实验三 发酵过程动力学实验 实验老师准备： 1、种子培养基（实验老师准备4个100ml种子） 2、产酶培养基确定（实验老师准备15瓶100ml产酶培养基和200ml已经长好的种子），培养基的组成按上次实验配方设计。 一．实验目的 学习生物反应过程的参数测定和计算方法 二．仪器 摇床（最大转速250r/min），紫外分光光度计、电热恒温水浴槽、烘箱 电子天平（感量0.001g） 三．试剂 1、DNS试剂：取6.3g3,5-二硝基水杨酸（DNS）和262mL2mol/LNaOH溶液加到酒石酸钾钠的热溶液中（192g酒石酸钾钠溶于500 mL水中），再加5g重蒸酚和5g亚硫酸钠，搅拌使其溶解，冷却后加水定容至1000mL，保存于棕色瓶中放置7天后使用。 2、测定蛋白酶活试剂同上次实验。 三．实验方法 1、生物量的测定 生物量的测定方法有比浊法和直接称重法等。本实验采用直接称重法。将发酵液取出，在两层纱布上过滤菌体，自来水冲洗2-3次，收集菌体，在布氏漏斗上抽干后称温重。 2、还原糖的测定 2.1原理 在碱性条件下，还原糖与3、5－二硝基水杨酸共热，3、5－二硝基水杨酸被还原为3－氨基－5－硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度呈一定的比例关系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的吸光度值。查标准曲线计算，可求出发酵液中还原糖的含量。 2.2实验步骤 （1） 发酵液单层滤纸过滤，滤液0.2ml稀释至含糖量2-8mg/100ml为试样。 （2）取4支干燥试管,编号,按下表所示的量,精确加入待测液和试剂(ml): 管号 项目  空白  还原糖    0  1  2  3  样品量  0  2.0  2.0  2.0  蒸馏水  3.5  1.5  1.5  1.5  3、5－二硝基 水杨酸试剂  1.5  1.5  1.5  1.5  总体积  5.0  5.0  5.0  5.0   加完试剂后, 将各管摇匀，戴上小漏斗，在沸水浴中加热5分钟，立即用冷水冷却至室温，再向各管中加入蒸馏水 20.0ml，用橡皮塞塞住管口，颠倒混匀。切勿用力振摇，引入气泡。在540nm波长下，以0号管为空白，在分光光度计上测定出各管溶液的吸光度值。 （3）以管1、2、3的吸光度值的平均值在标准曲线上查出相应的还原糖毫克数，按下式计算样品中还原糖的百分含量：  3.发酵液中蛋白酶活的测定（同上次实验） 4、发酵液中pH测定：酸度计法。 四、实验具体操作 实验分组：每班分成六组，分别在以下时间进行取样，每组取两瓶。具体时间为：在发酵0小时（前1天晚8点），12小时（第二天8点），15小时（11点），18小时（下午2点），21小时（下午5点），24小时（下午8点）分别测定发酵液中还原糖含量，生物量，蛋白酶活，pH变化，将整个班级结果汇总在一张表上，并标注自己组的各指标位置，以观察整体发酵水平及测定的准确性。