为结合部位 。
? 催化部位 (Catalytic site),
酶分子中促使底物发生化
学变化的部位称为催化部
位。
? 通常将酶的结合部位和催
化部位总称为酶的活性部
位或活性中心。
? 结合部位决定酶的专一性，
? 催化部位决定酶所催化反
应的性质。
? 调控部位 (Regulatory site):酶分子中存在着一
些可以与其他分子发生某种程度的结合的部位，
从而引起酶分子空间构象的变化，对酶起激活或
抑制作用
(2)必须 基团：酶表现催化活性不可缺少的基团。
? 亲核性基团：丝氨酸的羟基，半胱氨酸的巯基和组氨酸的咪唑基。
? 酸碱性基团：门冬氨酸和谷氨酸的羧基，赖氨酸的氨基，酪氨酸的酚
羟基，组氨酸的咪唑基和半胱氨酸的巯基等。
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
O H
O H
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
S H
S H
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
N
N H
N
N
H
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
C H
2
C
O H
O
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
C
O H
O
C O O H
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
C H
2
C H
2
C H
2
N H
2
N H
2
H
2
N C H C
C H
2
O H
O
O H
O H
亲核性基团 酸碱性基团
(3)酶原和酶原的激活：
? 酶原,没有活性的酶的前体。
? 酶原的激活,酶原在一定条件下经适当的物质作用可转变成有活性的
酶。酶原转变成酶的过程称为酶原的激活。
? 本质,酶原的激活实质上是酶活性部位形成或暴露的过程。
(4)同功酶：能催化同一化学反应的一类酶。
? 活性中心相似或相同：催化同一化学反应。
? 分子结构不同：理化性质和免疫学性质不同。
C H 3 C H C O O H
O H
N A D + H +C H 3 C C O O H
O
N A D H
三、酶的分类及命名
1,酶的分类
(1) 氧化 -还原酶 Oxidoreductase
? 氧化 -还原酶催化氧化 -还原反应。
? 主要包括脱氢酶 (Dehydrogenase)和氧化酶 (Oxidase)。
? 如，乳酸 (Lactate)脱氢酶催化乳酸的脱氢反应。
C H 3 C H C O O H
N H 2
H O O C C H 2 C H 2 C C O O H
O
H O O C C H 2 C H 2 C H C O O H
N H 2
C H 3 C C O O H
O
(2) 转移酶 Transferase
? 转移酶催化基团转移反应，即将一个底物分子的
基团或原子转移到另一个底物的分子上。
例如,谷丙转氨酶催化的氨基转移反应。
H 2 OC O O C H 2 C H 3R R C O O H C H 3 C H 2 O H
(3) 水解酶 Hydrolase
? 水解酶催化底物的加水分解反应。
? 主要包括淀粉酶、蛋白酶、核酸酶及脂酶等。
? 例如，脂肪酶 (Lipase)催化的脂的水解反应
H O O C C H = C H C O O H H 2 O H O O C C H 2 C H C O O H
O H
(4) 裂解酶 Lyase
? 裂合酶催化从底物分子中移去一个基团或 原子
形成双键的反应及其逆反应。
? 主要包括醛缩酶、水化酶及脱氨酶等。
? 例如,延胡索酸水合酶催化的反应。
O
C H 2 O H
O H
O H
O H
O H O
C H 2 O H C H 2 O H
O H
O H
O H
(5) 异构酶 Isomerase
? 异构酶催化各种同分异构体的相互转化，即底物
分子内基团或原子的重排过程。
例如,6-磷酸葡萄糖异构酶催化的反应。
(6) 合成酶 Ligase or Synthetase
? 合成酶，又称为连接酶，能够催化 C-C,C-O,C-N
以及 C-S 键的形成反应。这类反应必须与 ATP分解
反应相互偶联。
A + B + ATP + H-O-H ===A ? B + ADP +Pi
例如，丙酮酸羧化酶催化的反应
丙酮酸 + CO2 ? 草酰乙酸
3'3'
3'3'3'
3'3'3'3'
3'
5'5'5'5'
5'
5'5'5'5'5'
BBBBB
PP P
+
P O HPP
BBBB
PPPP
P
B
P
(7) 核酸酶（催化核酸） Ribozyme
? 核酸酶是唯一的非蛋白酶。它是一类特殊的 RNA，
能够催化 RNA分子中的磷酸酯键的水解及其逆反
应。
2,酶的命名
(1)习惯命名法,
1,根据其催化底物来命名；
2,根据所催化反应的性质来命名；
3,结合上述两个原则来命名；
4,有时在这些命名基础上加上酶的来源或其
它特点。
(2)国际系统命名法
? 系统名称包括底物名称、构型、反应性质，最后加一个酶
字。例如：
习惯名称,谷丙转氨酶
系统名称,丙氨酸,?-酮戊二酸氨基转移酶
酶催化的反应,
谷氨酸 + 丙酮酸 ?? ?-酮戊二酸 + 丙氨酸
1.酶催化作用的 本质,降低反应活化能
2.酶催化作用的 中间产（络合）物学说
? 在酶催化的反应中，第一步是酶与底物形成酶－
底物中间复合物。当底物分子在酶作用下发生化
学变化后，中间复合物再分解成产物和酶。
E + S ==== E-S ??? P + E
? 许多实验事实证明了 E－ S复合物的存在。 E－ S复
合物形成的速率与酶和底物的性质有关。
四、酶作用的机制
3.酶与底物结合形成中间络
合物的方式（理论）
(1)锁钥假说 (lock and key
hypothesis)：
? 认为整个酶分子的天然构象
是具有刚性结构的，酶表面
具有特定的形状。酶与底物
的结合如同一把钥匙对一把
锁一样
(2)诱导契合假说（ induced–fit
hypothesis),
? 该学说认为酶表面并没有一
种与底物互补的固定形状，
而只是由于底物的诱导才形
成了互补形状,
4,使酶具有高效催化的因素
(1)临近定向效应：
? 在酶促反应中，底物分子结合到酶的活性中心，一方面底物在酶活性
中心的有效浓度大大增加，有利于提高反应速度；
? 另一方面，由于活性中心的立体结构和相关基团的诱导和定向作用，
使底物分子中参与反应的基团相互接近，并被严格定向定位，使酶促
反应具有高效率和专一性特点。
(2),张力, 和, 形变,,
? 底物与酶结合诱导酶的分子构象变化，变化的酶分子又使底物分子的
敏感键产生, 张力, 甚至, 形变,,从而促使酶－底物中间产物进
入过渡态。
(3)酸碱催化：
? 酸 -碱催化可分为狭义的酸 -碱催化和广义的酸 -碱催化。酶参与的酸 -
碱催化反应一般都是广义的酸－碱催化方式。
? 广义酸－碱催化是指通过质子酸提供部分质子,或是通过质子碱接受
部分质子的作用，达到降低反应活化能的过程。
? 酶活性部位上的某些基团可以作为良好的质子供体或受体对底物进行
酸碱催化。
? His 残基的咪唑基是酶的酸碱催化作用中最活泼的一个催化功能团。
- C O O H,- N H 3,- S H,
+
OH NH N H
+
- C O O,- N H 2,- S,
-,,-
O
-
N HN:
广义酸基团 广义碱基团
（质子供体） （质子受体 ）
(4)共价催化：
? 催化剂通过与底物形成反应活
性很高的共价过渡产物，使反
应活化能降低，从而提高反应
速度的过程，称为共价催化。
? 酶中参与共价催化的基团主要
包括 His 的咪唑基,Cys 的硫
基,Asp 的羧基,Ser 的羟基
等。
? 某些辅酶，如焦磷酸硫胺素和
磷酸吡哆醛等也可以参与共价
催化作用。
1.底物浓度 对酶促反应速度影响
① 在酶浓度,pH，温度等条件
不变的情况下研究底物浓度
和反应速度的关系。如右图
所示：
? 在低底物浓度时,反应速度
与底物浓度成正比，表现为
一级反应特征 。
? 当底物浓度达到一定值，几
乎所有的酶都与底物结合后，
反应速度达到最大值
（ Vmax），此时再增加底物
浓度，反应速度不再增加，
表现为 零级反应 。
五、酶促反应的速度及其影响因素
② 米氏方程
? 1913年，德国化学家 Michaelis和 Menten根据 中
间产物学说 对酶促反映的动力学进行研究，推
导出了表示整个反应中底物浓度和反应速度关
系的著名公式，称为 米氏方程 。
V=
V m a x [ S ]
K m + [ S ]
Km — 米氏常数
Vmax — 最大反应速度
根据中间产物学说，酶促反应分两步进行,
? 米氏方程的推导：
? 米氏常数 Km的意义,
? 由米氏方程可知，当反应速度等于最大反应速度一半
时,即 V = 1/2 Vmax,Km = [S]
? 上式表示,米氏常数是 反应速度为最大值的一半时的
底物浓度 。
? 因此,米氏常数的单位为 mol/L。
? 不同的酶具有不同 Km值，它是酶的一个重要的特征物
理常数。
? Km值只是在固定的底物，一定的温度和 pH条件下，一
定的缓冲体系中测定的，不同条件下具有不同的 Km值。
? Km值表示酶与底物之间的 亲和程度, Km值大表示亲和
程度小，酶的催化活性低 ; Km值小表示亲和程度大,
酶的催化活性高。
测定 Km和 V的方法很多，最常用的是 Lineweaver–Burk的
作图法 — 双倒数作图法 。
1 Km 1 1
??? = ?? ? ??? + ??
V Vmax [S] Vmax
取米氏方程式的倒数形式：
-4 -2 0 2 4 6 8 10
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1/[S ](1/m m ol,L
-1
)
1/v
1/Vmax
斜率 =Km/Vmax
-1/Km
? 米氏常数 Km的 测定：
2.抑制剂 对酶反应的影响
? 有些物质能与酶分子上某些必须基团结合（作用 ),使酶的
活性中心的化学性质发生改变，导致酶活力下降或丧失，
这种现象称为 酶的抑制作用 。
? 能够引起酶的抑制作用的化合物则称为 抑制剂
（ inhibitor)
? 酶的抑制剂一般具备两个方面的 特点,
? a.在化学结构上与被抑制的底物分子或底物的过渡状态相
似。
? b.能够与酶的活性中心以非共价或共价的方式形成比较稳
定的复合体或结合物。
? 抑制作用的类型：
(1)不可逆抑制作用,
? 抑制剂与酶反应中心
的活性基团以共价形
式结合，引起酶的永
久性失活。如有机磷
毒剂二异丙基氟磷酸
酯。
(2)可逆抑制作用,
? 抑制剂与酶蛋白以非共价方式结合，引起酶活性暂时性丧失。抑
制剂可以通过透析等方法被除去，并且能部分或全部恢复酶的活
性。
? 根椐抑制剂与酶结合的情况，又可以分为三类：
I,竞争性抑制：
? 某些抑制剂的化学结构与底物相似，因而能与底物竟争与酶活性
中心结合。当抑制剂与活性中心结合后，底物被排斥在反应中心
之外，其结果是酶促反应被抑制了。
? 竟争性抑制通常可以通过增大底物浓度，即提高底物的竞争能力
来消除。
? 竞争性抑制可用下式表示：
? 有竞争性抑制剂存在时,Km值增大 (1+[I]/Ki)倍，
且 Km值随 [I]的增高而增大；
? 在 [E]固定时，当 [S] ﹥﹥ Km (1+[I]/Ki),Km
(1+[I]/Ki)项可忽略不计，则 v= Vmax，即最大
反应速度不变。
? 竞争性抑制作用的速度方程：
? 竞争性抑制作用的 Lineweaver–Burk图,
II,非竞争性抑制：
? 酶可同时与底物及抑制剂结合，引起酶分子构象变化，并导至酶活
性下降。由于这类物质并不是与底物竞争与活性中心的结合，所以
称为非竞争性抑制剂。
? 如某些金属离子（ Cu2+,Ag+,Hg2+）以及 EDTA等，通常能与酶分
子的调控部位中的 -SH基团作用，改变酶的空间构象，引起非竞争
性抑制。
? 非竟争性抑制不能通过增大底物浓度的方法来消除 。
? 非竞争性抑制可用下式表示：
? 有非竞争性抑制剂存在时,V值减小 (1+[I]/Ki)倍，
且 V值随 [I]的增高而降低；
? Km值不变。
? 非竞争性抑制作用的速度方程：
? 非竞争性抑制作用的 Lineweaver–Burk图,
? 有反竞争性抑制剂存在时,Km和 V值均减小 (1+[I]/Ki)倍，且
都随 [I]的增高而降低 。
III,反竞争性抑制,
? 酶只有在与底物结合后，才能与抑制剂结合，引起酶活性下降。
? 反竞争性抑制可用下式表示：
? 反竞争性抑制作用的速度方程：
? 反竞争性抑制作用的 Lineweaver–Burk图,
3.激活剂 对酶反应的影响
? 凡是能提高酶活力的简单化合物都称为 激活剂
（ activator)。其中大部分是一些无机离子和小分子简单
有机物。 如,Na+,K+,Ca2+,Mg2+,Cu2+,Zn2+,Co2+、
Cr2+,Fe2+,Cl-,Br-,I-,CN-,NO3-,PO4-等；
? 这些离子可与酶分子上的氨基酸侧链基团结合，可能是酶
活性部位的组成部分，也可能作为辅酶或辅基的一个组成
部分起作用；
? 一般情况下，一种激活剂对某种酶是激活剂，而对另一种
酶则起抑制作用；
? 对于同一种酶，不同激活剂浓度会产生不同的作用。
4.酶浓度 对酶反应的影响
? 在底物足够过量而其它条件固定的情况下，并且反应系统
中不含有抑制酶活性的物质及其他不利于酶发挥作用的因
素时，酶促反应的速度和酶浓度成正比。
5.温度 对酶反应的影响
? 一方面是温度升高,酶促
反应速度加快。
? 另一方面,温度升高,酶
的高级结构将发生变化
或变性，导致酶活性降
低甚至丧失。
? 因此大多数酶都有一个
最适温度 。 在最适温度
条件下,反应速度最大。
10 20 30 40 50 60 70 80 90
0
20
40
60
80
100
T e mp e r a t u r e
O
C
R
e
l
a
t
i
v
e
A
c
t
i
v
i
t
y
(
%)
最适温度
6.pH对酶反应的
影响
? 在一定的 pH下,酶
具有最大的催化活
性,通常称此 pH为
最适 pH。
7.酶的别构（变构）效应：
? 由于效应物的存在，而引起酶的 结构（构象） 变化。
? 别构酶 (Allosteric enzyme)的 特点,
? 一般是 寡聚酶,由多亚基组成，包括催化部位和调节（别
构）部位；
? 具有 别构效应 。指酶和一个配体（底物，调节物）结合后
可以影响酶和另一个配体（底物）的结合能力。
相同（均为底物）：同促效应（ homotropic effect）
不同（效应调节物）：异促效应 （ heterotropic effect）
根据配体结合
后对后继配
体的影响
根据配体性质
正协同效应 （ positive cooperative effect）
负协同效应 （ negative cooperative effect）
? 动力学特点,不符合米曼方程双曲线。
? 别构酶与非调节酶动力学曲线的比较
? 别构酶举例：天冬氨酸转氨甲酰酶，简称 ATCase
8.固定化酶
? 固定化酶 是通过吸附、耦联、交联和包埋等物理
或化学的方法把酶连接到某种载体上，做成仍具
有酶催化活性的水不溶性酶。
? 作用特点,稳定性提高，易分离，可反复使用，
提高操作的机械强度。
六、酶的分离纯化与酶活力测定
1.酶的分离纯化
① 基本原则,提取过程中避免酶变性而失去活性；防止强
酸、强碱、高温和剧烈搅拌等；要求在低温下操作，加
入的化学试剂不使酶变性，操作中加入缓冲溶液,
② 基本操作程序：
a,选材,微生物（微生物发酵物, 胞内酶，胞外酶），动
物（动物器脏：消化酶，血液,SOD酶，尿液：尿激酶
等）,植物（木瓜蛋白酶，菠萝蛋白酶等）。
b,抽提,加入提取液提取。胞内酶先要进行细胞破碎（机
械研磨，超声波破碎，反复冻融或自溶等），
c,分离,先进行净化处理（过滤，絮凝，离心脱色），再
采用沉淀法分离（盐析法，有机溶剂沉淀法，超离心
等）。
d,纯化,可采用离子交换层析，凝胶过滤，液相色谱，亲
和色谱和超滤等方法。
③ 酶的制剂形式：
a,固体：干燥（冰冻升华，喷雾干燥，真空干燥）
b,液体
④ 保存：低温下短期保存。
2.酶活力的测定
① 概念
? 酶活力,又称为酶活性，一般把酶催化一定化学反应的能
力称为酶活力，通常以在一定条件下酶所催化的化学反应
速度来表示。
? 基本原理,酶是蛋白质，种类多，结构复杂多样，一般对酶
的测定，不是直接测定其酶蛋白的浓度，而是测定其催化
化学反应的能力，这是基于在最优化条件下，当底物足够
（过量），在酶促反应的初始阶段，酶促反应的速度（初
速度）与酶的浓度成正比（即 V=K［ E］），故酶活力测定
的是化学反应速度，一定条件下可代表酶活性分子浓度。
② 酶活力测定
I,酶活力测定就是测定一定量的酶，在单位时间内产物 (P)的生成
（增加）量或底物（ S）的消耗（减少）量。即测定时确定三种量：
①加入一定量的酶；②一定时间间隔；③物质的增减量 。
II,测定酶活力常有以下几种方法：
? 在一个反应体系中，加入一定量的酶液，开始计时反应，经一定时
间反应后，终止反应，测定在这一时间间隔内发生的化学反应量
（终止时与起始时的浓度差），这时测得的是 初速度
? 在一定条件下，加入一定量底物（规定），再加入合适量的酶液，
测定完成该反应（底物反应完）所需的时间，（ 非初速度,为一平
? 动态连续测定法 。在反应体系中，加入酶，用仪器连续监测整个酶
促反应过程中底物的消耗或产物的生成。
? 快速反应追踪法 。近年来，追踪极短时间（ 10-3s以下）内反应过程
的方法和装臵已经应用。其代表有 停流法（ stopped-flow）和温度
跃变法（ temperature jump）。
III.
? 测酶活所用的反应条件应该是 最适条件,所谓最适条件包括最适温
度、最适 pH、足够大的底物浓度、适宜的离子强度、适当稀释的酶
IV,酶活力测定方法：
? 反应计时 。反应计时必须准确。反应体系必须预热至规定温度后，
加入酶液并立即计时。反应到时，要立即灭酶活性，终止反应，
并记录终了时间。终止酶反应，常使酶立刻变性，最常用的方法
是加入三氯乙酸或过氯酸使酶蛋白沉淀，也可用 SDS使酶变性，或
迅速加热使酶变性。有些酶可用非变性法来停止反应或用破坏其
辅因子来停止反应 。
? 反应量的测定 。测底物减少量或产物生成量均可。在反应过程中
产物是从无到有，变化量明显，极利于测定，所以大都测定产物
具体物质量的测定，据被测定物质的物理化学性质通过定量分析
法测定。常用的方法有：
? 光谱分析法,酶将产物转变为（直接或间接）一个可用 分光光度
法或荧光光度法 测出的化合物。
? 化学法,利用化学反应使产物变成一个可用某种物理方法测出的
化合物，然后再反过来算出酶的活性。
? 放射性化学法,用同位素标记的底物，经酶作用后生成含放射性
的产物，在一定时间内，生成的放射性产物量与酶活性成正比。
3.酶活力的表示方法及计算
I,酶活力单位
? 酶活力可用单位时间内单位体积中底物的减少量或产物
的增加量表示，单位为 mol/min等。
? 酶活力单位的基本定义 为：规定条件（最适条件）下一
定时间内催化完成一定化学反应量所需的酶量。
? 据不同情况有几种酶活力单位（ activity unit）或又称
酶单位 （ enzyme unit
a,国际单位,
? 一般用活力单位 U（ Unit） 表示，许多酶活力单位都是以
最佳条件或某一固定条件下每分钟催化生成 1μ mol产物
所需要的酶量为一个酶活力单位。
? 一个, Katal”单位是指在一定条件下 1秒钟内转化 1mol底物所需的酶量。
? Kat和 U的换算关系,1 Kat=6× 107U,1U=16067n Kat
? 以上的酶单位定义中，如果底物（ S）有一个以上可被作用的化学键，
则一个酶单位表示 1分钟使 1μmol 有关基团转化的酶量。如果是两个相
同的分子参加反应，则每分钟催化 2μmol 底物转化的酶量称为一个酶单
位。
? 在, U”和, kat”酶活力单位的定义和应用中，酶催化底物的分子量必须
是已知的，否则将无法计算 。
b,习惯单位,
在实际使用中，结果测定和应用都比较方便、直观，规定的酶活力单
① α -淀粉酶活力单位,每小时分解 1g可溶性淀粉的酶量为一个酶单位。
（ QB546-80），也有规定每小时分解 1mL2%可溶性淀粉溶液为无色糊精
② 糖化酶活力单位,在规定条件下，每小时转化可溶性淀粉产生 1mg还原糖
③ 蛋白酶,规定条件下，每分钟分解底物酪蛋白产生 1μg 酪氨酸所需的酶量。
④ DNA限制性内切酶,推荐反应条件下，一小时内可完全消化 1μg 纯化的 DNA
II,比活力 （ specific activity）
? 酶的比活力是每单位（一般是 mg）蛋白质中的酶活力单位数（如：
酶单位 /mg蛋白），实际应用中也用每单位制剂中含有的酶活力数
表示（如：酶单位 /mL（液体制剂），酶单位 /g（固体制剂）），
对同一种酶来讲，比活力愈高则表示酶的纯度越高（含杂质越少），
? 在评价纯化酶的纯化操作中，还有一个概念就是回收率。
回收率 =某纯化操作后的总活力 /某纯化操作前的总活力
［总活力 =比活力 ×
III,酶活力计算及计算举例
? 酶活力计算是将实验中所用各种参数和所测得的实验数据（反应时
间、酶液稀释度和用量、产物生成量等）换算成每毫升（或每克）
酶制剂中所含的酶活力单位数。
? 酶活力测定举例,福林 -酚（ Lowry）法 测定蛋白酶活力。该方法的
基本原理是以酪蛋白为底物进行反应，然后用福林 -酚试剂显色，
并用光度法测定酶促反应产物酪氨酸的生成量。测定在初速度阶段
本章小结
一、酶
1,酶的概念
2,酶催化作用的特点
① 共性
② 特性,条件温和、高效率、专一性、易变敏感性
二、酶的化学本质及结构功能特点
I,酶,单纯酶
结合酶,全酶 = 酶蛋白 + 辅因子
II,酶的辅因子
? 维生素和辅酶
? 维生素是机体维持正常生命活动所必不可少的一类小分子有机物质。
? 维生素一般习惯分为脂溶性和水溶性两大类。
? 辅酶是一类具有特殊化学结构和功能的化合物 。 参与的酶促反应主要为氧化 -还原反应或基团转移反应 。
? 大多数辅酶的前体主要是水溶性 B 族维生素。许多维生素的生理功
能与辅酶的作用密切相关。
III,酶结构与功能特点
(1)活性中心, 结合部位、催化部位、调控部位
(2)必须基团
(3)酶原和酶原的激活
(4)同功酶
三、酶的分类及命名
四、酶作用的机制
1.酶催化作用的 本质,降低反应活化能
2.酶催化作用的 中间产（络合）物学说
E + S ==== E-S ??? P + E
3.酶与底物结合形成中间络合物的方式,锁钥假说、诱导契合假说
4,使酶具有高效催化的因素
? 临近定向效应
?, 张力, 和, 形变,
? 酸碱催化
? 共价催化
五、酶促反应的速度及其影响因素
1.底物浓度对酶促反应速度的影响
? 米氏方程
? 米氏常数 Km的意义,米氏常数是反应速度为最大值的一半
时的底物浓度。米氏常数的单位为 mol/L。
? Km值表示酶与底物之间的亲和程度,Km值大表示亲和程度
小，酶的催化活性低 ; Km值小表示亲和程度大,酶的催化
活性高。
V=
V m a x [ S ]
K m + [ S ]
2.抑制剂对酶反应的影响
? 抑制作用的类型：
? 不可逆抑制作用
? 可逆抑制作用
a,竞争性抑制
b,非竞争性抑制
c,反竞争性抑制
a b c
3.激活剂对酶反应的影响：提高酶活力
4.酶浓度对酶反应的影响,在一定条件下酶促反应的速度和酶浓度成正比。
5.温度对酶反应的影响,最适温度
6.pH对酶反应的影响：最适 pH
7.酶的别构（变构）效应
? 别构酶的特点：
? 一般是寡聚酶
? 具有别构效应
? 反应速度和底物浓度关系不 符合米曼方程双曲线
8.固定化酶
六、酶的分离纯化与酶活力测定
1.酶的分离纯化
① 基本原则：提取过程中避免酶变性而失去活性
② 基本操作程序：
a,选材
b,抽提
c,分离
d,纯化
③ 酶的制剂形式与保存
2.酶活力的测定
I,概念
? 酶活力,又称为酶活性，一般把酶催化一定化学反应的
能力称为酶活力，通常以在一定条件下酶所催化的化学
反应速度来表示。
II,酶活力测定就是测定一定量的酶，在单位时间内产物 (P)
的生成（增加）量或底物（ S）的消耗（减少）量。即
测定时确定 三种量,①加入一定量的酶；②一定时间间
隔；③物质的增减量。
III,测定酶活力常有以下几种方法
? 初速度法
? 平均速度法
? 动态连续测定法
? 快速反应追踪法
? 测酶活所用的反应条件应该是最适条件
? 酶活力测定方法：
? 反应计时
? 反应量的测定,根据被测定物质的物理化学性质通过定量
分析法测定。常用的方法有：光谱分析法、化学法和放射
性化学法。
3.酶活力的表示方法及计算
? 酶活力单位的基本定义为：规定条件（最适条件）下一定
时间内催化完成一定化学反应量所需的酶量。
a,国际单位：, U” 和, Kat”
b,习惯单位
? 比活力：酶的比活力是每单位（一般是 mg）蛋白质中的酶
活力单位数（如：酶单位 /mg蛋白）。
? 回收率 =某纯化操作后的总活力 /某纯化操作前的总活力
