实验四微生物细胞大小和数量的测定
? 目的要求
? 实验材料
? 实验程序
? 思考题
目的要求
? 学习使用目镜测微尺和镜台测微尺在显
微镜下测定微生物大小的方法。
? 学习使用血球记数板测定微生物数量的
方法。
实验材料
显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、细菌
染色片、血球记数板、酵母菌悬液、盖玻
片、无菌滴管、西水纸、擦镜纸、香柏
油、二甲苯。
实验程序
?测定微生物的大小
? 测定微生物数量
实验程序：测定微生物的大小
测定的工具：目镜测微尺镜台测微尺
实验程序：测定微生物的大小
? 目镜测微尺的校正：在高倍镜下，看清镜台测微尺的刻度后，
转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺的刻度平行，移动推动
器，使目镜测微尺的0点与镜台测微尺的某一刻度重合，然
后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度。计算两刻度间目镜
测微尺的格数和镜台测微尺的格数。由于镜台测微尺的刻度每
格长10μm，所以可得：
目镜测微尺每格长度（μm）=（镜台测微尺格数×10）/目镜
测微尺格数
注意：校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件（特定的
接物镜、接目镜、镜筒长度等）进行，而且只能在这特定的情
况下才可重复使用。
? 菌体大小的测定：取下镜台测微尺，将细菌染色标本置于载物
台上，然后在油镜下用目镜测微尺测量菌体的长和宽。
实验程序：测定微生物数量
? 方法：活菌计数法——平板菌落计数法；总菌计数法——血
球计数板或霍瑟（PeroffHausser）细菌计数板（二者原
理和部件相同，只是厚薄不同而已）。
实验程序:测定微生物数量
? 本实验用血球计数板计数酵母菌的数量
1.取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加
盖玻片。
2.取酵母菌液，摇匀，用滴管由盖玻片边缘滴一
小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。
3.静止5min后，用低倍镜观察并将计数室移至
视野中央。
4.在高倍镜下计数：随机计数五个中格的平均
值，然后求得每个中格的平均值。乘上16（或
25）就得出一大格中的总菌数，最后再换算到每
mL菌液中的含菌数。
实验程序
5.计算方法：
6. 注意事项：压在方格线上的菌体，以压在底线和
右侧线上的菌体计入本格内；遇到有芽体的酵母
时，若芽体和母体同等大，就按单个酵母计数。
7.计数完毕后，血球计数板要立即清洗干净，并用
吸水纸吸干，最后用擦镜纸擦干净，并放回盒内。
（X1+X2+X3+X4+X5）
5 X 25（或16）X 10 X 1000 x 稀释倍数酵母菌细胞数/mL=
思考题
? 为什么目镜测微尺必须用镜台测微尺来校正？
? 在显微镜下直接测定微生物数量有什么优缺
点？
