第十九章 免疫学检测
贵阳医学院免疫学教研室
第一节 抗原抗体的测定
一、抗原抗体反应的相关理论
抗原具有抗原性（免疫反应性），可
与相应的抗体在体外发生特异性结合，
并在一定条件下出现可见反应现象。故
可用已知的抗原（或抗体）检测未知的
抗体（或抗原）。因抗体主要存在与血
清中，故又称为 血清学反应。
（ 一） 抗原抗体反应的特点
1.特异性
2.可逆性
3.比例性和结合物的可见性
4.阶段性（ 1）特异性结合阶段
（ 2）可见反应阶段
（二） 抗原抗体反应的主要影响因素
1.抗原、抗体反应的浓度、比例
2.电解质
3.温度
4.酸碱度
三、血清学反应的种类
（一）凝集反应（ agglutination）
1.直接凝集反应 （ direct
agglutination）
是指颗粒性抗原（凝集原）与相应的
抗体（凝集素）直接结合所呈现的凝集
现象。如红细胞 ABO血型的测定，细菌凝
集试验。
2.间接凝集反应
（ indirect passive agglutination）
是可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关
的微球载体上，形成致敏颗粒，与相应的抗
体或抗原在电解质存在的条件下进行反应，
出现凝集。
（二） 沉淀反应 （ precipetation）
是指可溶性抗原与相应抗体在合适的
电解质存在下，出现肉眼可见的沉淀现
象。
1.单向琼脂扩散试验
2.火箭电泳
3.双向琼脂扩散试验
4.对流免疫电泳
（三）补体结合试验
（ complement fixation test,CFT)
是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶
血素作为指示系统，来检测未知抗原或
抗体的试验。
（四）中和反应（ nertralization）
毒素、酶、激素或病毒等与其相应
的抗体结合后，导致生物活性的丧失。
1.病毒中和反应
2.毒素中和反应
（五）免疫标记技术
1.免疫酶技术
2.免疫荧光技术
3.放射免疫测定
4.免疫胶体金标记技术
第二节 免疫细胞的检测
一、免疫细胞的分离
（一）外周血单个核细胞的分离
（二） T,B及其它免疫细胞的纯化
（三）免疫磁珠分离法
（四）荧光激活细胞分离仪分离法
二、免疫细胞的计数
（一）花环形成试验
（二）荧光抗体染色
三、免疫细胞功能的检测
（一） T细胞功能的测定
淋巴细胞转化试验,T细胞在体外受特异
性抗原或有丝分裂原（ PHA,ConA等）
刺激后，能转化为淋巴母细胞。试验时
取外周血，分离淋巴细胞，加入有丝分
裂原或特异性抗原，在培养液中培养 72
小时，经涂片染色后镜检计算转化百分
率。
（二） B细胞功能的检测
1.空斑形成细胞检测
（ plaque formingcell,PFC）
是动物体外检测 B细胞功能的方法。
2.定量溶血分光光度法（ QHS）
又称 B细胞介导的红细胞定量溶血分光光
度法，反映机体的体液免疫功能。
3.酶联免疫斑点试验
（三）其他淋巴细胞功能的检测
1.NK 细胞活性测定
（ 1） NK细胞自然杀伤功能的检测
（ 2） ADCC试验
2.LAK细胞活性测定
（四）吞噬细胞功能检测
1.中性粒细胞吞噬功能的测定
2.大吞噬细胞的检测
第三节 细胞因子的检测
一、细胞生物学活性检测法
二、免疫学标记技术法
三、分子生物学方法
人类干扰素的检测
白细胞介素 -1（ IL-1） 的检测
肿瘤坏死因子（ TNF） 的检测
第四节
分子生物技术在免疫检测中的应用
一、分子杂交技术
二、转基因技术
三、多聚酶链反应
贵阳医学院免疫学教研室
第一节 抗原抗体的测定
一、抗原抗体反应的相关理论
抗原具有抗原性（免疫反应性），可
与相应的抗体在体外发生特异性结合，
并在一定条件下出现可见反应现象。故
可用已知的抗原（或抗体）检测未知的
抗体（或抗原）。因抗体主要存在与血
清中，故又称为 血清学反应。
（ 一） 抗原抗体反应的特点
1.特异性
2.可逆性
3.比例性和结合物的可见性
4.阶段性（ 1）特异性结合阶段
（ 2）可见反应阶段
（二） 抗原抗体反应的主要影响因素
1.抗原、抗体反应的浓度、比例
2.电解质
3.温度
4.酸碱度
三、血清学反应的种类
（一）凝集反应（ agglutination）
1.直接凝集反应 （ direct
agglutination）
是指颗粒性抗原（凝集原）与相应的
抗体（凝集素）直接结合所呈现的凝集
现象。如红细胞 ABO血型的测定，细菌凝
集试验。
2.间接凝集反应
（ indirect passive agglutination）
是可溶性抗原或抗体吸附于与免疫无关
的微球载体上，形成致敏颗粒，与相应的抗
体或抗原在电解质存在的条件下进行反应，
出现凝集。
（二） 沉淀反应 （ precipetation）
是指可溶性抗原与相应抗体在合适的
电解质存在下，出现肉眼可见的沉淀现
象。
1.单向琼脂扩散试验
2.火箭电泳
3.双向琼脂扩散试验
4.对流免疫电泳
（三）补体结合试验
（ complement fixation test,CFT)
是在补体参与下，以绵羊红细胞和溶
血素作为指示系统，来检测未知抗原或
抗体的试验。
（四）中和反应（ nertralization）
毒素、酶、激素或病毒等与其相应
的抗体结合后，导致生物活性的丧失。
1.病毒中和反应
2.毒素中和反应
（五）免疫标记技术
1.免疫酶技术
2.免疫荧光技术
3.放射免疫测定
4.免疫胶体金标记技术
第二节 免疫细胞的检测
一、免疫细胞的分离
（一）外周血单个核细胞的分离
（二） T,B及其它免疫细胞的纯化
（三）免疫磁珠分离法
（四）荧光激活细胞分离仪分离法
二、免疫细胞的计数
（一）花环形成试验
（二）荧光抗体染色
三、免疫细胞功能的检测
（一） T细胞功能的测定
淋巴细胞转化试验,T细胞在体外受特异
性抗原或有丝分裂原（ PHA,ConA等）
刺激后，能转化为淋巴母细胞。试验时
取外周血，分离淋巴细胞，加入有丝分
裂原或特异性抗原，在培养液中培养 72
小时，经涂片染色后镜检计算转化百分
率。
（二） B细胞功能的检测
1.空斑形成细胞检测
（ plaque formingcell,PFC）
是动物体外检测 B细胞功能的方法。
2.定量溶血分光光度法（ QHS）
又称 B细胞介导的红细胞定量溶血分光光
度法，反映机体的体液免疫功能。
3.酶联免疫斑点试验
（三）其他淋巴细胞功能的检测
1.NK 细胞活性测定
（ 1） NK细胞自然杀伤功能的检测
（ 2） ADCC试验
2.LAK细胞活性测定
（四）吞噬细胞功能检测
1.中性粒细胞吞噬功能的测定
2.大吞噬细胞的检测
第三节 细胞因子的检测
一、细胞生物学活性检测法
二、免疫学标记技术法
三、分子生物学方法
人类干扰素的检测
白细胞介素 -1（ IL-1） 的检测
肿瘤坏死因子（ TNF） 的检测
第四节
分子生物技术在免疫检测中的应用
一、分子杂交技术
二、转基因技术
三、多聚酶链反应
